外源生长素对黄芩悬浮细胞有效成分和内源激素含量的影响

目的:探讨外源生长素对黄芩悬浮细胞有效成分和内源激素含量的影响。方法:将稳定继代的黄芩愈伤组织在含有不同浓度NAA或KT的MS液体培养基悬浮震荡培养,光照16 h黑暗8 h进行培养18 d后,采用HPLC的方法,测定黄芩苷的含量,采用酶联免疫吸附法测定内源激素的含量,以黑暗条件为对照。结果:①与对照组相比,光照和黑暗条件下分别加入0.2 mg.L-1NAA后,黄芩苷含量显著降低,分别为未加入NAA时的2.56%,3.36%。②黑暗条件下,加入外源NAA后,ZR含量显著降低,但IAA,ABA和GAs含量变化不明显。③0.2 mg.L-1 NAA和不同浓度KT的协同作用对黄芩苷的含量呈现先增长后降低的趋势。其中1.0 mg.L-1的KT作用下黄芩苷含量最高,且黑暗条件下显著高于光照条件,达到2.13μg.L-1。结论:外源生长素不利于黄芩有效成分黄芩苷的积累,0.2 mg.L-1 NAA+1.0 mg.L-1 KT的组合对黄芩苷的积累量具有显著的促进作用。     

黄芩愈伤组织培养及黄芩苷合成调控的研究

目的研究黄芩愈伤组织培养和黄芩苷合成调控的规律。方法采用植物细胞培养技术诱导愈伤组织;HPLC法测定黄芩苷的量。结果黄芩愈伤组织生长和黄芩苷积累的优势培养条件为在基本培养基MS中氮源浓度为60mmol/L(NH4 ∶NO3-为1∶1),KH2PO4浓度0.5~1.5mmol/L,附加80g/L蔗糖,0.3mg/LIAA,2mg/L6-BA和200mg/L蛋白胨,温度(25±1)℃,暗培养。培养40d后收获愈伤组织,生物量达28.7g/L,黄芩苷为167.4mg/g,明显高于野生黄芩的最高量。结论黄芩愈伤组织的生长和黄芩苷的积累并不同步,而是先生长后合成。蔗糖对黄芩苷的合成具有明显的调节作用,在蔗糖质量浓度小于3%时,能有效促进愈伤组织的生长,但对黄芩苷的合成没有刺激作用;当蔗糖质量浓度在3%~8%时,愈伤组织表现出明显的生长和次生代谢功能,黄芩愈伤组织的生长及黄芩苷合成明显增加;当蔗糖质量浓度在8%时,两者均达到最大值。     

高效液相色谱法测定黄芩愈伤组织中黄芩苷、黄芩素含量

目的:研究黄芩愈伤组织中黄芩苷,黄芩素的含量测定方法。方法:采用HPLC法测定黄芩愈伤组织中黄芩苷,黄芩素的含量。结果:黄芩愈伤组织中黄芩苷,黄芩素的含量分别为0.39%和0.051%。结论:建立了黄芩愈伤组织中黄芩苷,黄芩素的含量测定方法。     

温度对黄芩愈伤组织中黄芩苷含量及关键酶基因表达的影响北大核心CSCD

为探究不同温度培养对黄芩愈伤组织生长过程中黄芩苷含量及基因相对表达量的影响,该研究设置4个培养温度对黄芩愈伤组织暗培养40 d,每5 d取样1次,测定生长量和黄芩苷含量,并以18S RNA为内参基因,实时荧光定量PCR分析黄芩苷合成途径中5个关键酶苯丙氨酸解氨酶（PAL）、肉桂酸-4-羟化酶（C4H）、查尔酮合成酶（CHS）、β-葡糖醛酸酶（GUS）、黄芩素-7-O-葡萄糖醛酸转移酶（UBGAT）基因表达量。结果表明,生物量、黄芩苷含量及积累量均随温度的升高呈增加趋势,25,30℃较适宜黄芩愈伤组织生长,25℃培养30 d黄芩苷含量与积累量最高,达到2.75%和12.44 mg;15℃培养条件下C4H,CHS,GUS,UGBAT基因相对表达量较高,25℃培养30 d至35 d PAL基因相对表达量显著高于其他处理组。各关键酶基因相对表达量与黄芩苷含量的相关性随培养温度的升高,由负相关转变为正相关,25,30℃培养条件下PAL,C4H,CHS基因相对表达量与黄芩苷含量达到极显著或显著水平。相对低温条件不利于黄芩愈伤组织生长和黄芩苷的积累,合成途径的上游酶基因PAL,C4H对黄芩苷的积累作用显著。     

HPLC等度洗脱法同时测定银黄薄膜衣片中绿原酸和黄芩苷的含量

目的:建立同时测定银黄薄膜衣片中绿原酸和黄芩苷含量的方法.方法:采用HPLC等度洗脱法,C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相甲醇-水-磷酸(45∶55∶0.2),流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长328 nm,进样量20μL.结果:绿原酸和黄芩苷在2.200 ～44.00 mg·L-1和24.20～242.0 mg·L-1峰面积与进样量呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.63％(RSD 1.8％,n=9)和99.72％(RSD 1.9％,n=9).结论:该方法简便、准确,可同时测定银黄薄膜衣片中绿原酸和黄芩苷的含量.     

温度对黄芩愈伤组织中黄芩苷含量及关键酶基因表达的影响

为探究不同温度培养对黄芩愈伤组织生长过程中黄芩苷含量及基因相对表达量的影响,该研究设置4个培养温度对黄芩愈伤组织暗培养40 d,每5 d取样1次,测定生长量和黄芩苷含量,并以18S RNA为内参基因,实时荧光定量PCR分析黄芩苷合成途径中5个关键酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、肉桂酸-4-羟化酶(C4H)、查尔酮合成酶(CHS)、β-葡糖醛酸酶(GUS)、黄芩素-7-O-葡萄糖醛酸转移酶(UBGAT)基因表达量。结果表明,生物量、黄芩苷含量及积累量均随温度的升高呈增加趋势,25,30℃较适宜黄芩愈伤组织生长,25℃培养30 d黄芩苷含量与积累量最高,达到2.75%和12.44 mg;15℃培养条件下C4H,CHS,GUS,UGBAT基因相对表达量较高,25℃培养30 d至35 d PAL基因相对表达量显著高于其他处理组。各关键酶基因相对表达量与黄芩苷含量的相关性随培养温度的升高,由负相关转变为正相关,25,30℃培养条件下PAL,C4H,CHS基因相对表达量与黄芩苷含量达到极显著或显著水平。相对低温条件不利于黄芩愈伤组织生长和黄芩苷的积累,合成途径的上游酶基因PAL,C4H对黄芩苷的积累作用显著。     

高效液相色谱法测定芩玄颗粒中黄芩苷含量

目的:建立测定芩玄颗粒中黄芩苷含量的高效液相色谱方法.方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱,流动相为甲醇-0.5％冰醋酸溶液(45∶55),流速1.0 mL· min-1,检测波长277 nm,柱温30℃,进样量10 μL.结果:黄芩苷浓度在2.128 ～106.4 mg·L-1与峰面积线性关系良好,平均回收率为101.50％,RSD 1.00％(n=6).结论:该方法操作快速、结果准确,专属性强,灵敏度高,可用于芩玄颗粒中黄芩苷的含量测定.     

不同培养基成分对金铁锁愈伤组织生长及皂苷含量积累的影响

目的 研究不同培养基成分对金铁锁愈伤组织生长和皂苷积累规律的影响.方法 改变培养基中碳源、氮源、磷酸盐、钙盐的浓度,比色法测定愈伤组织中皂苷的含量.结果 金铁锁愈伤组织生长和皂苷积累的最适培养基成分为蔗糖40 g·L-1,KNO3∶NH4NO3为(1.9:1.65)g·L-1,1 mmol·L-1KH2PO4,4.5 mmol·L-1CaCl2.结论 蔗糖作为碳源最有利于金铁锁愈伤组织生物量的积累和金铁锁皂苷的生物合成.混合氮源有利于金铁锁愈伤组织生长和皂苷含量的积累.     

HPLC同时测定呼吸通口服液中黄芩苷和牛蒡子苷的含量

目的:建立同时测定呼吸通口服液中有效成分黄芩苷和牛蒡子苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱platisil ODS(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.02%磷酸溶液(33∶66),检测波长208 nm,柱温室温。结果:黄芩苷在10～100 mg·L-1,牛蒡子苷在5～50 mg·L-1有良好的线性关系;黄芩苷的平均回收率99.8%,RSD 0.19%;牛蒡子苷的平均回收率100.1%,RSD 0.18%。结论:本方法简便可行,重复性好,可用于呼吸通口服液中黄芩苷和牛蒡子苷的含量测定和质量控制。     

HPLC测定柴胡健肝胶囊中黄芩苷的含量

目的:建立HPLC测定柴胡健肝胶囊中黄芩苷含量的方法。方法:色谱柱为Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-水-冰醋酸(54∶46∶0.2),流速1.5 mL·min-1,测定波长315 nm。结果:黄芩苷线性范围为8.072～48.43 mg·L-1,平均回收率为99.54%,RSD 0.88%(n=6)。结论:本法方便、快速、准确,可用于柴胡健肝胶囊的质量控制。     

巫山淫羊藿离体胚培养的研究

目的:研究药用植物巫山淫羊藿组织培养技术,为工厂化育苗提供科学根据。方法:以巫山淫羊藿的种胚为外植体,采用MS培养基,附加不同浓度2,4-D,6-BA,IBA,NAA进行正交试验。结果:诱导愈伤组织的最优培养基为:MS+2,4-D2 mg.L-1+IBA 2 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1;愈伤组织分化的最优培养基为:MS+6-BA 1 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1+IBA 1 mg.L-1;诱导芽的最优培养基为:MS+IBA 2 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1;芽增殖的最佳培养基为:MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1。结论:通过诱导愈伤组织途径和丛生芽途径,建立了巫山淫羊藿种胚外植体诱导和培养方法,达到快速繁殖的目的。     

夏枯草愈伤组织诱导和植株再生技术的研究

目的:探讨夏枯草愈伤组织诱导和植株再生条件。方法:采用正交试验法研究不同外植体、蔗糖、植物生长物质及其配比对夏枯草愈伤组织诱导和分化的影响。结果和结论:以叶片为外植体诱导愈伤效果最好,茎段次之,叶柄不能诱导出愈伤组织;6-BA是影响夏枯草愈伤组织形成的主要因素;诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+6-BA 3.0 mg.L-1+NAA 0.1mg.L-1+2,4-D 0.5 mg.L-1+蔗糖3%;宜于愈伤组织分化的培养基为1/2 MS+6-BA 3.25 mg.L-1+NAA1.25 mg.L-1+蔗糖2%;最佳生根培养基:MS+IBA 1.0 mg.L-1+蔗糖3%。     

杠柳组培苗的诱导及其次生代谢产物杠柳毒苷动态积累的研究

目的:通过诱导杠柳组培苗,分析杠柳组培苗在分化过程中不同部位杠柳毒苷含量,探索次生代谢产物杠柳毒苷在分化再生过程中的动态变化。方法:首先在无菌条件下利用杠柳种子产生实生苗,然后切取胚轴,在含有IBA 0.1 mg.L-1+BA 1 mg.L-1的MS培养基上诱导形成愈伤组织和不定芽,待不定芽发育形成3 cm左右的无根苗时将其切下,接种到含IBA 0.5 mg.L-1的1/2MS培养基中进行生根培养,使其形成组培苗。在培养组培苗过程中,分别采集不同的分化部位进行含量测定。结果:分化过程中不同部位杠柳毒苷含量差异很大,其中完整组培苗中根的含量最高,然后依次是愈伤组织、完整组培苗的茎和叶、无根苗的茎和叶。结论:整个再生过程表明,根和分化的愈伤组织是最有可能产生和积累杠柳毒苷的地方,茎和叶中含有的杠柳毒苷很有可能是通过输导组织运送的。     

催眠睡茄植株再生体系的建立

目的:建立和优化催眠睡茄植株再生体系。方法:以催眠睡茄的叶片作为外植体,探讨不同植物生长物质对愈伤组织诱导,丛生芽分化以及试管苗生根的影响。结果和结论:愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+1.0 mg.L-12,4-D+0.1mg.L-1KT;丛生芽诱导的最优培养基是MS+1.0 mg.L-16-BA+0.1 mg.L-1NAA,试管苗生根诱导最优培养基为1/2MS+0.5 mg.L-1NAA;在珍珠岩-腐殖土(1∶1)的基质中,再生植株室外移栽成活率达到92%。     

穿心莲内酯对表皮葡萄球菌生物被膜作用初探

目的:通过穿心莲内酯对表皮葡萄球菌生物被膜抑制作用的研究,为表皮葡萄球菌生物被膜菌引起的相关感染提供新的治疗途径。方法:体外构建表皮葡萄球菌生物被膜,以红霉素作为阳性对照药,利用XTT减低法评价穿心莲内酯对表皮葡萄球菌初始黏附及生物被膜内细菌代谢的影响,显微镜下观察该药对表皮葡萄球菌生物被膜的形态学影响,刚果红培养基法检测穿心莲内酯对PIA(polysacchatide interc-ellular adhesion,胞间多糖黏附素)形成的影响。结果:穿心莲内酯1 000,100,10 mg.L-1对表皮葡萄球菌的黏附均有抑制作用,质量浓度大于31.25 mg.L-1对生物被膜内细菌代谢有明显抑制作用,质量浓度为250 mg.L-1时对表皮葡萄球菌生物被膜的形态有显著影响,质量浓度为10 mg.L-1时对PIA的形成无影响。结论:穿心莲内酯对表皮葡萄球菌生物被膜的形成有显著抑制作用,但效果不及红霉素。     

延胡索水提物及左旋延胡索乙素抗吗啡条件性位置偏爱效应机制研究和效果比较

目的:研究延胡索水提物及左旋延胡索乙素(L-THP)抗吗啡条件性位置偏爱(CPP)效应的机制并进行效果比较.方法:吗啡剂量递增注射10d建立大鼠吗啡CPP模型(起始剂量10 mg·kg-1,每天递增10 mg·kg-1,至注射10d时100mg·kg-1),延胡索水提液2,1,0.5 g·kg-1(分别含L-THP 0.153,0.077,0.038 mg),以及L-THP 3.76,1.88,0.94 mg·kg-1灌胃治疗6d后,检测大鼠CPP效应,用比色法和免疫组化分别测定其中脑腹侧被盖区-伏核-前额叶皮质(VTA-NAc-PFC)神经环路各脑区内谷氨酸递质含量和NR2B的表达.结果:与生理盐水治疗组比较,延胡索2,1g·kg-1及L-THP 3.76,1.88 mg·kg-1组大鼠在白箱(吗啡伴药箱)停留时间明显减少(P＜0.05或P＜0.01),同时VTA,NAc和PFC内谷氨酸含量及NR2B表达均显著降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:延胡索与L-THP均能加速吗啡CPP效应的消退,逆转VTA-NAc-PFC神经环路中升高的谷氨酸含量和下调NR2B的表达,可能是二者加速吗啡CPP效应消退的机制之一;含1倍量L-THP单体的延胡索中药不但在抑制吗啡CPP行为学方面相当于单独应用约24倍L-THP单体的效果,而且,在对VTA-NAc-PFC环路中谷氨酸递质和NR2B的药理作用机制方面也具有很大的相似性.     

植物生长物质对红景天愈伤组织诱导和培养的影响

目的:考察植物生长物质对四裂红景天愈伤组织诱导和培养的影响并分析愈伤组织中红景天苷含量。方法:运用正交设计实验,在MS固体培养基中添加不同种类、不同含量的植物生长物质,进行愈伤组织的诱导和培养,并用HPLC检测愈伤组织中红景天苷的含量。结果:培养基中含有2,4-D1mg·L^-1,NAA2mg·L^-1,6-BA0.5mg·L^-1,KT0.1mg·L^-1时,愈伤组织诱导效果最好,诱导率为83.3%。当生长物质配比为2,4-D1mg·L^-1,6-BA0.1mg·L^-1和KT0.5mg·L^-1时,最适于愈伤组织的培养,培养30d后干重达11.77g·L^-1,红景天苷的含量为干重的0.28%。结论:红景天愈伤组织在诱导和培养2个阶段所需的生长物质种类和含量有很大差异;诱导的愈伤组织能够合成红景天苷。     

高效毛细管电泳法同时测定小白蒿5种黄酮类化合物的含量

目的:建立小白蒿中5种黄酮类化合物的同时测定方法,为综合评价小白蒿最佳采集时间提供参考依据。方法:采用高效毛细管电泳法测定小白蒿中5种黄酮类化合物的含量,并对不同采集时间小白蒿和不同部位中5种黄酮类化合物的含量进行比较。结果:在所用的实验操作条件下,5种对照品溶液分别在1.00～40.00 mg.L-1(r=0.999 8),2.00～80.00 mg.L-1(r=0.999 9),0.50～80.00 mg.L-1(r=0.999 6),1.00～40.00 mg.L-1(r=0.999 3)和1.00～40.00 mg.L-1(r=0.999 4)具有良好的线性关系,平均回收率分别为99.31%(RSD 1.60%),98.14%(RSD 1.03%),98.37%(RSD 1.57%),97.92%(RSD 0.94%),98.16%(RSD 1.20%)。结论:实验结果表明,小白蒿花中黄酮类化合物的相对含量较高,最佳采集时间为6月中旬到7月末。     

Box-Behnken设计优化黄芩超高压提取工艺

目的:应用Box-Behnken试验设计优选黄芩的超高压提取工艺。方法:以黄芩苷提取率为指标,采用单因素试验考察提取压力、提取次数、液固比等因素对黄芩超高压提取工艺的影响;Box-Behnken试验设计考察乙醇体积分数、液固比、提取压力对提取工艺的影响,优化工艺参数。结果:最佳提取工艺条件为乙醇体积分数72%,提取压力100 MPa,液固比100∶1,提取时间10 s,黄芩苷提取率102.65 mg.g-1。结论:优选的工艺提取率高、提取温度低、耗时短、能耗少,适用于黄芩的工业化提取。