自噬基因LC3、Beclin1在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的探究子宫内膜异位症(EMs)患者血清和腹腔液中自噬基因LC3、Beclin1的表达,以及LC3和Beclin1在异位子宫内膜组织中mRNA的表达,探讨LC3、Beclin1与EMs的相关性及其意义。方法选取84例EMs和非EMs患者的血清、腹腔液及子宫内膜组织进行分组分析。采用ELISA和RT-qPCR检测其LC3和Beclin1的表达以及LC3和Beclin1 mRNA的表达。结果 ELISA检测结果显示:子宫内膜异位症组中LC3和Beclin1的表达水平明显低,其表达差异有统计学意义(P <0.05);qRT-PCR结果显示:子宫内膜异位症组患者的子宫内膜中LC3和Beclin1mRNA的表达明显降低,其表达差异有统计学意义(P <0.05)。结论 EMs患者血清、腹腔液及子宫内膜中LC3和Beclin1均呈现低表达,探讨LC3与Beclin1在EMs的临床表达,有助于进一步明确EMs的发病机制,指导临床诊断及治疗。     

Beclin1、LC3和mTOR在肝癌中的表达及临床意义

目的 通过检测Beclin1、LC3和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在肝癌组织中的表达,并结合各相关临床病理指标,从而探讨Beclin1、LC3和mTOR的表达水平在肝癌发生发展中的作用及其相互之间的关系.方法 采用免疫组织化学技术,检测56例肝癌组织和40例正常肝脏组织中Beclin1、LC3和mTOR蛋白的表达情况,并分析二者与肝癌各相关临床病理特征之间的关系.结果 Beclin1、LC3和mTOR蛋白在肝癌组织中的阳性表达率分别为75％、70％和50％,均明显高于正常肝组织中的阳性表达率25％、30％、28％,差异有统计学意义(P<0.05).Beclin1与LC3在肝癌中表达呈正相关(r=0.643,P<0.01),与mTOR表达之间无明显相关性(r=-0.167,P>0.05).LC3与mTOR表达呈负相关(r=-0.386,P<0.01).Beclin1、LC3和mTOR的表达均与年龄、性别、肿瘤大小、HBSAg、AFP值等均无显著相关性(P>0.05),但与病理学分级和有无胆管癌栓有关(P<0.05).结论 Beclin1、LC3和mTOR的异常高表达可能与肝癌的发生关系密切.     

葫芦素E抑制HeLa细胞mTORC1的活性并诱导细胞自噬

目的研究葫芦素E诱导HeLa细胞发生细胞自噬的作用机制。方法改良MTT法测定葫芦素E对HeLa细胞增殖的影响,免疫印迹法检测mTORC1下游信号蛋白的磷酸化以及自噬相关蛋白的表达。结果葫芦素E对HeLa细胞增殖有剂量依赖性抑制作用,其24 h的IC50为4.01μmol·L-1。通过对mTORC1底物磷酸化水平的检测发现,葫芦素E对p70S6K的磷酸化(活化)作用有明显的剂量和时间依赖性抑制作用。同时,葫芦素E增加自噬小体标志物LC3-Ⅱ的表达,氯喹能进一步提高其水平;葫芦素E还能降低p62/SQSTM1的水平,表明诱导了完整的细胞自噬过程。细胞自噬的诱导与mTORC1下游底物ULK1S757磷酸化水平的下降有正相关性。结论葫芦素E可能通过抑制mTORC1活性而诱导细胞发生自噬作用。     

自噬相关基因Beclin1与肿瘤

Beclin1是一种自噬相关基因,其在细胞自噬中起到了重要的调节作用。此外,最近的研究表明它在肿瘤的发生、发展中也发挥了一定作用,它通过自噬、凋亡等作用抑制肿瘤的发展,但也有研究表明其在肿瘤发展过程中起到了积极的作用。     

Nod1受体激活对腹膜间皮细胞自噬相关蛋白表达的影响

目的探讨Nod1受体激活对腹膜间皮细胞自噬的影响。方法 Nod1受体激动剂iE-DAP作用大鼠原代培养腹膜间皮细胞0、1、2h,Western blot检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1的表达。结果随刺激时间延长,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达比值增加,Beclin-1蛋白表达亦增加。结论 Nod1受体激活可诱导腹膜间皮细胞自噬的发生,这有可能发挥清除细胞内细菌感染的作用。     

α1抗胰蛋白酶突变体ATZ过表达增强细胞自噬水平

目的观察α1抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,AAT)Z型突变体(α1-antitrypsin Z variant,ATZ)表达对细胞自噬水平的影响,探讨ATZ细胞毒作用的可能机制。方法体外培养人胚肾细胞株HEK 293T并转染ATZ真核表达质粒,利用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,免疫荧光染色观察LC3的细胞定位,real-time PCR法检测自噬相关基因Atg5、Atg12和Beclin1的变化,DAB染色观察ATZ过表达对细胞形态的影响。结果与转染空质粒对照组相比,ATZ过表达促进细胞自噬的标志分子LC3由LC3-Ⅰ转变为LC3-Ⅱ,p62水平降低;而经自噬抑制剂氯化铵处理后,ATZ过表达细胞中出现LC3点状聚集,p62水平增加;同时,ATZ过表达明显增加自噬相关基因Atg5、Atg12的mRNA水平,而对Beclin1无明显影响;少量表达ATZ的细胞形态基本正常,细胞中LC3形成点状聚集;反之,过度表达ATZ的细胞核变小、固缩甚至消失,无LC3-Ⅱ表达。结论过表达ATZ通过增加Atg5和Atg12表达激活自噬,这可能与其细胞毒性有一定相关性。     

丹参酮ⅡA对 ox－LDL诱导血管内皮细胞自噬效应蛋白 Beclin1表达的影响

目的：氧化型低密度脂蛋白（ oxidized low－densitylipoprotein,ox－LDL）可诱导血管内皮细胞发生自噬,造成血管内皮损伤,从而导致动脉粥样硬化的发生。该研究拟探讨丹参酮ⅡA对ox－LDL诱导的血管内皮细胞自噬效应蛋白Beclin1表达的影响。方法（1）运用不同浓度ox－LDL处理人脐静脉血管内皮细胞HUVECs,MDC染色、流式细胞仪检测ox－LDL对HU-VECs自噬水平的影响,采用免疫印迹技术检测自噬标记蛋白Beclin1表达;（2） ox－LDL处理后,运用不同浓度丹参酮ⅡA干预,MDC染色、流式细胞仪HUVECs自噬水平变化,免疫印迹检测Beclin1蛋白水平变化。结果 ox－LDL能诱导HUVECs发生自噬,丹参酮ⅡA能抑制ox－LDL诱导的HUVECs自噬效应蛋白Beclin1表达。结论丹参酮ⅡA通过抑制ox－LDL诱导的HUVECs自噬,从而对ox－LDL所致的HUVECs损伤起保护作用。     

自噬相关基因Beclin 1在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的 探讨自噬相关基因beclin 1在不同卵巢组织中的表达及其临床意义.方法 免疫组化和RT-PCR方法分别检测正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤以及上皮性卵巢癌组织中的beclin 1的蛋白及其mRNA的表达,比较三组间的表达差异.结果 正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤beclin 1蛋白表达阳性率明显高于上皮性卵巢癌组织(83.3％和70.0％ vs.36.7％)(P＜0.05);正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤beclin 1 mRNA的表达强度明显高于上皮性卵巢癌组(0.695±0.123和0.615±0.119 vs.0.243±0.103)(P＜0.05).结论 beclin 1在上皮性卵巢癌中的表达下降;上皮性卵巢癌发生、发展可能与自噬相关基因beclin 1自噬活性的抑制有关.     

线粒体自噬与NLRP3炎症小体调控通路及中医药干预的关系研究进展

线粒体能通过自噬选择性地去除损伤的线粒体,以控制线粒体的质量并确保线粒体的功能,从而实现微调线粒体的数量来维持能量代谢。NLRP3炎性小体是机体固有免疫重要成分,可由多种类型病原体或危险信号启动激活,对许多疾病的发生与发展起着至关重要的作用。而线粒体自噬在NLRP3炎症小体激活过程中,通过作用于诸多环节发挥负调节作用。近年来,中医药在线粒体代谢与调控通路方面的研究发展迅速,线粒体自噬和NLRP3炎症小体调控通路被认为是潜在的强有力的中医药干预疾病靶点。本文通过对线粒体自噬的主要通路与NLRP3炎症小体的调控通路及中医药对线粒体自噬和NLRP3炎症小体的影响在疾病中的作用进行综述,以期为中医药通过线粒体自噬和NLRP3炎症小体途径防治疾病尤其是代谢性与心脑血管疾病的研究提供借鉴和新的思路。     

自噬相关基因Beclin1和MAP1LC3B在胆囊癌组织中的表达及其意义

目的 检测自噬基因Beclin1、MAP1LC3B在原发性胆囊癌组织中的表达情况,探讨细胞自噬在胆囊癌发生中的作用及其临床意义.方法 采用免疫组织化学SP方法,检测Beclin1、MAP1LC3B在胆囊癌组织中的表达情况,并以同期手术切除的胆囊炎性疾病组织为对照;统计Beclin1和MAP1LC3B的表达情况,并分析其与胆囊癌临床病理特征之间的关系.结果 胆囊癌组和慢性胆囊炎组Beclin1的阳性表达率分别为45.7％和78.3％,MAP1LC3B的阳性表达率分别为47.8％和71.7％,两组差异有统计学意义（P＜0.05）.Beclin1和MAP1LC3B在不同年龄、性别、癌组织分化程度患者中的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,但与周围脏器侵犯情况、病理TNM分期有关（P＜0.05）.Beclin1和MAP1LC3B在胆囊癌组织中的表达水平呈正相关（r=0.538,P＜0.01）.结论 胆囊癌组织中Beclin1和MAP1LC3B表达水平明显低于胆囊炎性疾病组织;Beclin1和MAP1LC3B的表达水平与胆囊癌侵袭能力及TNM分期有关,且两者表达呈正相关;提示Beclin1和MAP1LC3B是反映胆囊癌生物学行为的重要指标,两者之间可能存在着某种共同通路.     

The potential of Beclin 1 as a therapeutic target for the treatment of breast cancer

Introduction: Beclin 1 plays a crucial role in autophagy via the Beclin 1 interactome, and is involved in various biological processes such as protein sorting, chemokinesis, and cell death. Via these biologic functions, Beclin 1 contributes to both tumor suppression and tumor progression.

Areas covered: Beclin 1 plays a key biologic function on cell homeostasis and affects tumorigenesis. In this review, detailing up-to-date knowledge on the tumorigenic role of Beclin 1, its implication in breast cancer, and its utility as a breast cancer-specific drug target is discussed.

Expert opinion: Because Beclin 1 is expressed in breast cancer cells, Beclin 1 could be a unique, effective drug target for the prevention and treatment of breast cancer. However, the expression of Beclin 1 varies according to cancer molecular subtypes, and Beclin 1 is involved in both breast cancer suppression and tumor progression; therefore, the decision of using a Beclin 1 inducer or inhibitor should be made based on breast cancer stage and subtype.     

Silica dust exposure induces autophagy in alveolar macrophages through switching Beclin1 affinity from Bcl‐2 to PIK3C3

Increased deposition of silica dust in pulmonary interstitial tissues leads to silicosis, in which autophagy plays a defensive role in silica dust‐associated stress response and cell death. Our previous studies revealed that silica dust exposure contributed to autophagy in pulmonary macrophages in vivo, while the specific regulatory mechanism is still unclear. This study aimed to figure out the regulatory mechanism as well as the role of autophagy in the pathogenesis of experimental silicosis. We used 3‐methyladenine (3‐MA) and ABT‐737 to suppress the expression of phosphatidylinositol 3‐kinase catalytic subunit type 3 (PIK3C3) and B cell leukemia/lymphoma 2 (Bcl‐2), two critical initiators of autophagy, and detected and evaluated the autophagy in NR8383 cells with or without silica dust exposure. We found that exposure of silica dust increased autophagy in NR8383 cells and elevated the expression of Beclin1 and PIK3C3, but it reduced the expression of Bcl‐2. The relationship among Beclin1, PIK3C3, and Bcl‐2 were then investigated using immunoprecipitation analysis, and we found that suppression of PIK3C3 and/or Bcl‐2 using 3‐MA and/or ABT‐737 could alter the autophagy induced by silica dust in NR8383 cells, and the complexes of Beclin1/PIK3C3 and Beclin1/Bcl‐2 were both downregulated, which may be that inhibition of PIK3C3 and Bcl‐2 altered the affinity of Beclin1 with PIK3C3 and Bcl‐2 and lead to the silence of PIK3C3 signaling. These findings indicate that silica dust exposure induces autophagy via changing the connectivity of Beclin1 from Bcl‐2 to PIK3C3.     

冬凌草甲素通过miR-217/ABCC1通路对索拉非尼耐药的肝癌细胞Huh-7/Sor增殖、凋亡的影响

目的 探讨冬凌草甲素对人肝癌细胞Huh-7索拉非尼(Sor)耐药细胞株Huh-7/Sor的影响及其作用机制.方法 体外培养Huh-7/Sor细胞株,qRT-PCR检测miR-217和ABCC1 mRNA的表达水平,Western blotting检测ABCC1蛋白的表达水平;用冬凌草甲素处理Huh-7/Sor细胞后,C...     

白藜芦醇保护脑缺血/再灌注损伤与自噬关系的研究

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)预处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后自噬的影响,探讨Res保护局灶性脑缺血/再灌注损伤的作用机制。方法将64只SD♂大鼠随机分成4组,假手术组(S组)、模型组(M组)、Res低剂量(15 mg.kg-1)干预组(R1组)和Res高剂量(40 mg.kg-1)干预组(R2组),用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h,再灌注24 h后,观察大鼠神经功能评分;透射电镜法观察神经元的超微结构及其内自噬空泡数量的变化;免疫组化法检测LC3的蛋白表达;RT-PCR法分别检测LC3和Beclin 1的mRNA表达。结果与M组相比,Res可明显减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤的神经功能评分(P<0.05);使自噬泡数量明显增加;上调缺血皮质区脑组织LC3和Beclin 1蛋白及mRNA的表达(P<0.05)。结论 Res对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后神经元有保护作用,其机制可能与其诱导自噬的生成,上调LC3和Beclin 1的表达有关。     

自噬相关蛋白在肺鳞癌和腺癌组织中的表达及相关性研究

目的：探讨自噬相关蛋白Beclin1、Atg1、mTOR在不同分化程度肺鳞癌(SCC)和腺癌中的表达情况及其相关性。方法：采用免疫组织化学方法,检测82例肺癌组织及17例癌旁正常肺组织Beclin1、Atg1、mTOR的表达情况。结果：癌旁组织中Beclin1、Atg1阳性率高,而mTOR的阳性率较低;SCC和肺腺癌组织中,随分化程度的降低,Beclin1、Atg1呈递减趋势,而mTOR的阳性表达呈递增趋势。相关性分析显示,不同分化程度SCC中Beclin1与Atg1表达呈正相关（R=0.609,P<0.01）,Beclin1、Atg1分别与mTOR呈负相关（R=-0.617,-0.444,P<0.01）;不同分化程度肺腺癌中,Beclin1与Atg1表达呈正相关（R=0.458, P<0.01）,Beclin1、Atg1分别与mTOR呈负相关（R=-0.497,-0.541,P<0.01）。结论: mTOR随SCC和肺腺癌分化程度的降低,表达逐渐增高,而Beclin1、Atg1表达逐渐降低,提示SCC和肺腺癌的恶变程度与自噬有关。     

琥珀散对人MenSCs植入式子宫内膜异位症裸鼠异位病灶及Beclin1、ZEB1表达的影响

目的 探究琥珀散对人经血源间充质干细胞(MenSCs)植入式子宫内膜异位症(EMT)裸鼠的异位病灶及 Bcl-2 同源结构域蛋白抗体(Beclin1)、锌指E盒同源结合蛋白1(ZEB1)表达的影响。方法 将裸鼠随机分为对照组、模型组、地诺孕素(0.001 g·kg^-1)组和琥珀散(29 g·kg^-1)组,每组 10 只。从 EMT 患者及健康女性的月经血中提取 MenSCs,并借助成脂、成骨诱导分化鉴定其干细胞属性。将EMT MenSCs注射至裸鼠腹部皮下,制备EMT裸鼠模型,对照组植入正常人MenSCs。至第7天每组随机抽取1只裸鼠,开腹观察异位病灶生长情况,并借助HE染色和人类白细胞抗原A(HLAA)免疫荧光法评价模型。自造模成功连续给药21 d,末次给药后第2日取材,观测EMT异位病灶体积及血管分布;切取异位病灶组织,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting、免疫组织化学及免疫荧光技术分别测定组织中Beclin1与ZEB1在mRNA及蛋白水平的表达。结果 EMT源及正常MenSCs为长梭形,呈辐射状向周边集落扩散,且经成脂、成骨诱导分化后均有脂滴、钙结节形成。造模7 d后,对照组未见异位病灶形成,其余各组均有囊泡样病灶形成,且周围血管形成丰富,病理切片均可见子宫内膜腺体和间质,HLAA 均阳性表达。与模型组比较,琥珀散能显著缩小EMT裸鼠异位病灶体积(P<0.001),改善周围血管分布。在 mRNA水平, 与模型组比较,地诺孕素组和琥珀散组ZEB1表达显著降低(P<0.001),Beclin1 表达显著升高(P<0.001)。在蛋白水平,与模型组比较,Western blotting结果显示,地诺孕素组和琥珀散组ZEB1 表达显著降低 (P<0.05),Beclin1表达显著升高(P<0.01、0.001);免疫组化结果显示,琥珀散组 Beclin1 大量分布在异位内膜、腺腔以及腺上皮细胞与间质细胞的胞核及胞浆中,Beclin1 表达显著增加(P<0.01);免疫荧光结果显示,琥珀散组 ZEB1 蛋白在异位内膜、腺腔、腺上皮细胞及周围间质细胞的胞核与胞浆中的分布均明显减少,地诺孕素组、琥珀散组 ZEB1 蛋白表达阳性率显著降低(P<0.001)。结论 琥珀散可能通过上调 Beclin1、下调 ZEB1 表达,缩小 EMT 裸鼠异位病灶,改善周围血管分布。     

奥曲肽对人肝癌细胞Huh-7增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的探讨奥曲肽对人肝癌细胞Huh-7增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法 Huh-7细胞用不同浓度奥曲肽(0、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L,分别为A、B、C、D、E、F组)处理,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot法检测半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果与A组相比,其余各组Huh-7细胞的生长抑制率、G1期细胞的比例、凋亡率及Caspase-3蛋白表达均以浓度依赖性的方式明显增加。结论奥曲肽可显著抑制Huh-7细胞的生长,诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡;且奥曲肽可能通过启动Caspases途径诱导人肝癌细胞Huh-7凋亡。