侧群细胞及其在干细胞研究中的应用

肿瘤干细胞学说的提出为肿瘤的治疗提供了新的靶点和方向。尽管已经从白血病、乳腺癌、脑肿瘤等肿瘤中初步分离鉴定出肿瘤干细胞，但是还有许多恶性肿瘤由于肿瘤干细胞表面标记尚不清楚而无法鉴定，通过侧群细胞(side population cells，SP) 分选来初筛肿瘤干细胞，方法简便、有效，正被越来越多地应用。     

几种值得深入研究的肿瘤相关干(祖)细胞

越来越多证据表明,肿瘤是一类多因素致病、多步骤发生、异质性演进的遗传性疾病,是特殊的"难愈性创伤",并与慢性炎性过程密切相关.肿瘤还被认为属于分化异常性干细胞疾病[1].不仅肿瘤的发生与干细胞(stem cells)和(或)祖细胞(progenitor cells)密切相关,而且多种具有干细胞或祖细胞特性的细胞也参与肿瘤的生长和演进[2-3].存在于肿瘤内并参与肿瘤发生发展的干(祖)细胞可统称为肿瘤相关干(祖)细胞(tumor associated stem/progenitor cells).这些细胞包括来源于骨髓经血液进入肿瘤组织的一些干(祖)细胞和肿瘤组织固有的肿瘤干细胞(cancer stem cells)及其衍生的干细胞样细胞.深入研究肿瘤相关干(祖)细胞的病理生物学特性和作用,对于进一步揭示肿瘤发病机制、寻找防治新方法,具有重要意义.     

头颈部鳞癌干细胞标志物的研究进展

肿瘤干细胞(CSC)是一群具有自我更新能力和多向分化潜能的肿瘤细胞,虽然CSC在肿瘤细胞总数中只占很小比例,但在肿瘤的起源、发展、转移及复发等方面均有重要的作用.过去几年内研究者已经证明包括头颈部鳞癌干细胞在内的许多CSCs的存在,并分别针对头颈部肿瘤干细胞与头颈部鳞癌的关系、肿瘤干细胞的生物学特性和鉴定标志等问题展开...     

中间型滋养细胞肿瘤的临床病理特征

目的 探讨上皮样滋养细胞肿瘤(ETT)和胎盘部位滋养叶细胞肿瘤(PSTY)的临床病理特征.方法 结合临床表现、形态学特征、发病机制和免疫表型,对4例PSTT及1例ETT病例进行分析,并对鉴别诊断、治疗和预后进行分析.结果 PSTT和ETT临床表现为阴道不规则流血,伴HCG轻一中度升高.PSTT瘤细胞呈片块状或条索状穿插于子宫肌层平滑肌束间,常浸润血管壁;ETT瘤细胞排列成巢团状,位于玻璃样物或肿瘤坏死物中,呈地图样外观.免疫表型表达上皮性、滋养细胞性标志物,但对HPL、Mel-CAM、PLAP及p63的表达有差异.治疗手段以全子宫切除术和术后化疗为主,预后较好.结论 PSTT与ETT是罕见的中间型滋养细胞肿瘤(ITT),二者具有不同的形态学特征和免疫表型,但临床表现及惰性生物学行为相似.     

人卵巢癌细胞株侧群细胞的生物学特征

目的 研究人卵巢癌细胞株细胞中乳腺癌耐药蛋白与侧群细胞表型的关系,并探讨侧群细胞在卵巢癌病理牛理中的作用以及卵巢癌细胞株在卵巢癌肿瘤干细胞研究中的应用. 方法 利用流式细胞术从人卵巢浆液腺癌细胞株OVCAR3中分离排斥双苯酰亚胺(Hoechst 33342)染色的侧群细胞以及能被其染色的非侧群细胞,比较两个亚群的细胞集落形成率,并检验其在软琼脂平板生长的能力.同时以免疫印迹和免疫荧光染色检测两种细胞的乳腺癌耐药蛋白表达情况. 结果 OVCAR3细胞株中排斥Hoechst 33342的细胞占2.0%,此活动对维拉帕米(verapamil)敏感.侧群细胞和非侧群细胞克隆形成率分别为46.17%±23.27%和6.17%±3.06%,侧群细胞克隆形成率高于非侧群细胞(P<0.05),并能在软琼脂平板中生长、形成球形的细胞集落.侧群细胞表达乳腺癌耐药蛋白. 结论 人卵巢浆液腺癌细胞株中存在排斥Hoechst 33342染色、对维拉帕米敏感的侧群细胞,是维持细胞株的主要因素,其表型与乳腺癌耐药蛋白相关.OVCAR3可用于卵巢癌肿瘤干细胞的研究.     

血管周上皮样细胞肿瘤的分子遗传学

血管周上皮样细胞肿瘤(perivascular epithelioid cell tumours,PEComas)是由组织学和免疫组织化学上有独特表现的血管周上皮样细胞构成的间叶性肿瘤,PEComas家族包括肾血管平滑肌脂肪瘤、肺透明细胞"糖"瘤、淋巴管肌瘤病、淋巴管平滑肌瘤、镰状韧带透明细胞肌黑色素细胞性肿瘤和其他部...     

K562细胞株侧群细胞中部分白细胞分化抗原的表达

背景：白血病侧群细胞表型的研究对于理解肿瘤细胞的异质性和起源、分子标记和靶向治疗等都有积极意义。 目的：鉴定人慢性粒细胞白血病细胞株K562中是否存在侧群细胞,并观察侧群细胞亚群与非侧群细胞亚群中部分白细胞分化抗原的表达差异。 方法：采用流式细胞术检测K562细胞株中是否存在侧群细胞;并进一步分析K562侧群细胞和非侧群细胞两亚群间CD34+、CD34+CD38-、CD34+CD38+、HLA-DR+细胞的表达情况。 结果与结论：经Hoechst33342染色,流式细胞仪分析结果显示在K562中存在侧群细胞,这部分细胞比例少,为(2.7±0.5)%;统计学分析侧群细胞和非侧群细胞亚群中CD34⁺、CD34⁺CD38^-细胞表达率差异有显著性意义,而CD34⁺CD38⁺细胞表达率和HLA-DR+细胞表达率差异均无显著性意义;侧群细胞和非侧群细胞相比在分化抗原表达上有异质性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

肝癌SMMC-7721细胞中侧群细胞分选及其生物学特性的研究

目的: 分选肝癌SMMC-7721细胞中的侧群(SP)细胞并分析其生物学特性。方法: 采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术将SMMC-7721细胞分为SP细胞和非侧群(NSP)细胞2个亚群。细胞生长曲线法和平板克隆法比较SP细胞和NSP细胞的增殖能力和克隆形成能力;Transwell法检测SP细胞和NSP细胞的迁移及侵袭能力;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡率;裸鼠体内成瘤实验比较SP细胞和NSP细胞的致瘤性。结果: SMMC-7721细胞中分选出的SP细胞比例为(9.2±0.2)%。SP细胞中G₀/G₁期细胞比例高于NSP细胞,凋亡率低于NSP细胞(P＜0.05);SP细胞的增殖速度、克隆形成能力、体外迁移和侵袭能力均明显高于NSP细胞(P＜0.05);裸鼠成瘤实验显示SP细胞的致瘤能力明显高于NSP细胞。结论: 肝癌SMMC-7721细胞中的SP细胞可能富集了肝癌干细胞。     

骨髓基质细胞与神经性疾病的治疗

<正>骨髓基质细胞(bone marrow stromal ceils,BMSCs)又名成纤维细胞样克隆形成单位(fibroblast colony-forming units,CFU-F)、间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)、间质祖细胞(mesenchymal progenitor cells,MPCs)。本文统一用BMSCs这一概念,重点对BMSCs的生物学特性及其神经损伤修复作用进行综述。1. BMSCs的生物学特性     

乳腺癌MCF-7细胞系中CD55hig亚群生物学特性分析

目的:确定MCF-7细胞系侧群(SP)部分的CD55高表达(CD55hig)细胞是否具有肿瘤干细胞特性。方法:培养乳腺癌MCF-7细胞系,加入核酸染料Hoechst33342和Verapami,用流式细胞术(FCM)分离SP亚群和MP亚群细胞,以CD55mAb分别标记,测定侧群(SP)和主群(MP)细胞的CD55平均荧光强度值,再以CD55 mAb标记未分选MCF-7细胞,测定CD55hig细胞所占比例,并分选收集CD55hig细胞,观察细胞形态、贴壁率、克隆形成及细胞周期分布以及裸鼠体内种植等生物学特性。结果:SP细胞CD55的平均荧光强度值为100.85±4.57,MP细胞CD55的平均荧光值为50.51±4.75;MCF-7细胞中CD55hig细胞比例为2.12%;24 h内CD55hig细胞细胞贴壁率低于CD55low细胞,接种24 h后,两者贴壁率无明显差异(P>0.05);接种培养12 h后,CD55hig细胞多为球形呈悬浮状态;CD55hig细胞都具有克隆形成能力,CD55hig细胞在培养1周后克隆形成率为(20.04±1.07)%,低于CD55low细胞(27.14±1.07)%(P<0.01);CD55hig细胞中G0/G1静止期细胞占(85.4±3.37)%,高于CD55low细胞(58.6±2.55)%及MCF-7细胞(70.73±4.21)%,有统计学显著差异(P<0.05)。所有裸鼠种植CD55hig细胞后均成瘤,移植瘤病理检验具有恶性肿瘤细胞的特性。结论:乳腺癌MCF-7细胞中存在少量的CD55hig细胞,CD55hig细胞大多数处于静止期、不贴壁呈悬浮状态和克隆遗传性,CD55hig细胞具有肿瘤干细胞生物学特性。     

Systemic mesenchymal stem cells reduce growth rate of cisplatin-resistant ovarian cancer

Epithelial ovarian cancer is one of the most malignant cancers in women and resistant to chemotherapy is the major obstacle for the five-year survival rate. Cisplatin is one of the effective anticancer drug used in the ovarian cancer. To find a good strategy to cure the tumors which is resistant to cisplatin, the cisplatin-resistant 3SKOV3 cells were selected from SKOV-3 ovarian cancer cells. Furthermore, the isolated mesenchymal stem cells were infused systemically to try to cure the transplanted tumor induced by 3SKOV3 cells in nude mice. The morphology and cell membrane CD44 expression were investigated by microscope and flow cytometry. The biological behaviors of resistant 3SKOV3 and its parental SKOV3 cells, including proliferation, adhesion, and cell cycle were determined by CCK8, absorbance assay and FCM methods. The transplanted tumors were set up in nude mice with 3SKOV3 cells injection. The growth rate of transplanted tumors was detected following with MSCs injection. The 3SKOV3 cells have different morphologic manifestation and expressed high level of CD44 molecule. At the same time, 3SKOV3 cells have less adhesion ability and less S-phase ratio. The isolated MSCs from bone marrow could inhibit the growth of transplanted tumor via systemic injection. The cisplatin-resistant 3SKOV3 cells have the different biological behaviors as its parental SKOV3 cells. The present study indicated that systemic MSCs have the therapeutic role on ovarian cancer. However, further investigations are in progress to elucidate the underlying mechanism.     

Down-regulation of UTP23 promotes paclitaxel resistance and predicts poorer prognosis in ovarian cancer

ObjectiveFrequent resistance to paclitaxel and carboplatin based chemotherapy remains a therapeutic challenge in ovarian cancer. UTP23, a small sub-unit processome component, is down-regulated in a paclitaxel-resistant cell line SKOV3-TR30 compared with its parental SKOV3 cells based on our previous study. However, the specific mechanism of UTP23 in regulating ovarian cancer chemotherapy resistance remains largely unknown.MethodsImmunohistochemical (IHC) staining was used to measure UTP23 expression in 133 ovarian cancer tissues. Then we used short hairpin RNA (shRNA), over-expression plasmid and cell counting kit-8 (CCK-8) assay to evaluate the function of UTP23 on modulating paclitaxel resistance in ovarian cancer. RNA-sequencing (RNA-seq) was used to find targeted downstream molecular of UTP23. Quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) and western blotting were utilized to detect related genes expression.ResultsWe confirmed that UTP23 was down-regulated in both SKOV3-TR30 and A2780-TR cells compared with their parental cells. Decreased UTP23 expression was observed in ovarian cancer tissues with paclitaxel resistance. Moreover, lower expression of UTP23 was tightly correlated with patients of worse prognosis. Further UTP23 silence by shRNA increased paclitaxel resistance in SKOV3 and A2780 cells. And UTP23 over-expression by plasmid decreased paclitaxel resistance in SKOV3-TR30 and A2780-TR cells. Additionally, RNA-seq and qRT-PCR validation revealed that growth differentiation factor 15 (GDF15) was probably a downstream target for UTP23. GDF15 was notably up-regulated upon the depletion of UTP23 in both SKOV3 and A2780 cells.ConclusionOur findings elucidated a previously unknown function for UTP23 in regulating paclitaxel sensitivity and UTP23 could serve as a potential prognostic predictor for ovarian cancer.     

内源性IL-8诱导卵巢癌细胞对顺铂与紫杉醇产生耐药的机制研究

目的探讨内源性IL-8诱导卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药的机制及相关信号转导通路。方法在原有工作基础上,以2种人卵巢癌细胞系A2780(不分泌IL-8,对顺铂、紫杉醇敏感)和SKOV-3(高分泌IL-8,对顺铂、紫杉醇耐药)为研究模型,分别将正义(sense,ss)IL-8基因或反义(antisense,as)IL-8基因稳定转染至A2780细胞或SKOV3细胞,应用MTT法、Caspase-3活性测定、RT-PCR及Western blot技术等观察内源性IL-8是否影响卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,并对其作用的机制和可能的信号传导通路进行研究。结果 1)内源性过表达IL-8可诱导A2780细胞对顺铂和紫杉醇产生耐药,而抑制IL-8表达可恢复SKOV3细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,IL-8诱导的卵巢癌细胞化疗耐药是通过降低Caspase-3活性来实现的;2)内源性过表达IL-8可上调A2780细胞的耐药相关基因MDR1和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达,而抑制IL-8表达可使上述基因的表达明显降低;3)Wortmannin(PI3K抑制剂)和PD98059(MEK1/2抑制剂)能分别阻断IL-8诱导下卵巢癌细胞的Akt和ERK活化及化疗耐药作用。结论 IL-8诱导的卵巢癌细胞化疗耐药可能与其上调耐药相关基因MDR1和凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xL及XIAP的表达以及活化Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt信号通路相关,提示调节IL-8表达或其相关信号通路可能是治疗耐药性卵巢癌的一种良好策略。     

Ikaros的3种亚型对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的:探讨Ikaros的3种亚型对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。方法:利用逆转录病毒转染人卵巢癌SKOV3细胞,分别表达Ikaros的3种亚型(IK1、IK2和IK6);采用CCK-8法分析表达不同亚型后SKOV3细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞周期的改变;Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:CCK-8结果显示IK1和IK2能明显抑制SKOV3细胞的增殖;细胞周期结果表明IK1和IK2能诱导SKOV3细胞发生G1期阻滞,IK6则对SKOV3细胞的增殖能力和细胞周期则无明显影响;Western blot检测结果显示,IK1和IK2明显降低cyclin D1和cyclin D2蛋白的表达水平,同时升高p21蛋白的表达水平。IK6则对SKOV3细胞的cyclin D1、cyclin D2及p21蛋白表达水平无明显改变。结论:IK1和IK2这2种亚型能明显抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,其机制可能是由于IK1和IK2能降低细胞周期促进蛋白cyclin D1和cyclin D2的表达及增加细胞周期抑制蛋白p21的表达,从而诱导细胞周期发生G1期阻滞。而IK6亚型对SKOV3细胞增殖能力及细胞周期无明显影响。     

靶向上皮性卵巢癌SKOV3细胞ZEB1-shRNA重组体构建及功能研究

目的:利用RNA干扰技术,降低人上皮性卵巢癌SKOV3细胞中锌指增强子结合蛋白1(ZEB1)基因的表达,观察ZEB1低表达对SKOV3细胞的生长影响。方法:用pSUPER-EGFP1载体构建针对人ZEB1基因的干扰质粒shZEB1,脂质体转染SKOV3细胞,G418筛选稳定转染细胞株,通过RT-PCR和Western blot检测ZEB1在SKOV3细胞中表达。用克隆形成、划痕试验、RT-PCR和致瘤试验分别检测转染细胞克隆能力、迁移力、miR-200c表达水平和在裸鼠的致瘤性。结果:成功构建shZEB1,稳定转染细胞株shZEB1-SKOV3内ZEB1表达下降,导致shZEB1-SKOV3细胞miR-200c表达增高,克隆能力、迁移力及致瘤性下降。结论:用RNA干扰技术可靶向降低卵巢癌细胞株SKOV3内ZEB1的表达,使其致瘤性降低,提示ZEB1可作为分子靶点用于上皮性卵巢癌靶向治疗。     

人结肠癌细胞系SP细胞microRNA表达谱的初步分析

 目的：探讨结肠癌侧群（SP）细胞在结肠癌多药耐药性中的作用及其microRNA生物标志。方法：结肠癌SP细胞的分选采用流式细胞术,细胞活力的测定采用MTT法,microRNA表达谱的检测采用microRNA芯片,microRNA表达的验证采用实时荧光定量PCR。结果：（1）HCT-15、HT-29及LoVo结肠癌细胞系中SP细胞的比例分别为16.75%、13.02%及9.52%。（2） 化疗药（5-氟尿嘧啶、草酸铂及阿霉素）对3种结肠癌细胞系SP细胞的 IC50均明显高于对非SP细胞的IC50（P<0.05）。（3）microRNA芯片检测表明miR-5000-3p、miR-5009-3p及miR-552在3种结肠癌细胞系的SP细胞中表达均上调,实时荧光定量PCR亦证实此结果。结论：miR-5000-3p、miR-5009-3p及miR-552在结肠癌细胞系的SP细胞中表达上调,有可能成为结肠癌SP细胞的潜在microRNA生物标志。     

MUC16介导卵巢癌细胞免疫逃逸NK细胞杀伤的研究进展

过继性自体NK细胞免疫治疗临床应用的效果不明显可能与肿瘤在恶化过程中对NK细胞的免疫逃逸有关,MUC16作为一种表达于卵巢癌上皮细胞表面的跨膜黏蛋白可能参与了卵巢癌细胞对NK细胞杀伤作用的免疫逃逸.因而了解MUC16介导卵巢癌细胞免疫逃逸NK细胞杀伤作用的相关性研究很重要.     

青藤碱抑制人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭

目的:观察青藤碱对人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:分别采用不同浓度的青藤碱处理SKOV3细胞12、24和48 h,采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Transwell实验检测细胞迁移率和侵袭率,同时采用Western blot法检测细胞周期素(cyclin)A、cyclin D1、E-cadherin和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达水平。结果 :随着青藤碱作用浓度和作用时间的增加,SKOV3和IOSE80细胞活力逐渐降低,青藤碱作用SKOV3和IOSE80细胞48 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为2.12 mmol/L和17.35 mmol/L;青藤碱可呈剂量依赖性地诱导SKOV3细胞发生G_0/G_1期和S期阻滞(P0.05),抑制SKOV3细胞迁移和侵袭(P0.05),下调cyclin A、cyclin D1和MMP-9蛋白水平(P0.05),并上调E-cadherin蛋白水平(P0.05)。结论 :青藤碱可在体外抑制人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭,这可能与其下调cyclin D1、cyclin A和MMP-9蛋白水平,以及上调E-cadherin蛋白水平有关。     

CD44和NANOG在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的:探讨上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)中CD44及转录因子NANOG的表达及其临床意义。方法:用免疫组织化学法检测良性卵巢肿瘤和EOC组织中CD44及NANOG的表达,并对EOC中CD44和NANOG的表达水平做相关性分析。Western blot法检测不同浓度顺铂对卵巢癌SKOV3细胞中CD44及NANOG蛋白表达水平的影响。结果:CD44和NANOG在EOC中的阳性表达率均明显高于良性卵巢肿瘤组织(P0.01);EOC中CD44与NANOG的表达水平呈正相关(r=0.346,P0.01)。CD44在EOC中的阳性表达率与临床分期和淋巴结转移有关(P0.05),而与年龄、病理分级、病理类型和肿瘤位置无关;NANOG在EOC中的阳性表达率与病理分级和临床分期有关(P0.05),而与年龄、病理类型、淋巴结转移和肿瘤位置无关。顺铂可诱导卵巢癌SKOV3细胞中CD44和NANOG表达上调(P0.05)。结论:CD44和NANOG在EOC中高表达,且与EOC发生和发展有关。顺铂可诱导卵巢癌SKOV3细胞中肿瘤干细胞标记物CD44及胚胎干细胞多能性基因产物NANOG表达升高。肿瘤干细胞的产生可能是促进EOC发生、发展及化疗耐药的潜在机制。     

干扰长链非编码RNA MNX1-AS1对卵巢癌细胞的干样特性、氧化应激以及线粒体功能损伤的影响

目的：探讨干扰长链非编码RNA（lncRNA） MNX1-AS1对卵巢癌细胞的干样特性、氧化应激以及线粒体 功能损伤的影响。方法：将KOV3 细胞随机分组,进行处理及培养,RT-PCR 检测RNA MNX1-AS1 的表达,筛选 干扰效果最明显的序列;观察干细胞成球情况;免疫印迹检测干细胞标记物蛋白八聚体结合转录因子4（OCT4）、 性别决定区Y 框蛋白（SOX2）和ATP 结合转运蛋白G 超家族成员2（ABCG2）的表达;检测氧化应激标记物丙 二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量;荧光探针检测活性氧（ROS）的含量;流式细胞仪检测线粒体 膜电位的变化;免疫印迹检测B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl-2）/Bcl-2 相关X蛋白（Bax）、活化胱天蛋白酶3（cleaved cas3）/cas3、c-Myc 的表达。结果：3 个序列对比显示MNX1-AS1-shRNA3 干扰组最为显著,选择此组为后续实 验干扰组,分组为对照组、阴性对照组（shRNA-NC）、干扰组（MNX1-AS1-shRNA3）;与对照组相比,MNX1- AS1-shRNA3 干扰组SKOV3 干细胞成球数量、直径减小,干细胞标记物蛋白OCT4、 SOX2、ABCG2 的表达显著 降低,SOD 活性、c-Myc 蛋白表达均显著降低,线粒体损伤标记物蛋白的表达（Bax/Bcl-2、cleaved cas3/cas3）、 MDA与ROS 含量均显著升高,线粒体的膜电位下降。结论：干扰lncRNA MNX1-AS1 诱导卵巢癌细胞的干样特 性降低、氧化应激增强、线粒体损伤加重,干扰lncRNA MNX1-AS1 对SKOV3 细胞抑制效果显著,具有靶向治 疗卵巢癌的潜力。