临床分离志贺菌耐药性分析及1类整合子的检测

目的了解2007年至2010年安徽省临床分离志贺菌耐药性和1类整合酶基因(intⅠ1)、qacE△1-sul1基因及整合子携带的耐药基因盒的分布。方法琼脂稀释法检测21种抗菌药物对志贺菌的最低抑菌浓度。PCR扩增intⅠ1和qacE△1-sul1基因,对阳性菌株可变区基因盒序列进行分析。结果 137株志贺菌对萘啶酸、氨苄西林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率均80.0%以上,且多重耐药率达94.2%,但对三代头孢菌素和氟喹诺酮类耐药率在33.0%以下。intⅠ1的检出率为89.1%(122/137),检出dfrA17-aadA5和aar-3-aacA4两种基因盒,首次在志贺菌中检测到aar-3-aacA4基因,GenBank登录号JF271916。结论安徽省临床分离志贺菌多重耐药现象严重。临床仍可选用氟喹诺酮类和三代头孢菌素作为本地区细菌性痢疾的经验性治疗。1类整合子与志贺菌的耐药具有一定的相关性。     

铜绿假单胞菌I类整合子相关基因的解析和定位

目的对4株铜绿假单胞菌临床菌株携带的I类整合子相关基因进行解析和定位，探讨I类整合子相关基因在细菌耐药性形成和耐药基因播散中的作用。方法采用PCR扩增、DNA测序、DNA序列比对的方法对4株铜绿假单胞菌临床菌株携带的I类整合子相关基因进行解析，采用接合试验对该类整合子进行定位分析。结果4株铜绿假单胞菌I类整合子都含有耐药基因．该耐药基因在相应菌株中发挥耐药作用；该菌整合子位于质粒上。结论I类整合子耐药基因在铜绿假单胞菌耐药性形成和耐药基因的播散中发挥作用。     

100株住院儿童大肠埃希菌Ⅰ类整合子研究

目的:了解Ⅰ类整合子在住院儿童分离大肠埃希菌中分布流行情况。方法:根据NCCLS推荐的纸片扩散法进行药敏试验;PCR扩增临床大肠埃希菌Ⅰ类整合子整合酶基因和可变区基因盒。结果:患者整合酶检出率68%,Ⅰ类整合子基因盒检出率为65%。Ⅰ类整合子的大小约为772 bp～2360 bp,100株细菌各含1～2个Ⅰ类整合子,整合子中最常见的基因盒排列为dfrA17+aadA5和dfrA12+aadA2。结论:Ⅰ类整合子在多重耐药大肠埃希菌中广泛流行,是介导细菌多重耐药性的重要分子机制,应加强基因水平耐药监测。     

铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子相关基因的解析和定位

目的对4株铜绿假单胞菌临床菌株携带的Ⅰ类整合子相关基因进行解析和定位,探讨Ⅰ类整合子相关基因在细菌耐药性形成和耐药基因播散中的作用。方法采用PCR扩增、DNA测序、DNA序列比对的方法对4株铜绿假单胞菌临床菌株携带的Ⅰ类整合子相关基因进行解析,采用接合试验对该类整合子进行定位分析。结果4株铜绿假单胞菌I类整合子都含有耐药基因,该耐药基因在相应菌株中发挥耐药作用;该菌整合子位于质粒上。结论Ⅰ类整合子耐药基因在铜绿假单胞菌耐药性形成和耐药基因的播散中发挥作用。     

肺炎克雷伯菌Ⅰ型整合子的检测与鉴定

目的研究Ⅰ型整合子参与肺炎克雷伯菌耐药的分子机制。方法收集2007年至2010年某院临床分离的297株肺炎克雷伯菌,应用K-B纸片扩散法检测耐药性,采用聚合酶链式反应进行I类整合子整合酶基因的检测;整合子可变区扩增、克隆测序,分析I类整合子基因结构。结果 297株肺炎克雷伯菌中,除MEM、IPM外,对其余11种抗菌素,Ⅰ类整合酶基因阳性菌株的耐药率明显高于Ⅰ类整合酶基因阴性菌株。57.91%(172/297)的菌株I类整合子整合酶基因阳性,共检测出10种不同基因盒。可变区编码耐药基因有aadA2、aadA1、aadA5、aadA3C、aacA4,介导氨基糖苷类抗菌素耐药;dhfrhI、dfrA12、dfrA14、dfrA17、dfrA1、dfrA25、dhfrhI,介导磺胺类抗菌素的耐药;aar-2,介导利福平耐药。结论Ⅰ类整合子在本院临床分离肺炎克雷伯菌中分布较广泛,主要介导氨基糖苷类和磺胺类抗菌素耐药。整合子与肺炎克雷伯菌的耐药有关,在肺炎克雷伯菌耐药性的形成和播散中具有重要作用。     

鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合子与多重耐药相关性研究

目的 了解临床分离鲍曼不动杆菌的耐药状况、Ⅰ类整合子的分布情况,探讨Ⅰ类整合子与多重耐药的关系.方法 检测20种临床常用抗菌药物对鲍曼不动杆菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC).PCR扩增Ⅰ类整合酶基因.对部分Ⅰ类整合酶阳性菌株进行耐药基因盒序列分析.结果 鲍曼不动杆菌呈现多重耐药,鲍曼不动杆菌对IMP和MRP耐药率分别为0.9%和1.8%,对CPZ/SB的耐药率为35.7%,对其它抗菌药物的耐药率均大于60%,多重耐药率为76.8%(86/112),但对COL和MIN均敏感.80.4%(90/112)的菌株检测出Ⅰ类整合子.Ⅰ类整合子阳性株对多种药物的耐药率均高于阴性株,且Ⅰ类整合子阳性株多重耐药率(90%)明显高于阴性株(22.7%)(P<0.01).Ⅰ类整合子基因盒序列分析显示,Ⅰ类整合子携带aacA4,catB8和aadA13种耐药基因.结论 Ⅰ类整合子在鲍曼不动杆菌中检出率很高并与其多重耐药性关系密切.     

多重耐药大肠埃希菌rmtB基因检测与整合子初步研究

目的对2010年临床分离的125株大肠埃希菌进行rmtB基因及整合子进行分析筛选。方法针对住院儿童大肠埃希菌采用KB法对氨基糖苷类药物及其他药物进行敏感性测定,并采用PCR方法扩增3种氨基糖苷类耐药基因和整合子。结果显示对12种药物耐药率达30%~75%。其中16S rRNA甲基化酶基因rmtB检出率12%,氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(3)-Ⅱ和氨基糖苷类核苷转移酶基因aadA1检出率1.6%。rmtB阳性菌株携带I类整合子的检出率66.7%,主要携带了dfrA12+aadA2+orfF、dfrA17+aadA5两种排列形式。结论 rmtB基因及I类整合子在大肠埃希菌中广泛存在,其在耐药性播散中发挥着重要的作用。     

阴沟肠杆菌Ⅰ类整合子可变区耐药基因的研究

目的 研究阴沟肠杆菌Ⅰ类整合子可变区基因盒的种类及位置，探讨Ⅰ类整合子携带的耐药基因盒特点，分析耐药基因盒与阴沟肠杆菌耐药性的关系。方法 采用纸片扩散法(K-B法)测定抗生素的敏感性；PCR扩增阴沟肠杆菌Ⅰ类整合子阳性株中的可变区基因盒，并测序分析。结果 可变区一共扩增出15种基因盒，其中耐药基因盒7种：aadA2-dfrA12、aadA2-aadB、aadA2、aadB、dfrA12、aac(6′)-Iica-catB3和blaIMP-4，以aadA2-dfrA12(1913bp)最常见。许多质粒DNA和染色体DNA的PCR扩增产物相同。结论 Ⅰ类整合子可变区携带的耐药基因盒以耐氨基糖昔类和耐甲氧苄氨嘧啶类抗生素基因为主。耐药基因在阴沟肠杆菌中存在水平播散和垂直传播的现象。     

志贺菌1、2类整合子及ISCR1携带情况与耐药性的关系

目的 了解天津地区志贺菌1类、2类整合子及插入序列共同区(ISCR1)携带情况及其与耐药性的关系。方法 K-B纸片扩散法测定临床分离的159株志贺菌的药敏情况。以煮沸法制备细菌总DNA作为PCR扩增模板。采用PCR方法扩增1类、2类整合子及ISCR1并测序分析。PCR产物直接测序,结果经BLAST程序与Gen-Bank数据库标准株比对分析。结果 159株志贺菌中,53株福氏志贺菌对四环素的耐药率最高88.68%,其次是链霉素81.13%、氯霉素及SMZco均为56.60%,多重耐药率77.36%;106株宋氏志贺菌对氨苄西林的耐药率最高97.17%,其次是SMZco95.28%、四环素83.96%、庆大霉素76.42%,多重耐药率98.11%。1类整合子阳性118株,其中典型1类整合子23株,共有5种基因盒,分别为aad A2、aad A1、dfrⅠ、blaoxa-10及blaoxa-1;非典型1类整合子95株,基因包括int I1、aad A、blaoxa-1和IS1等;2类整合子阳性89株,其基因盒有dfr A1、satl及aad A1;1类、2类整合子同时阳性的菌株70株。未发现ISCR1阳性菌株。整合子阳性菌株中多重耐药率高于整合子阴性菌株(90.65%vs 50%,P<0.05)。结论 1、2类整合子广泛存在于志贺菌中且与志贺菌的多重耐药相关。     

天津地区志贺菌耐药性及整合子携带调查

目的:了解天津地区志贺菌抗生素耐药性变迁及1、2类整合子携带状况。方法:K-B纸片法测定1981—1983年及2009年天津地区临床分离的57株志贺菌药敏情况。以煮沸法制备细菌总DNA作为PCR扩增模板。PCR方法扩增1、2类整合子整合酶及可变区并测序分析。PCR产物直接测序,结果经BLAST程序与GenBank数据库标准菌株比对分析。结果:1981—1983年组志贺菌对四环素、链霉素、氯霉素及复方新诺明敏感率低,3种及3种以上抗生素多重耐药率为66.67%;2009年组志贺菌对氨苄西林、链霉素、复方新诺明、哌拉西林和四环素敏感率低,3种及3种以上抗生素多重耐药率为83.33%。1981—1983年组1类整合子阳性率为87.88%(29/33),27株可变区含氨基糖苷类药物耐药基因aadA;1株宋内志贺菌可变区含甲氧苄啶耐药基因dfrA17和氨基糖苷类药物耐药基因aadA5;未发现2类整合子阳性株;2009年组1类整合酶阳性率为79.17%(19/24),可变区及3末端扩增均阴性;2类整合子阳性率87.50%(21/24),可变区含dfrA1+sat1+aadA1,介导甲氧苄啶、链丝菌素和链霉素耐药;其中17株1、2类整合酶均阳性。结论:2009年分离的志贺菌抗生素耐药较上世纪80年代分离的志贺菌增强,多重耐药菌株增加。天津地区志贺菌携带1、2类整合子。′     

Antibiotic resistance, integrons and Salmonella genomic island 1 among non-typhoidal Salmonella serovars in The Netherlands

The objective of this study was to investigate the antimicrobial resistance patterns, integron characteristics and gene cassettes as well as the presence of Salmonella genomic island 1 (SGI1) in non-typhoidal Salmonella (NTS) isolates from human and animal origin. Epidemiologically unrelated Dutch NTS strains (n=237) originating from food-producing animals and human cases of salmonellosis were tested for their susceptibility to 15 antimicrobial agents. Resistance to 14 of these antimicrobials, including the third-generation cephalosporins, was detected. Resistance to sulphonamides, ampicillin, tetracycline, streptomycin, trimethoprim and nalidixic acid was common (>/=10% of the strains were resistant). Resistance against three or more antimicrobials was observed in 57 isolates. The same 237 strains were studied for the prevalence of class 1 integrons, their gene cassettes and the presence of SGI1. Thirty-six isolates (15.2%) carried class 1 integrons. These integrons had ten distinct profiles based on the size of the integron and restriction fragment length polymorphism analysis. Integrons were detected for the first time in serovars Indiana and Senftenberg. Multidrug resistance was strongly associated with the presence of class 1 integrons in which the aadA2, aadA1, bla(PSE-1), dfrA1, dfrA5, dfrA14 or sat genes were present, as determined by nucleotide sequence determination. The presence of gene cassettes or combinations of gene cassettes not previously found in integrons in Salmonella was observed. SGI1 or its variants (SGI-B, -C and -F) were present in 16 isolates belonging to either serovar Typhimurium, Derby or Albany. Regardless of whether the isolate was of human or animal origin, the same resistance phenotype, integron profile and SGI1 structure could be observed.     

Stenotrophomonas maltophilia resistance to trimethoprim/sulfamethoxazole mediated by acquisition of sul and dfrA genes in a plasmid-mediated class 1 integron

Stenotrophomonas maltophilia is becoming a more and more common cause of infections. In this study, the minimal inhibitory concentrations of trimethoprim/sulfamethoxazole (SXT), ceftazidime, minocycline, levofloxacin, chloramphenicol and ticarcillin/clavulanic acid were determined and the distribution of integrons and sul1, sul2 and dfrA genes was investigated in 102 S. maltophilia isolates collected from patients treated in 31 hospitals in Anhui, China, in the month of September in 2006-2008. The rate of resistance to SXT was up to 30.4%, and 64.7% of isolates were class 1 integron-positive. Sequencing data revealed the following novel gene cassettes embedded in class 1 integrons: dfrA17-aadA5; dfrA12-aadA2; aacA4-catB8-aadA1; aadB-aac(6')-II-bla(CARB-8); and arr-3-aacA4. This is the first report of the gene cassettes dfrA17-aadA5 and dfrA12-aadA2 and of sul2 genes in SXT-resistant S. maltophilia isolates in China. None of the SXT-susceptible S. maltophilia isolates were positive for sul2 or dfrA gene products by polymerase chain reaction (PCR), but PCR products for sul1 were detected in 27 SXT-susceptible and 25 SXT-resistant isolates. The findings from this study indicate that the sul1 gene, in combination with dfrA17 and dfrA12 gene cassettes and sul2 genes located within a 7.3kb plasmid, lead to a high rate of SXT resistance and also confirm the need for ongoing resistance surveillance.     

第一类整合子整合酶基因intI1的定位分析

目的　整合子 ( integrons)介导的细菌耐药特性已成为研究细菌耐药机制的热点 ,在研究了来自正常人携带沙门氏菌中整合子的分布和特性的基础上 ,进一步探讨整合子的基因定位。方法　从已鉴定的整合子阳性菌株出发 ,分别提取其质粒和染色体 DNA,进行质粒的接合转移试验。对染色体 DNA进行限制性酶切 ,以第一类整合酶基因 int I1( DIG标记 )为探针 ,进行 Southern杂交。结果　 4株整合酶阳性菌株不存在含有第一类整合子的接合性质粒 ,确定 4株整合子阳性菌株的整合酶基因 int I1基因位于染色体上。结论　本文发现的整合子阳性菌株对耐药基因的捕获是通过染色体 DNA介导的。     

Class 1 integrons and virulence genes in Salmonella enterica isolates from pork and humans

In this study, 183 Salmonella enterica isolates were characterised for integrons and virulence genes. Among the isolates, 46% were positive for intI1, but no isolates carried intI2 or intI3. Eighteen class 1 integrons (21%) contained resistance gene cassettes (i.e. dfrA1-orfC, dfrA12-aadA2, bla(PSE-1) and aadA2) and five class 1 integrons with the dfrA12-aadA2 array were conjugally transferable. Two Salmonella pork isolates of serotypes Albany and Kedougou possessed Salmonella genomic island 1 variants SGI1-G and SGI1-F, respectively. Four class 1 integrons contained an atypical 3'-CS linked to the qacH-sul3 domain, and three were not a sul type. Two novel GyrA mutations (Pro-45→Ser and Met-48→Ile) and three novel ParC mutations (Ser-5→Arg, Thr-31→Met and Leu-77→Arg) were identified in ciprofloxacin-resistant isolates. At least 90% of the Salmonella isolates contained pagC, prgH, sitC, sipB or spaN, whereas all isolates harboured invA, msgA, spiA and tolC.     

奇异变形菌中整合子分布及耐药性分析

目的 了解院内奇异变形菌中各类整合子的携带分布情况、阳性菌株可变区基因盒类型以及其与宿主菌耐药表型的相关性,从而为临床治疗和院内感染控制提供参考。方法 采用PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳等方法,将本院2016年1月—2018年12月份从临床标本中分离得到的150株奇异变形菌进行第1、2和3类整合子的筛选,并对整合子阳性菌株可变区进行测序分析以及宿主菌的耐药性进行相关性分析。结果 150株奇异变形菌中携带整合子的菌株共有91株,阳性率为60.7%,其中第1类整合子阳性菌株有30株,占20.0%;第2类整合子阳性菌株22株,占14.7%;同时携带第1和2类菌株39株,占26.0%;未筛出第3类整合子;在91株整合子阳性菌株中,86株可变区出现扩增产物条带,其余5株可变区未见扩增产物;第1类整合子阳性菌株可变区携带的耐药基因盒主要为AadA2、DfrA32,第2类整合子阳性菌株可变区携带耐药基因盒主要为DfrA1;可变区携带AadA2的菌株对庆大霉素和妥布霉素的耐药率显著高于整合子阴性菌株(P<0.01),可变区携带DfrA1或DfrA32的菌株对复方磺胺甲噁唑(即甲氧苄啶/磺胺甲噁唑)的耐药率也明显高于整合子阴性菌株(P<0.01);91株整合子阳性菌株对氨苄西林/舒巴坦、复方磺胺甲噁唑、环丙沙星、庆大霉素、头孢曲松、妥布霉素和左氧氟沙星的耐药率均显著高于整合子阴性菌株(P<0.01)。结论     

奇异变形菌中整合子分布及耐药性分析

目的 了解院内奇异变形菌中各类整合子的携带分布情况、阳性菌株可变区基因盒类型以及其与宿主菌耐药表型的相关性,从而为临床治疗和院内感染控制提供参考。方法 采用PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳等方法,将本院2016年1月—2018年12月份从临床标本中分离得到的150株奇异变形菌进行第1、2和3类整合子的筛选,并对整合子阳性菌株可变区进行测序分析以及宿主菌的耐药性进行相关性分析。结果 150株奇异变形菌中携带整合子的菌株共有91株,阳性率为60.7%,其中第1类整合子阳性菌株有30株,占20.0%;第2类整合子阳性菌株22株,占14.7%;同时携带第1和2类菌株39株,占26.0%;未筛出第3类整合子;在91株整合子阳性菌株中,86株可变区出现扩增产物条带,其余5株可变区未见扩增产物;第1类整合子阳性菌株可变区携带的耐药基因盒主要为AadA2、DfrA32,第2类整合子阳性菌株可变区携带耐药基因盒主要为DfrA1;可变区携带AadA2的菌株对庆大霉素和妥布霉素的耐药率显著高于整合子阴性菌株(P<0.01),可变区携带DfrA1或DfrA32的菌株对复方磺胺甲噁唑(即甲氧苄啶/磺胺甲噁唑)的耐药率也明显高于整合子阴性菌株(P<0.01);91株整合子阳性菌株对氨苄西林/舒巴坦、复方磺胺甲噁唑、环丙沙星、庆大霉素、头孢曲松、妥布霉素和左氧氟沙星的耐药率均显著高于整合子阴性菌株(P<0.01)。结论 临床分离的奇异变形菌携带整合子的比例较高,其可变区所携带的耐药基因主要为编码氨基糖苷类和甲氧苄氨嘧啶类抗菌药物的基因,整合子的携带与宿主菌产生的耐药性呈高度相关。     

产AmpC酶大肠埃希菌中整合子的研究

目的:观察25株产AmpC酶大肠埃希菌中整合子的分类、结构及其在介导AmpC酶基因转移中的作用。方法:采用微量稀释法测定20种抗生素对试验菌株的敏感性。利用多重聚合酶链反应(PCR)方法检测整合酶基因(intI)及其定位,对其阳性菌株可变区(Int)扩增产物进行测序分析。结果:这25株菌对多种抗生素耐药。20株Ⅰ类整合酶基因阳性(80%);所携带的耐药基因盒绝大多数为aadA5和dfr17;未发现携带AmpC基因盒的整合子。结论:Ⅰ类整合子广泛地存在于产AmpC酶的大肠杆菌中;耐药基因盒是整合子阳性菌株对氨基糖苷类、磺胺类药物及氯霉素耐药的主要原因,但对介导AmpC酶基因转移,不起主要作用。