柚皮素调控NLRP3炎性小体对坏死性小肠结肠炎新生小鼠肠道的保护作用研究

目的:探讨柚皮素对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生小鼠的肠道保护作用及其分子机制.方法:将新生C57BL/6小鼠按随机数字表法分为正常对照组(Control组)、模型组(NEC组)、柚皮素低剂量组(L-NAR,5 mg/kg)和柚皮素高剂量组(H-NAR,20 mg/kg).采用缺氧冷刺激+LPS腹腔注射的方法建立NEC...     

Th1／Th2相关细胞因子在活体小肠移植术后监测中的意义

目的 研究人活体部分小肠移植术受体围手术期Ｔｈ１／Ｔｈ２相关细胞因子的变化及与排斥反应的相关性。方法 采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法测定受体围手术期血清ｓＩＬ－２Ｒ，ＩＬ－４和ＩＬ－６水平，并与内镜活检病理结果相比较。结果 受体术后第１天出现ｓＩＬ－２Ｒ升高的第１个高峰，并于术后第１２天基本达术前水平。第２个高峰出现于第６５天，并于第６７天达高峰。而受体于第６７天出现较强烈的排斥反应，两天后得到控制，     

褪黑素体内外对胃癌Th1/Th2/Th17型细胞因子表达的影响

目的 探讨褪黑素（MLT）体内外对胃癌Th1/Th2/Th17型细胞因子干扰素（IFN）-γ、肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素（IL）-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17a表达的影响。 方法 1.构建荷胃癌小鼠模型,共32只雄性615小鼠全部荷小鼠前胃癌（MFC）细胞后随机分为4组,分别用0、25、50、100 mg/kg剂量褪黑素进行腹腔注射并测量肿瘤长短径。干预1周后取外周血,剥离肿瘤组织进行称重和测量。2.将MFC接种于6孔细胞培养板中,贴壁24 h后分别用0、2、4、6、8、10 mmol/L浓度褪黑素干预,24 h后形态学观察并收集相应上清液。3.采用ELISA检测外周血清中褪黑素的浓度变化。采用流式液相多重蛋白定量技术流式微珠阵列（CBA）分别检测外周血清、细胞上清液中Th1/Th2/Th17型相关细胞因子的浓度变化。 结果 1.成功建立荷胃癌小鼠模型。与阴性对照组相比, 褪黑素中、高剂量组小鼠外周血清褪黑素浓度明显升高,肿瘤体积明显下降。与阴性对照组相比,中剂量组血清中IL-10浓度明显增加;高剂量组血清IFN-γ、IL-2、IL-10浓度均明显增加。2.褪黑素干预MFC细胞实验中,与空白对照组相比,6、10 mmol/L 褪黑素组中IFN-γ浓度显著降低;4、6、8、10 mmol/L 褪黑素组中IL-6浓度明显降低,而 6 mmol/L 褪黑素组IL-10浓度明显升高。以上差异均具有统计学意义（P<0.05）。 结论 褪黑素体内外对胃癌细胞均有抑制作用且可能通过调节Th1/Th2/Th17细胞相关因子IFN-γ、IL-2、IL-6及IL-10的表达起增强肿瘤免疫作用。     

不同级别胶质瘤患者术前外周血Th1/Th2细胞因子的表达

目的:分析不同级别脑胶质瘤患者手术前外周血Th1/Th2细胞因子表达变化。方法:选择近期住院的脑胶质瘤患者63例,在治疗前采用ELISA方法进行外周血IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度检测。结果:胶质瘤组外周血IL-4和IL-10浓度均明显高于对照组,而前者外周血IFN-γ、IL-2浓度及IFN-γ/IL-4比值则显著低于后者(P<0.05或P<0.01)。高级别组(Ⅲ~Ⅳ级)外周血IL-4和IL-10浓度均明显高于低级别组(Ⅰ~Ⅱ级),而前者外周血IFN-γ、IL-2浓度及IFN-γ/IL-4比值则显著低于后者(P<0.05或P<0.01)。结论:脑胶质瘤患者可能有Th2优势表达,与恶性程度有一定关系。     

膜表达的HLA-G1对同种反应性PBMC分泌Th1/Th2型细胞因子的影响

目的研究人脐静脉内皮细胞系(ECV304)表达的HLA-G1对同种异体外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2型细胞因子分泌的影响。方法采用脂质体介导的基因转染技术将pcDNA3-HLA-G1转入ECV304,以间接免疫荧光技术在蛋白质水平上检测HLA-G1分子在ECV304上的表达;以表达HLA-G1的ECV304作为刺激细胞,灭活后,与健康人PBMC共同培养,用ELISA检测上清液中Th1/Th2型细胞因子的浓度,观察HLA-G1对同种异体抗原激活的PBMC分泌Th1/Th2型细胞因子的影响。结果与转染pcDNA3空质粒的对照组相比,HLA-G1能使PBMC的IL-10分泌增加(P<0.05),而IL-2,IFN-γI、L-4分泌无明显影响。结论HLA-G1能引起由同种异体抗原激活的PBMC分泌IL-10增加,提示HLA-G1有可能使Th1/Th2型细胞因子向Th2型偏移。     

TRAIL对CIA小鼠脾细胞表达Th1/Th2细胞因子的影响

 摘要：目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（Tumor Necrosis Factor Related Apoptosis Inducing Ligand , TRAIL）对胶原诱导型关节炎（Collagen-induced arthritis, CIA）小鼠的治疗效果,探讨TRAIL治疗类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）的可能机制。方法 牛Ⅱ型胶原蛋白加弗氏完全佐剂免疫DBA/1J小鼠建立CIA模型,采用重组腺相关病毒AAV-TRAIL关节腔内注射进行治疗。CBA和流式细胞术检测Th1/Th2细胞因子的分泌。结果 AAV-TRAIL可改善CIA小鼠的病情,体外研究其机制发现TRAIL可抑制CIA小鼠的脾细胞分泌Th1型细胞因子,但对Th2型细胞因子没有作用。结论TRAIL对CIA小鼠的治疗作用可能和TRAIL抑制Th1型细胞因子分泌相关。     

复发性自然流产育龄期妇女外周血Th1/Th2细胞因子表达分析

我们观察了21例复发性自然流产（recurrent spontaneousabortion,RSA）育龄期妇女外周血IL-4、IFN-γ表达水平及IFN-γ/IL-4比值变化,并与同期正常怀孕妇女的检测结果比较,现报告如下。     

颅脑损伤合并急性肺损伤患者血清Th1/Th2细胞因子表达分析

急性肺损伤（acute lung injury,ALI）是脑外伤后较为常见的并发症。越来越多的证据[1-2]表明,脑外伤合并ALI患者存在外周免疫反应受损,即卒中诱导的免疫抑制综合征（SIDS）,后者削弱了机体对人侵病原体的有效防御,导致感染率和病死率增高,但国内相关研究较少。     

坏死性小肠结肠炎早产儿肠组织差异性表达nesfatin-1及机制探讨

目的:分析nesfatin-1在坏死性小肠结肠炎(NEC)早产儿肠组织中的表达情况,并探讨nesfatin-1对脂多糖(LPS)诱导的NEC结肠细胞模型的影响及作用机制。方法:收集2017～2019年间在本院接受NEC肠道手术的早产儿中获得小肠组织。应用RT-qPCR检测nesfatin-1在NEC的mRNA在小肠组织中的表达。以人胎正常结肠上皮细胞HCoEpiC和人结肠癌细胞Caco-2为研究对象,分别采用nesfatin-1过表达载体及其阴性对照载体以及pcDNA-TLR4(Toll样受体4)处理细胞。采用ELISA法检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-10的含量。采用Western blot分析nesfatin-1、TLR4、NLRP3、黑色素瘤缺乏因子-2(AIM2)、caspase-1和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达和共免疫沉淀法分析nesfatin-1与TLR4的关系。结果:NEC早产儿小肠组织中nesfatin-1的表达明显低于健康组(P<0.01)。与对照组相比,LPS诱导的肠上皮细胞HCoEpiC和HT-29细胞中的nes...     

CD86协同刺激信号在孕早期母—胎界面Th1／Th2型细胞因子表达调控中的作用

目的探讨CD86协同刺激信号在孕早期母-胎界面Th1/Th2型细胞因子表达调控中的作用。方法建立正常妊 娠模型CBA×Balb/c和自然流产模型CBA× DBA/2。于孕第4、6、8、10天给CBA孕鼠腹腔注射大鼠IgG作为对照组;仅于孕第4 天或于孕第4、6、8、10天给CBA孕鼠腹腔注射大鼠抗小鼠CD86 mAb。孕第14天计算两种模型各实验组胚胎吸收率R。ELISA 法测定孕第9和第14天各实验组母-胎界面组织体外培养上清中Th1/Th2型及相关细胞因子(IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10、 TGF-β2)表达水平。结果孕早期干预CD86协同刺激信号,对正常妊娠模型母-胎界面孕第9和第14天IL-4、IL-10、TGF-β2以及 IFN-γ、TNF-α表达均无显著影响,其胚胎吸收率亦无显著变化。自然流产模型中,孕早期干预CD86协同刺激信号后,孕第9、 第14天母-胎界面IL-4、IL-10、TGF-β2表达均显著增加(P＜0.05);而IFN-γ、TNF-α表达显著下降(P＜0.05)。胚胎吸收率亦 显著下降(P＜0.05)。结论孕早期母-胎界面CD86协同刺激信号的调节紊乱可能是触发母体对胚胎产生免疫排斥的重要病 理因素,于孕早期干预CD86协同刺激信号能够恢复母-胎界面Th1型/Th2型免疫调节的生理平衡,从而诱导母-胎免疫耐受。     

CCK-8对KLH免疫小鼠脾细胞Th1/Th2平衡的影响

目的： 探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8）对Th1/Th2平衡的调节作用。方法: 给予BALB/c小鼠钥孔戚血蓝蛋白（KLH）免疫同时体内给予不同剂量的CCK-8,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其脾细胞培养上清中Th1型细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2（IL-2）和Th2型细胞因子白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-5（IL-5）水平,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测脾细胞中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5 mRNA表达;ELISA法检测血清中Th1型抗KLH抗体IgG2a和Th2型抗KLH抗体IgG1水平。结果: ①KLH免疫使小鼠脾细胞分泌Th1/Th2型细胞因子水平明显增高,mRNA表达增高,KLH免疫同时给予CCK-8可使脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-2含量进一步增加和IFN-γ、IL-2mRNA表达增高,而使IL-4、IL-5含量降低,IL-4、IL-5 mRNA表达减低和降低IL-4/IFN-γ比值。②KLH免疫小鼠血清中IgG2a、IgG1发生不同程度增高,CCK-8可使其血清中IgG1水平减低而使IgG2a水平增高。结论: CCK-8可促进KLH免疫小鼠体内Th1反应,使Th2优势反应向Th1方向转变。     

外周血Th1/Th2细胞在大鼠肝移植早期的变化

目的观察外周血Th1/Th2细胞在大鼠肝移植早期不同免疫状态下的变化趋势是否和免疫状态有关。方法大鼠分3组：A组：同基因移植组（BN→BN）;B组：异基因移植（Lewis→BN）＋环孢素A（CsA）组;C组：异基因移植组。均36只,另外各设观察组观察生存期。于移植后1、3、5、7和14d应用流式细胞分析外周血CD4^＋CD45RC^&#177;的百分数,观察移植肝排斥反应病理分级及受体存活时间。结果（1）A组和B组的生存期平均大于100d,明显长于C组（34.3&#177;3.6）d。（2）除第1天外,C组和B组各时间段的排斥分级明显高于A组（P〈0.05或〈0.01）;C组亦明显高于B组（P〈0.05或〈0.01）。（3）移植后3d起CD4^＋CD45RC^＋%/CD4^＋CD45RC^-%在C组明显高于A组和B组（P〈0.05或〈0.01）。（4）CD4^＋CD45RC^＋%/CD4^＋CD45RC^-%在B组和排斥分级存在负相关（r=-0.565,P〈0.01）,而在C组CD4^＋CD45RC^＋%/CD4^＋CD45RC^-%和排斥分级存在正相关（r=0.745,P〈0.01）。结论外周血Th1/Th2细胞的变化趋势和大鼠肝移植早期不同免疫状态有关。     

脑脊髓损伤大鼠局部Th1/Th2细胞相关因子的表达及意义

目的 分析大鼠急性脑脊髓性损伤后脑脊髓中Th1和Th2细胞相关因子的表达水平,探讨其在持续性二次损伤中可能的作用.方法 制备SD大鼠急性脑脊髓性损伤模型,随机分为损伤组和脂多糖(LPS)处理组,各组又分别对脑和脊髓进行实验处理.用荧光定量PCR分别检测不同组别大鼠脑脊髓中Th1和Th2细胞相关因子,并进行相关性分析.结果 与对照组相比,损伤和LPS处理的脑组织Th1细胞相关的细胞因子IFN-γ表达明显增高(P＜0.05),而T-bet的表达并无明显改变;在损伤和LPS处理的脊髓中,IFN-γ和转录因子T-bet、HLX的表达均显著升高(P＜0.05).无论是脊髓损伤组还是LPS处理组,细胞因子IL-4和转录因子GATA3均与对照组无异,呈低表达状态.结论 脑脊髓损伤后呈现不同程度的Th1细胞相关因子上调,尤以可溶性的细胞因子IFN-γ为显著,脊髓损伤时出现T-bet与HLX表达上调.     

慢性乙肝患者树突状细胞对Th1/Th2分化的影响

探讨慢性乙肝患者树突状细胞(dendritic cells,DC)对CD4+Th细胞亚群分化的影响。分离慢性乙肝患者外周血单个核细胞(PBMC),以rhIL-4(50 ng/ml)、rhGM-CSF(10 ng/ml)和rhTNF-α(100 u/ml)诱导培养DC。以流式细胞仪检测DC表面CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子表达情况。MTT法检测DC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力。免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞亚群,PMA+Ionomycin刺激后胞内荧光染色,流式细胞仪检测辅助性T细胞(helper T cell,Th)内特征性细胞因子IFN-γ/IL-4以判断Th1/Th2分化。ELISA法检测DC或Th细胞培养上清中IL-6、IL-12、IFN-γ和IL-4的含量。结果:慢性乙肝患者的DC表达CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子水平明显低于正常人(P<0.01);培养至第7天,慢性乙肝患者DC分泌的IL-12水平低于正常人(P<0.01),而分泌的IL-6水平增高(P<0.05)。与正常人相比,慢性乙肝患者外周血中Th1细胞占CD4+T细胞的百分比较低(P<0.01),其Th细胞培养上清中IFN-γ的量也较低(P<0.01)。患者DC与同种异体的健康人Th细胞共培养,刺激Th1型细胞因子IFN-γ产生的能力低于正常人(P<0.01)。慢性乙肝患者体内DC功能的异常可能导致了外周血Th1细胞分化不足。     

Th1/Th2、Tc1/Tc2亚群在乙肝肝硬化患者中的作用

目的 :探讨乙肝肝硬化患者外周血 (PBMC)中CD4 和CD8 T细胞内Th1和Th2类细胞的平衡状态 ,探明Th1、Th2类细胞在乙肝肝硬化中的作用。方法 :乙肝肝硬化患者CD4 T细胞和CD8 T细胞中IFN γ 和IL 4 细胞的百分率 ,观察乙肝肝硬化患者Th1 Th2、Tc1 Tc2比例的变化。结果 :乙肝肝硬化患者PBMC中CD4 ,CD8细胞 ,CD4 CD8比值与健康对照者相比无统计学差异 (P >0 0 5 ) ,Th1细胞及Tc1细胞百分率为 8 8% ,9 0 % ,较健康对照者 7 5 % ,7 7%升高 (P <0 0 5 )。结论 :乙肝肝硬化患者外周血T细胞亚群发生Th1类偏移 ,在乙肝肝硬化的发生和发展中可能起重要作用     

特应性皮炎患者外周血细胞亚群DC1/DC2、Th1/Th2检测的临床意义

为探讨特应性皮炎（AD）患者外周血细胞亚群DC（DC1/DC2）与细胞亚群Th（Th1/Th2）分化状态及其临床意义,采用免疫荧光三标记流式细胞术检测35例特应性皮炎患者外周血DC1/DC2亚群（DC1/CD11 c＋和DC2/CD123＋）、Th1/Th2亚群（CD3＋CD4＋CD30-/CD3＋CD4＋CD30＋）,并以35名正常人作为对照组。结果表明,特应性皮炎患者DC CD123＋百分率比对照组明显增高（P＆lt;0.05）,而CD11 c＋DC百分率与对照组相比,无统计学意义（P＆gt;0.05）;Th2（CD3＋CD4＋CD30＋）显著增高（P＆lt;0.05）,Th1亚型（CD3＋CD4＋CD30-）与对照组比较,差异无统计学意义（P＆gt;0.05）。特应性皮炎患者外周血细胞亚群DC2呈优势,导致向细胞亚群Th2的免疫反应偏移,这可能与特应性皮炎的发病有关。     

接种纯化人用狂犬病疫苗对妊娠期Th1/Th2类细胞因子谱的影响

目的研究人用狂犬病纯化疫苗（RV）对妊娠期Th1/Th2类细胞因子谱的影响。方法对所有可疑狂犬病毒暴露者进行RV的全程接种,在接种RV的第0、14、45天时采血并分离外周血单个核细胞与RV进行培养,采用ELISA法检测抗狂犬病病毒抗体,体外培养检测淋巴细胞增殖能力,CBA法检测细胞培养上清液中Th1类细胞因子：干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素-2（IL-2）以及Th2类细胞因子：IL-4、IL-5、IL-10的水平。结果 17例暴露者于RV全程注射后17d（第45天）抗体检测阳性;RV刺激后,暴露者第45天淋巴细胞增殖能力明显高于第0天（P〈0.05）;当RV刺激后,暴露组第14天、第45天产生IL-2、IL-4、IL-5的含量显著高于未刺激组及暴露组第0天水平（P〈0.05）。结论妊娠期注射RV在刺激机体产生体液免疫的同时,可以有效地诱导Th1/Th2类细胞因子的产生。