Die β-Laktamase-Inhibitoren und ihre klinische Bedeutung

Zusammenfassung Zu den verschiedenen Möglichkeiten der Überwindung einer -Laktamase-bedingten Resistenz von Mikroorganismen gehört der Einsatz von Enzyminhibitoren, die selbst keine nennenswerte eigene antimikrobielle Aktivität aufweisen, jedoch in Kombination mit einem Breitspektrumantibiotikum vom -Laktamtyp synergistisch wirken. Auf diese Weise gelangen -Laktam-resistente Bakterien erneut in das Wirkungsspektrum von Substanzen wie Penicillin G oder Ampicillin, die aufgrund steigender Resistenzentwicklung in den letzten Jahren ihre therapeutische Effizienz zu verlieren drohen. 6--Bromopenicillansäure und die sogenannten Olivansäuren weisen eine bemerkenswerte Hemmpotenz gegenüber verschiedenen -Laktamasen auf. Die mikrobiologischen und bisher vorliegenden pharmakokinetischen Daten eines Penicillansäuresulfons, das ebenfalls signifikante Hemmeigenschaften verschiedener klinisch relevanter -Laktamasen besitzt, werden diskutiert. Von Clavulansäure, einem Stoffwechselprodukt vonStreptomyces clavuligerus mit -Laktamstruktur konnte ebenfalls gezeigt werden, daß es ein progressiver Hemmstoff der -Laktamasen vom Richmond-Typ II-V ist. Neben den bisher vorliegendenIn-vitro-Untersuchungen werden auch Ergebnisse klinischer Studien mit der Kombination Clavulansäure und Amoxicillin erwähnt.

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Inhibitors of -lactamases and their clinical significance

Summary One of the various possibilities of overcoming bacterial resistance due to -lactamase production is with enzyme inhibitors. These have no remarkable intrinsic antimicrobial activity, but act synergistically in combination with a broad spectrum antibiotic of the -lactam type. Thus -lactam resistant bacteria are once again within the antibacterial spectrum of substances like penicillin G or ampicillin, which have been in danger of losing their therapeutical effectiveness in recent years due to an ever increasing development of resistance. 6--bromopenicillanic acid and the so-called olivanic acids exhibit remarkable inhibitory properties against several -lactamases. Microbiological and pharmacokinetic data published recently on a penicillanic acid sulfone, which also shows significant inhibitory properties against several clinically relevant -lactamases, are discussed in this paper. Clavulanic acid, a recently discovered product ofStreptomyces clavuligerus with a -lactam structure, acts as a progressive inhibitor of Richmond type II-V -lactamases. In addition to microbiological and enzyme-kineticin vitro data, results of clinical studies with the combination clavulanic acid and amoxicillin are summarized.

     

“Bound” insulin: in vivo and in vitro biologic activity

Summary Partially purified preparations of human serum bound insulin were injected intraperitoneally or intravenously into intact fed, fasted or fasted-refed rats, or incubatedin vitro with their isolated epididymal adipose tissue. The biologic activity of bound insulin on muscle and adipose tissue,in vivo andin vitro, was compared with the activity of crystalline insulin standards. Bound and crystalline insulin injected intraperitoneally into rats stimulated the incorporation of glucose-u-¹⁴C into the glycogen of muscle and into the glycogen and fat of adipose tissue. The activities of both bound and crystalline insulin were affected by the nutritional state of the animals. Intravenous administration of partially purified bound insulin or crystalline insulin stimulated the incorporation of glucose-u-¹⁴C into the muscle glycogen of intact fed, fasted or fasted-refed rats and into the fat of the adipose tissue of fed or fasted-refed rats. Bound insulin, but not crystalline insulin stimulated fat synthesis in the adipose tissue of fasted rats. Bound or crystalline insulin, at the concentration used, failed to stimulate glycogen synthesis in adipose tissue. Bound insulin stimulated the oxidation of glucose into CO₂ in isolated rat adipose tissue and the incorporation of glucose-u-¹⁴C into the glycogen and fat of the adipose tissue. The effect of bound or crystalline insulin on isolated adipose tissue was also affected by the nutritional state of the animal.

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Zusammenfassung Teilweise gereinigte Präparate von gebundenem Insulin aus menschlichem Serum wurden normalen gefütterten, hungernden oder nach Hungern wiederaufgefütterten Ratten intraperitoneal oder intravenös injiziert oderin vitro mit dem isolierten epididymalen Fettgewebe dieser Ratten inkubiert. Die biologische Aktivität des gebundenen Insulins am Muskel und Fettgewebe,in vivo undin vitro, wurde mit der Aktivität von Standardlösungen kristallinen Insulins verglichen. Wurde gebundenes und kristallines Insulin Ratten intraperitoneal injiziert, kam es zu einer vermehrten Einlagerung von Glukose-U-¹⁴C in Muskelglykogen und in das Glykogen und Fett des Fettgewebes. Sowohl die Aktivität des gebundenen als auch des kristallinen Insulins wurden durch den Ernährungszustand der Tiere beeinflußt. Die intravenöse Verabreichung des teilweise gereinigten gebundenen Insulins oder des Kristallinsulins führte zu einer verstärkten Einlagerung von Glukose-U-¹⁴C in das Muskelglykogen der gefütterten, hungernden oder der nach Hungern wiederaufgefütterten Ratten und auch in das Fett des Fettgewebes der gefütterten und nach Hungern wiederaufgefütterten Ratten. Nur das gebundene Insulin, nicht das kristalline Insulin steigerte die Fettsynthese des Fettgewebes der hungernden Ratten. Weder das gebundene noch das kristalline Insulin führten bei den verwendeten Konzentrationen zu einer Steigerung der Glykogensynthese des Fettgewebes. Das gebundene Insulin stimulierte die Oxydation von Glukose zu CO₂ am isolierten Fettgewebe der Ratte und die Einlagerung von Glukose-U-¹⁴C in das Glykogen und Fett des Fettgewebes. Die Wirkung des gebundenen und des kristallinen Insulins auf das isolierte Fettgewebe wurde ebenfalls durch den Ernährungszustand der Tiere beeinflußt.

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Résumé Cette étude porte sur l'injection intrapéritonéale ou intraveineuse de préparations partiellement purifiées d'insuline liée de sérum humain. Des rats nourris ad libitum, mis à jeun, ou renourris après une période de jeûne, ont servi pour ces injections, et leur tissu adipeux épididymaire a servi à l'étude de l'effet in vitro de ces préparations. L'activité biologique de cette insuline liée a été comparée avec celle d'une insuline cristalline standard. L'insuline liée tout comme l'insuline cristalline stimule l'incorporation de glucose-u-C¹⁴ dans le glycogène du muscle et dansle glycogène et la graisse du tissu adipeux, à la suite de leur injection intrapéritonéale. L'état de nutrition des animaux injectés modifie les activités et de l'insuline liée et de l'insuline cristalline. L'injection intraveineuse d'insuline liée partiellement purifiée, ou d'insuline cristalline, stimule l'incorporation de glucoseu-C¹⁴ dans le glycogène musculaire de rats nourris ad libitum, à jeun, ou renourris après un jeûne prolongé. Elle stimule également l'incorporation du glucose dans la graisse du tissu adipeux de rats nourris ou renourris après jeûne. L'insuline liée seulement, non l'insuline cristalline, stimule la lipogénèse du tissu adipeux de rats à jeun. Tant l'insuline cristalline que l'insuline liée est restée sans effet, pour les dosages utilisés, sur la synthèse du glycogène dans le tissu adipeux. L'insuline liée stimule l'oxydation du glucose par le tissu adipeux isolé ainsi que son incorporation dans le glycogène et la graisse de ce tissu. L'action de l'insuline liée ou cristalline est également modifiée par l'état de nutrition de l'animal dont le tissu adipeux est utilisé in vitro.

     

The cooperation of cefotaxime and desacetyl-cefotaxime with respect to antibacterial activity and β-lactamase stability

Summary Desacetyl-cefotaxime, the main metabolite of cefotaxime, possesses a broad antibacterial spectrum. Its activity is lower than that of cefotaxime, but significantly surpasses that of cefazolin against gram-negative bacteria. The -lactamase stability of desacetyl-cefotaxime is higher than that of the parent compound. This -lactamase stability might be responsible for the synergistic effects of cefotaxime and desacetyl-cefotaxime occasionally seen inin vitro combination studies.

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Kooperation von Cefotaxim und Desacetyl-Cefotaxim in bezug auf antibakterielle Aktivität und -Laktamasestabilität

Zusammenfassung Desacetyl-Cefotaxim, der Hauptmetabolit von Cefotaxim, besitzt ein breites Wirkungsspektrum. In seiner antibakteriellen Aktivität ist es dem Cefotaxim zwar unterlegen, übertrifft aber Cefazolin bei den gramnegativen Erregern deutlich. Die -Laktamasestabilität von Desacetyl-Cefotaxim ist noch höher als die der Ausgangssubstanz. Diese -Laktamasestabilität ist möglicherweise der Grund für den inin vitro Kombinationsversuchen gelegentlich nachweisbaren synergistischen Effekt von Cefotaxim und Desacetyl-Cefotaxim.

     

Perspectives of beta-lactamases inhibitors in therapy of infections caused by Escherichia coli or Klebsiella with plasmidic resistance to third generation cephalosporins

Summary New plasmidic -lactamases inactivating so far stable cephalosporins, aztreonam and cephamycins restrict the use of these antibiotics in therapy of infections, e.g., byEscherichia coli and Klebsiella. Thus, combinations of -lactamase inhibitors and -lactam antibiotics were investigatedin vitro with regard to their therapeutic perspectives. Minimal inhibitory concentrations and the kinetics of killing in a pharmacodynamic model were determined. Extended broad spectrum betalactamases (EBS--lactamases) representative both for the TEM- and SHV-type were included. None of the available fixed combinations of penicillins and -lactamase inhibitors appears useful for therapy of infections caused by producers of EBS--lactamases. In contrast, combinations of piperacillin and tazobactam or sulbactam plus cephalosporins (cefoperazone, cefotaxime, ceftazidime) or aztreonam are highly active (both by their MICs and bactericidal activity) against TEM-type EBS--lactamases, but less promising for the SHV-type EBS--lactamases, and plasmidic cephamycinase. Of the -lactams available, the monobactam carumonam and the carbapenems (imipenem, meropenem) remain safe in infections caused byE. coli and Klebsiella EBSBase producers.

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Therapeutische Perspektiven von -Laktamase-Inhibitoren bei Infektionen durch Escherichia coli oder Klebsiella mit plasmid-determinierter Resistenz gegenüber Drittgenerationscephalosporinen

Zusammenfassung Neue plasmid-kodierte -Laktamasen inaktivieren bisher stabile Cephalosporine, Aztreonam und Cephamycine. Sie schränken damit die therapeutische Sicherheit dieser Antibiotika bei Infektionen zum Beispiel durchEscherichia coli oder Klebsiellaarten ein. Deshalb wurden die therapeutischen Perspektiven von Kombinationen aus -Laktamase-Inhibitoren und -Laktam-Antibiotikain vitro analysiert. Die minimalen Hemmkonzentrationen (MHK) wurden gemessen. Zu einem pharmakokinetischen Modell wurde die Abtötungskinetik bestimmt. Einbezogen wurden Enzyme sowohl aus der TEM- als auch der SHV-Reihe. Keine der beiden zugelassenen festen Kombinationen aus Penicillinen und -Laktamase-Inhibitoren erwies sich als erfolgversprechend für die Therapie von Infektionen durch Stämme, welche -Laktamasen mit erweitertem Spektrum produzieren. Demgegenüber waren Kombinationen aus Piperacillin und Tazobactam oder Sulbactam mit Cephalosporinen (Cefoperazon, Cefotaxim, Ceftazidim) oder Aztreonam sowohl aufgrund ihrer MHK-Werte als auch ihrer bakteriziden Aktivität im pharmakodynamischen Modell hochaktiv gegenüber TEM--Laktamasen mit erweitertem Spektrum, jedoch weniger wirksam bei Stämmen mit neuen Enzymen der SHV-Reihe und plasmid-kodierter Cephamycinasen. Unter den derzeit vorhandenen -Laktam-Antibiotika kommt anhand ihrerIn-vitro-Aktivität dem Monobactam Carumonam sowie den Carbapenemen (Impipenem, Meropenem) auch ohne -Laktamase-Inhibitor die größte therapeutische Sicherheit bei Infektionen durchE. coli und Klebsiella-Stämme mit der Fähigkeit zur Synthese von -Laktamasen mit erweitertem Spektrum zu.

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Symposium 2nd Biennial Conference on Chemotherapy of Infectious Diseases and Malignancies, Montreux, March 5^th–8^th, 1989.

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Supported by Pfizer GmbH, Karlsruhe, FR Germany.     

Epidemiology of extended spectrum β-lactamases

Summary -lactamases play a major part in resistance, as recently redemonstrated by the emergence of extended spectrum -lactamases. Since its discovery in FR Germany, SHV-2 has been reported from four continents and CTX-1 (TEM-3) was established in at least 26 French hospitals. More than 12 other enzymes have been individualized. The newest aspect of resistance was probably underestimated because most strains of enterobacteria (mainlyKlebsiella pneumoniae) appeared susceptible to oxyimino--lactams as suggested by MICs or diameters of inhibition zone sizes. The double-disk synergy test between amoxicillin/clavulanic acid and oxyimino--lactams was useful to easily detect two susceptibility patterns (CTX, CAZ). Extended spectrum -lactamases isolated among nosocomial isolates of enterobacteria (urines, blood, wound, sputum cultures) mostly from intensive care units have spread through hospitals. If outbreaks were described, numerous serotypes were identified inKlebsiella pneumoniae. In France the distribution of extended spectrum -lactamases showed that CTX-1 (TEM-3) was well distributed among ten species unlike SHV-type enzymes (SHV-2, SHV-3, SHV-4) preferentially detected inKlebsiella pneumoniae. A majority of strains produced CAZ-type enzymes inEscherichia coli. Some isolates produced two extended spectrum -lactamases. In Tunisia extended spectrum -lactamase producing strains were mainly identified among pediatric isolates ofKlebsiella pneumoniae, Salmonella andEscherichia coli; SHV-2 was predominant but recently CTX-1 and two other types with an isoelectric point of 6.35 and 5.4 (phenotype CTX) were individualized. Because plasmid-encoded, this mechanism was spreading in France among enterobacteria with other resistance markers (e.g. netilmicin, amikacin) for CTX-1 unlike SHV-2. The transferability of extended spectrum -lactamases appeared to occur less frequently from isolates of enterobacteria issued from Tunis and particularly for the first isolates ofSalmonella wien. The transmissible resistance to other antibiotics such as aminoglycosides was demonstrated in 1988. It seems highly likely that the use of newer antibiotics favors the appearance of extended spectrum -lactamases.

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Epidemiologie der Breitspektrum--Laktamasen

Zusammenfassung -Laktamasen spielen in der bakteriellen Resistenz eine entscheidende Rolle; dies bestätigte sich erneut mit dem Auftreten von Breitspektrum--Laktamasen. Nach Erstentdeckung in der Bundesrepublik wurde SHV-2 in vier Kontinenten nachgewiesen; in mindestens 26 französischen Krankenhäusern trat CTX-1 (TEM-3) auf. Mehr als 12 weitere Enzyme wurden identifiziert. Die Bedeutung dieser neuesten Resistenz-Form wurde wahrscheinlich unterschätzt, da die meisten Stämme von Enterobakterien (vor allemKlebsiella pneumoniae nach Ergebnissen der MHK-Bestimmungen oder Hemmhofdurchmesser gegen Oxyimino--Laktame empfindlich zu sein schienen. Zwei Empfindlichkeitsmuster (CTX, CAZ) lassen sich mit dem Doppel-Blättchen-Synergismus-Test von Amoxicillin/Clavulansäure und Oxyimino--Laktamen ohne Schwierigkeiten nachweisen. In den Krankenhäusern haben sich Breitspektrum--Laktamasen ausgebreitet, die bei nosokomialen Enterobakterien-Stämmen (aus Urin-, Blut-, Wund- und Sputumkulturen), vorwiegend aus Intensivstationen, zu finden sind. Bei Ausbrüchen vonKlebsiella pneumoniae-Infektionen fanden sich zahlreiche Serotypen. Untersuchungen zur Verteilung der Breitspektrum--Laktamasen in Frankreich zeigten, daß CTX-1 (TEM-3) unter zehn Spezies verbreitet ist, während sich die Enzyme vom Typ SHV (SHV-2, SHV-3, SHV-4) vorwiegend inKlebsiella pneumoniae nachweisen lassen. BeiEscherichia coli bildeten die meisten Stämme Enzyme vom Typ CAZ. Manche Isolate bildeten zwei Breitspektrum--Laktamasen. Breitspektrum--Laktamasebildung durchKlebsiella pneumoniae, Salmonella undEscherichia coli wurde in Tunesien vor allem in Isolaten aus der Pädiatrie nachgewiesen; am häufigsten fand sich SHV-2, kürzlich wurden aber auch CTX-1 und zwei andere Typen mit isoelektrischem Punkt von 6,35 und 5,4 (Phänotyp CTX) identifiziert. Da diese Enzyme durch Plasmide kodiert sind, breitete sich dieser Resistenzmechanismus in Frankreich für CTX-1 zusammen mit anderen Resistenzmarkern aus (z. B. Resistenz gegen Netilmicin, Amikacin), was für SHV-2 nicht der Fall war. Bei Enterobakterien-Isolaten aus Tunis, vor allem den erstenSalmonella wien-Isolaten, war die Übertragbarkeit von Breitspektrum--Laktamasen offensichtlich seltener. 1988 wurde übertragbare Resistenz gegen andere Antibiotika wie Aminoglykoside festgestellt. Es scheint sehr unwahrscheinlich, daß die Verwendung neuerer Antibiotika das Auftreten von Breitspektrum--Laktamasen begünstigt.

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This study was supported in part by a grant to A. P. (N° 87-33403E) from the Caisse Nationale de l'Assurance Maladie des Travailleurs Salariés.

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supported by Pfizer GmbH, Karlsruhe     

The antigenicity of human hemoglobins

Summary The correlation of the antigenicities among native hemoglobins and their subunit chains were investigated by the absorption of antisera and the combination of urea added immunoelectrophoresis with double diffusion. Alphachain showed identity with Hb-F but partial identity with -chain and Hb-A. Beta-chain showed identity with Hb-A but -chain and Hb-F showed partial identity with this chain. Gamma-chain showed identity only with Hb-F and its antigenicity was considered as being different from those of - or -chains.The lines of -, -and -chains were reconfirmed from the facts that the appearance of them depended always on the existence of anti-Hb-A or anti-Hb-F antibodies in the absorbed antisera and the minor component lines of

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Zusammenfassung Die Zusammenhänge der Antigenität zwischen nativen Hämoglobinen und deren Unterketten wurden mit der Absorption der Antiseren und der Kombination der Harnstoff-Immunelektrophorese und Doppeldiffusion untersucht. Die -Kette zeigte Identität mit Hb-F, aber nur partielle Identität mit der -Kette und Hb-A. Die -Kette war in ihrer Antigenität mit Hb-A identisch, die -Kette und Hb-F waren teilweise identisch mit der -Kette. Die -Kette zeigte die Identität mit Hb-F; es wird angenommen, daß ihre Antigenität verschieden von der -oder -Ketten ist.Für das Auftreten der Linien der -, - und -Ketten müssen Anti-Hb-A-oder Anti-Hb-F-Antikörper in den absorbierten Antiseren vorhanden sein, außerdem fusionieren die schwächeren Linien der Doppeldiffusion nicht mit irgendwelchen Linien der Unterketten. Auch gereinigte - oder -Ketten wurden zur Feststellung ihrer Linien benutzt.

     

Entwicklung neuer Antiöstrogene vom Typ des 3,3′-Dihydroxy-α,β-diäthylstilbens und ihre Prüfung am DMBA-induzierten,hormonabhängigen Mammacarcinom der SD-Ratte

Zusammenfassung Die Verlagerung der phenolischen OH-Gruppen des Diäthylstilböstrols in die 3,3-position (trans-3,3-Dihydroxy-,-diäthylstilben, Verb. Nr. III) führt unter Erhaltung der Rezeptoraffinität zu einer starken Abnhme der östrogenen Wirkung. III hemmt in vitro die östradiol-Rezeptor-Wechselbeziehung kompetitiv und antagonisiert in vivo bei der Maus die uterotrope Wirkung des Östrons. In Versuchen am DMBA-induzierten, hormonabhängigen Mammacarcinom der Ratte kommt es, unter III-Einwirkung dosisabhägig zu einer starken Abnahme von Tumorgröße und-zahl, die durch die antiöstrogenen Eigenschaften von III bedingt, ist. Der Austausch der ,-ständigen Äthylreste in III durch andere Alkylketten führt zu keiner weiteren, Steigerung der antiöstrogenen und tumorhemmenden, Wirkung.

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Abkürzungen trans-4,4-DES trans-4,4-Dihydroxy-,-diäthylstilben (Diäthylstilböstrol DAB 7) - I trans-3,3-Dihydroxy-,-dimethylstilben - II cis-3,3-Dihydroxy-,-diäthylstilben - III trans-3,3-Dihydroxy-,-diäthylstilben - IV trans-3,3-Dihydroxy-,-di-n-propylstilben - V trans-3,3-Dihydroxy-,-di-n-butylstilben - VI trans-2,2-Dihydroxy-,-diäthylstilben - DCC Dextran Coated, Charcoal - DMBA 7,12-Dimethylbenz-[a]-anthracen - TRIS Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan - EDTA Äthylendiamintetraessigsäure - E2 Östradiol - ³H-E2 Östradiol [2,4,6,7-³H]; 90–115 Ci/mmol (New England Nuclear, Dreieichenhain/Frankfurt) - PPO 2,5-Diphenyloxazol - Dimethyl-POPOP p-Bis-2-(4-methyl-5-phenyl-oxazoyl)-benzol - K _d Dissoziationskonstante des Östradiol-Rezeptor-Komplexes - K _i Dissoziationskonstante des Inhibitor-Rezeptor-Komplexes - SDS Natriumdodecylsulfat - TCA Trichloressigsäure Der Deutschen Forschungsgemeinschaft, und dem Verband der Chemischen Industrie-Fonds der Chemischen Industrie — danken wir für die Förderung dieser UntersuchungenFrau G. Braun und Frau J. Garamvölgy danken wir für ihre wertvolle MitarbeitEin Teil der Untersuchungen wurde im Institut für Pharmazie, und Lebensmittelchemie der Universität München durchgeführtHerrn Prof. Dr. Heinrich Thies zum 75. Geburtstag gewidmet     

Comparative nephrotoxicity among aminoglycosides and beta-lactam antibiotics

Summary Five hundred thirty-seven elderly male patients with complicated urinary tract infections who received treatment with aminoglycosides (gentamicin, tobramycin, sisomicin, or netilmicin) or -lactam antibiotics (ticarcillin, amoxicillin, or cefamandole) were reviewed with respect to nephrotoxic reactions. Nephrotoxicity was defined as a 31% increase in serum creatinine during treatment for patients with pretreatment creatinine clearances 30 ml/min, or an 18% increase in those patients with a pretreatment creatinine clearance < 30 ml/min. Renal toxicity correlated with advanced age and reduced renal function in the aminoglycoside groups. For patients with pretreatment creatinine clearances 30 ml/min, treatment groups were comparable for all relevant clinical and therapeutical features. Among these treatment groups, tobramycin was the least nephrotoxic of the aminoglycosides. Nephrotoxicity, as defined above, was lower for the -lactam antibiotics than for the aminoglycoside groups combined; however, the decrease was not significant. The mean serum creatinine, however, increased significantly in all patients following aminoglycoside treatment and this increase was significantly higher than in the -lactam group.

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Vergleich der Nephrotoxizität von Aminoglycosiden und -Lactam Antibiotika

Zusammenfassung 537 ältere männliche Patienten mit komplizierten Harnwegsinfektionen, die mit Aminoglycosiden (Gentamicin, Tobramycin, Sisomicin oder Netilmicin) oder -Lactam Antibiotika (Ticarcillin, Amoxicillin oder Cefamandol) behandelt wurden, wurden im Hinblick auf nephrotoxische Reaktionen überprüft. Nephrotoxizität wurde definiert als Anstieg des Serum-Kreatinin um 31% unter der Behandlung bei prätherapeutischer Kreatinin-Clearance von 30 ml/min oder um 18% bei Patienten, die vor der Behandlung eine Kreatinin-Clearance von < 30 ml/min aufwiesen. In den Aminoglycosid-Gruppen korrelierte die renale Toxizität mit fortgeschrittenem Alter und verminderter Nierenfunktion. Bei Patienten mit einer Kreatinin-Clearance von 30 ml/min waren alle Behandlungsgruppen in sämtlichen wichtigen klinischen und therapeutischen Elgenschaften vergleichbar. Tobramycin wies in diesen Gruppen unter den Aminoglycosiden die geringste Nephrotoxizität auf. Die Nephrotoxizität war entsprechend der oben genannten Definition in den -Lactam-Antibiotikagruppen geringer als in den Aminoglycosidgruppen; jedoch war dieser Unterschied nicht signifikant. Hingegen kam es bei allen Patienten nach Aminoglycosid-Behandlung zu einem signifikanten Anstieg mittleren Serum-Kreatinin-Spiegels, und dieser Anstieg war signifikant höher als in der -Lactam-Gruppe.

     

Presence of Two Signaling TGF-β Receptors in Human Pancreatic Cancer Correlates with Advanced Tumor Stage

Transforming growth factor- (TGF-)signal transduction is mediated via specific cellsurface signaling TGF- receptors, most notably thetype I ALK5 (TR-I_ALK5)and the type II(TR-II). We evaluated TR-I_ALK5 andTR-II expression in 41 human pancreatic cancertissue samples and correlated these findings withclinical data of the patients. Northern blot analysisindicated that, in comparison with the normal pancreas,pancreatic adenocarcinomas exhibited 8.0-fold and4.5-fold increases (P < 0.01), respectively, in mRNAlevels encoding TR-I_ALK5 andTR-II. In situ hybridization showed that both TR-I_ALK5 mRNAwere highly expressed in the majority of pancreaticcancer cells. Immunohistochemical analysis ofTR-I_ALK5 and TR-II revealedpositive immunostaining in 73% and 56% of the tumors, respectively. Both receptorswere concomitantly present in 54% of the pancreaticcancer samples. The presence ofTR-I_ALK5 or TR-II and theconcomitant presence of TR-I_ALK5 and TR-II in the cancer cells was associatedwith advanced tumor stage (P < 0.01). These findingsshow that in many human pancreatic cancers, increasedlevels of the two signaling TRs are present. The presence of the signaling TRs inadvanced tumor stages indicates a role in diseaseprogression.     

Changes in the hydroxyproline,hexosamine and sialic acid of the diabetic human and β, β′-iminodipropionitrile-treated rat retinal vascular systems

Summary The retinal vasculature has been isolated from nondiabetic and diabetic post mortem human eyes by controlled trypsin digestion. Chemical analysis demonstrated increases in the hydroxyproline and hexosamine contents in diabetes. There was no general increase in the sialic acid content. These results have been related to histological preparations of sectors of the same retinas. Administration of, -iminodipropionitrile to rats caused a retinopathy characterised by endothelial cell proliferation, increased PAS-positivity and microaneurysms. Chemical analysis of retinal vascular systems from, -iminodipropionitrile-treated rats revealed increases in hydroxyproline, hexosamine and sialic acid contents.

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Änderungen des Gehaltes an Hydroxyprolin, Hexosamin und N- azetyl- Neuraminsäure in den Netzhautgefäen von menschlichen Diabetikern und mit , Iminodiproprionitril behandelten Ratten

Zusammenfassung Die Netzhautgefäße wurden post-mortal aus diabetischen und nichtdiabetischen Augen mit Hilfe einer kontrollierten Trypsin-Behandlung gewonnen. Bei der chemischen Analyse fand sich ein Anstieg des Hydroxyprolin- und Hexosamingehaltes in den diabetischen Augen. Der N-azetyl-Neuraminsäuregehalt war im allgemeinen nicht erhöht. Diese Resultate wurden in Beziehung gebracht zu den histologischen Befunden, die an den einzelnen Sektoren der gleichen Retina erhoben wurden. Verabreichung von, -Iminodiproprionitril an Ratten bewirkte eine Retinopathie unter den Zeichen einer Wucherung der Endothelzellen, verstärkter PAS-Anfärbbarkeit und Mikroaneurysmen. Die chemische Analyse der Netzhautgefäße von mit, -Iminodiproprionitril behandelten Ratten zeigte einen erhöhten Gehalt an Hydroxyprolin, Hexosamin und N-azetyl-Neuraminsäure.

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Variations de l'hydroxyproline, de l'hexosamine et de l'acide sialique dans les systèmes vasculaires rétiniens de l'homme diabétique et du rat traité par le , -iminodipropionitrile

Résumé Le système vasculaire rétinien a été isolé, par digestion trypsique contrôlée, après la mort, à partir d'yeux humains de non-diabétiques et de diabétiques. L'analyse chimique a révélé l'augmentation du contenu en hydroxyproline et en hexosamine, dans le diabète. Il n'y avait pas d'augmentation générale du contenu en acide sialique. Ces résultats ont été rapprochés des préparations histologiques de portions des mêmes rétines. L'administration de, -iminodipropionitrile à des rats provoquait une rétinopathie caractérisée par une prolifération des cellules endothéliales, une PAS-positivité augmentée et des microanévrismes. L'analyse chimique des systèmes vasculaires rétiniens des rats traités par le,-iminodipropionitrile, a révélé l'augmentation du contenu en hydroxyproline, en hexosamine et en acide sialique.

     

Increased Expression of Transforming Growth Factor-β1 During Gastric Ulcer Healing in Rats

This study was done to investigate theexpression and localization of transforming growthfactor-₁ (TGF-₁) inthe gastric ulcerated tissues produced by acetic-acidduring the healing process, by northern blot analysis and immunohistochemicaltechnique. Ulcerated TGF-₁ mRNA levelswere significantly increased from days 3 to 18, in asimilar manner to extracellular matrix proteins, andreturned to control levels at the scarred phase.Immunoreactive TGF-₁ was localized inepithelial cells beneath proliferative zone in intacttissues. 1 In ulcerated tissues, TGF-₁was localized in macrophages in the ulcer bed and in fibroblasts ormyofibroblasts in the granulation tissues. Treatmentwith prostaglandin E₁ (PGE₁)further stimulated ulcerated TGF-₁expression, being associated with the acceleration of gastric ulcer healing, while treatment withindomethacin reduced TGF-₁ expression,being accompanied by the delayed ulcer healing. Thecombination of PGE₁ and indomethacin reversedthe indomethacin-induced decrease in ulcerated TGF-₁.Thus, TGF-₁ may be implicated in theacceleration of gastric ulcer healing.     

Thein vitro inactivation of thirteen β-lactam antibiotics by other mechanisms than adsorption to faecal substance

Summary We have investigated the antibiotic inactivating capacity of intestinal contentsin vitro in faeces. In the presently reported study the influence of -lactamase catalyzed hydrolysis on the antimicrobial activity of 13 commonly used -lactam antibiotics was investigated, while the influence of non-specific adsorption of antibiotics to faecal compounds was also taken into account. The following antibiotics were tested: benzylpenicillin, amoxicillin, amoxicillin/clavulanate, cloxacillin, piperacillin, temocillin, cefuroxime, cefamandole, cephradine, cefotaxime, ceftazidime, aztreonam and imipenem. Faecal samples were obtained from 30 healthy volunteers. Six different concentrations of each antibiotic were added to 1 g of faeces. After 24 h of incubation at 37°C the remaining amount of active antibiotic was determined by means of a growth inhibition assay. The contribution to the test results of non-specific adsorption to macromolecules was calculated by means of a model and the inactivation data were subsequently corrected. The amount of antibiotic non-specifically bound to faecal macromolecules varied from 0% to 80% of the amount of antibiotic initially added to the faeces. A considerable difference was found in the degree of inactivation of several antibiotics. However, in contrast to earlier investigations, the results of this study show that in a normal population the influence of -lactamase catalyzed hydrolysis on the activity of -lactam antibiotics is apparently very small when compared to the influence of non-specific adsorption of -lactam antibiotics to faecal compounds.

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Inaktivierung von 13 -Laktamantibiotika durch Mechanismen, die nicht auf Adsorption durch Bestandteile der Faeces zurückzuführen sind

Zusammenfassung Die Fähigkeit des Darminhaltes, Antibiotika zu inaktivieren, wurdein vitro untersucht. In der vorliegenden Studie wurde neben der unspezifischen Adsorption von Antibiotika an Stuhlbestandteile vor allem der Einfluß der -Laktamase-vermittelten Hydrolyse auf die anti-mikrobielle Aktivität von 13 gebräuchlichen -Laktamantibiotika untersucht (Benzylpenicillin, Amoxicillin, Amoxicillin/Clavulansäure, Cloxacillin, Piperacillin, Temocillin, Cefuroxim, Cefamandol, Cephradin, Cefotaxim, Ceftazidim, Aztreonam und Imipenem). Die Stuhlproben wurden von 30 gesunden Probanden gewonnen. Jedes Antibiotikum wurde in sechs verschiedenen Konzentrationen jeweils zu 1 g Faeces gegeben. Nach 24 h Inkubationszeit bei 37°C wurde mittels Wachstumshemmtest die Restaktivität des Antibiotikums bestimmt. Die Ergebnisse wurden mit dem Faktor der unspezifischen Adsorption an Makromoleküle (Berechnung nach entsprechendem Modell) korrigiert. Von der ursprünglich zugegebenen Antibiotikamenge wurden 0 bis 80% unspezifisch an Makromoleküle der Faeces gebunden. Zwischen dem Inaktivierungsgrad der Antibiotika bestanden beträchtliche Unterschiede. Im Vergleich zur unspezifischen Adsorption an Stuhlbestandteile erwies sich in dieser Studie — im Gegensatz zu früheren Untersuchungen — der Einfluß der Hydrolyse durch -Laktamasen auf die Antibiotikaaktivität bei gesunden Personen als sehr gering.

     

Comparative in vitro activities of amoxicillin-clavulanate,ampicillin-sulbactam and piperacillin-tazobactam against strains of escherichia coli and proteus mirabilis harbouring known β-lactamases

Summary Strains ofEscherichia coli (N=124) andProteus mirabilis (N=29) harboring known -lactamases were analyzed as to their susceptibility to ampicillin, amoxicillin, and piperacillin alone and in combination with sulbactam, clavulanate, and tazobactam. With TEM 1-producingE. coli, a correlation between specific -lactamase activity and the MIC of piperacillin and ampicillin-sulbactam was observed. These strains also showed significant differences in susceptibilities to the various combinations, suggesting that, at least in strains resistant to one combination, several -lactam/-lactamase inhibitor combinations should be tested in the laboratory. All combinations tested enhanced the activity of the -lactam towards TEM 1-producingE. coli, piperacillin-tazobactam being the most active. The drugs were less active to OXA 1 enzymes; solely with piperacillin-tazobactam 90% of strains were within the therapeutic range of the drug. Sulbactam acted synergistically to chromosomally encoded -lactamases, whereas amoxicillin-clavulanate was inactive. Piperacillin and piperacillin-tazobactam inhibited all strains producing chromosomally encoded -lactamases at concentrations within the therapeutic range of the drugs. In contrast, TEM 2 ofP. mirabilis was not sensitive to ampicillin-sulbactam, but to the other combinations; here again piperacillin-tazobactam was the most active.

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Vergleich der In-vitro-Aktivitäten von Amoxicillin-Clavulansäure, Ampicillin-Sulbactam und Piperacillin-Tazobactam gegenüber Stämmen von Escherichia coli und Proteus mirabilis mit bekannten -Laktamasen

Zusammenfassung Wir untersuchten die Empfindlichkeit vonEscherichia coli (N=124) undProteus mirabilis-Stämmen (N=29) mit bekannten -Laktamasen gegenüber Ampicillin, Amoxicillin und Piperacillin, allein und in Kombination mit Sulbactam, Clavulansäure oder Tazobactam. Bei TEM 1-produzierendenE. coli-Stämmen fanden wir eine Korrelation zwischen der spezifischen -Laktamase-Aktivität und der MHK gegenüber Piperacillin oder Ampicillin-Sulbactam. Diese Stämme zeigten auch erhebliche Unterschiede in der Empfindlichkeit gegenüber den untersuchten Kombinationen. Daher ist zu empfehlen, wenigstens bei Stämmen, die gegenüber einer Kombination resistent sind, mehrere -Laktamase-Inhibitor-Kombinationen zu untersuchen. Alle eingesetzten Kombinationen zeigten Synergismus gegen TEM 1-produzierendeE.-coli-Stämme, dabei war Piperacillin-Tazobactam am aktivsten. Gegenüber OXA 1--Laktamasen waren alle Kombinationen weniger wirksam. Nur Sulbactam in der Kombination mit Ampicillin zeigte Synergismus gegen chromosomal kodierte Enzyme, Amoxicillin-Clavulansäure war nicht aktiv. Piperacillin und Piperacillin-Tazobactam waren wirksam gegenüber allen Stämmen mit chromosomal kodierten -Laktamasen, dabei lagen die minimalen Hemmkonzentrationen im therapeutisch nutzbaren Bereich. Demgegenüber war Ampicillin-Sulbactam inaktiv gegen TEM 2-produzierendeP. mirabilis-Stämme, die anderen Kombinationen waren wirksam, dabei zeigte Piperacillin-Tazobactam die höchste Aktivität.

     

Zum cytostatischen Wirkmechanismus von N-Methyl-N-β-chloräthylhydrazin und seinem Benzaldehydhydrazon

Zusammenfassung N-Methyl-N--chloräthylhydrazin-HCl und sein Benzaldehydhydrazon hemmen in vitro rasch und stark die DNS- und RNS-Synthese in Asciteszellen. Sie übertreffen in Wirkungseintritt und Wirkungsstärke N,N-Dimethylhydrazin und Procarbazin. Während der Angriffspunkt des N-Methyl-N--chloräthylhydrazins direkt im DNS-Synthese-System liegt, hemmt sein Benzaldehydhydrazon auch die Aufnahme und Phosphorylierung von Nucleosiden.

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On the cytostatic mechanism of action of N-Methyl-N--chloroethylhydrazine and its benzaldehydhydrazone

Summary N-Methyl-N--chloroethyl-hydrazine and its bezaldehydhydrazone inhibit the synthesis of DNA and RNA in ascites cells in vitro faster and stronger than N,N-Dimethylhydrazine and procarbazina does. The benzaldehydhydrazone essentially inhibits influx and phosphorylation of nucleosides wheras N-Methyl-N--chloroethylhydrazine acts directly on DNA synthesis.

     

A new plasmidic cefotaximase from patients infected withSalmonella typhimurium

Summary Salmonella typhimurium strains resistant to most -lactams, co-trimoxazole, tobramycin and gentamicin were isolated from patients in two hospitals in Buenos Aires, Argentina, beginning in August 1990. The patients were suffering from meningitis, septicaemia or enteritis. Therapy including ampicillin, ceftriaxone and gentamicin failed. The strains produced a plasmidic (pMVP-4) extended broad-spectrum -lactamase which is more active against cefotaxime than against ceftazidime (V_max for cefotaxime 350 times higher than for ceftazidime). This cefotaximase demonstrates similarity to the previously described CTX-ase-M-1 fromEscherichia coli, but it is distinctly different from CTX-ase-M-1 by its isoelectric point (7.9 for CTX-ase-M-2 in comparison with 8.9 for CTX-ase-M-1) as well as in its lower susceptibility to the -lactamase inhibitors sulbactam, clavulanic acid, tazobactam and BRL 42715. Thus, the -lactamase produced byS. typhimurium strains from Argentina appears to represent a new member (CTX-ase-M-2) of a novel group of plasmidic extended broad-spectrum -lactamases designated as cefotaximases.

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Neue plasmidische Cefotaximase von Patienten mit Salmonella typhimurium-Infektion

Zusammenfassung In zwei Hospitälern in Buenos Aires, Argentinien, wurden von August 1990 anSalmonella typhimurium-Stämme mit Resistenz gegenüber den meisten -Laktamantibiotika, Co-trimoxazol sowie Tobramycin und Gentamicin isoliert. Klinische Diagnosen bei diesen Patienten waren Meningitis, Sepsis oder Enteritis. Antibiotische Therapie mit Ampicillin, Ceftriaxon und Gentamicin blieb erfolglos. DieS. typhimurium-Stämme produzieren eine plasmidische (Plasmid pMVP-4) -Laktamase mit erweitertem Breitspektrum (EBS--Lactamase), welche gegenüber Cefotaxim deutlich aktiver ist als gegenüber Ceftazidim (V_max für Cefotaxim 350 mal größer als für Ceftazidim). Diese Cefotaximase ist verwandt mit der Cefotaximase ausEscherichia coli (CTX-M-1), von der sie sich jedoch im isoelektrischen Punkt (7,9 bei der CTX- ase-M-2 gegenüber 8,9 bei der CTX-ase-M-1) sowie in ihrer Hemmbarkeit durch Sulbactam, Clavulansäure, Tazobactam und BRL 42715 eindeutig unterscheidet. Die beiS. typhimurium-Stämmen in Argentinien gefundene neue -Laktamase wird als zweites Enzym einer neuen Gruppe von -Laktamasen mit erweitertem Breitspektrum vom Cefotaximase-Typ betrachtet.

     

Modulation of pacemaker activity in sheep cardiac Purkinje fibers by stimulation of β-adrenoceptor subtypes

The electrophysiological effects mediated by ₁- and ₂- in spontaneously active sheep cardiac Purkinje fibers were investigated using the non-selective agonist (–)-isoproterenol (IPN) and the selective agonists (–)-noradrenaline (₁) and procaterol (₂) in the absence and presence of the selective antagonists bisoprolol (₁) and ICI 118,551 (₂).IPN (0.01 mol/l) increased the spontaneous rate by 54% and the slope of diastolic depolarization by 68% of the respective control values. Further, IPN increased the action potential duration at –20 mV (APD –20 mV) from 96 to 154 ms, reduced the APD –70 mV by 17% and the duration of the diastole by 39% and slightly hyperpolarized the maximum diastolic potential. These effects were partially inhibited by ICI 118,551 (0.03 mol/l), diminished by bisoprolol (0.1 mol/l) and almost completely blocked by the combination of both antagonists. Concentration response curves of IPN were influenced by the selective antagonists as follows: ICI 118,551 (0.03 mol/l) shifted the curves to the right by 0.2–0.4 log units and increased the slope factor. Bisoprolol (0.1 mol/l) induced a greater shift to the right by 1.1–1.5 log units. Combination of bisoprolol with ICI 118,551 shifted the curves to the right by 1.5–1.7 log units.Noradrenaline (0.3 mol/l) elicited similar actions as IPN. Bisoprolol (0.1 mol/l) shifted the concentration response curves of noradrenaline to the right by 1.1–1.9 log units. Actions of procaterol (0.1 mol/l) were weak, attained only 15–35% of the maximal effects of IPN and could be blocked by ICI 118,551 (0.03 mol/l).These results show that the increase of pacemaker activity induced by catecholamines in sheep cardiac Purkinje fibers is predominantly mediated by stimulation of ₁. However, contribution of ₂ mediated effects could be demonstrated.Supported by Ministerium für Wissenschaft und Forschung, Nordrhein-Westfalen, Projekt-Nr, 40008786.     

Phase contrast studies on mitotic cycle of pernicious anemia megaloblasts after vitamin B12 treatment

Summary Phase-contrast observations show that the mitotic time in vitro of erythropoietic cells (intermediate erythroblasts) from pernicious anemia patients 36 hours after the onset of Vit. B₁₂ therapy appears consistently longer than in megaloblasts from untreated patients. The duration of mitosis appears unchanged in erythropoietic cells from patients at the 4th day after the onset of treatment (definitive erythroblasts), in respect of intermediate erythroblasts. Both mitotic time of intermediate and definitive erythroblasts do not significantly differ from that of normoblasts from healthy patients. Maturation induces a lengthening of mitosis at a higher degree in intermediate, definitive and normal erythroblasts, than in megaloblasts. In connection with the increase in mitotic time, all mitotic phases are also prolonged, but at a different degree for each phase. These Authors claim that the proliferative potentials of intermediate, definitive, and normal erythroblasts are lower than that of megaloblasts from untreated patients.

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Zusammenfassung Phasenkontrastbeobachtungen zeigen, daß die Dauer der Mitose in vitro von erythropoetischen Zellen (intermediäre Erythroblasten) von Kranken mit perniziöser Anämie 36 Stunden nach Beginn einer Vit.-B₁₂-Behandlung durchwegs länger erscheint, als bei Megaloblasten von unbehandelten Kranken. Die Dauer der Mitose bei erythropoetischen Zellen von Kranken am 4. Tag nach Beginn der Behandlung (definitive Erythroblasten) scheint in bezug auf intermediäre Erythroblasten unverändert zu sein. Die Mitosezeit von intermediäre sowie von definitiven Erythroblasten unterscheidet sich nicht signifikant von der von Normoblasten gesunder Personen. Die Reifung verursacht eine Verlängerung der Mitose in höherem Maße bei intermediären, definitiven und der normalen Erythroblasten, als bei Megaloblasten. In Verbindung mit der Verlängerung der Mitosezeit werden auch alle Mitosephasen verlängert; jedoch in einem für jede Phase verschiedenen Ausmaß. Nach Ansicht der Autoren ist das Vermehrungspotential intermediärer, definitiver und normaler Erythroblasten niedriger, als das von Megaloblasten unbehandelter Kranker.

     

Increased levels of tumor necrosis factor α (TNF-α) and interleukin 1β (IL-1β) in tracheal aspirates of newborns with pneumonia

Summary Pneumonia is one of the major sites of infection in ventilated newborns. We investigated whether the cytokines IL-1 and TNF- are detectable in tracheal aspirates of newborns with pneumonia as a diagnostic marker. All 12 infants with pneumonia had elevated levels of IL-1 (range 30–300 pg/ml) and TNF- (range 60–680 pg/ml), whereas control infants (n=21; respiratory distress syndrome, very low birth weight or infants intubated preoperatively) had no detectable levels of IL-1 or TNF-.In vitro investigations with mononuclear cells of umbilical cord blood were performed to rule out that exogenously added surfactant influences IL-1 and TNF- production. It is concluded that IL-1 and TNF- are important and specific mediators of neonatal pneumonia which may be of diagnostic importance.

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Erhöhte Spiegel von TNF- und IL-1 im Trachealsekret von Neugeborenen mit Pneumonie

Zusammenfassung Die Pneumonie ist eine der Hauptlokalisationen von Infektionen bei Neugeborenen. Wir untersuchten, inwieweit die Zytokine IL-1 und TNF- im Trachealsekret von Neugeborenen mit Pneumonie als diagnostischer Marker nachgewiesen werden können. Alle 12 Kinder mit Pneumonie hatten erhöhte Spiegel für IL-1 (30–300 pg/ml) und TNF- (60–680 pg/ml), während die Kontrollen (n=21; Atemnotsyndrom, sehr untergewichtige Neugeborene, präoperativ intubierte Kinder) keine nachweisbaren Spiegel für IL-1 und TNF- hatten. Um auszuschließen, daß exogen appliziertes Surfactant die IL-1 und TNF--Produktion beeinflußt, wurdenIn vitro-Untersuchungen mit mononukleären Zellen von Nabelschnurblut durchgeführt. Wir schließen aus den Ergebnissen, daß IL-1 und TNF- wichtige und spezifische Mediatoren der Neugeborenenpneumonie sind, die von diagnostischer Bedeutung sein können.

     

Vergleichende elektronenmikroskopische Untersuchungen normaler menschlicher Pankreasinseln und eines hormonell-aktiven Inselzell-Carcinoms mit Hyperinsulinismus

Zusammenfassung Es wird über elektronenmikroskopische Befunde an normalen menschlichen Pankreasinseln sowie an einem aktiven Inselzell-Carcinom mit Hyperinsulinismus berichtet.Die - und -Granula sind sowohl in Gestalt als Größe unterschiedlich. Die Bildung der Granula hängt offenbar mit dem rauhen endoplasmatischen Reticulum zusammen. - und -Granula entstehen wahrscheinlich zunächst in Form kleiner prosekretorischer Granula an der Peripherie des Golgi-Apparates. Die zunächst nicht von einer Membran umgebenen kleinen Granula erhalten im Verlaufe ihrer weiteren Entwicklung bei Abgabe an das endoplasmatische Reticulum eine Membran. Die Mobilisierung des Insulins erfolgt durch intracytoplasmatische Auflösung der Granula. Bei der D-Zelle dürfte es sich um eine Reservezelle handeln, die in Inselzellen ungewandelt werden kann. Die acino-insulären Zellen weisen auf eine Umwandlung acinärer in insuläre Zellen hin.In dem aktiven Inselzell-Carcinom ließen sich keine typischen -Granula nachweisen. Das Insulin wird hier nicht in Granula gespeichert, sondern sofort ausgeschieden. Die weiten intercellulären Räume in dem Tumor sowie die Auskleidung von Bluträumen durch Tumorzellen hat für die Entstehung der hypoglykämischen Krisen eine große Bedeutung, da hierdurch eine schnellere Ausscheidung des Insulins ermöglicht wird.

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Summary A report of an electron microscopic study of normal human pancreatic islets and a functioning islet-cell carcinoma with hyperinsulinism.The - and -granules differ both in shape and diameter. The formation of the granules is related to the endoplasmic reticulum. The small prosecretoric granules at the periphery of the Golgi apparatus are most likely the first step in the formation of - and -granules. The prosecretoric granules are conveyed to the endoplasmic reticulum where they get an encasing membrane. The granules undergo an intracellular dissolution before the secretory products are released into the blood stream. The D-cell represents most likely an undifferentiated islet cell. The acinar-islet cells indicate a conversion of acinar into islet cells.In the functioning islet-cell carcinoma no typical granules were found. The insulin in the tumor cells is not stored in granules, but secreted in non-granular form. The wide intercellular spaces and the lining of blood spaces by tumor cells play an important part in the hypoglycaemic crisis, because a quicker release of insulin is possible.

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Mit Unterstützung der Deutschen Forschungsgemeinschaft.     

Oligosaccharides accumulated in the bovineβ-mannosidosis kidney

Summary The phenotype of bovine-mannosidosis (-mannosidase deficiency), recently identified in Salers cattle, is similar to the caprine form of the disease (Abbittet al., 1991). This investigation was designed to characterize accumulated kidney oligosaccharides in bovine-mannosidosis. Oligosaccharides were extracted from the kidney of an affected Salers calf and purified by chromatographic techniques. The amount of accumulating oligosaccharides in 1 g of wet tissue was about 21µmol. Structures of derivatized oligosaccharides were characterized by high-performance liquid chromatography, mass spectrometry, methylation analysis and sequential exoglycosidase digestions. The major accumulating oligosaccharides were Man1-4GlcNAc and Man1-4GlcNAc1-4GlcNAc. Oligosaccharides accumulating in minor amounts were Man1-4GlcNAc1-4Man1-4GlcNAc, Man1-6Man1-4GlcNAc1-4GlcNAc and Man1-4GlcNAc1-4Man1-4GlcNAc1-4GlcNAc. As in caprine-mannosidosis, oligosaccharides with terminal-mannose residues and cleaved as well as uncleaved chitobiose linkages were identified in bovine-mannosidosis kidney. The accumulating oligosaccharides in tissue were thus identical in bovine and caprine-mannosidosis; however, the source of the novel oligosaccharides remains to be determined.