甲氧基聚乙二醇遮蔽猕猴红细胞表面类人B抗原的研究

目的　观察mPEG对猕猴类人B抗原的修饰效果及mPEG修饰后的红细胞给动物输血的安全性。方法　用 3mg/ml的mPEG修饰遮蔽猕猴红细胞表面的类人B血型抗原 ,吸收放散法检测猕猴血型及mPEG对猕猴红细胞血型的修饰结果 ;红细胞变形仪等检测mPEG修饰对红细胞的变形能力、结构与功能的影响 ;荧光素标记 ,自体回输实验检测红细胞存活率 ;异体回输实验观察修饰后红细胞对受血猴的血液、尿液的影响。结果　mPEG修饰可以遮蔽猕猴类人B抗原的抗原性 ,不影响所修饰红细胞结构、功能及体内存活 ;mPEG修饰的类人B型红细胞输给类人A型血的猕猴 ,未发生输血反应 ;受血猴的血细胞、血液生化及尿液各项指标与输血前相比 ,无明显变化。结论　mPEG修饰可遮蔽猕猴红细胞表面类人B抗原的抗原性 ,mPEG修饰红细胞在受血猴体内是安全的。     

异种输血--猕猴受输猪红细胞的初步研究

本研究的目的是改造猪红细胞（pRBC）表面抗原，使之与灵长类动物相容，以探讨异种输血的可能性。结合使用α半乳糖苷酶（AGL）酶解和甲氧基聚乙二醇（mPEG）修饰改造猪红细胞表面异种抗原，并输注给猕猴，观察pRBC在猕猴体内活存时间及安全性；使用免疫抑制剂（蛇毒因子CVF和地塞米松）延长pRBC在猕猴体内的存活时间；建立失血性贫血猕猴模型，观察输注pRBC治疗失血性贫血猕猴的可能性。结果表明：AGL酶解能够去除猪红细胞表面主要异种抗原（α—Gal抗原），减弱其与猕猴血清的凝集反应，酶解技术与mPEG修饰技术结合可以使猪红细胞与猕猴血清更为相容。异种输血试验表明，双修饰的pRBC在猕猴体内存活时间为12小时，使用免疫抑制剂后，可延长至40小时；pRBC在猕猴体内8小时的存活率为38％，在输注pRBC的8小时内，失血猕猴的血红蛋白和红细胞压积可维持在失血前的正常水平。结论：改造后的pRBC可安全地输注给猕猴，改善失血猕猴的贫血症状．提示用猪红细胞进行异种输血是可能的。     

甲氧基聚乙二醇体外修饰移植物细胞对单倍体相合小鼠造血干细胞移植后GVHD的影响

本研究探讨甲氧基聚乙二醇(mPEG)化学修饰移植物细胞对小鼠单倍体相合干细胞移植后移植物抗宿主病(GVHD)的影响.取经mPEG修饰及未修饰的成年CB6小鼠脾细胞悬液注入BALB/c新生幼鼠的腹腔(5×106脾细胞/只),以脾增大指标判断新生BALB/c小鼠注射单倍体相合供鼠脾细胞后的GVHD反应;取经mPEG修饰及未修饰的成年BALB/c小鼠骨髓及脾细胞混合悬液(BMS)尾静脉注入接受致死量γ射线照射后的成年BALB/c小鼠(2×105个BMS/只),注射后第8天取受鼠脾脏,计数脾结节数.结果表明修饰组脾指数1(SI1)较未修饰组减低,修饰组脾指数2(SI2)值＜1.3,未修饰组SI2值＞1.3,提示接受mPEG修饰的单倍体相合脾细胞输注后,修饰组GVHD程度较未修饰组轻;未修饰组与修饰组相比较,脾结节形成的数量差异无显著性意义(p＞0.05),说明mPEG修饰不影响造血干祖细胞的活性.结论mPEG修饰移植物可减轻小鼠单倍体相合干细胞移植后的GVHD,而不影响干祖细胞活性.     

mPEG修饰红细胞Rh抗原稳定性的研究

本研究旨在探究mPEG修饰的红细胞Rh抗原的稳定性。利用红细胞膜蛋白SDS—PAGE电泳技术分析mPEG修饰后红细胞膜蛋白与mPEG结合情况，用红细胞血影凝集实验及40cCPD保养液保存的修饰红细胞与匹配血液体外混血实验，观察mPEG修饰后红细胞Rh抗原被遮蔽的稳定性。结果发现：不同保存时间的mPEG修饰的红细胞在模拟输血（即混血前后）的血型保持不变，同时mPEG修饰的红细胞在保存过程中游离血红蛋白水平正常，并且混血后经37℃孵育的mPEG修饰的红细胞游离血红蛋白水平低于不混合的修饰的红细胞。比较分析PEG特异的碘染和考马斯亮蓝染的显色图谱发现，特殊的碘染显示出mPEG与红细胞膜蛋白结合的条带，mPEG—SPA与红细胞膜蛋白结合后导致蛋白分子迁移速度发生改变。mPEG修饰的红细胞血影凝集实验证实，修饰红细胞在质膜裂损后mPEG仍有效地遮蔽抗原。结论：mPEG—SPA不论在红细胞膜蛋白被单独提取后，还是膜破损后以及存活状态下，均能与红细胞膜蛋白稳固结合。     

去除αGal抗原的猪红细胞输入猕猴体内的初步研究

目的探讨经α-半乳糖苷酶(AGL)去除了αGal抗原的猪红细胞输注给灵长类动物的可能性。方法使用AGL体外去除猪红细胞表面的αGal抗原,应用流式细胞术和配血试验检测修饰效果:用FITC标记此红细胞,将AGL酶解的pRBCs与未酶解的pRBCs分别输注给使用免疫抑制剂(眼镜蛇毒因子及地塞米松)预注射的猕猴;流式细胞仪检测计算输注红细胞在猕猴体内的存活率,同时检测受试猕猴的血生化及尿液指标。结果AGL有效清除了猪红细胞表面的αGal抗原,使其与猕猴血清的凝集反应减弱。未酶解的pRBCs在猕猴体内存活<0.5h。AGL酶解后的猪红细胞输注后2h在猕猴体内有29%存活,8h猕猴体内仍可检测到荧光标记的pRBCs。结论AGL能有效清除猪细胞表面的αGal抗原,减弱HAR,延长异种移植物的存活时间。     

利用SCID小鼠模型评价-80℃冷冻人血小板的体内生存能力

为了评估人血小板-80℃冷冻保存后在活体内的生存能力,取新鲜机采血小板加入二甲基亚砜（DMSO）,使其终浓度为5％,于～80℃保存10天后,取出立即放置于37℃水浴箱中快速解冻,并离心浓缩10倍。用带有超细针头的胰岛素注射器抽取浓缩血小板1130μl,经尾静脉注入重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠体内,在注入0．5、2、4、6、12、24小时时采集小鼠全血,肝素抗凝,用CD61-PE标记后,流式细胞术计数人血小板,以30分钟时的人血小板计数为100％,计算人血小板存活率。结果表明：冷冻血小板在活体内存活率明显降低,新鲜血小板和冷冻血小板输注SCID小鼠体内4小时时的存活率分别为（79．5±9．1）％和（40．6±6．6）％（P〈0．01）,推算半寿期（T1/2）分别为7小时和2．5小时。结论：血小板-80℃冷冻保存后在活体内的生存能力降低。     

利用自制贮血瓶回收腹腔内出血51例报告

随着医疗水平的提高和服务范围的扩大,人体血资源愈加短缺,自体血回收再回输显得更有意义.笔者通过对51例腹腔内出血自体回输与50例腹腔内出血未作自体血回收而输等量异体血患者的比较,发现两组患者的Hb在输注前和输注后的差异没有显著性,PLT在输注前没有显著差异,而在输注后有极显著性差异.因此,自体血回输不仅节约血资源,减少患者的输血反应,而且可以减少患者因输异体血而引起的血小板减少.现报告如下.     

小鼠红细胞异体输注后的体内存活研究

目的建立小鼠红细胞体外去白细胞保存和标记的方法,监测小鼠红细胞异体输注后在体内的存活情况。方法取10-15只C57BL/6小鼠血液(约0.6 m L/只),通过离心和过滤,获得去除白细胞的小鼠红细胞。荧光染料Di O标记红细胞后,尾静脉注射入小鼠体内,流式检测不同时间的取血样品,计算输注红细胞在体内的存活时间和存活率。结果小鼠白细胞去除率为(96.22±1.95)%,Di O标记小鼠红细胞阳性率为(94.31±2.01)%。小鼠红细胞异体输注后,体内24 h存活率90%,到50 d左右输注红细胞基本被清除。结论建立了小鼠红细胞体外去白细胞保存、荧光标记和体内跟踪检测的方法,应用该方法完成了对小鼠红细胞异体输注后存活情况的监测。     

利用自制贮血瓶回收腹腔内出血5l例报告

随着医疗水平的提高和服务范围的扩大，人体血资源愈加短缺，自体血回收再回输显得更有意义。笔通过对51例腹腔内出血自体回输与50例腹腔内出血末作自体血回收而输等量异体血患的比较，发现两组患的Hb在输注前和输注后的差异没有显性，PLT在输注前没有显差异，而在输注后有极显性差异。因此，自体血回输不仅节约血资源，减少患的输血反应，而且可以减少患因输异体血而引起的血小板减少。现报告如下。     

应用小鼠模型评价人血小板体内活力的方法研究

目的选择合适的方法抑制小鼠对输入的人血小板的快速吞噬清除,建立适合于评价人血小板体内活力的小鼠实验动物模型。方法对4周龄雄性昆明鼠分别腹腔注射不同剂量地塞米松（DEX）,用碳粒廓清试验检测小鼠巨噬细胞抑制效果。分别给DEX鼠和对照鼠尾静脉输注新鲜的人血小板,用小鼠抗人CD41-FITC单克隆抗体和流式细胞仪检测小鼠全血中的人血小板数,比较人血小板在小鼠体内的回收率和生存时间的差异。给DEX鼠分别输注22℃保存5d或4℃保存1d的人血小板,观察血小板体内活力的差异。结果碳粒廓清试验显示,注射高、低两种剂量地塞米松（30mg、60mg/kg体重）的小鼠吞噬指数分别为2.90±0.69和3.84±0.53,两组差异无统计学意义（n=5,P〉0.05）;而与对照鼠6.69±1.30相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。以低剂量DEX建立小鼠模型,输注新鲜人血小板,24h回收率和生存时间与对照鼠相比分别为（36.62±13.90）%,（25.92±9.66）hvs（0.96±0.61）%,（5.10±0.58）h,明显高于对照鼠（n=6,P〈0.05）。用DEX鼠检测22℃保存5d或4℃保存1d的人血小板与22℃保存1d的血小板相比,24h回收率和生存时间差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论地塞米松有效地延长了人血小板在小鼠体内的生存时间。该小鼠模型可检测22℃或4℃保存的血小板体内活力的差异,有望用于评价人血小板的体内活力。     

聚乙二醇衍生物修饰红细胞的保存性能研究

目的 评估经甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酯(mPEG-SPA)修饰后红细胞(RBC)的保存性能.方法 以mPEG-SPA体外修饰健康人RBC;观察修饰前后RBC的变形性、渗透脆性、自身溶血率、磷脂酰丝氨酸和CD59,评估修饰对RBC保存性能的影响.结果 mPEG-SPA修饰后RBC的变形性略有下降、渗透脆性和自身溶血率有所增加;修饰后红细胞磷脂酰丝氨酸表达明显增加;红细胞CD59的表达严重下降,其表达率几近于零.结论 mPEG-SPA修饰后红细胞的保存性能下降,可能影响修饰后红细胞的寿命和输入体内的存活率.     

The production of red blood cell alloantibodies in mice transfused with blood from transgenic Fyb-expressing mice

BACKGROUND: A murine model would be useful to identify which immune mechanisms could be manipulated to treat or prevent red blood cell (RBC) alloimmunization in patients who become sensitized to multiple or widely expressed antigens. STUDY DESIGN AND METHODS: Transgenic mice (B6CBAF1/J-Tg-Fy(b)) expressing the human Fy(b) antigen of the Duffy (Fy) blood group were donors. Recipient B6CBA-F1 mice received four weekly intravenous (IV) transfusions: either 0.3 mL of washed buffy coat-depleted RBCs or 0.3 mL of RBCs with spleen cells. Titers of immunoglobulin M (IgM) and immunoglobulin G (IgG) were measured in recipient serum samples by flow cytometry with RBCs from donor mice as target cells. Recipient serum samples were also tested against human RBCs of various Fy phenotypes. Additionally, RBC survival studies were performed in alloimmunized mice utilizing biotin-labeled Fy(b) transgenic mouse RBCs. RESULTS: B6CBA-F1 mice receiving washed buffy coat-depleted RBCs first made IgM, followed by IgG alloantibodies to transgenic mouse Fy(b)-positive RBCs. Recipients of Fy(b)-positive RBCs mixed with spleen cells also produced IgM and IgG alloantibodies, but at a slower rate than recipients of washed buffy coat-depleted RBCs. Serum samples showed specificity for Fy3, Fy(b), and Fy6. Decreased survival of transfused RBCs was evident at 24 hours after transfusion. CONCLUSIONS: It is possible to elicit the formation of anti-Fy alloantibodies by IV transfusion in mice that lack Fy antigens. The transfusion of RBCs alone was adequate to stimulate alloantibody production in B6CBA-F1 recipient mice. The survival of transfused Fy(b)-positive RBCs is diminished in sensitized mice. This model will be useful in further studies of RBC alloimmunization.     

血浆与红细胞不同输注比例对创伤性失血患者大量输血救治的影响

目的探讨大量输血时,输注不同比例的血浆和红细胞对创伤性失血患者救治的影响。方法回顾性分析本院2008年1月～2011年8月间,因创伤性失血需要输注悬浮红细胞10U以上的患者131例次。根据入院24h内输注血浆与悬浮红细胞(FP∶RBC)的比例,将患者分为高比例组(FP∶RBC≥1∶1,n=56)、中比例组(FP∶RBC=1∶2～1∶1,n=43)、低比例组(FP∶RBC≤1∶2,n=32)。采用单变量方差分析、配对t检验和Kaplan-Meier的统计方法,比较患者大量输血前后和3组之间凝血功能指标、在院期间红细胞输注总量、生存率的差异。结果与输血前相比,高比例组和中比例组患者输血后APTT、PT-INR均无明显变化,低比例组APTT、PT-INR均明显升高(P<0.01)。3组之间输血后的凝血功能指标、在院期间红细胞输注总量差异有统计学意义[输血后APTT,高vs中vs低:(37.3±12.4)vs(41.1±11.5)vs(49.9±14.0),P<0.05;输血后PT-INR,高vs中vs低:(1.11±0.19)vs(1.20±0.37)vs(1.66±0.62),P<0.05;在院期间红细胞输注总量,高vs中vs低:(19.8±6.3)vs(25.8±11.3)vs(26.6±8.0),P<0.01],但生存率差异无统计学意义。输血后高、中比例组凝血功能均显著优于低比例组(P<0.05),高比例组在院期间红细胞输注总量显著少于其他2组,低比例组与中比例组相比无差异。结论大量输血时,较高比例地输注血浆,有利于预防创伤性失血患者发生凝血功能障碍,降低患者住院期间红细胞输注总量,达到节约血液资源的目的。     

α-半乳糖苷酶酶解制备通用红细胞的动物实验研究

目的　观察酶解对猕猴红细胞形态及功能的影响 ,评价酶解后通用红细胞的安全性。方法　以基因重组的α 半乳糖苷酶体外酶解猕猴类人B型抗原 ,并以改良吸收放散试验鉴定酶解效果 ,检测酶解前后猕猴红细胞的形态和功能变化 ,流式细胞仪测定酶解红细胞在受体内的 2 4h存活率及半衰期 ,监测受体回输前后不同时期的血液、尿液生化指标。结果　经α 半乳糖苷酶酶解后的红细胞其B抗原被清除 ,形态及功能与酶解前无明显变化 ,在受体内的 2 4h存活率为 84 .6 %和 6 8.1 % ,半衰期为 7d和 8d ,血液、尿液等主要生化指标亦正常。结论　α 半乳糖苷酶酶解对猕猴红细胞的形态和功能无不良影响 ,酶解后红细胞输给异体猕猴是安全的     

Modeling transfusion reactions and predicting in vivo cell survival with kodecytes

BACKGROUND: The availability of suitable animal models is a limitation in research on transfusion reactions. KODE technology allows for the artificial attachment of incompatible blood group antigens, plus visualization and recovery constructs onto red blood cells (RBCs), making them potentially suitable to study both transfusion reactions and determine in vivo cell survival. STUDY DESIGN AND METHODS: Function‐spacer‐lipid (FSL) constructs representing blood group A antigen (FSL‐A) and biotin (FSL‐biotin) together with FSL‐GB3 as a benign antigen were used to create a range of murine kodecytes. Compatible and incompatible kodecytes were transfused into naive or anti‐A hyperimmune mice. FSL‐biotin constructs simultaneously included in the same RBC were visualized with avidin Alexa Fluor 488 and fluorescence microscopy to determine circulating cell survival or to demonstrate recovery of kodecytes. RESULTS: Using fluorescence microscopy of blood films, biotin, and GB3 + biotin kodecyte transfusions, all showed similar survival and were present in the circulation at more than 72 hours in naive and anti‐A–immunized mice. A + biotin kodecytes were also present in the circulation at more than 72 hours in naive mice but were mostly cleared within 6 minutes in anti‐A–immunized mice. Avidin agarose beads in gel cards were used to demonstrate recovery of A + biotin kodecytes from blood samples. CONCLUSIONS: KODE technology not only enables the creation of artificial transfusion reactions in animal models, but also has the potential to be used clinically in man to determine 24‐hour cell survival. The ability to recover the kodecytes for further analysis has valuable research and diagnostic potential.     

输血对脑外伤患者术后感染的影响

目的 探讨输血对脑外伤患者术后感染的影响,指导合理输血。方法 选择本院1997年1月~2004年1月525例脑外伤手术患者,其中225例术中输注普通悬浮红细胞,202例输注悬浮去白细胞红细胞,98例未输血。对3组患者术后感染率及输血剂量与感染率的关系进行比较。结果 普通悬浮红细胞输血组术后感染率为11．11％,悬浮去白细胞红细胞输血组术后感染率为3．46％,与普通悬浮红细胞输血组相比差异有显著性（P〈0．01）,与未输血组感染率（2．04％）比较差异无显著性。普通悬浮红细胞输血组患者的输血量与术后感染的发生显著相关（P〈0．01）,而悬浮去白细胞红细胞输血组的输血量与术后感染率的相关性不显著。结论 脑外伤患者术后感染的发生与输血、血液成分及输血量等有关。在保证患者能够耐受手术的情况下,应尽量不输血或少输血,对确需输血的患者,应该输注去白细胞红细胞。     

Diabetes augments and inhaled nitric oxide prevents the adverse hemodynamic effects of transfusing syngeneic stored blood in mice

BACKGROUND: Stored red blood cells (RBCs) undergo progressive deleterious functional, biochemical, and structural changes. The mechanisms responsible for the adverse effects of transfusing stored RBCs remain incompletely elucidated. STUDY DESIGN AND METHODS: Awake wild‐type (WT) mice, WT mice fed a high‐fat diet (HFD‐fed WT) for 4 to 6 weeks, and diabetic (db/db) mice were transfused with syngeneic leukoreduced RBCs or supernatant with or without oxidation (10% of total blood volume) after storage for not more than 24 hours (FRBCs) or 2 weeks (SRBCs). Inhaled nitric oxide (NO) at 80 parts per million was administered to a group of mice transfused with SRBCs. Blood and tissue samples were collected 2 hours after transfusion to measure iron and cytokine levels. RESULTS: SRBCs had altered RBC morphology and a reduced P₅₀. Transfusion of SRBCs into WT or HFD‐fed WT mice did not produce systemic hemodynamic changes. In contrast, transfusion of SRBCs or supernatant from SRBCs into db/db mice induced systemic hypertension that was prevented by concurrent inhalation of NO. Infusion of washed SRBCs or oxidized SRBC supernatant into db/db mice did not induce hypertension. Two hours after SRBC transfusion, plasma hemoglobin (Hb), interleukin‐6, and serum iron levels were increased. CONCLUSION: Transfusion of syngeneic SRBCs or the supernatant from SRBCs produces systemic hypertension and vasoconstriction in db/db mice. It is likely that RBC storage, by causing in vitro hemolysis and posttransfusion hemoglobinemia, produces sustained NO scavenging and vasoconstriction in mice with endothelial dysfunction. Vasoconstriction is prevented by oxidizing the supernatant of SRBCs or breathing NO during SRBC transfusion.