钩吻碱类提取物对小鼠脾细胞增殖反应的影响

钩吻碱类提取物在浓度大于１．２５μｇ／ｍｌ以上时对混合淋巴细胞培养反应（ＭＬＲ）均有不同程度的抑制作用，具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）的最低抑制浓度为２．５μｇ／ｍｌ，抑制率为１８．３％。单独采用Ｃ５７ＢＬ／６ｊ小鼠脾细胞进行实验，促有丝分裂剂为细菌脂多糟（ＬＰＳ５μｇ／ｍｌ），在钩吻碱类提取物浓度为４０μｇ／ｍｌ才出现抑制作用（Ｐ＜０．０５），抑制率为１８％，改用刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ２μｇ／ｍｌ）刺激，钩吻碱类提取物最低抑制浓度为２０μｇ／ｍｌ，抑制率为１２．４％（Ｐ＜０．０５）．脾细胞先经ＣｏｎＡ活化．后用白细胞介素２（５ｕ／ｍｌ）维持培养，此时钩吻碱类提取物的最低抑制浓度为４０μｇ／ｍｌ．抑制率为１７．１％（Ｐ＜０．０５）。     

不饱和脂肪酸对肺癌细胞的抑制作用

不饱和脂肪酸（ＬＡ）浓度为２５μｇ／ｍｌ，对人肺腺癌细胞系（ＳＰＣ－Ａ１）细胞和二倍体人胚肺细胞系（ＨＬＦ）细胞抑制率分别为：９８．４±２．２％，１８．０±２．１％（Ｐ＜０．００１）。表现为对恶性细胞的选择性抑制作用。ＳＰＣ－Ａ１对５μｇ／ｍｌ ＬＡ无反应，１μＭ丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）对ＳＰＣ－Ａ１细胞抑制率为４３．４±２．９％而当用１μｍ ＭＭＣ处理这种对５μｇ／ｍｌ ＬＡ无反应的ＳＰＣ－Ａ１时，     

高效液相色谱法测定红霉素血药浓度

建立了ＨＰＬＣ测定红霉素血药浓度的新方法。以峰面积定量，浓度与峰面积具有良好相关性（ｒ＝０．９９８），线性范围０．４～４．０μｇ／ｍｌ，最低检测限０．１μｇ／ｍｌ。浓度为０．４，１．６，３．２μｇ／ｍｌ的回收率均大于９３．４％，三个浓度下测定的日内差及日间差（ＲＳＤ）分别为１．２３％，１．４９％，１．６７％和２．１８％，３．２６％，４．１７％，与微生物法测定结果无显著差异。     

无机氟对大小鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响

采用胚胎肢芽细胞微团培养方法，观察无机氟对ＳＤ大鼠和昆明种小鼠胚胎芽细胞增殖和分化的影响。结果显示培养液中一定浓度的氟对两种动物胚胎肢芽细胞增殖和分化有明显抑制作用，且呈剂量－反应关系。拟合细胞分化和增殖抑制曲线，计算得大、小鼠半数抑制分化浓度（ＩＤ５０）分别为６．８％μｇ／ｍｌ、７．３μｇ／ｍｌ；半数抑制增殖浓度（ＩＰ５０）为４４．１μｇ／ｍｌ、６３．６μｇ／ｍｌ。ＩＰ５０分别为６．４和８．７。     

激素和干扰素对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长影响的研究

为了解氢化可的松和干扰素α－２ｂ对瘢痕疙瘩浸润，增生和老化各部分成纤维细胞的影响是否相同，对６例瘢痕疙瘩不同部位和６例正常皮肤成纤维细胞在培养基中加入氢可的松（０．１ｍｇ／ｍｌ和０．５ｍｇ／ｍｌ）及干扰素α－２ｂ（１０００μ／ｍｌ）后的增殖情况下初步研究，结果：氢化可的松浓度为０．１ｍｇ／ｍｌ时，所有细胞均被抑制，当氢化可的松浓度升至０．５ｍｇ／ｍｌ时，几乎氖的细胞均不能存活，干扰素α－２ｂ对瘢痕     

五倍子对兔眼结膜成纤维细胞的抑制作用（Ⅰ）

报告了用五倍子提取液对体外培养的３～５代兔眼结膜成纤维细胞的抑制作用，结果显示五倍子提取液对成纤维细胞有显著抑制作用。五倍子终浓度２５μｇ／ｍｌ对成纤维细胞的抑制率为１７．２４％，与不加药的对照组比较差异显著（Ｐ＜０．０５），五倍子提取液终浓度越高对成纤维细胞的抑制率就越高，五倍子提取液终浓度７５～６００μｇ／ｍｌ对成纤维细胞的抑制率为３６．４８％～９７．８９％，与对照组比较差异非常显著（Ｐ＜０．００１）。细胞形态学观察结果可见五倍子对成纤维细胞具有明显的影响。与对照药物５－Ｆｕ及高三尖杉酯碱对成纤维细胞的抑制作用相等。３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验提示五倍子抑制成纤维细胞的作用机理是抑制成纤维细胞的ＤＮＡ合成。     

用HPLC法同时测定洗必泰及有关杂质对氯苯胺的研究

采用反相高效液相色谱法同时测定了洗必泰及有关杂质对氯苯胺浓度。用Ｚｏｒｂａｘ－Ｃ＿８柱，０．２ｍｏｌ／ＬＮａＨ＿２ＰＯ＿４（ｐＨ３．０）－甲醇（４９．５：５０．５）为流动相，非那西丁为内标，２４０ｎｍ波长检测。本法简便准确，重现性好。洗必泰和对氯苯胺分别在１５～２００μｇ／ｍｌ和６０～１２００μｇ／ｍｌ浓度范围内线性关系良好（ｒ＝０．９９９９），最低检测限分别为１．３３μｇ／ｍｌ和７．５μｇ／ｍｌ（Ｓ／Ｎ＝３：１），平均回收率分别为１００．１％和１０３．１％。相对标准偏差Ｒ５０％分别为１．４１％和１．１４％。     

羊开口提取物的分离及对艾滋病毒逆转录酶和DNA多聚酶活性的抑制作用

羊开口经提取分离为Ｙ－１、Ｙ－Ｐ、Ｙ－Ａ、Ｙ－Ｅ、Ｙ－Ａ－１和Ｙ－Ａ－１和Ｙ３～１１等部分，通过其对艾滋病毒逆转录酶（ＨＩＶ－ＲＴ）和ＤＮＡ多聚酶（ＤＮＡＰｏｌ）活性试验，发现Ｙ－１、Ｙ－Ａ、Ｙ－Ａ－１、Ｙ－９和Ｙ－１１有极强的抑制酶活性作用。５０％酶活性抑制浓度（ＩＣ５０）对ＨＩＶ－ＲＴ分别为０．１～０．５μｇ／ｍｌ，对ＤＮＡｐｏｌα为０．５～２．５μｇ／ｍｌ。ＨＩＶ－ＲＴ的抑制率当浓度Ｙ－Ａ、Ｙ－Ａ－１２．５μｇ／ｍｌ，Ｙ－９、Ｙ－１１２μｇ／ｍｌ和Ｙ－１５μｇ／ｍｌ时分别为９９．３７％，９３．３５％，９８．２４％，９９．９２％和９０．０％：ＤＮＡｐｏｌα的抑制率当Ｙ－Ａ、Ｙ－９、Ｙ－１１的浓度为２．５μｇ／ｍｌ和Ｙ－１浓度为５μｇ／ｍｌ时，分别为９５．４５％，９３．３３％，９３．０１％和９９．１１％。结果提示羊开口中存在抑制ＨＩＶ－ＲＴ和ＤＮＡｐｏｌα的物质。     

珍珠丸—1和珍珠丸—2清除和抑制自由基的实验研究

本文报道珍珠丸－１（Ｚｈｅｎ－１）和珍珠丸－２（Ｚｈｅｎ－２）清除和抑制自由基的作用。结果显示Ｚｈｅｎ－１对０２＾－的ＩＣ５０为１１５．７μｇ／ｍｌ，ＳＣ５０为１１１．５μｇ／ｍｌ，对ＯＨ的ＩＣ５０为７４７μｇ／ｍｌ，ＳＣ５０为１１２１μｇ／ｍｌ；Ｚｈｅｎ－２对０２＾－的ＩＣ５０为６６．０μｇ／ｍｌ，ＳＣ５０为８２．４μｇ／ｍｌ，对ＯＨ的ＩＣ５０为６６０μｇ／ｍｌ，ＳＣ５０为６５２μｇ／ｍｌ。提增     

脂多糖对正常人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶mRNA表达的调控及意义

目的研究细菌脂多糖（LPS）对增生性瘢痕患者正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶mRNA表达的影响,以了解LPS在增生性瘢痕形成中的生物学作用。方法体外培养增生性瘢痕患者瘢痕组织及正常皮肤成纤维细胞,应用不同浓度（0．005—1．0μg／m1）的大肠杆菌LPS（E．coli055：B5）对正常皮肤成纤维细胞进行刺激,并对刺激后细胞传代至表型稳定（第8代）,采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测LPS对正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶mRNA的表达的调控作用,观察剂量一效应关系。分别以同一个体相同代数的瘢痕组织成纤维细胞和未经LPS刺激的正常皮肤成纤维细胞做阳性对照和阴性对照。结果LPS刺激浓度在0．005．0．5μg／ml范围内促进正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达,抑制胶原酶mRNA表达（均P〈0．01）,均在0．1μg／ml浓度点作用达高峰;当LPS刺激浓度到达1．0μg／ml时,抑制正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达,促进胶原酶mRNA表达,且均显著低于阴性对照组（均P〈0．01）。当LPS刺激浓度为0．1μg／ml时,正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达量与阳性对照组近似（均P〉0．05）。结论在一定浓度范围内LPS促进成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达、抑制胶原酶mRNA表达。LPS可能是增生性瘢痕形成的原始诱导因素之一。     

Expression of MMP-3 mRNA in hypertrophic scar fibroblasts and MMP-3 gene transfection

Hypertrophicscarring,whichoftencausescosmeticproblemsandfunctionaldisorders,isacommonclinicalproblemforpatientswhohavesurvivedextensivethermalinjury;itrepresentsthedermalequivalentoffibroproliferativedisorders.Histologically,hypertrophicscarringischaracterizedbyexcessiveaccumulationofextracellularmatrix(ECM)inthewoundllj.However,themechanismforexcessivescarformationhasstillnotwellelucidated.Someresearchershavesuggestedthattheexcessivecollagenaccumulationmightbeduetothetransformationofnormalfi…     

病理性瘢痕和正常皮肤来源成纤维细胞CD90、α-SMA表达的研究

目的检测体外培养的病理性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞中CD90、α-SMA表达情况,并分析二者的相关性。方法取手术切除的瘢痕疙瘩4例、增生性瘢痕12例、正常皮肤（瘢痕边缘）16例,每组标本中选取特异性较强的组织块各3例,原代培养不同组织来源的成纤维细胞,取第3代细胞制成细胞爬片,免疫荧光双重标记（CD90和α-SMA）细胞,通过计算每系成纤维细胞CD90、α-SMA的荧光值,检测成纤维细胞中CD90、α-SMA的表达情况,并分析CD90和α-SMA表达的关系。结果增生性瘢痕来源成纤维细胞的CD90表达强于正常皮肤的成纤维细胞（P〈0.05）,瘢痕疙瘩来源成纤维细胞的CD90表达和正常皮肤的表达无差异（P〉0.05）;增生性瘢痕与其周围皮肤、瘢痕疙瘩与其周围正常皮肤来源成纤维细胞的α-SMA表达均无差异（P〉0.05）;在同一细胞内CD90和α-SMA具有共区域和共趋势表达的特点。结论增生性瘢痕来源的成纤维细胞存在CD90多量表达的特异表型,瘢痕成纤维细胞CD90和α-SMA有共区域表达的特点和一致的表达趋势,二者可能有一定的协同关系。     

确炎舒松对增生性瘢痕PCNA、bcl-2表达的影响

目的观察局部注射确炎舒松后增生性瘢痕(HS)中增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2的表达水平变化,探讨糖皮质激素治疗瘢痕的机制.方法用免疫组织化学SP法检测比较42例HS激素注射前后PCNA、bcl-2表达水平变化.结果HS中PCNA、bcl-2阳性细胞均较正常皮肤显著增多,注药组PCNA及bcl-2阳性细胞率均较对照组明显减少,两者差异有显著性(P＜0.05).结论成纤维细胞增殖过度、凋亡不足是HS形成的重要原因,激素可通过抑制PCNA基因的表达来抑制HS成纤维细胞增殖;激素可能通过抑制bcl-2基因的表达而诱导成纤维细胞凋亡.     

超声波对小鼠胚胎表达整合素及其着床能力的影响

目的：研究超声波照射对小胎胚表达整合素α1、α5、β1、β3的影响充及与其着床能力的关系。方法：取小鼠二细胞胚经超声波照射后体外培养至囊胚期,用免疫组化法检测其整合素α1、α5、β1、β3的表达及其着床能力的改变,并与未经照射的正常胚胎比较,结果：1、超声波照射组胚贴附率,滋养细胞外延生长率均显著低于正常胚胎。2、正常胚胎桑椹胚期即有α5、β1、β3整合素表达,而无α1表达：囊胚期α5、β1、β3表达增强,仍无α1表达：α1只出现在外延生长的滋养细胞。3、超声波照射组胚胎β3整合素的表达明显弱于正常组。且未见α1表达,而α5、β1的表达两组间无差异。结论：超声波照射使胚胎着床能力明显降低。可能与其影响胚胎细胞α1、3整合素的正常表达有关。     

转化生长因子β1对软骨样细胞整合素和吞噬细胞糖蛋白-1表达的影响

目的 :检测软骨样细胞 (HEMCSS)α1β1,α2 β1,α5 β13种整合素 (integrins)和吞噬细胞糖蛋白 - 1(CD4 4 )的表达 ,及转化生长因子 β1(TGF - β1)对它们表达水平的影响。方法 :HEMCSS是永生性软骨肉瘤细胞 ,培养于含10 %胎牛血清 ,不含或含 1,5 ,10ng·ml-1的TGF - β1的培养液 ,培养时间 2 4h。共聚焦显微镜观察α1β1,α2 β1,α5 β1和CD4 4在HEMCSS细胞上的表达和分布 ,流式细胞仪检测α1β1,α2 β1,α5 β1和CD4 4在HEMCSS细胞上表达的水平。结果 :共聚焦显微镜结果显示 ,HEMCSS细胞膜表面均有α1β1,α2 β1,α5 β1及CD4 4表达。流式细胞仪检测表明 ,加入TGF - β1,培养HEMCSS细胞 2 4h后可诱导α1β1,α2 β1,α5 β1的表达增加 ,并呈剂量依赖趋势。而 3种不同浓度的TGF - β1培养 2 4h后均减少了HEMCSS细胞CD4 4表达。结论 :TGF - β1可以调节HEMCSS细胞膜上细胞外基质受体的表达 ,从而调节软骨细胞与细胞外基质成分的结合 ,对调节软骨细胞的功能起着重要的作用。     

康宁克通A对大鼠肾小球系膜细胞增生及单核细胞趋化蛋白—1表达的作用

目的：探讨康宁克通A（TA）抑制大鼠肾小球系膜细胞（GMCs)增生及单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）的表达影响及机制。方法：在体外培养的大鼠GCMs株中加入脂多糖（LPS）后,再分别加入不同浓度的TA,共设3组：①GMC组,②LPS组,即GMCs LPS,③TA组,即GMCs LPS TA。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）掺入法,于24h,48h观察3组中GMCs增生水平,选择药物的最佳GMCs增生抑制浓度及时间段。采用免疫组织化学方法观察3组GMCs涂片中MCP－1及核转录因子－κB(NF-κB)的表达,采用ELISA方法观察其培养的上清液中MCP－1的浓度。结果：①TA组GMCs增生水平明显低于LPS组及GMC组（均P＜0.01)。②TA组GMCs中MCP－1的表达明显低于LPS组和GMC组（均P＜0.01)。③TA组GMCs中NF－κB表达明显低于LPS组（P＜0.01),与GMC组差异无显著性（P＞0.05)。④TA组GMCs培养上清中MCP－1浓度明显低于LPS组（P＜0.01),与GMC组差异无显著性（P＞0.05)。结论：TA可能系通过抑制GMCs中NF－κB的激活而抑制大鼠GMCs增生,下调GMCs中MCP－1的异常表达及分泌。     

汉防抑制甲素对瘢痕成纤维细胞增殖作用的影响的实验研究

目的比较汉防抑制甲素与激素对瘢痕成纤维细胞增殖作用的差异,为汉防抑制甲素应用于临床提供依据。方法利用瘢痕成纤维细胞体外培养模型,采用MTT记数、流式细胞仪记数厦HE染色法,比较并分析了汉防抑制甲素与激素对瘢痕成纤维细胞增殖活力的影响。结果同在IC50时,两者对瘢痕成纤维细胞的抑制作用相似。均可使生长曲线压低,群体倍增时间延长,G2-M期细胞明显增多厦时相时间明显延长,此外汉防抑制甲素还可使S期明显延长。结论汉防抑制甲素具有与糖皮质激素相似的抑制瘢痕成纤维细胞增殖的作用。     

生物蛋白胶和曲安奈德对犬食管内镜黏膜下剥离术后狭窄的预防

目的 探讨生物蛋白胶和曲安奈德对犬食管内镜黏膜下剥离术(endoscopic submucosal dissection,ESD) 后狭窄的预防效果.方法 健康12月龄普通家犬20只(雌雄不限,体质量12 ～15 kg) ,采用随机数字表法分为4组(n = 5): 联合治疗组、生物蛋白胶组、曲安奈德组和对照组,ESD术于食管距门齿30～34 cm处剥离食管黏膜3/4环周,建立创面,分别于创面喷涂生物蛋白胶+ 曲安奈德混悬液、生物蛋白胶溶液、曲安奈德溶液,对照组不用药物.术后6周胃镜检查后处死实验犬取食管标本观察大体形态、比较狭窄率,狭窄组织行HE染色和针对α-SMA的免疫组化染色.结果 胃镜下见狭窄处瘢痕皱襞.大体标本见瘢痕处管壁变薄.相比曲安奈德组(P＜ 0.05) 和对照组(P＜ 0.01) ,联合治疗组狭窄率更小;生物蛋白胶组较对照组狭窄率也更小(P＜ 0.05) .HE染色见黏膜下层广泛的肌成纤维细胞、胶原纤维和固有肌层萎缩.与联合治疗组比较,曲安奈德组和对照组α-SMA表达量均显著增加(P＜ 0.01);与生物蛋白胶组比较,曲安奈德组(P＜ 0.01) 和对照组(P＜ 0.05) 表达量也增加.结论 食管ESD术后创面局部喷涂生物蛋白胶+ 曲安耐德混悬液或生物蛋白胶对术后狭窄有预防效果,其机制可能与减少黏膜下层纤维化和炎症反应有关,而单次喷涂曲安奈德对术后狭窄无效.     

增生性瘢痕成纤维细胞P物质表达的研究

目的研究P物质（substance P，SP）在人增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞的表达情况及其与正常皮肤之间的差异，探讨增生性瘢痕组织SP表达增高的原因。方法以酶消化法体外培养成人增生性瘢痕以及正常皮肤的成纤维细胞，将SP（终浓度为10^-7mol／L）加入培养液中刺激成纤维细胞，分别于刺激前和刺激后1、3、6、12、24h采用RT—PCR检测细胞内SP基因的表达情况，ELISA检测培养液中SP浓度。正常皮肤对照组及瘢痕对照组除不应用SP外，余处理均相同。结果未受SP刺激时，人增生性瘢痕及正常皮肤体外培养的成纤维细胞均能分泌一定浓度的SP，两者之间差异有统计学意义（P〈0．01）。SP刺激后，正常皮肤体外培养的成纤维细胞SP基因和蛋白表达均在1～3h内达到高峰，随后迅速下降，24h后仍高于其正常水平；而增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞SP基因和蛋白表达在3～6h内达到高峰，随后缓慢下降，24h后仍高于其正常水平。两种成纤维细胞SP的分泌差异有统计学意义（P〈0．05）。结论外源性SP可诱使成纤维细胞内SP的分泌增加，而增生性瘢痕与正常皮肤成纤维细胞SP的分泌情况有明显差异。     

Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因第2外显子核酶对靶RNA的体外切割活性的研究

目的 体外研究锤头型α1Ⅰ型及Ⅲ型前胶原基因第2外显子片段核酶对各自靶RNA分子的切割活性及反应条件。同时观察两反义核酶对瘢痕中成纤维细胞胶原合成的影响。方法 将含α1Ⅰ型及Ⅲ型前胶原基因第2外显子片段的重组质粒(pT-Ⅰ、pT-Ⅲ)，经体外^32P标记转录后形成产物靶RNA。同时将含特异性核酶基因的重组质粒(pT-gⅠ、pT-gⅢ)进行非标记的体外转录，产物(核酶)与各自的^32P-靶RNA按不同的条件混和反应，电泳后放射自显影观察结果。将构建好的核酶以脂质体包裹后导入培养的成纤维细胞内，采用图像分析法观察核酶对成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白mRNA合成的影响。结果 两种核酶在37℃、42℃均能有效切割各自的靶RNA，对Mg^2 浓度的要求范围较宽(10～20mmol／L)；反应温度从65℃逐渐降至并维持在37℃的条件下核酶切割活性显提高。Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达明显降低，胶原蛋白生成降低，胶原生成明显受抑制。结论 针对α1Ⅰ型及Ⅲ型前胶原基因第2外显子片段的核酶能有效地在体外对靶RNA进行切割并能有效地抑制瘢痕中成纤维细胞胶原的合成。