三羟异黄酮联合阿霉素对人乳腺癌细胞HER-2/neu表达的影响

目的:探讨三羟异黄酮(GEN)联合阿霉素(ADM)对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM中HER-2/neu mR-NA及蛋白表达的影响。方法:将不同浓度GEN和ADM单独或联合作用于体外培养的MCF-7/ADM细胞后,RT-PCR检测HER-2/neu mRNA表达情况,Western blot检测HER-2/neu蛋白表达情况。结果:体外培养的MCF-7/ADM细胞高表达HER-2/neu mRNA及蛋白,经GEN单独及联合ADM作用后,HER-2/neu mRNA和蛋白表达明显下调。联合用药比相同浓度GEN单用下调更明显。结论:人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性与HER-2/neu mRNA及蛋白高表达相关,GEN能部分逆转MCF-7/ADM细胞多药耐药性。     

三羟异黄酮对MCF-7/ADM细胞阿霉素耐药性的逆转作用

目的:探讨三羟异黄酮(GEN)单用及联合阿霉素(ADM)对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性的影响。方法:分别将不同浓度GEN(8、15、30、60μg/mL)和阿霉素单独及联合与人乳腺癌MCF-7/ADM细胞体外共培养48、72 h,MTT法检测细胞抑制率(IR),计算耐药倍数和逆转倍数。结果:MCF-7/ADM细胞相对敏感株MCF-7/S的耐药倍数48 h为117.15倍、72 h为54.42倍。当GEN单独作用后可抑制MCF-7/ADM细胞生长,抑制作用与时间、浓度呈正相关。25μg/mL GEN联合阿霉素对MCF-7/ADM细胞生长抑制率明显高于单用阿霉素(P<0.01),其逆转倍数为7.53倍。结论:GEN可抑制人乳腺癌MCF-7/ADM细胞生长,联合阿霉素对肿瘤细胞生长抑制具有协同作用,GEN能够逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。     

HER2/neu和基于HER2/neu乳腺癌治疗的研究进展

HER2/neu是表皮生长因子受体家族的一个成员,该基因的扩增或过表达在近30%的乳腺癌的发生发展和转移中起着重要的作用,也是乳腺癌预后判断的一个重要的生物标志物、更是乳腺癌分子靶向治疗的一个重要靶标。近年来,针对HER2/neu蛋白已经研制出了多种有效的药物,最主要的和已经进入临床应用的是针对HER2/neu蛋白的单克隆抗体类药物。HER2/neu阳性的乳腺癌经联合治疗后,85%的患者的存活期可以达到5年以上。本文介绍了HER2/neu基因与蛋白及其作用通路,简介了HER2/neu的检测,重点介绍了以HER2/neu为靶标的单克隆抗体类药物治疗。     

抗HER2/neu单克隆抗体的制备及其对乳腺癌细胞生长的抑制性

目的 制备抗HER2／neu的特异性单克隆抗体，筛选出能够分泌抑制p185 HER2／neu蛋白过表达的肿瘤细胞生长的单抗杂交瘤细胞株。方法 原核表达含全长neu蛋白的融合蛋白，免疫Balb／c雌性小鼠后取效价高的小鼠尾静脉加强后行脾细胞与SP2／0细胞进行细胞融合。以ELISA、免疫细胞化学、免疫组织化学、细胞免疫荧光和MTT法进行筛选。结果 共获得8株稳定分泌HER2／neu单抗的杂交瘤细胞株，其中5株细胞产生的抗体体外实验能够抑制乳腺癌细胞HBT133的生长。结论 能够抑制HBT133细胞生长的5株杂交瘤细胞株可以用作人源化，具有较高的临床应用价值。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究三羟异黄酮(genistein,Gen)对乳腺癌细胞株MCF鄄7细胞增殖和细胞周期的影响。方法:采用MTT比色法观察Gen对MCF鄄7细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期分布,Westernblot分别检测周期素B(cyclinB)、周期素E(cyclinE)蛋白表达情况。结果:Gen(≥10μmol/L)对MCF鄄7细胞生长有显著抑制作用,细胞生长阻滞于G2/M期,cyclinB蛋白表达增加,且呈剂量-效应关系;但对cyclinE蛋白表达无影响。结论:Gen抑制MCF鄄7细胞增殖、诱导G2/M期阻滞与其导致cyclinB蛋白积累有关,与cyclinE蛋白表达无明显关系。     

原癌基因HER2／neu在乳腺癌中的表达及研究进展

乳腺癌是一种临床异质性疾病,其临床病理因素的多样性导致发生不同的临床结局。乳腺癌的发生涉及细胞凋亡与增殖失衡、细胞的分化紊乱、癌基因与抑癌基因的功能失调以及相关信号传导系统等多种生命活动的异常。HER2（human epidermal growth factor receptor 2）是与乳腺癌的预后有密切关系的癌基因,约在20％-30％的乳腺癌中可以检测到该基因的扩增和过表达。其靶向治疗药物Herecptin（赫赛汀）自问世至今,用于治疗HER2基因过表达的进展期乳腺癌患者取得了令人鼓舞的疗效。现就近年来有关原癌基因HER2／neu在乳腺癌中的研究进展简要综述如下。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞端粒酶的影响

目的 研究三羟异黄酮(Genistein,Gen)对人乳腺癌细胞系体外增殖的影响及其与端粒酶的关系.方法 体外培养雌激素受体阳性(ER )和阴性 (ER-)乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231,MTT法检测细胞增殖的影响;RT-PCR法观察端粒酶逆转录酶TERT基因mRNA的表达;免疫细胞化学染色观察NF-κB p65的核移位.结果 雌二醇(Estradiol,E2)单独作用时,促进MCF-7细胞增殖、TERT mRNA表达和NF-κB p65的核移位,但对MDA-MB-231细胞无明显影响.低剂量的Gen对MCF-7细胞的单独作用与E2类似,与E2联合作用时,MCF-7细胞无明显变化;高剂量的Gen单独或联合E2作用于 MCF-7细胞以及MDA-MB-231细胞,均表现为抑制细胞增殖、TERT mRNA表达和NF-κB p65的核移位.结论 Gen对两种乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的不同影响与雌激素受体表达状态及E2存在与否有关,并可能是通过调节TERT的mRNA表达、NF-κB p65的核移位来调控细胞端粒酶活性的.     

Geldanamycin对HER2/neu高表达人乳腺癌细胞系SKBr3增殖及迁移能力的影响

目的 探讨Hsp90抑制剂苯醌安莎霉素类抗生素(GA)对HER2/neu高表达人乳腺癌细胞系SKBr3增殖及迁移能力的影响.方法 用Western蛋白印迹法检测GA介导的HER2/neu酪氨酸激酶的降解;MTT法分析GA对肿瘤细胞存活率的影响;流式细胞仪测定GA对肿瘤细胞周期的影响;RT-PCR和real-time PCR分析GA对cyclin D1表达的影响以及分析GA对肿瘤细胞迁移能力的干预作用.结果 GA以剂量/时间依赖性的方式降解了HER2/neu酪氨酸激酶的表达并抑制了SKBr3乳腺癌细胞的增殖,这种增殖抑制效应表现在:GA干预后乳腺癌细胞的存活率明显降低;GA阻断了乳腺癌细胞细胞周期的进展,使细胞周期停滞于G1期,而这两种表现与cyclin D1表达量的减低有着明显的关系.GA的干预也同时降低了肿瘤细胞的迁移能力.结论本研究证实GA能够降解HER2/neu酪氨酸激酶并抑制HER2/neu高表达人乳腺癌细胞系SKBr3的增殖和迁移能力.     

人乳腺癌MCF-7/ADM细胞的耐药谱及brca1基因表达的实验研究

[目的]研究人乳腺癌MCF-7/ADM细胞的耐药谱并探讨brca1基因产物表达与该细胞耐药性的相关性。[方法]经MTT法检测MCF-7/ADM细胞的耐药谱;通过免疫荧光法检测brca1基因产物表达情况。[结果]测得MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药倍数为3.7倍;对长春新碱的耐药倍数为70.3倍;对氟尿嘧啶的耐药倍数为7.8倍。brca1基因产物在MCF-7/ADM细胞中的表达强度(98.23±7.63)高于MCF-7/S细胞(8.69±1.25),差异具有显著性意义(P<0.01)。[结论]MCF-7/ADM细胞是多药耐药细胞株,brca1与肿瘤多药耐药产生可能有一定的相关性。     

HER2/neu和Akt2在胃癌中的表达及意义

 目的检测HER2/neu和Akt2蛋白在胃癌及正常胃组织中的表达,分析二者与胃癌临床病理指标间的关系。方法应用免疫组化方法检测HER2/neu和Akt2蛋白在80例胃癌及40例正常胃组织中的表达。结果HER2/neu和Akt2蛋白阳性表达率胃癌中分别为17.50%和67.50%,正常胃组织中分别为0和5.00%,胃癌组织与正常胃组织比较HER2/neu和Akt2蛋白阳性表达率的差异均有统计学意义（P <0.05）;胃癌中,HER2/neu的表达与胃癌Lauren分型、组织学分化程度有关（P <0.05）,与临床分期、淋巴结转移及浆膜浸润无关（P >0.05）;而Akt2的表达与胃癌Lauren分型、组织学分化程度、临床分期及淋巴结转移有关（P <0.05）,与浆膜浸润无关（P >0.05）。HER2/neu及Akt2在胃癌中的表达有一定的一致性（χ² =4.97,P <0.05）。结论HER2/neu和Akt2蛋白在胃癌中有表达,二者的表达可能与胃癌的不良预后有密切关系,HER2/neu及Akt2在胃癌中的表达具有一定的一致性。     

塞来昔布对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM的增殖抑制作用

目的： 通过研究选择性环氯化酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布联合阿霉素(ADM)对乳腺癌MCF-7/ADM细胞株生长的作用,探讨塞来昔布的抗肿瘤作用。方法：MCF-7/ADM细胞加入不同浓度等倍稀释的ADM（0.05、0.10、0.20、0.40、0.80和1.60 mg/L）为对照组,MCF-7/ADM细胞加入无细胞的完全培养基为阴性对照组,在对照组的基础上联合应用10、20 μmol/L塞来昔布为实验组,各组细胞于24、48、72 h后采用CCK-8检测细胞生长抑制率。MCF-7/ADM细胞单加0.05 mg?L-1ADM及联合塞来昔布(10、20 μmol/L)处理后3 h收集细胞,采用流式细胞术检测细胞内ADM水平。结果：不同浓度ADM单药及联合塞来昔布（10和20 μmol/L）　作用于MCF-7/ADM 24、48和72 h后细胞生长受到抑制,实验组不同时间细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05),且20 μmol/L塞来昔布实验组细胞生长抑制率高于10 μmol?L-1塞来昔布实验组,差异具有统计学意义（P<0.05）。对照组24、48和72 h的细胞未见明显变化,但实验组细胞作用48和72 h后出现细胞改变及死亡,呈塞来昔布剂量依赖性。与对照组比较,塞来昔布实验组（10和20 μmol/L）细胞内ADM浓度升高（P<0.05）;20 μmol/L塞来昔布实验组细胞内ADM浓度高于 10 μmol/L塞来昔布实验组(P<0.05)。结论：选择性COX-2抑制剂塞来昔布联合ADM可有效逆转乳腺癌ADM细胞株耐药。
     

Astrocyte elevated gene-1 induces breast cancer proliferation and invasion through upregulating HER2/neu expression

Background  Astrocyte elevated gene-1 (AEG-1), primarily identified as a late response gene induced by HIV-1 infection, plays multiple roles in the process of oncogenesis. This novel gene has been demonstrated to be involved in the several potent carcinogenic pathways, including PI3K/Akt pathway, nuclear factor (NF)-κB pathway, and Wnt/β-catenin pathway. Although the function of AEG-1 has been intensively investigated in recent years, the molecular mechanism underlying its oncogenic role is largely unknown. The aim of this research was to explore the potential function of AEG-1 in breast cancer development and progression.

Methods  AEG-1 was ectopically overexpressed in breast cancer MCF-7 cells and its biological effects on the proliferation and invasion of MCF-7 cells were studied by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and invasion assays. The expression of HER2/neu, a crucial oncogene involving in breast cancer carcinogenesis, was also determined.

Results  Overexpression of the AEG-1 promoted the proliferation and invasion ability of breast cancer cells, and upregulated the expression of HER2/neu, a crucial oncogene involving in breast cancer carcinogenesis.

Conclusion  AEG-1 might facilitate the proliferation and invasion of breast cancer cells by upregulating HER2/neu expression, which provides a potential target for breast cancer therapy.

     

Hiwi基因靶向沉默对乳腺癌MCF-7/ADM细胞化疗敏感性的影响

目的：探讨耐阿霉素乳腺癌MCF-7/ADM细胞应用Hiwi基因靶向沉默技术后对阿霉素敏感性的变化,阐明Hiwi基因在乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药机制中的作用。方法：MCF-7/ADM细胞分为对照组、Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组,分别转染Hiwi control、Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2 3种不同载体,应用实时定量PCR和Western blotting法检测Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平,判断转染效率。转染后各组乳腺癌MCF-7/ADM细胞加入不同浓度阿霉素（0、0.1、0.5和1.0mg·L^-1）,0mg·L^-1阿霉素组为对照组,采用MTT法检测各组MCF-7/ADM细胞的存活率,即耐药敏感性。结果：与对照组比较,转染后Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2组细胞中Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）。与对照组比较,经不同浓度阿霉素作用后,Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组细胞存活率明显降低（P<0.01）,阿霉素浓度为1.0 mg·L^-1时,2组细胞存活率分别为（48.15±6.28）%和（41.73±6.17）%,对阿霉素的敏感性明显增强。结论：Hiwi基因在MCF-7/ADM细胞中具有高效的靶向沉默,Hiwi基因沉默后的MCF-7/ADM细胞对阿霉素恢复敏感性。     

咯萘啶逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性及机制探讨

目的 在明确咯萘啶(PND)逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药性的药效基础上,初步探索作用机制。方法采用MTT法检测单用阿霉素(ADM)和联用咯萘啶(PND)对人乳腺癌敏感细胞MCF-7和耐药细胞MCF-7/ADM的抑制作用,得出半数抑制浓度(IC₅₀),并计算耐药倍数和逆转倍数。Western blot检测细胞中Fas和Caspases-3蛋白表达。结果ADM对MCF-7和MCF-7/ADM的IC₅₀分别为1.399 μg/mL和43.885 μg/mL,耐药倍数为31.4倍。PND(0.5 μg/mL)联合ADM作用MCF-7/ADM的IC₅₀为3.246 μg/mL,逆转倍数为13.5倍,并能提高耐药MCF-7/ADM中Fas和Caspases-3蛋白表达。结论PND能够逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药性,通过上调膜蛋白Fas表达,增加MCF-7/ADM对ADM的敏感性,从而促进细胞凋亡。     

Astrocyte Elevated Gene-1 Induces Breast Cancer Proliferation and Invasion Though Upregulating HER2/neu Expression

AEG-1, first identified as a late response gene induced by HIV-1 infection was found to play multiple roles in process of oncogenesis. This novel gene has been demonstrated to be involved in the several potent carcinogenic pathways, such as PI3K/Akt pathway, NF-κB pathway and Wnt/β-catenin pathway. Though its pertinent functions have been illuminated in recent years, the molecular mechanism underlying its oncogenic performance is largely unknown. Therefore, in order to explore the potential function of AEG-1 in breast cancer development and progression, we ectopically overexpressed AEG-1 in breast cancer MCF-7 cells and studied its biological effects on MCF-7 cells. With MTT assay and invasion assay, we found that overexpression of AEG-1 could promote the proliferation and invasion ability of breast cancer cells. Furthermore, we also elucidated that AEG-1 could unregulate the expression of HER2/neu, a crucial oncogene involved in breast cancer carcinogenesis. Taken together, we concluded that AEG-1 might facilitate the proliferation and invasion of breast cancer cells though upregulating HER2/neu expression, providing a novel target for breast cancer therapy.     

HER-2/neu蛋白在胃癌中的表达及意义

[目的] 探讨表皮生长因子受体HER-2/neu在胃癌组织表达的临床病理学意义.[方法] 采用免疫组织化学法检测67例胃癌标本HER-2/neu蛋白的表达,并分析检测结果与患者的随访资料及临床病理学参数的关系.[结果] HER-2/neu蛋白在胃癌组织的阳性表达率为22.4%(15/67),而在癌旁正常组织无表达.HER-2/neu表达与患者的性别、年龄、分化程度均无相关关系(P>0.05),而与肿瘤的Lauren分类、临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05).HER-2/neu蛋白表达阳性患者的中位生存期为30.0个月,表达阴性的为50.0个月,二者差异有显著性意义(P<0.05).运用COX比例风险模型分析提示HER-2/neu和临床分期为胃癌独立预后因素.[结论] 检测胃癌组织中HER-2/neu蛋白的表达,有助于判断患者预后.     

荧光原位杂交法检测乳腺癌HER-2/neu表达及临床意义

目的探讨用荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)方法检测乳腺癌HER-2/neu基因表达的临床意义。方法应用FISH法对2008年1月至2008年7月在首都医科大学附属北京天坛医院就诊的33例女性新发乳腺癌患者进行HER-2/neu基因检测,分析基因表达程度与临床病理特征之间的关系,比较基因和免疫组化(IHC)法蛋白表达的差别。结果33位受试者中HER-2/neu基因过表达率为39.4%,其过表达与肿瘤大小、绝经与否、临床分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。该基因在有腋淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组(P<0.05),ER阴性组高于ER阳性组,差异有统计学意义(P<0.01)。PR阴性组与阳性组间差异无统计学意义。P53基因阳性组显著高于阴性组(P<0.05)。HER-2/neu基因过表达者11例为免疫组化HER-2蛋白强阳性病例;2例为中度阳性病例。结论FISH技术可稳定检测乳腺癌中HER-2/neu基因的表达程度,其过表达与绝经与否、肿瘤大小、临床分期无关,与腋淋巴结转移和P53基因表达成正相关,与ER呈密切负相关。HER-2蛋白高强度表达(3+)与基因扩增有极好的一致性,而中等强度表达(2+)必须进一步行FISH法基因检测。