神经生长因子及其受体p75在乳腺癌中的表达

目的: 探讨神经生长因子(NGF)及其低亲和力受体p75在乳腺癌中的表达及其意义.方法: 采用PV-9000免疫组织化学方法检测118例乳腺疾病患者病灶组织中NGF和p75的表达.结果: NGF在乳腺癌上皮细胞中表达,在恶性肿瘤中阳性率高于良性肿瘤(P< 0.01),在原位癌和浸润癌中阳性率差异无统计学意义(P >0.05);p75在乳腺的肌上皮细胞表达,在良性肿瘤中的阳性率高于恶性肿瘤(P< 0.01).NGF阳性率在肿瘤的分级、年龄、淋巴结转移间差异均无统计学意义(P >0.05),p75阳性率在年龄间差异无统计学意义(P >0.05),而在肿瘤的分级和淋巴结转移间表达阳性率差异均有统计学意义(P< 0.01和P< 0.05).结论: NGF可能是乳腺癌发生、发展的分子事件,但与乳腺癌的浸润性进展无关;p75可作为乳腺癌恶性程度的分子标志物.     

神经生长因子受体TrkA和p75与乳腺肿瘤的相关性研究

目的分析神经生长因子的两种受体TrkA和p75与乳腺肿瘤的相关性。方法回顾性分析我院2010年2月-2012年2月100例乳腺肿瘤,采用SABC免疫组织化学法进行测定神经生长因子两种受体TrkA和p75在乳腺肿瘤中的表达。结果 TrkA在44例浸润性乳腺肿瘤中有39例高表达,占88.64%;在27例良性乳腺肿瘤中有5例高表达,占18.52%,两者差异有统计学意义(χ2=48.75,P<0.05)。所有的恶性乳腺肿瘤均不表达p75,恶性乳腺肿瘤和良性乳腺肿瘤及正常组织表达比较,差异有统计学意义(χ2=42.34,P<0.05)。结论神经生长因子的两种受体TrkA和p75与恶性肿瘤有一定的关系,可以作为乳腺肿瘤治疗的切入点。     

胰腺癌组织中神经生长因子受体的表达意义

目的:研究神经生长因子(NGF)高亲和受体TrkA与低亲和受体p75在胰腺癌中的表达意义.方法:应用实时定量PCR法检测56例胰腺癌组织中TrkA及p75的表达并进行临床病理及预后分析.结果:所有组织标本中均可检测出TrkA及p75的表达呈负相关.p75与TrkA的表达水平与患者的腹背部疼痛和神经浸润程度有关 (P均＜0.05).Cox单变量分析揭示,高p75表达患者较高TrkA患者的总生存时间延长(P＜0.05),Cox多变量分析揭示,p75及TrkA均为影响预后的独立因素.结论:胰腺癌中TrkA的表达促进肿瘤的恶性进展,而p75则相反,NGF刺激增长或抑制胰腺癌的双重作用可能与TrkA及p75的表达比率相关.     

神经生长因子及其受体在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究神经生长因子(NGF)及其受体P75NGFR和TrkA在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理学指标间的关系.方法:采用免疫组化技术检测NGF、P75NGFR和TrkA在65例胰腺癌、18例癌旁正常胰腺及慢性胰腺炎组织中的表达和分布,并分析其表达与临床病理学指标间的关系.结果:NGF及TrkA在胰腺癌组织中的表达较癌旁正常胰腺及慢性胰腺炎组织高;而P75NGFR的表达无显著性差异.NGF的表达与肿瘤大小密切相关,与淋巴结转移也有关;而P75NGFR和TrkA两者的表达只与淋巴结转移密切相关.NGF的表达与胰腺癌组织学分型、肿瘤分期、肿瘤大小、淋巴结转移都有关,而与肿瘤大小的关系最为密切;P75NGFR的表达仅与淋巴结转移有关;而TrkA的表达与淋巴结转移和肿瘤分期有关.淋巴结转移和TrkA的阳性表达与预后密切相关.结论:NGF、P75NGFR和TrkA在胰腺癌的发展中有一定的作用,TrkA与胰腺癌的关系尤为密切,可作为重要的靶标分子用于胰腺癌的基因治疗.     

MIB-1、p63在乳腺肿瘤细胞中的表达及意义

目的探讨MIB-1、p63在不同病理类型乳腺肿瘤中的表达及其临床意义。方法根据WHO（2003）乳腺肿瘤分类标准,收集乳腺肿瘤患者手术切除标本：非典型性增生（ADH）组24例、乳腺原位癌组（DCIS）20例、浸润性癌（IDC）组45例,乳腺普通型增生（UDH）20例作为对照组。应用免疫组化进行MIB-1、p63检测,观察其在不同病理类型乳腺组织中的分布及表达水平。结果p63在UDH、ADH、DCIS组中均有不同程度的阳性表达,主要表达于导管周围的肌上皮,ADH、DCIS两组间无明显差异,但与UDH组相比,其阳性表达率明显下降,在IDC组中p63几乎不表达;MIB-1主要表达于增殖细胞中的核抗原,阳性染色定位于肿瘤细胞核,MIB-1标记的增殖指数PI在UDH、ADH、DCIS、IDC组分别为2.25±0.54、4.08±0.57、5.50±0.56、30.22±2.41,从UDH到ADH、DCIS,再到IDC,PI显著升高,p63表达呈逐渐减弱。MIB-1在IDC表达与临床病理分期、分子分型有关,而与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、腋窝淋巴结转移及其个数无关,临床分期越晚（Ⅲ、Ⅳ期）、分子分型为HER-2型、三阴性患者,其PI均分别高于临床分期早（Ⅰ、Ⅱ期）、分子分型为管腔型A或B患者（P＜0.05）。结论联合检测p63、MIB-1可以较好地反映乳腺增生性病变的程度,正确鉴别乳腺的良恶性病变,通过检测MIB-1的增殖表达水平可预测乳腺恶性肿瘤的浸润程度及整体预后评估。     

骨髓基质干细胞转染后神经生长因子及其受体p75的表达

目的：为应用神经生长因子（ NGF）修饰的骨髓基质干细胞（ BMSC）进行耳蜗移植治疗老年性耳聋的实验研究提供支持。方法采用脂质体LipofectamineTM 2000方法进行骨髓基质干细胞转染,共分为4组：A组：脂质体包裹的重组质粒转染组;B组：脂质体转染组;C组：脂质体包裹的空质粒转染组;D组：用含10％胎牛血清的DMEM F12培养液培养。免疫组化检测各组转染后神经生长因子和神经生长因子受体p75的表达。结果各转染组细胞均有NGF、受体p75表达,且均以胞浆表达为主;图像分析显示,重组质粒组NGF表达的平均光密度值明显高于其余3组,重组质粒组受体p75表达的平均光密度值明显低于其余3组。结论采用脂质体Lipofectami-neTM 2000转染方法能成功将含有NGF的重组质粒转染至BMSC,为我们进一步应用NGF修饰的BMSC进行耳蜗移植治疗老年性耳聋的实验研究提供理论基础。     

神经生长因子在炎性疼痛中的作用及机理研究进展

神经生长因子是一种高分子量的肽,广泛存在于机体各种组织、器官,能够结合TrkA受体和p75NTR受体,在中枢神经系统和周围神经系统的发展和维持中起着重要作用。神经生长因子的失调与多种病理学的疼痛有关,神经生长因子及其受体在疼痛的产生及维持中担任重要角色。而神经生长因子在炎性疼痛中的作用及机理尚不清楚。本文对其现在的研究情况做一综述。     

原肌球蛋白受体激酶A和p75在相关肿瘤中的 研究进展

神经生长因子是神经营养因子家族成员之一,其在调节外周神经元和中枢神经元的活动中发挥重要作用。研究发现,神经生长因子在调节肿瘤的发生发展中发挥重要作用,其主要通过原肌球蛋白受体激酶A（tropomyosin receptor kinase A,TrkA）和p75两个经典的神经生长因子受体发挥作用。TrkA、p75的表达与肿瘤的生物学特性及临床病理相关因素密切相关。在调节肿瘤生物学特性方面,神经生长因子所发挥的作用也因上述两种受体作用的不同而发挥不同甚至截然相反的作用。本文综述TrkA、p75在不同类型肿瘤组织中的表达情况,阐述其在神经生长因子中的作用差异,并就造成此种差异的原因及可能存在的机制进行进一步探讨。     

大鼠脊髓中神经生长因子受体TrkA的表达与分布

目的：检测神经生长因子受体TrkA在大鼠脊髓中的表达与分布。方法：通过Western blot检测TrkA在脊髓中的表达;通过免疫荧光组织化学,利用激光共聚焦显微镜检测TrkA在神经元中的定位。结果与结论：TrkA广泛分于脊髓各层神经元及灰质内,并且在神经元的胞体和树突中均有表达。     

神经生长因子对氧合血红蛋白诱导小鼠神经细胞凋亡及神经生长因子受体表达的影响

【目的】研究神经生长因子（NGF）对氧合血红蛋白（Oxynb）诱导的小鼠神经细胞凋亡以及P75NTR和TrkA表达的影响,并进一步探讨Oxynb诱导细胞凋亡及NGF对神经细胞保护作用的可能机制。【方法】雄性健康ICR小鼠随机分为损伤组（24只）、损伤给药组（24只）,脑皮层局部蛛网膜下腔注射Oxynb建立蛛网膜下腔出血的动物模型,尾静脉注射神经生长因子,使用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测P75NTR和Tr—kA表达的情况。【结果】注射0xy硒后出现神经细胞凋亡,P75NTR表达增加,TrkA表达无明显改变,在NGF给药组,神经细胞凋亡数明显减少,P75NTR表达明显降低,TrkA的表达无明显改变。【结论】P75NTR表达的增加提示,其参与了Oxynb诱导的小鼠神经细胞凋亡,而静脉注射NGF可以抑制OxyHb诱导的细胞凋亡,其机制可能是通过与受体结合,从而降低P75NTR表达水平以实现其保护作用。     

乌头汤对DPN大鼠NGF受体TrkA、p75NTR表达的影响

[目的] 通过观察乌头汤对糖尿病周围神经病变（DPN）大鼠胫神经神经生长因子（NGF）受体、酪氨酸蛋白激酶A（TrkA）和p75神经营养因子受体（p75NTR）表达及血清NGF含量的影响,探索该方改善DPN的可能机制。[方法] Wistar大鼠腹腔注射链尿佐菌素（STZ）建立糖尿病模型,观察乌头汤对胫神经纤维组织TrkA、p75NTR及血清NGF的影响。[结果] 干预前后模型组和乌头汤组均较空白组FBG显着升高（P<0.01）,各组内FBG在干预前后无统计学差异（P>0.05）;与模型组比较,乌头汤组血清NGF含量明显升高（P<0.05）,神经组织p75NTR明显降低（P<0.05）.乌头汤组p75NTR免疫组化染色阳性表达程度较模型组明显降低。[结论] 乌头汤改善DPN的作用可能与其能够调节神经纤维p75NTR含量和血清NGF含量有关。     

骨肿瘤中血管内皮生长因子受体的表达

目的：观察血管内皮生长因子受体flt-1和KDR在骨肿瘤中的表达,探讨flt-1和KDR与骨肿瘤的发生,恶性程度及临床病理关系。方法：采用免疫组化SP法染色和图像分析检测90例骨肿瘤中flt-1和KDR的表达。结果：20例骨软骨瘤flt-1和KDR染色均为阴性。在骨巨细胞瘤及骨肉瘤中flt-1和KDR均表达。flt-1和KDR不仅在血管内皮细胞中,在部分肿瘤细胞也呈阳性反应。骨肉瘤中flt-1和KDR的表达明显高于骨巨细胞瘤（P＜0．05）。在骨巨细胞瘤中,随着分化程度的下降,受体的表达有逐渐递增的趋势。Ⅱ、Ⅲ级与Ⅰ级之间存在显著性差异（P＜0．05）,Ⅱ与Ⅲ级之间无差异（P＞0．05）。相关分析显示flt-1和KDR的表达与骨巨细胞瘤的病理分级密切相关。结论：VEGF及其受体flt-1和KDR的表达与骨肿瘤的恶性程度密切相关。恶性程度越,高表达越增强,flt-1和KDR在骨肿瘤中的表达可能作为判断骨肿瘤恶性度的一项有价值的指标。     

TrkA膜外域各结构域重组蛋白的制备和活性测定

目的:制备有活性的TrkA 膜外域各结构域重组蛋白.方法:用PCR法克隆TrkA膜外域各结构域(分别命名为CLC、Ig1和Ig2)的cDNA片段,然后插入融合表达载体pET-28a(+)中,经测序证实后,转入大肠杆菌BL21中表达,并用亲和层析法进行纯化,用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞株测定TrkA与配体结合的关键结构域(CLC、Ig1和Ig2)活性.结果:成功地用大肠杆菌制备了纯度达90％以上的TrkA膜外域各结构域重组蛋白;NGF+Ig2组PC12细胞突起生长率明显低于NGF组(P<0.05),NGF+CLC、NGF+Ig1组与NGF组相比没有显著差异.结论:Ig2能抑制经NGF诱导的PC12细胞的分化,CLC和Ig1不能抑制PC12细胞的分化.     

Cotransfection of TrkA and p75NTR in neuroblastoma cell line (IMR-32) promotes differentiation and apoptosis

Objective To assess the effects of both TrkA and p75NTR on nerve growth factor (NGF)-induced differentiation of neuroblastoma cells.Methods Retroviral vectors were constructed to express the high affinity NGF receptor (TrkA) and low affinity NGF receptor ( p75^NTR). Neuroblastoma cell line IMR-32 was transfected by the vectors expressing either TrkA or p75^NTR or both by using lipofectmine^TM reagent separately or cotransfected at the same time. Southern blot, Northern blot, RT-PCR and flow cytometry were used to determine the success of the transfection. MTT technique was to monitor the cell proliferation. Colony formation in soft agar and tumor forming assay in nude mice were used to test the biological characteristics of the tumor cells. Terminal-deoxynucleotidytransferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)assay was used to test the apoptosis of the tumor cells.Results Stable transformant cell lines expressing TrkA, p75^NTR or both genes were established.Studies on these transformant cell lines have shown different NGF responses. The p75^NTR transfection only resulted in the mild differentiation response, and transfection of TrkA gene caused remarkable neurite extension, up-regulation of neurofilament and decreased expression of N-myc oncogene after NGF treatment. The cotransfection of the two genes into this cell line resulted in the more rapid and more apparent morphological changes than single TrkA transfected cells after NGF treatment. The cotransfected cells underwent apoptosis after withdrawal of NGF.Conclusions The results indicate that coexpression of both low-and high-affinity NGF receptors are not only more efficient in restoration of NGF-induced differentiation pathway, but also be able to activate the pro-apoptotic activity of low-affinity NGF receptor and make the tumor cells become NGF-dependent and irreversibly differentiated.     

神经生长因子对角膜上皮细胞增殖的影响

目的　探讨神经生长因子 (NGF)对角膜上皮细胞增殖的影响 ,为寻找促进角膜上皮损伤修复的药物提供依据。方法　在人和兔角膜上皮细胞培养液中加入NGF ,采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法观测细胞增殖情况。并用流式细胞仪检测NGF对人角膜上皮细胞增殖核抗原表达的影响。结果　加入外源性NGF后 ,培养的人和兔角膜上皮细胞增殖率较对照组均有明显增加 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ,流式细胞仪检测细胞增殖核抗原的表达较对照组明显增多(P <0 0 1)。结论　外源性NGF对人和兔角膜上皮细胞的增殖有明显的促进作用     

Cotransfection of TrkA and p75~(NTR) in neuroblastoma cell line (IMR-32) promotes differentiation and apoptosis of tumor cells

Objective To assess the effects of both TrkA and p75NTR on nerve growth factor (NGF)-induced differentiation of neuroblastoma cells.Methods Retroviral vectors were constructed to express the high affinity NGF receptor (TrkA) and low affinity NGF receptor (p75NTR). Neuroblastoma cell line IMR-32 was transfected by the vectors expressing either TrkA or p75NTR or both by using lipofectmine?reagent separately or cotransfected at the same time. Southern blot, Northern blot, RT-PCR and flow cytometry were used to determine the success of the transfection. MTT technique was to monitor the cell proliferation. Colony formation in soft agar and tumor forming assay in nude mice were used to test the biological characteristics of the tumor cells. Terminal-deoxynucleotidytransferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) assay was used to test the apoptosis of the tumor cells.Results Stable transformant cell lines expressing TrkA, p75NTR or both genes were established. Studies on these transformant cell line     

神经生长因子在病毒性心肌炎心肌中的表达及法医学意义

目的检测病毒性心肌炎(VM)患者心肌组织中神经生长因子(NGF)的表达,探讨其在病毒性心肌炎发病过程中的作用及其在法医学中的意义。方法取10例病毒性心肌炎死者心肌组织为实验组,10例颅脑损伤死者心肌组织为对照组,HE染色并采用免疫组化法(SABC法)检测NGF表达,对其表达水平与心肌病变积分进行相关性分析。结果病毒性心肌炎死者心肌组织与对照组心肌组织中NGF表达有显著性差异(P<0.05),NGF免疫组化阳性颗粒指数与心肌病变积分呈显著正相关(r=0.91,P<0.05)。结论NGF过度表达可能在病毒性心肌炎的发病机制中起重要作用,NGF对病毒性心肌炎猝死有辅助诊断价值。     

血管内皮细胞生长因子在乳腺癌组织中的表达及其生物学意义

目的：探讨血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)对乳腺癌生物学特性的影响。方法：采用RT－PCR的方法研究乳腺癌组织中VEGF mRNA表达率,同时以Ⅷ因子相关抗原的抗体作为第一抗体的链酶亲和素－生物素－过氧化物酶复合物（Strep-avidin-biotin-peroxidase complex,SABC)免疫组化法检测乳腺癌组织中毛细血管密度,免疫组化结果以每200倍放大视野中毛细血管计数,小于50为“＋”,50－74为“＋＋”,75－99为“＋＋＋”,大于100为“＋＋＋＋”,并与乳腺良性病变作比较。结果：在30例乳腺癌组织中VEGF mRNA表达率为86．7％（26／30）,而乳腺良性病变组织中VEGF的mRNA表达率为15％（3／20）,两者有显著性差异（P＜0．001）。VEGF mRNA表达与肿块的大小无关,与患者是否有淋巴结以及是否有骨髓转移有关。在乳腺癌组织中毛细血管数80％（24／30）为“＋＋＋”,而对照组毛细血管密度都为“＋”。并且VEGF mRNA表达与肿瘤组织中毛细血管密度高度相关。结论：说明VEGF可以促进乳腺癌组织中毛细血管内皮细胞的增生,与肿瘤的血管形成及转移有关。分析VEGF mRNA表达对术前评估乳腺癌生物学特征有一定价值。     

大鼠脊髓慢性受压后脊髓组织神经生长因子及其受体的表达

目的:观察大鼠脊髓慢性受压后脊髓组织中神经生长因子(NGF)及其受体(TrkA)表达的变化。方法:采用大鼠后路渐进性压迫的方法制作大鼠轻、中、重度脊髓压迫损伤动物模型,用免疫组化检测脊髓组织中NGF及其受体的表达的变化。结果:正常大鼠脊髓组织中的脊髓神经元和灰、白质中的胶质细胞NGF和TrkA表达较弱;脊髓受压后NGF和TrkA表达增强(P<0.05)。受压程度越重,其表达越明显,免疫反应强度与脊髓受压程度呈正相关。结论:大鼠脊髓慢性受压后,NGF及其受体表达增多,这可能对脊髓神经元的存活和保留具有重要作用。