BXSB小鼠肾组织中MCP-1的异常表达及甲泼尼龙的干预作用

目的:探讨BXSB狼疮鼠肾组织单核细胞趋化因子1(MCP1)的表达情况及甲泼尼龙(MPS)是否可通过抑制MCP1的表达而缓解狼疮肾炎(LN)。方法:将18周龄雄性BXSB自发性狼疮小鼠随机分成BXSB治疗组(n=6)和对照组(n=6);另随机抽取同龄雄性BALBc小鼠6只为正常对照组。MPS组小鼠每日腹腔注射MPS25mg·kg-1;BXSB小鼠对照组及BALBc小鼠按体质量每日同一时间腹腔注射等体积生理盐水,连续3周。用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)研究BXSB小鼠肾脏MCP1mRNA的表达,并观察小鼠24h尿蛋白排泄量。结果:BXSB治疗组与对照组小鼠肾组织均检测到MCP1mRNA的表达,而BALBc正常对照组小鼠未见表达;BXSB治疗组小鼠肾组织MCP1mRNA表达量显著低于对照组(P<0.01);BXSB治疗组24h尿蛋白排泄量显著低于对照组(P<0.01)。结论:MCP1可能参与介导LN的发生、发展;MPS可能通过抑制肾组织MCP1的表达而减轻蛋白尿,从而缓解LN。     

BXSB狼疮鼠骨髓粒-巨噬细胞集落形成单位异常与发病的关系

目的：研究BXSB自发性狼疮鼠骨髓粒-巨噬细胞系的增殖情况与狼疮发病的关系。 方法：雄性BXSB小鼠按4、8、12、16及20周龄分组,每组6只,采用甲基纤维素半固体培养方法体外培养骨髓单个核细胞（BMMC）,计数粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）及小鼠外周血单核细胞(PBMC),并检测尿蛋白。相同周龄的C57BL小鼠作为正常对照组。 结果：12周龄雄性BXSB小鼠尿蛋白（+）,20周龄时尿蛋白（）,4、8周龄BXSB小鼠及各周龄C57BL小鼠尿蛋白（-）。8周龄雄性BXSB小鼠骨髓CFU-GM为（96.00±18.11）/2×10⁵ BMMC,PBMC计数为（111.33±10.97）×10⁶•L^-1,均明显高于4周龄BXSB小鼠及正常C57BL小鼠（P<0.05）,随着周龄增加,CFU-GM和PBMC进一步增多。 结论：BXSB小鼠粒-巨噬细胞系造血异常及外周血单核细胞增多参与了自身免疫疾病的发病过程。     

商陆皂苷甲对BXSB小鼠肾脏细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响

目的 通过观察商陆皂苷甲(esculentoside A,EsA)对BXSB小鼠肾脏细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响,探讨EsA治疗狼疮肾炎的可能机制.方法 将24只18周龄雄性BXSB小鼠随机分为模型对照组、地塞米松治疗组和EsA治疗组,分别腹腔注射治疗4周后留取各组动物肾组织标本,进行TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;免疫组织化学法检测肾组织Bax和Bcl-2表达.结果 3组间肾小球和肾小管细胞凋亡指数的差异有统计学意义(P<0.05),EsA治疗组凋亡指数最高,其次是地塞米松治疗组;与模型对照组比较,EsA治疗组和地塞米松治疗组BXSB小鼠的肾组织Bcl-2光密度值明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),EsA治疗组和地塞米松治疗组差异无统计学意义(P>0.05);Bax的表达3组间差异无统计学意义(P>0.05);而3组间肾组织Bcl-2/Bax的比值差异有统计学意义(P<0.05).结论 EsA具有诱导BXSB小鼠肾小球和肾小管细胞凋亡作用,EsA可以下调BXSB小鼠肾组织中的凋亡调节蛋白Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值而加速细胞凋亡的发生.     

2型糖尿病小鼠肾脏纤溶酶原激活物抑制物-1表达

目的探讨2型糖尿病动物模型KKAy小鼠肾脏纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)和组织纤溶酶原激活物(tPA)mRNA表达与肾脏细胞外基质蓄积的关系.方法选取8周龄雄性KKAy小鼠和C57BL-J小鼠,分别于16、20和24周处死.采用发色底物法检测不同周龄的KKAy小鼠及参照组C57BL/J小鼠的血浆PAI-1活性,RT-PCR法检测小鼠肾皮质tPA mRNA表达,原位杂交法检测肾皮质PAI-1 mRNA水平,免疫组织化学和免疫印迹法检测肾皮质层粘连蛋白表达.结果不同周龄KKAy小鼠肾皮质层粘连蛋白表达均高于同龄对照组(P＜0.05).2型糖尿病KKAy小鼠与C57BL/J小鼠血浆PAI-1活性的差异没有显著性(P＞0.05);但肾皮质tPA mRNA水平却显著降低,以16周时最为显著,仅为C57BL/J小鼠的47%,随周龄的增加,其差异逐渐减小.原位杂交显示KKAy小鼠PAI-1mRNA可在肾脏多部位表达,并以近端小管上皮细胞内的表达为主,且明显高于同龄C57BL小鼠.结论2型糖尿病KKAy小鼠早期肾病时,细胞外基质蛋白的蓄积可能和tPA mRNA表达下调及PAI-1 mRNA表达上调所致的纤溶酶降解细胞外基质作用降低有关.     

信号传导和转录激活因子3及其蛋白抑制剂在狼疮小鼠肾组织中的表达

目的探讨信号传导和转录激活因子3(STAT3)及其蛋白抑制剂(PIAS3)在MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中的表达。方法以18周龄雌性MRL/lpr小鼠作为狼疮肾炎组,相同周龄的BALB/C小鼠作为正常对照组。分别取两组小鼠肾组织,应用荧光定量RT-PCR法检测STAT3和PIAS3 mRNA的表达,采用Western blot和免疫组织化学方法检测磷酸化STAT3(p-STAT3)和STAT3的蛋白表达,同时检测小鼠实验室指标以及肾脏组织病理的表现。结果 MRL/lpr小鼠尿蛋白、血尿素氮、血肌酐均高于BALB/C小鼠(P<0.05)。MRL/lpr小鼠肾脏组织病理主要表现为肾小球系膜细胞增生,肾小管间质炎症细胞浸润,而BALB/C小鼠肾小球、肾小管无异常。MRL/lpr小鼠肾组织STAT3 mRNA和p-STAT3蛋白的表达均较BALB/C小鼠升高(P<0.05),其PIAS3mRNA表达则较BALB/C小鼠明显降低(P<0.01),而两组小鼠STAT3总蛋白的表达无明显差别。结论 MRL/lpr小鼠肾组织STAT3 mRNA和p-STAT3蛋白的表达均高于对照组,而其PIAS3 mRNA表达低于对照组。     

ILK在cGVHD狼疮样小鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的观察整合素连接激酶(ILK)在慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠肾脏中的表达,探讨其在狼疮肾炎肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法建立cGVHD狼疮样小鼠模型,将小鼠分成正常对照组(A组)、12周模型组(B组)和16周模型组(C组),每组6只。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、western blot、免疫组织化学法分别检测ILK、E-钙粘蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白在肾组织中的表达。结果RT-PCR和west-ern blot方法分别检测到B、C两组小鼠肾组织ILK、α-SMA mRNA和蛋白表达较A组升高(P均<0.01),E-钙粘蛋白表达降低(P均<0.01)。ILK蛋白和mRNA表达与α-SMA表达呈正相关(r分别为0.83,0.86,P均<0.01),与E-钙粘蛋白表达呈负相关(r分别为-0.84,-0.89,P均<0.01)。免疫组化结果表明,与A组相比,B、C两组小鼠肾小管及间质均可见ILK、α-SMA蛋白显著表达,而E-钙粘蛋白的表达显著减少。结论cGVHD狼疮样小鼠肾组织中ILK蛋白及mRNA表达明显上调,可能通过介导肾小管上皮-间充质细胞转分化而参与了狼疮肾炎肾间质纤维化的进程。     

青蒿鳖甲汤加减对MRL/lpr狼疮鼠Th17细胞及肾脏病理的影响

【目的】探讨中药复方青蒿鳖甲汤加减对自发性红斑狼疮模型MRL/lpr小鼠Th17细胞及肾脏病理的影响。【方法】选用8~10周雌性MRL/lpr小鼠分为模型组、中药组、泼尼松组和联合用药组,各8只;8~10周龄雌性C57BL/6小鼠8只为正常对照组。中药组给予青蒿鳖甲汤加减水煎剂浓缩液(剂量为19.25 g·kg-1·d-1),泼尼松组给予醋酸泼尼松片水溶液(剂量为8.75 mg·kg-1·d-1),联合用药组同时给予上述2种药物,模型组和正常对照组给予生理盐水。给药7周后取小鼠脾脏及肾脏,采用流式细胞术检测脾脏单个核细胞悬液中Th17细胞的表达;光镜下观察小鼠肾脏病理改变并进行狼疮肾炎肾组织活动性指数(AI)评分。【结果】模型组小鼠Th17细胞比例显著高于正常对照组(P0.05);各给药组Th17细胞比例均显著低于模型组(P0.05),泼尼松组Th17细胞比例显著高于中药组(P0.05)。中药组、泼尼松组及联合用药组镜下均见肾脏病理改变明显较模型组轻,其狼疮肾炎肾组织活动性指标AI评分显著低于模型组(P0.05)。各组MRL/lpr小鼠AI评分与Th17细胞水平呈正相关(r=0.77,P0.01)。【结论】青蒿鳖甲汤加减可抑制MRL/lpr狼疮鼠Th17细胞的表达,可改善其狼疮肾炎肾组织活动性病理变化。     

JNK在cGVHD狼疮样小鼠肾组织表达及在肾纤维化中作用研究

目的:观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)在慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠肾组织中的表达情况,初步探讨其在狼疮肾炎肾脏纤维化中所起的作用.方法:建立cGVHD狼疮样小鼠模型.将小鼠分为12周正常对照组、16周正常对照组、12周模型组及16周模型组4组,每组6只,于12周末处死12周正常对照组和12周模型组小鼠,16周末处死16周正常对照组和16周模型组小鼠,采用双缩脲比色法观察各组小鼠24 h尿蛋白排泄量,HE和Masson染色观察肾间质纤维化程度,免疫组织化学法定位检测JNK、p-JNK在肾组织的表达,RT-PCR法检测各组JNK mRNA表达及Western blotting技术半定量检测JNK、p-JNK蛋白表达水平.结果:12周模型组小鼠24 h尿蛋白排泄量,JNK、p-JNK蛋白及mRNA的表达与正常对照组相比均明显增加(P<0.01),16周模型组更甚(P<0.01).结论:JNK、p-JNK蛋白及mRNA表达在cGVHD狼疮样小鼠肾组织中明显上调,其可能在狼疮肾炎肾纤维化进程中起着重要作用.     

p38MAPK在慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠肾组织的表达研究

目的:探讨慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠肾组织p38MAPK的表达变化,进而分析p38MAPK在狼疮肾炎肾纤维化发生中的作用。方法:将12只雌性(C57BL/6J×DBA/2)F1杂交鼠随机分为模型组及正常对照组,每组6只。于16周末处死,取肾行HE和Masson染色,应用免疫组化方法检测TGF-β1、p38MAPK、P-p38MAPK在肾脏的定位表达,RT-PCR法研究各组肾组织TGF-β1、p38MAPK mRNA的表达,Western blot定量检测TGF-β1、p38MAPK、P-p38MAPK蛋白的表达水平,并观察两组小鼠24 h尿蛋白排泄量。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠24 h尿蛋白排泄量、TGF-β1、p38MAPK和P-p38MAPK蛋白及mRNA表达均明显增加(P<0.01),TGF-β1与p38MAPK的表达呈正相关(r=0.418,P<0.05)。结论:cGVHD狼疮样小鼠肾组织中TGF-β1、p38MAPK和P-p38MAPK蛋白及mRNA表达明显上调,p38MAPK信号通路可能在狼疮肾炎肾纤维化的进程中起重要作用。     

氨甲蝶呤调控调节性T细胞数量及Foxp3表达在银屑病治疗中的作用

目的：探讨氨甲蝶呤(methotrexate,MTX)对调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)细胞数量及关键转录因子 Foxp3 mRNA的影响。方法：1)收集初诊的寻常型银屑病患者、健康对照者和经MTX治疗8周后疗效显著的寻常型银屑 病患者入组,抽取外周抗凝静脉血并分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),采用流式细胞 术(fl ow cytometry, FCM)检测Treg细胞数量,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测PBMC 中Foxp3 mRNA表达水平;2)将咪喹莫特(imiquimod,IMQ)连续外用在BALB/c小鼠背部,观察6 d,每天拍照记录小鼠 皮损变化,根据银屑病面积和严重程度指数(psoriasis area and severity index,PASI)进行评分,将小鼠皮损进行HE染色 观察其病理改变;3)在IMQ诱导中期(第3天)使用不同剂量MTX(38.5和77.0 nmol/L)进行小鼠腹腔内注射1次,同时设 置PBS组和阴性对照组,肉眼观察各组皮损外观并用HE染色方法观察皮损组织病理改变,观察6 d;随后采用FCM检 测小鼠脾淋巴细胞中Treg细胞数量,qRT-PCR法检测脾淋巴细胞Foxp3 mRNA表达水平。结果：1)在银屑病患者外周血 PBMC中Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达水平比健康对照者明显降低(P<0.05);用MTX治疗8周后疗效显著的寻常型银 屑病患者外周血Treg细胞的数量显著高于治疗前水平(P<0.05),Foxp3 mRNA表达水平显著升高(P<0.01);2)由IMQ诱 导的BALB/c小鼠表现出银屑病样的皮损外观及组织病理学改变,其脾淋巴细胞中Treg细胞数量下降(P<0.01),Foxp3 mRNA表达水平降低(P<0.05);3)使用不同剂量MTX于BALB/c小鼠腹腔内注射可有效缓解其银屑病样皮炎的皮损外 观、逆转病理改变,小鼠脾淋巴细胞Treg细胞数量部分逆转,Foxp3 mRNA表达水平增高(P<0.05)。结论：MTX可以通 过调控Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达水平来治疗银屑病。     

商陆皂苷甲对BXSB狼疮性肾炎小鼠的治疗作用

[摘要]目的 观察商陆皂苷甲（EsA）在LN模型BXSB小鼠体内的作用,来探讨其对LN的治疗价值。方法 12周龄雄性BXSB小鼠24只,随机分成模型对照组、EsA低剂量治疗组和EsA高剂量治疗组。腹腔注射4周,每日一次至治疗终点。留取标本,行尿蛋白、血清肌酐、白蛋白测定及肾脏病理检查。结果 1.模型小鼠尿蛋白升高,治疗组经治疗后较对照组下降,高剂量治疗组进一步下降。2.经药物治疗后,BXSB小鼠肾组织病理损伤明显减轻。3.各组血清肌酐及白蛋白均不高,无统计学差异。结论 1.EsA具有降低BXSB狼疮性肾炎小鼠的尿蛋白的作用。2.EsA可以改善BXSB狼疮性肾炎小鼠的肾脏病理。     

红斑狼疮样雄性BXSB小鼠模型肾脏受累状况的研究

目的 :探讨系统性红斑狼疮样动物模型雄性BXSB小鼠肾脏病变进展状况。方法 :分别测定不同月份的BXSB小鼠的 2 4h尿蛋白含量及其肾脏免疫复合物沉积状况。结果 :雄性BXSB小鼠 2月龄出现肾脏病理改变 ,3月龄出现临床指标改变。结论 :雄性BXSB小鼠 2月龄出现肾脏病理改变 ,3月龄肾脏出现临床指标改变 ,且随着鼠龄的增加其疾病症状呈加重趋势     

哮喘小鼠脾细胞中粒细胞型髓源性抑制细胞和Th17细胞水平的变化

目的: 探索髓源性抑制细胞（myeloid derived suppressor cells,MDSCs）、Th17及调节性T细胞（Treg）在实验性哮喘小鼠脾脏中的水平。方法: 将6～8周BALB/c雄性小鼠随机分为PBS组和模型组;用卵清蛋白建立哮喘小鼠模型,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中卵清蛋白特异性的IgE;采用HE染色和PAS染色观察小鼠肺组织的病理变化;用流式细胞术检测脾细胞中Th17、Treg、MDSCs的比例;采用免疫组化观察小鼠肺组织骨髓分化抗原（Gr 1）、白介素17（IL 17）、叉头样转录因子3（Foxp3）的表达水平。结果： 与PBS组相比,模型组小鼠气道炎性细胞增多,黏液分泌增加,血清IgE水平明显增高,脾细胞中Th17细胞的比例增加、Treg细胞比例减少;MDSCs中的粒细胞型亚群（G-MDSCs）的比例增加;同时肺组织中IL-17、Gr-1高表达,Foxp3低表达。结论： G MDSCs、Th17细胞比例增加,Treg细胞比例减少可能参与小鼠哮喘的发病。     

白介素—1受体拮抗剂对BXSB狼疮小鼠的治疗作用观察

利用基因工程技术获得高纯度人白介素-1受体拮抗剂（IL－1ra），连续性尾静脉注射4．5月龄雄性BXSB狼疮小鼠，发现其尿蛋白水平和ANA滴度的增加幅度减少，肾脏IgG、C3沉积减轻，血清白细胞介素-6（IL－6）活性和肾脏IL－6蛋白表达减弱。提示IL－1在BXSB狼疮小鼠发病中的病理性作用及IL－1ra对该鼠可能的治疗作用。     

甲基化干预对小鼠大肠癌生长及p16/CDKN2基因表达的影响

目的 探讨甲基转移酶抑制剂5-氮-2'脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对小鼠大肠癌发生发展的影响及其与细胞周期依赖性激酶抑制因子p16/CDKN2 mRNA表达的关系.方法 40只雄性KM小鼠按随机数字表法随机分为2组:1,2-二甲肼(DMH)诱癌组和甲基化干预组,每组20只.小鼠皮下注射DMH 25 mg/kg,每周1次,连续22周,以诱发小鼠大肠癌,甲基化干预组于12周开始皮下注射5-Aza-CdR.另选同来源雄性KM小鼠作为未诱癌对照组(阴性对照组)10只,于皮下按25mg/kg注射生理盐水,每周1次,连续22周."席卷法"收集肿瘤组织,HE染色观察肿瘤发生的数目、类型及浸润程度;免疫组织化学染色观察细胞增殖核抗原(PCNA)蛋白表达情况;原位杂交技术检测肠癌组织抑癌基因p16/CDKN2 mRNA的表达.结果 (1)DMH诱癌组肿瘤数达(7.6±3.1)个/只,而甲基化干预组诱癌数为(3.4±1.8)个/只,且以重度异性增生为主,浸润癌的发生率明显低于DMH诱癌组(P＜0.05).(2)DMH诱癌组19只小鼠中PCNA阳性表达16只,明显多于甲基化干预组(19只中11只阳性表达)及未诱癌对照组(0只,均P＜0.05).(3)DMH诱癌组有明显p16/CDKN2 mRNA杂交信号(蓝紫色),主要位于胞质,但甲基化干预组染色显然较DMH诱癌组强,尤其以瘤灶部位明显.结论 早期5-Aza-CdR的干预能显著抑制小鼠大肠癌的发生发展,其抑制肿瘤机制可能是通过激活抑制因子p16/CDKN2的表达.

Abstract：

Objective To explore the effects and relationship of specific demethylation agent 5-Aza-2'-deoxycytidine (5-Aza-CdR) on colorectal cancer ( CRC ) induced by 1,2-dimethylhydrazine ( DMH ) in mouse and the in vivo expression of cyclin-dependent kinases inhibitor p16/CDKN, mRNA. Methods A total of 40 male KM mice were randomized into 2 groups and CRC was induced by a 22-week injection of DMH. One group was interfered by specific DNA methyltransferase inhibitor 5-Aza-CdR. Another 10 the same source male KM mice were induced by a 22-week injection of saline as none induced cancer control group (negative control group ). All mice were sacrificed to examine for colorectal neoplasm.Immunohistochemical staining was used to assess the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA). The expression of p16/CDKN2 mRNA was detected by in situ hybridization. Results The average numbers of neoplasm was higher in the DMH group (7. 6 ±3. 1 ) than that of the group DMH +5-Aza-CdR (3.4 ± 1.8, P ＜0. 05). Immunohistochemical staining showed there was a significant elevation of PCNA in the group DMH(16/19) as compared with that in the group DMH +5-Aza-CdR ( 11/19, P ＜0. 05 ). In situ hybridization revealed that the level of tumor suppressor gene p16/CDKN2 mRNA was significantly lower in the group DMH than that in the group DMH +5-Aza-CdR. Conclusion The specific demethylation agent 5-Aza-2'-deoxycytidine may inhibit the carcinogenesis of CRC. Its mechanism may be related with a high expression of p16/CDKN2 mRNA.     

δ-ALA-PDT对BXSB小鼠淋巴细胞凋亡及肾脏免疫复合物的影响

目的 :探讨δ ALA PDT对BXSB小鼠外周血淋巴细胞凋亡率及其肾脏免疫复合物沉积状况的影响。方法 :将 3月龄BXSB小鼠随机分成 4组 ,分别给予NS、δ ALA、PDT、δ ALA PDT治疗 ,观察其 2 4h尿蛋白的含量、外周血淋巴细胞凋亡率及其肾脏免疫复合物的沉积状况。结果 :δ ALA PDT组 2 4h尿蛋白的含量及其肾脏免疫复合物的沉积状况均低于其他组 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ;而外周血淋巴细胞凋亡率δ ALA PDT组明显高于NS组和δ ALA组 (P <0 .0 5 )。结论 :δ ALA PDT可减缓BXSB小鼠的疾病进展状况     

高血脂对小鼠Foxp3基因表达的影响

目的 研究高血脂对小鼠Foxp3基因表达的影响,并观察ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化中Foxp3的表达及鉴定其功能.方法 选取8周龄雄性C57BL/6J ApoE-/-及其同系野生型小鼠16只,分为对照组和高脂饮食组(n=8),构建小鼠动脉粥样硬化模型,比较不同组小鼠血脂水平、斑块面积和不同器官组织中Foxp3+CD4+CD25+Tregs细胞的数目;利用RT-PCR和Western blot分析组织中Foxp3基因转录水平和Foxp3蛋白表达水平.结果 与对照组[TG(2.0±0.1)mmol/L、TC(20.6±0.1) mmol/L]比较,高脂饮食组小鼠血脂水平[TG(2.8±0.2)mmol/L、TC(28.2±1.2) mmol/L]明显升高(P<0.01),斑块面积(25 044.32±4 920.42)μm2显著增加(P<0.01),而不同器官组织中Foxp3+CD4+CD25+Tregs细胞的数目显著减少(P<0.05),Foxp3基因转录水平(P<0.01)和Foxp3蛋白表达(P<0.05)降低.结论 高脂能抑制不同免疫器官Foxp3基因的表达和功能,可能是高脂致动脉粥样硬化的机制之一.