脐带血干细胞增殖能力的研究

目的对新鲜、冷冻后复苏及扩增后的脐带血干细胞增殖能力的研究.方法采集正常分娩产妇自愿捐献的脐带血,用淋巴细胞分离液分选出单个核细胞或用磁珠抗体分选CD34+细胞,冷冻贮存或扩增.用甲基纤维素半固体培养基培养方法测定脐带血冷冻或扩增后的集落形成能力,并与新鲜脐带血做比较.用MTF方法测定扩增的脐带血干细胞与新鲜脐带血干细胞黏附功能.结果新鲜脐带血单个核细胞105个可生成CFU-Mix集落(19.0±2.8)个、CFU-GM(55.6±15.7)个、BFU-E(65.0±22.8)个.冷冻复苏的脐带血单个核细胞105个可生成Mix集落(25.2±8.4)个、CFU-GM(46.5±18.0)个、BFU-E(52.3±24.5)个.在含有PF4(100ng/ml)的扩增后的脐带血,每103个CD34+细胞生成CFU-Mix集落(32.2±6.4)个、CFU-GM(42.5±9.31)个、BFU-E(22.3±2.3)个.PF4促进新鲜脐带血的黏附能力,而且在扩增脐带血CD34+细胞体系中加入100ng/ml的PF4,脐带血CD34+细胞对基质层的黏附能力始终保持较高水平,14天时脐带血CD34+细胞自发黏附率PF4组比对照组提高(55.07±13.62)%.结论冷冻或含PF4优化体系扩增脐带血干细胞保持了新鲜脐带血干细胞形成CFU-Mix的能力;在扩增脐带血干细胞中PF4可保持脐带血CD34+细胞黏附功能.     

TGF-β1和/或TNF-α反义PS-ODNS对造血干/祖细胞体外扩增的作用

目的研究TGF-β1和/或TNF-α反义硫代寡核苷酸(PS-ODNS)对造血干/祖细胞体外扩增的调节作用.方法采用免疫磁珠分离技术从新鲜脐带血中分离CD34+细胞,用淋巴细胞分离液从骨髓血中分离单个核细胞,应用液体培养及造血祖细胞集落分析检测TGF-β1和/或TNF-α反义PS-ODNS对CD34+细胞数及多向性造血祖细胞(CFU-mix)、粒-单祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(BFU-E和CFU-E)集落数的影响.结果培养体系中加入TGF-β1反义PS-ODNS后CD34+细胞数、CFU-mix、CFU-GM、BFU-E和CFU-E集落数分别是对照组(仅加细胞因子组)的4、2.6、2.7、1.8、2.1倍;加入TNF-α反义PS-ODNS后CD34+细胞数、CFU-mix、CFU-GM、BFU-E和CFU-E集落数分别是对照组的4、2.9、2.6、1.7、1.8倍;同时加入TGF-β1和TNF-α反义PS-ODNS后CD34+细胞数、CFU-mix、CFU-GM、BFU-E和CFU-E集落数分别是对照组的5.3、2.1、2.7、1.9、1.8倍.结论采用反义PS-ODNS阻断内源性TGF-β1和TNF-α是造血干/祖细胞体外扩增的有效措施之一.     

Ad-hOSM转基因饲养层细胞对脐血CD34~+造血干/祖细胞增殖及归巢能力的影响

目的:建立转人抑瘤素M(hOSM)基因腺病毒载体的饲养层细胞,观察转基因细胞对脐血CD34+造血干/祖细胞扩增的影响,比较扩增前、后造血干/祖细胞体外迁移能力的变化。方法:建立转hOSM基因腺病毒载体的饲养层细胞,并用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因;采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+造血干/祖细胞,流式细胞术(FCM)检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养,FCM检测各组增殖效果;扩增后的造血干/祖细胞用跨膜迁移实验(Transwell实验)检测自发迁移率和SDF-1诱导迁移率以鉴定体外扩增的造血干/祖细胞的归巢能力。结果:建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光,RT-PCR法和ELISA法证实有目的基因表达,免疫磁珠法分离的脐血CD34+造血干/祖细胞纯度可达(96.8±2.28)%,与Ad-hOSM转基因饲养层细胞共培养7 d后CD34+造血干/祖细胞可扩增15.73倍,表面黏附分子CXCR4和CD54表达量仍较高,培养后的细胞用Tran-swell板做体外迁移实验,与转基因饲养层细胞共培养的干细胞,其诱导迁移率为(40.68±1.35)%,明显高于对照组,可以较好的保持其归巢能力。结论:转hOSM基因腺病毒载体的饲养层细胞可有效扩增脐血CD34+造血干/祖细胞,延缓其分化,并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力。     

成人骨髓间充质干细胞对造血干细胞体外增殖的影响

目的研究骨髓间充质干细胞（MSC）对脐带血（CB）CD34^＋细胞体外增殖和造血重建能力的影响。方法取人骨髓单个核细胞贴壁培养．梭形细胞完全融合后传代，用流式细胞仪检测免疫表型；将CBCD34^＋细胞接种到MSC或其他培养液中．比较不同培养条件对造血干细胞扩增能力、集落形成能力及黏附分子表达的影响。结果在加入IL-3的培养体系中．在MSC和细胞因子作用下，CD34^＋细胞扩增7d和14d后，有核细胞（NC）、CD34^＋细胞和CDl33^＋细胞数，实验组均显著多于对照组。CD34＋细胞在未加入IL-3的培养体系中培养8d后，实验组NC、CD34^＋细胞、CD34^＋CD38-细胞和造血祖细胞集落扩增倍数均显著高于对照组。扩增后CD34^＋细胞的ALCAM、VLA-α4、VLA-α5、VLA-β1、HCAM、PECAM和LFA-1表达较扩增前无显著变化。结论MSC可为造血干细胞（HSC）体外扩增提供适宜的微环境，有助于CD34^＋细胞体外增殖并抑制HSC分化，保持其造血重建潜能和归巢能力。     

脐血间充质干细胞的体外培养及其表面标志变化

背景:目前有关脐血间充质干细胞的体外培养和大规模扩增方法不一,存在一定困难。目的:观察脐血间充质样干细胞体外分离和培养的方法,并检测其表面分子的变化。方法:取新鲜采集脐带血,用1.077g/cm3的淋巴细胞分层液,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞。将脐血单个核细胞接种于37℃、含体积分数为5%CO2培养箱内培养。于不同时间观察细胞形态的变化并通过流式细胞仪检测细胞表面分子的表达情况。结果与结论:从脐血中分离出的单个核细胞,培养中先出现大量的造血细胞集落,CFU-GM与BFU-E集落形成最多,集落分别增加了(37.1±2.3)和(10.4±1.7)倍,瑞氏染色显示这些细胞大多数为粒系的集落(80.1±85.2)%,其次为红系的细胞集落(14.2±1.8)%,7d后出现贴壁的扁平状上皮样细胞和长梭形成纤维样细胞,同时有大量的破骨样细胞混杂。扩增后第14天经流式细胞仪分析CD38+细胞为1.64%,CD34+/CD38+细胞为1.71%,CD34+/CD38-细胞为0.55%,PI+细胞为0.05%,Annexin-V+细胞为0.18%。随着培养时间的延长,细胞数目不断增加,培养21d时,单个核细胞扩增了近7.8倍.,第28天增加了1.71倍。经流式细胞仪分析CD38+细胞为74.32%,CD34+/CD38+细胞为1.61%,CD34+/CD38-细胞为0.24%。提示脐血间充质干细胞可以体外培养。     

人参总皂甙体外诱导CD34+造血干/祖细胞增殖的作用

目的：探讨人参总皂甙(TSPG)协同造血生长因子体外诱导CD34~ 造血干/祖细胞(HSC/HPC)增殖的作用。方法：收集人脐血细胞,采用Stemsep TM干细胞分选系统分离纯化CD34~ HSC/HPC,经不同剂量TSPG加入不同造血生长因子组合进行培养,检测细胞总数、CD34~ 细胞及集落形成细胞总数(CFCs)的变化。结果：TSPG 10、20、50和70μg/ml均可不同程度地提高细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞扩增倍数,TSPG 50μg/ml是最佳刺激浓度,可使细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞分别增至(2470．50±79．96)倍、(53．96±4．29)倍和(21．86士3．09)倍。结论：合适剂量的TSPG能够促进CD34~ 造血干/祖细胞体外增殖。     

利用旋转式生物反应器快速扩增骨髓间充质干细胞

目的　探讨旋转式生物反应器是否能促进骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)的快速扩增。方法　将MSCs细胞放入盛有Myelocult(上标 TM)培养液生物反应器中动态培养,并在Myelocult(上标 TM)培养液中补充一些因子,如干细胞因子(SCF),白介素3和6(IL-3, IL-6)。检测和比较经反应器处理前后的MSCs的表型,增生和分化能力的变化。结果　在生物反应器中培养8d,总细胞数、Stro-l(上标 +) CD44(上标 +) CD34(上标 -)间充质干细胞和CD34(上标 +)CD44(上标 +) Stro-l(上标 -)造血干细胞分别增加了9、29和8倍。实验研究结果显示,生物反应器扩增的间充质干细胞表达了原始间充质干细胞的标记物内皮因子(SH2)和波形蛋白,却没有发现与细胞系的分化有关的标记物,包括骨钙素（成骨指标）,Ⅱ型胶原（成软骨指标）和C/EBPα（成脂指标）。生物反应器组的细胞集落生成效率（成纤维细胞集落／天）是对照组（无生物反应器组）的1.44倍。经诱导后,生物反应器扩增的间充质干细胞可以分化成成骨细胞,软骨细胞和脂肪细胞,其分化能力与未经生物反应器处理的MSCs无区别。结论　旋转式生物反应器结合改良的Myelocult(上标 TM)培养液可用于快速扩增间充质干细胞。     

CD34~+CD38~+造血干细胞移植MISTRG小鼠的人源化免疫特征研究

目的研究人脐带血CD34~+CD38~+造血干细胞移植入MISTRG免疫缺陷小鼠体内的人源化免疫特征。方法利用Ficoll密度梯度离心法从新生儿脐带血中分离单个核细胞,并结合免疫磁珠法分选hCD34~+造血干细胞,然后经体外扩增培养后利用流式细胞技术检测CD34~+CD38~+细胞的比例。取2×105细胞数注射至辐照后的新生MISTRG小鼠肝脏内,分别于第3、6、9、12周采血检测人源免疫细胞的分化与表达情况。结果免疫磁珠法分选人的CD34~+CD38~+造血干细胞纯度高达92.0%。移植小鼠外周血中的hCD45~+细胞初始浓度水平大于10.0%,淋巴细胞群包含人源T(hCD3~+CD45~+)、B(hCD3-CD19~+)和NK(hCD3-CD56~+)淋巴细胞,其中B(hCD3-CD19~+)淋巴细胞所占比值最大(初始水平为49.0%±7.4%),髓系细胞群则主要由巨噬细胞组成(初始水平为82.3%±4.5%)。小鼠外周血中hCD45~+细胞比值和T细胞占免疫细胞的比值随着时间的推移逐渐下降,B淋巴细胞和巨噬细胞所占的比例逐渐升高,而NK细胞基本完全消失。结论人源CD34~+CD38~+造血干细胞在新生MISTRG小鼠中可有效分化为人源淋系和髓系免疫细胞。在移植后的12周内hCD45~+细胞的比例逐渐下降,MISTRG免疫缺陷小鼠最佳的人源化免疫系统维持时间为第3～6周。     

FLT3配基与血小板生成素对造血调节作用的研究进展

FLT3配基(FL)主要影响造血干/祖细胞生长,影响淋巴系及髓系细胞的增殖;抑制髓系祖细胞的凋亡;促进树突细胞生长.TPO是血小板生成的主要调节因子,不仅促进巨核系造血,也作用于早期造血干/祖细胞,使早期造血干/祖细胞扩增,维持存活及抑制凋亡.FL与TPO联合,能使脐带血干细胞维持长时期的增殖和自我更新;在具有基质细胞层HESS-5细胞的无血清培养体系中,加入TPO与FL,可使CD34+CD38-细胞增殖.FL与TPO联合,对造血干/祖细胞显著扩增,有助于脐血移植的可行性.     

TAT-HOXB4蛋白对脐血CD34~+细胞的体外扩增实验研究

目的:研究TAT-HOXB4蛋白对脐血CD34+细胞的体外扩增效果。方法:采用磁珠阳性分离(MiniMARCS)纯化法分离纯化脐血CD34+细胞;用造血干细胞体外悬浮培养法以及流式细胞术检测法,观察应用TAT-HOXB4蛋白对脐血CD34+细胞的体外扩增能力。结果:加入TAT-HOXB4蛋白组的CD34+细胞数为对照组的13倍,MNC为对照组的6倍,并且在实验的第4天体外扩增效果最明显。结论:TAT-HOXB4蛋白对脐血CD34+细胞的体外扩增效果显著。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Aspects of the problem of direct introduction of Standards of International Organizations

Editorial note. This article is published as part of a discussion. Particular issues of the article are disputable. First of all, this concerns the so-called “folder” method of introduction of international standards for medical devices to domestic medical practice (i.e., by direct translation of the standards and their publication as standardizing documents). Nevertheless, at least one of the problems, the problem of coordination between domestic state standards for medical devices and international recommendations of ISO and IEC, is undoubtedly of topical importance. Advancement of new health service legislation which is to be approved by law-makers will definitely introduce corrections into the present situation. The Editorial Board of Meditsinskaya Tekhnika believes this article will lessen these problems and to be welcomed by readers.