去甲斑蝥素诱导人肾癌786—0细胞凋亡的体外研究

目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）诱导人肾癌细胞株786—0凋亡的机制。方法实验分NCTD组和对照组．分别应用MTT法、流式细胞术和实时定量PCR检测NCTD对体外培养786—0细胞的生长抑制率、细胞周期和凋亡率以及肿瘤凋亡控制因子Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果NCTD能抑制786—0细胞生长,随着NCTD浓度升高、处理时间延长作用增强,有明显的时间-剂量依赖性。流式分析显示,786—0细胞的S期细胞减少,G2/M期细胞增多,凋亡率上升。实时定量PCR结果表明,在80μmol／L NCTD处理24h后,Bcl-2 mRNA表达量明显减少、Bax mRNA表达水平则升高,Bcl-2／Bax比值明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论NCTD可明显抑制786—0细胞的增殖和生长,诱导其凋亡,其机制可能与干扰786—0细胞生长周期、抑制DNA合成代谢以及影响凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达有关。     

JTV1对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的观察上调JTV1基因的表达对人白血病K562细胞系增殖与凋亡的影响并探讨其机制。方法将携带有JTV1基因的pcDNA3.1-JTV1载体转染人K562细胞作为阳性转染组,转染pcDNA3.1空载体作为空载体转染组,未转染的K562细胞为未转染组。通过集落形成实验检测各组K562细胞的增殖能力,采用流式细胞术与Annexin-PI双染色结合分析细胞周期和细胞凋亡率,同时采用RT-PCR法检测JTV1基因及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc mRNA水平的变化,采用Western blotting检测基因JTV1及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc蛋白水平的变化。结果集落形成实验结果显示上调JTV1基因表达后K562细胞的增殖能力明显降低。流式细胞术与Annexin-PI双染色检测结果显示,与空载体转染组及未转染组相比,阳性转染组K562细胞的G期细胞比例明显升高(P<0.05);阳性转染组中Bax基因的mRNA水平和蛋白水平较空载体转染组及未转染组均明显上升,而Bcl-2基因和C-myc基因的mRNA水平和蛋白水平则明显下调(P<0.05)。结论 JTV1基因过表达可能通过抑制基因Bcl-2和C-myc的表达增强基因Bax的表达,从而抑制K562细胞系的增殖并促进其凋亡。     

姜黄素联合声光动力疗法对人肝癌HepG2细胞的作用及机制研究

目的:探索姜黄素(CUR)联合声光动力疗法(SPDT)对人肝癌Hep G2细胞的杀伤作用及其作用机制,为临床应用CUR联合声光动力治疗肝癌提供依据。方法:实验对象人肝癌Hep G2细胞,分为PDT组、SDT组和SPDT组三组,采用CCK-8检测细胞生存率;荧光分光光度计检测胞内DCFH-DA的荧光强度反应各组细胞活性氧产生情况、胞内JC-1荧光探针的红、绿荧光强度反应各组细胞线粒体膜电位变化情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3、Bcl-2、Bcl-x L、Bax在各组细胞中的表达情况。结果:应用CCK-8实验发现当CUR浓度为80μmol/L时,肝癌Hep G2细胞生存率显著下降;但40μmol/L的CUR作用的Hep G2细胞生存率90%。激光共聚焦显微镜及荧光分光光度计检测发现40μmol/L的CUR孵育Hep G2细胞3 h,细胞摄取CUR的量达到峰值。当光照波长445 nm,能量密度5 J/cm2时,光动力(PDT)组细胞生存率下降至(71.9±7.2)%。声动力(SDT)超声作用时间为10 min时,细胞的生存率下降至(70.6±6.8)%。SPDT组先超声作用10 min,然后激光照射(能量密度5 J/cm2),20 h后细胞生存率下降至(54.6±3.8)%。流式细胞术显示细胞凋亡率分别为PDT组(12.2±1.8)%,SDT组(11.9±1.3)%,SPDT组(19.3±1.6)%。透射电镜发现SPDT组有大量凋亡细胞。与PDT和SDT组相比,SPDT组细胞活性氧产量明显增高,线粒体膜电位下降明显,凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3、Bax的表达增加,Bcl-2、Bcl-x L的表达减少。结论:CUR联合SPDT较单独治疗取得了更为显著的治疗效果,达到了强强联合,优势互补的预期疗效。作用机制可能是CUR联合SPDT后产生较多的活性氧,损伤线粒体膜,导致线粒体膜电位及结构发生改变,膜通透性增大,通过细胞色素C的入胞诱发凋亡相关通路。     

血管紧张素Ⅱ经线粒体途径介导RIN-m细胞凋亡的实验研究

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和氯沙坦对胰岛β细胞的作用及相关分子机制.方法 常规培养大鼠胰岛素瘤RIN-m细胞,分为3组:空白对照组(RPMI 1640培养基常规培养)、AngⅡ组(终浓度100nmol/L AngⅡ处理)、氯沙坦预处理组(终浓度1μmol/L氯沙坦作用15min后再添加终浓度100nmol/L的AngⅡ).按照前述分组处理完毕后继续孵育48h.采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达,分光光度法检测Caspase 3和Caspase9活性.结果 AngⅡ组细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.001)和氯沙坦预处理组(P<0.001),后两组间比较无显著差异(P>0.05).与空白对照组及氯沙坦预处理组比较,AngⅡ组Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.001),Bax mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.001).氯沙坦预处理组Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达与空白对照组比较无显著差异(P>0.05).AngⅡ组Caspase 3和Caspase 9的活性显著高于空白对照组(P<0.05)及氯沙坦预处理组(P<0.05),后两组间比较无显著差异(P>0.05).结论 AngⅡ可能通过线粒体途径诱导胰岛β细胞凋亡,氯沙坦预处理可部分逆转AngⅡ的这种效应,从而对β细胞发挥保护作用.     

脂联素对血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞凋亡的干预作用

目的 探讨脂联素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的干预作用及其机制.方法 体外培养乳鼠心肌细胞,采用α-肌动蛋白免疫荧光法进行细胞鉴定.将心肌细胞分为3组:对照组、AngⅡ组、AngⅡ+脂联素组,分别采用流式细胞术检测心肌细胞的凋亡状态及细胞内活性氧(ROS)水平,Western blotting检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达变化.结果 1μmol/L AngⅡ可明显诱导乳鼠心肌细胞凋亡,凋亡率达26.0%,伴有Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达减少以及ROS水平增高(P<0.05);加入30mg/L的脂联素后可明显抑制细胞凋亡的发生,凋亡率降至8.0%左右,同时伴有Bax表达减少,Bcl-2的表达增加以及ROS水平的降低(P<0.05).结论 脂联素可减轻AngⅡ导致的心肌细胞凋亡,这一作用可能是通过增加心肌细胞Bax和ROS的表达,减少Bcl-2的表达来实现的.     

雷公藤内酯醇诱导人脉络膜黑色素瘤株OCM-1凋亡的机制研究

目的探讨雷公藤内酯醇(TPL)对人脉络膜黑色素瘤株OCM-1增殖的影响,分析其诱导人OCM-1细胞凋亡的作用机制。方法将OCM-1细胞分为对照组和实验组,实验组加入20μl不同终浓度(5、10、20、40、80、160nmol/L)的TPL,对照组加入等量无血清RPMI 1640培养液,分别作用24、48、72h。采用MTT法检测TPL对OCM-1细胞增殖的影响,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化,流式细胞术检测不同浓度TPL诱导后OCM-1细胞的凋亡比例,Western blotting检测TPL诱导后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、survivin及caspase-3的表达。结果 TPL可抑制OCM-1细胞增殖,48h及72h的IC50值分别为56.14±6.72、15.57±4.28nmol/L。TPL诱导OCM-1细胞后,在瑞氏-吉姆萨染色中可观察到凋亡小体。流式细胞术在不同浓度TPL诱导后的OCM-1细胞中均检测到亚二倍体凋亡峰。TPL诱导OCM-1细胞凋亡过程中,Western blotting检测显示Bax蛋白表达上调(P<0.01),Bcl-2、survivin蛋白表达下调(P<0.01),并可检测到活化的caspase-3。结论 TPL可抑制人OCM-1的增殖并诱导其凋亡,Bax、Bcl-2、survivin及caspase-3蛋白在其中可能具有重要作用。     

PUVA诱导K562细胞凋亡时对Fas表达的影响

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法(PUVA)诱导人白血病细胞K562凋亡时对Fas表达的影响。方法以K562细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas基因表达水平、蛋白表达水平为检测指标,观察中药补骨脂中提取的PSO加波长为360 nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果(1)单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可诱导K562细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者。(2)电镜下观察经PUVA处理后的K562细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。(3)单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可上调K562细胞Fas基因表达水平,PUVA的作用显著强于前两者。(4)单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可上调K562细胞Fas蛋白表达水平,PUVA的作用显著强于前两者。结论(1)PUVA可诱导白血病细胞K562发生凋亡,作用强于单纯PSO及单纯UVA照射。(2)PUVA诱导K562凋亡的途径之一为上调K562细胞Fas基因表达水平。     

三氧化二砷对白血病细胞DNA损伤及凋亡相关基因表达的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O3)对HL－60，K562和NB4细胞DNA的损伤及凋亡相关基因的调控。方法：用荧光显微技术，单细胞彗星电泳观察As2O3对HL－60，K562及NB4细胞DNA的损伤，用流式细胞术测定As2O3对HL－60，K562及NB4细胞凋亡相关基因Bcl-2和p53的表达，结果：As2O3诱导HL－60，K562和NB4细胞的凋亡时造成了DNA损伤；显著下调三种细胞内Bcl-2蛋白的表达，且Bcl-2下调程度与凋亡有密切关系，上调了p53蛋白的表达。结论：As2O3诱导细胞凋亡时发生了DNA的损伤，诱导凋亡主要是通过下调Bcl-2和上调p53来实现。     

氧化苦参碱对H9c2心肌细胞损伤的保护作用

 目的 探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对H9c2心肌细胞氧化应激条件下的保护作用。方法 建立H9c2心肌细胞氧化应激模型,加入OMT进行预处理。取对数生长期细胞,分为:对照组,不给于任何处理;模型组,在细胞培养液中加入终浓度为100 μmol/L的H₂O₂培养4 h;2个OMT预处理组,分别用含有10 μmol/L和50 μmol/L OMT且不含有血清的DMEM完全培养液预处理12 h,再向其加入终浓度为100 μmol/L的H₂O₂培养4 h。通过MTT法检测细胞代谢活力;HE染色观察细胞形态;收集细胞上清液检测乳酸脱氢酶(LDH)含量,检测细胞内丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)与超氧化物歧化酶(SOD)含量;Hoechst染色检测细胞凋亡率;通过RT-PCR检测细胞中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA、Casepase3 mRNA、Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA表达水平;Western blot法检测Nrf2、HO-1蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组细胞存活率(39.53%±0.25%)下降,LDH漏出量[(472.22±15.54)U/L]增加,SOD[(64.51±5.37)U/mgprot]等含量降低,MDA[(6.70±0.05)nmol/mgprot]含量升高;RT-PCR与Western blot 结果均显示Nrf2、HO-1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,OMT低、高浓度预处理组细胞存活率(57.40%±0.12%、77.51%±0.23%)升高,LDH漏出量[(367.72±12.53)U/L、(275.35±12.48)U/L]降低,细胞内SOD[(90.55±2.27)U/mgprot、(130.52±5.94)U/mgprot]等含量增加,MDA[(4.75±0.09)nmol/mgprot、(3.22±0.03)nmol/mgprot]含量下降;RT-PCR与Western blot 结果均显示Nrf2、HO-1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 氧化苦参碱通过抑制线粒体凋亡途径和激活Nrf2/HO-1信号通路,保护氧化应激损伤的H9c2心肌细胞。     

洛铂对鼻咽癌细胞CNE2体外放射增敏作用的研究

目的 研究洛铂联合外照射对人鼻咽癌细胞系CNE2的杀伤和放射增敏作用及其机制。方法 以对数生长期的人鼻咽癌细胞系CNE2为研究对象,MTT法检测单纯洛铂和洛铂联合照射对CNE2细胞的增殖抑制作用;克隆形成试验分析洛铂对CNE2细胞的放射增敏作用;流式细胞仪检测单纯洛铂组和洛铂联合照射组细胞凋亡及细胞周期分布;蛋白免疫印迹检测Bcl-2、 Bax和Caspase-3蛋白表达。结果 洛铂对CNE2有增殖抑制作用,且细胞毒性呈剂量依赖性,IC₅₀为1.610 μmol/L,洛铂联合照射⁶⁰Co γ射线4 Gy对CNE2细胞IC₅₀为0.077 μmol/L。洛铂联合照射组放射增敏比大于3。24 h内随洛铂浓度增加,鼻咽癌细胞进入G₂/M期比例增多。而洛铂联合照射将鼻咽癌细胞更多地阻滞于G₂/M期,当洛铂浓度增大到6 μmol/L,洛铂联合照射组主要将细胞阻滞于S期。洛铂5 μmol/L作用24 h可引起15.6%的细胞凋亡,4 Gy照射可引起11.3%细胞凋亡,洛铂联合照射组可引起61.8%的细胞凋亡。蛋白免疫印迹结果显示,洛铂联合照射组抑制凋亡蛋白Bcl-2表达水平下降,促进凋亡诱导蛋白Bax以及活化的Caspase-3表达水平升高。结论 洛铂对人鼻咽癌CNE2细胞有放射增敏作用,作用机制可能与抑制Bcl-2表达,促进Bax表达,激活Bcl-2（Bax）-Caspase信号通路有关。     

阿魏酸钠对抗Aβ_（25-35）诱导的鼠神经元凋亡作用研究

目的探讨阿魏酸钠对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）通过谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡的影响。方法 培养的皮层神经元分别与谷氨酸（20μmol/L）、Aβ25-35（5μmol/L）、Aβ25-35（5μmol/L）＋谷氨酸（20μmol/L）孵育,采用Hoechst 33258荧光染色法分析神经细胞凋亡;然后用谷氨酸（50μmol/L）诱导神经元凋亡,采用荧光染色法和Western blot观察阿魏酸钠的保护作用。结果单独应用Aβ25-35（5μmol/L）和单独加入谷氨酸（20μmol/L）引起的皮层神经元凋亡率与对照组无明显差异;Aβ25-35与皮层神经元共同孵育5天,接着用谷氨酸处理24h,细胞凋亡率从正常的9.2%±1.5%增加到43%±8%;阿魏酸钠能够显著降低谷氨酸诱导的神经细胞凋亡百分比至21%±5%,并对抗谷氨酸引起的Bcl-2蛋白表达的降低。结论阿魏酸钠能够减弱Aβ25-35提高谷氨酸毒性诱导的鼠皮层神经元凋亡。     

MC002诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡及其作用机制

目的与雷公藤内酯醇（PG490）进行比较,观察雷公藤内酯醇衍生物MC002对人喉癌Hep-2细胞体外增殖的抑制作用及其分子机制。方法以MC002和PG490分别处理人喉癌细胞Hep-2,采用噻唑蓝比色法（MTT）检测药物对Hep-2细胞的增殖抑制作用并计算IC50值;利用软琼脂克隆形成实验观察细胞的锚定非依赖性生长能力;选用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;用ROS检测试剂盒分析药物对细胞活性氧水平的影响;以实时荧光定量PCR技术（Realtime-PCR）检测细胞凋亡相关因子Bcl-2及Bax mRNA水平的表达变化。结果 MC002及PG490均对体外培养的人喉癌Hep-2细胞有增殖抑制作用,且具有剂量依赖性,IC50值分别为183.58nmol/L和119.35nmol/L,而且两种药物可以抑制细胞的锚定非依赖性生长能力;此外,MC002及PG490可以降低ROS水平,并且使凋亡相关因子BaxmRNA表达上调,Bcl-2mRNA表达下调。结论 MC002具有与PG490相同的作用,可以抑制人喉癌细胞株Hep-2的生长,诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关因子Bcl-2、Bax及ROS的表达有关。     

氨基胍、黄芩苷对糖尿病大鼠组织非酶糖化及视网膜细胞凋亡的影响

目的研究非酶糖化、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax与糖尿病视网膜病变（DR）的关系,探讨非酶糖化抑制剂氨基胍和具有非酶糖化抑制作用的中药黄芩苷干预治疗,对DR的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为4组,正常对照组、糖尿病组、糖尿病氨基胍（100mg／kg·d）治疗组、糖尿病黄芩苷（150mg／kg·d）治疗组,腹腔注射链脲佐菌素（60mg／kg）诱发糖尿病。16周后,处死大鼠,分离主动脉,测定组织非酶糖化,观察视网膜Bcl-2、Bax的表达,电镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果①与正常对照组相比,糖尿病组非酶糖化明显升高（P〈0．001）,氨基胍治疗组、黄芩苷治疗组较糖尿病组非酶糖化明显降低（P〈0．01）,而血糖无明显变化;②糖尿病组视网膜Bcl-2蛋白表达明显减少、Bax蛋白表达明显增加．氨基治疗组、黄芩苷治疗组的Bcl-2蛋白表达明显增加、Bax蛋白表达较糖尿病组明显减少;③透射电镜下见糖尿病视网膜组神经节细胞呈典型的凋亡形态学改变,氨基胍治疗组、黄芩苷治疗组大鼠组织细胞凋亡改变明显减轻。结论①非酶糖化通过调节Bcl-2,Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,而参与DR的发生与发展;②非酶糖化抑制剂通过抑制非酶糖化,调节Bax、Bcl-2的表达抑制细胞凋亡,延缓DR的发展;③黄芩苷对非酶糖化抑制作用与典型非酶糖化抑制剂氨基胍相似,且价格低、副作用少,值得临床推荐应用。     

人参总皂甙对K562细胞凋亡相关基因XIAP和Survivin表达的影响

目的探讨人参总皂甙（TSPG）对K562细胞凋亡相关基因XIAP和Survivin表达的影响。方法采用四唑盐比色试验（MTT法）检测TSPG对K562细胞增殖的影响;Hoechst33342/PI荧光染色法观察K562细胞的凋亡;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测K562细胞XIAP和Survivin基因的mRNA的表达。结果TSPG在低浓度时有促进细胞增殖的作用（P〉0.05）,高浓度时逐渐出现抑制作用（P〈0.05）;荧光技术显示不同浓度TSPG培养K562细胞后24和48小时后凋亡细胞数目明显增多（P〈0.01）;TSPG下调K562细胞XIAP和Survivin基因的表达（P〈0.01）。结论TSPG通过下调K562细胞XIAP和Survivin基因的表达从而诱导K562细胞凋亡。     

18氟-氟代脱氧葡萄糖对Lewis肺癌细胞增殖的影响

目的 研究不同浓度¹⁸氟-氟代脱氧葡萄糖(¹⁸F-FDG)对Lewis肺癌细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法 以0、0.37、1.85、3.70 和 7.4 (×10⁶ Bq/ml) ¹⁸F-FDG处理细胞24 h,用倒置显微镜与电子显微镜观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期时相分布,³H-TdR掺入法检测细胞DNA合成,比色法检测细胞脂质过氧化水平,免疫组织化学法检测细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 细胞的累积吸收剂量分别为0、0.11、0.55、1.10与2.20 Gy。受照细胞出现凋亡形态学改变,在0～2.20 Gy剂量范围内,细胞凋亡率由(4.05±0.01)%增大为(25.6±0.28)%(t=188, P<0.01),³H-TdR掺入率从100%下降为(22.0±0.51)%( t=27.6, P<0.05),细胞内丙二醛(MDA)含量由(0.08±0.03)上升到(0.67±0.12)μmol/L(t=11.7, P<0.01)。Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增高,细胞周期发生G₂/M期阻滞。结论 ¹⁸F-FDG能诱导Lewis肺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

基于高内涵分析技术的新型PPARα/γ双重激动剂C333H和P633H的肝细胞毒性初步研究

目的基于建立的高内涵细胞多参数毒性分析方法,观察新型PPARα/γ双重激动剂C333H和P633H的HepG2肝细胞毒性,并初步探查其可能的损伤机制。方法在HepG2人肝癌细胞上,采用高内涵分析（HCA）技术,进行C333H和P633H的细胞毒性（细胞数量、核固缩、膜通透性、线粒体膜电位和细胞色素C）,以及氧化应激和DNA损伤的多参数分析。结果 MTT法测得C333H和P633H抑制HepG2细胞增殖的IC50分别为（161.57±15.29）μmol/L和（101.08±17.58）μmol/L。HCA研究表明C333H在10～100μmol/L,P633H在3～30μmol/L显著降低膜通透性和线粒体膜电位;C333H在30～300μmol/L、P633H在10～100μmol/L浓度依赖性地降低细胞数量。至高浓度时,300μmol/L C333H和100μmol/L P633H进一步显著降低线粒体膜电位和细胞数量,显著增加核DNA及细胞色素C含量,显著减少核面积,此浓度下膜通透性和超氧化物歧化酶显著增加。结论 C333H在低于100μmol/L,P633H在低于30μmol/L时对HepG2肝细胞无明显的毒性反应;线粒体损伤、膜完整性破坏是两化合物引起细胞毒性反应的主要机制,其中线粒体损伤为毒性反应早期敏感性检测指标。此外,HCA法与MTT法在细胞增殖作用的分析上具有较好的一致性。     

二氢青蒿素抑制结肠癌细胞株HCT-116并诱导凋亡的实验研究

目的：研究二氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对人结肠癌HCT-116细胞的体外抑制并诱导凋亡,并探讨其作用机制。方法：以不同浓度的DHA作用于体外培养的HCT-116细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测细胞生长抑制率;应用流式细胞仪进行周期分析检测细胞凋亡情况;用Western Blotting法,检测不同浓度的DHA作用于肿瘤细胞时,凋亡相关蛋白Bcl-2,bax,cleavad-PARP表达情况。结果：在DHA作用后,HCT-116细胞生长受到明显抑制,IC50（半抑制浓度）值为14.18μmol/L。并呈一定的量效和时效依赖关系。流式细胞仪检测亚二倍体（sub-G0）比例增高;Western-Blotting检测药物处理细胞后Bcl-2表达水平下调,而Bax、cleavad-PARP表达水平明显上调。结论：DHA能抑制HCT-116细胞的生长增殖并诱导细胞发生凋亡。     

活性炭纳米粒子对人胃癌BGC-823细胞作用的体外实验研究

目的：探讨活性炭纳米粒子（activated carbon nanoparticles,ACNP）对人胃癌BGC-823细胞的作用。方法：将ACNP以不同浓度和时间作用于BGC-823细胞,通过MTT试验观察ACNP对细胞增殖的抑制作用;测定培养上清液乳酸脱氢酶（LDH）活性,判断细胞损伤状况;用甲基绿-派洛宁染色法及透射电镜观察细胞凋亡形态;用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果：ACNP能明显抑制BGC-823细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性,作用24,48,72h后的半数抑制浓度（IC50）分别是1．57,1．18,0．87g／L。低浓度ACNP（0．1,0．2g／L）作用24h后,LDH漏出量与对照组相比没有显著差异。0．1g／L的ACNP作用24h后,细胞出现凋亡特征的形态学改变。0．1,0．2g／L的ACNP作用24h后,细胞凋亡率分别为（5．01±1．16）％、（8．21±1．63）％,与对照组（2．48±0．58）％比较均有显著性差异;ACNP作用组的S期细胞所占比例明显增高。结论：ACNP抑制BGC-823细胞的增殖,可使细胞阻滞于S期。诱导细胞凋亡。     

细胞色素C依赖的线粒体途径在hTERT干扰促进肝癌HepG2细胞凋亡中的作用

目的检测靶向RNAi抑制hTERT基因对HepG2肝癌细胞凋亡的促进作用及其与线粒体凋亡途径的关系,探讨hTERT干扰促进细胞凋亡的可能机制。方法收集第20代hTERT基因RNAi真核表达载体稳定转染细胞、对照细胞（转染空载体质粒）及未转染HepG2细胞,采用Western blot检测线粒体、胞质细胞色素C（cyt C）的表达及细胞内caspase-9、Bcl-2、Bax和hTERT的表达。结果与未转染细胞和对照细胞相比,转染细胞hTERT、Bcl-2和线粒体cyt C表达明显减少,Bax和胞质cyt C表达明显增加;未转染细胞及对照细胞仅见约46kD的前caspase-9条带,转染细胞可见46kD前caspase-9条带和35kD caspase-9 p35亚基条带。结论RNAi靶向抑制hTERT基因可通过抑制Bcl-2表达和促进Bax表达引起线粒体cyt C释入胞质,激活caspase-9促进HepG2肝癌细胞凋亡。