REEP6在人睾丸和精子中的表达及定位

目的:通过对人受体相关蛋白(receptor accessory protein 6,REEP6)在睾丸和精子中表达研究来探讨REEP6蛋白在雄性生殖中潜在的功能。方法:Western blot检测REEP6在人睾丸及精子中的表达;免疫组化及组织免疫荧光方法对REEP6在人睾丸组织中的定位进行研究;人精子免疫荧光对REEP6在精子顶体反应前后的定位进行研究。结果:REEP6在人睾丸及精子中均有表达,在睾丸组织中REEP6定位于各级生精细胞的细胞膜,在精子中则定位于核后区附近,并且在顶体反应前后,REEP6在人精子的定位及表达量不发生改变。结论:REEP6在人睾丸和精子中均有表达,其表达定位具有细胞特异性和区域特异性,提示其可能在人睾丸精子发生和(或)精卵融合过程中发挥作用。     

附睾蛋白RhoA参与人精子顶体反应

目的:研究RhoA在男性生殖系统中的表达和功能.方法:采用RT-PCR来检测RhoA的mRNA表达,Western blot和免疫组化用来检测RhoA蛋白在人睾丸,附睾及成熟精子中的表达.免疫荧光用来观察这个蛋白在人精子上的定位.豌豆凝集素(PSA)染色用来确定精子顶体反应率.结果:只能在附睾中检测到RhoA的mRNA,而RhoA蛋白不仅在附睾上皮中表达,在人精子上也有表达.它位于人精子的顶体和尾部,并且随着顶体反应转移到精子的赤道部及顶体后区.同时特异的RhoA抗体能够显著地抑制精子发生顶体反应(P<0.01).结论:结果表明RhoA可能是在附睾成熟过程中带到人精子质膜表面,从而使精子获得发生顶体反应的能力.     

DNAJB8在小鼠睾丸生殖细胞中的表达定位

目的：探究DNAJB8［DnaJ heat shock protein family（HSP40） member B8］在小鼠精子发生过程中的表达模式。方法：分别采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测小鼠各脏器、不同发育时期睾丸组织以及不同生精细胞DNAJB8的mRNA转录和蛋白表达量;免疫荧光检测DNAJB8在生精细胞中的表达定位。结果：DNAJB8基因在睾丸组织中特异表达,从小鼠出生后21 d（P21）即圆形精子阶段开始DNAJB8 mRNA保持较高的表达,而DNAJB8蛋白在精子变形晚期出生后35 d（P35）才开始表达。DNAJB8蛋白主要定位在晚期精子细胞及精子鞭毛中段。结论：DNAJB8可能参与小鼠精子变形晚期的发育过程。     

骨桥蛋白在雄性小鼠生殖系统中的表达及意义

目的:检测骨桥蛋白(OPN)在小鼠睾丸、附睾、精子中的表达,探讨其意义。方法:用免疫组织化学方法检测OPN在正常小鼠睾丸及附睾中的表达情况,免疫细胞荧光法检测OPN在小鼠精子中的表达情况,分析OPN与雄性小鼠生殖能力的关系。结果:OPN在小鼠睾丸、附睾组织及精子上均具有特征性表达。在睾丸中,OPN表达于Sertoli细胞、Leydig细胞以及各级生精细胞,尤其是精原细胞、精子细胞和精子的胞质中;附睾内,OPN的表达主要见于各段上皮主细胞胞质中,部分基细胞、亮细胞中也可见到免疫阳性反应。并且附睾头部的免疫阳性染色相对较弱;免疫荧光染色则将OPN定位于附睾尾精子的顶体帽区及鞭毛。结论:小鼠睾丸、附睾及精子中均存在OPN的特异性表达,OPN可能参与精子的发生及成熟过程,并与精子的活力和受精能力密切相关。     

生精相关基因Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达和定位研究

目的：应用小鼠Znf230多克隆抗血清,对Znf230在小鼠睾丸及精子中的表达及定位进行研究。方法：用RT-PCR分析、Western blot检测、免疫组织化学和免疫荧光染色方法研究Znf230在小鼠不同发育阶段睾丸组织及精子中的表达及亚细胞定位情况。结果：小鼠从出生到成年的发育过程中,Znf230的表达水平基本上是稳定的。小鼠出生6 d和12 d时,该蛋白在精原细胞核中表达,从出生18 d到精子发育成熟这个阶段,该蛋白转移到圆形精子细胞、延长精子细胞和精子中表达,具体定位于顶体区域和精子的尾部。结论：Znf230可能在小鼠生精过程中起着重要的作用。     

人睾丸组织特异表达新基因HSD-9的克隆及其编码蛋白质功能

目的 利用本室建立的人睾丸组织中不同细胞特异表达的ESTs文库克隆新基因HSD-9,初步研究HSD-9蛋白的特性及功能。方法 采用电子克隆手段获得新基因HSD-9,生物信息学手段分析基因及编码蛋白质的特点。Northernblot研究HSD-9基因的表达谱,原核表达方法得到HSD-9蛋白并制备特异性多克隆抗体,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜技术研究HSD-9蛋自在生精细胞中的定位及在哺乳动物细胞中的表达特点。结果HSD-9基因在人睾丸组织特异表达,其大鼠同源物可在大鼠各级生精细胞中表达;HSD-9．EGFP在CHO细胞和s4细胞中表达呈现沿细胞膜分布的小颗粒和偏心分布于胞内一侧的粗大颗粒;HSD-9-EGFP和网格蛋白clathrin可以部分共定位。结论 HSD-9是人睾丸组织特异表达新基因,其编码蛋白质在CHO细胞和S4细胞中表达特点非常类似于内吞小体蛋白的表达特点,推测其可能参与了细胞中内吞过程的调节。     

丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶SRPK2在小鼠睾丸组织中的表达及意义

【摘要】 目的 通过研究丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2（serine/arginine-rich protein specific kinase 2，SRPK2） 基因mRNA及其编码蛋白产物在小鼠睾丸组织中的表达特征，探讨该基因在精子发生过程中的作用及意义。 方法 分别采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹杂交（Western blotting）分析该基因mRNA及蛋白产物在小鼠多种组织中的表达；利用实时定量PCR（real-time quantitative PCR）分析SRPK2 mRNA在不同发育阶段小鼠睾丸组织中的差异表达；应用免疫组织化学染色和间接免疫荧光技术观察SRPK2蛋白在小鼠曲精小管中的细胞定位和生精细胞内的亚细胞定位。 结果 半定量RT-PCR和Western blotting分析显示SRPK2 mRNA和蛋白在小鼠睾丸组织中均大量表达；实时定量PCR分析发现SRPK2 mRNA在5周及8周龄雄性小鼠睾丸组织中显著表达，具有明显的阶段特异性表达特征。免疫组织化学染色结果表明SRPK2蛋白阳性着色主要位于曲精小管中的长形精子细胞核；间接免疫荧光分析显示SRPK2蛋白定位于长形精子细胞核表面。 结论 SRPK2基因在小鼠睾丸组织中大量表达，并且具有显著的阶段特异性表达特征和明确的细胞核定位，极有可能在小鼠精子发生的变态成形期参与mRNA前体分子的剪接过程，其作用机制值得进一步深入研究。     

PIAS2蛋白在不同病理分型的无精子症患者睾丸组织中的表达

目的:探讨PIAS2在不同生精功能状态的人睾丸组织中的表达情况。方法:对80例无精子症患者进行睾丸组织病理检查诊断,根据病理形态的不同分为：生精功能正常或基本正常(n=40)、精子发生低下(n=20)、唯支持细胞综合征(n=20)等。选择上述各型结构完整的睾丸组织,分别应用免疫组化法(SP)对PIAS2在不同生精功能状态的睾丸组织进行研究。结果:PIAS2在各级生精细胞多为强阳性表达,呈深棕黄色;PIAS2在间质细胞及支持细胞表达弱阳性表达或不表达。结论:PIAS2染色强弱与睾丸生精功能的强弱有一定关系,是一个潜在的判断睾丸生精功能的指标。     

人类趋化素样因子超家族2参与小鼠精子形成

目的: 探究人类趋化素样因子超家族2(CKLF-like MARVEL transmembrane domain-containing protein 2, CMTM2)在小鼠精子生成过程中的作用。方法: 构建CMTM2基因敲除小鼠模型,利用Northern、RT-PCR及 Western 印迹检测野生型、杂合子及纯合子小鼠的CMTM2表达水平,统计小鼠生育幼崽数量及生育率,采集并分析精子活动度、形态及睾丸组织切片,检验血清睾酮及促卵泡激素(follicle-stimulating hormone, FSH)水平。结果: CMTM2在小鼠生精中呈现准确的调控式高度表达,基因敲除的成年小鼠和野生型成年小鼠在体重上差异没有统计学意义。纯合子的小鼠睾丸体积及重量小于野生型小鼠睾丸,野生型小鼠与CMTM2敲除小鼠的睾丸长径比较,差异有统计学意义[(11.32±1.21) mm vs. (8.29±1.92) mm, P<0.05],睾丸重量比较,差异有统计学意义[(101.63±2.33) mg vs. (85.22±2.84) mg, P <0.05]。与野生型小鼠相比,杂合子精子数量明显减少,纯合子小鼠精子发生停滞。在精子形态学方面,与野生型小鼠相比,杂合子小鼠有更多圆形精子,而纯合子则因精子发育停滞,多为圆形精子细胞。睾酮和FSH在3组间差异无统计学意义。纯合子雄性小鼠由于精子发生停滞而不育,纯合子小鼠缺失生精上皮层。结论: CMTM2在生精过程中发挥着不可或缺的作用,其参与精子发生的潜在机制有待于进一步实验研究以证实。     

转化生长因子 β1 在大鼠睾丸及附睾中的表达研究

目的 通过研究转化生长因子（TGFβ1）在大鼠睾丸、附睾中的表达特征,探讨其在男性生殖系统中的作用.方法 用免疫组化SP法检测TGFβ1蛋白在青春期SD大鼠睾丸、附睾中的表达与定位.结果 TGFβ1在大鼠睾丸和附睾中都有特征性表达.TGFβ1蛋白在睾丸内表达于生精细胞、精子细胞、支持细胞和间质细胞胞质及顶体;附睾中表达于主细胞胞质内,附睾上皮亮细胞、晕细胞和基细胞中均为阴性.结论 大鼠睾丸、附睾中TGFβ1蛋白的特征性表达提示,它们可由不同生精上皮细胞、间质细胞和附睾主细胞产生,可能以自分泌或旁分泌的形式作用于生殖细胞或间质细胞,直接或间接地影响精子的发生、发育和成熟过程,并与精子的活动和受精能力有关.     

小剂量玉米赤霉烯酮损害雄性小鼠生殖能力的研究

目的 评估小剂量(低于无明显作用水平的浓度)玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)暴露后小鼠精子发生及精液质量的变化趋势,探讨小剂量ZEA暴露对雄性小鼠生殖能力的影响.方法 90只出生后21 d的雄性CD-1小鼠按随机数字表法分成3组,分别暴露于0、20、40 μg/(kg·d)ZEA,处理14、28、42 d后,采用计算机辅助精液质量分析观察精子活力参数,吉姆萨染色观测精子畸形率,测量睾丸体积及质量,免疫组化染色检测生精细胞计数.结果 处理42 d后,20、40 μg,/(kg·d)组精子活动率低于0 μg/(kg·d)组[(82.80±4.34)％、(74.90±6.70)％ vs (93.20±1.66)％,P=0.004、0.002];20、40 μg/(kg·d)组小鼠畸形精子率高于0μg/(kg·d)组[(29.40±1.09)％、(40.80-±6.17)％ vs (19.40±0.45)％,P ＜0.001,P=0.002];20、40μg/(kg·d)组小鼠的单位面积生精细胞计数低于0μg/(kg·d)组(2 422.7±206.1、1 855.8±105.3 vs3 189.8 ±306.0,P=0.013、0.001).结论 小剂量ZEA的暴露能够降低雄性小鼠的精子发生及精液质量,损害其生殖能力.     

男性避孕药AF-2364对雄兔生殖细胞的影响

目的：观察男性避孕药AF-2364对雄兔生殖细胞的组织学和超微结构的影响。方法：将27只雄兔随机分为对照组、静脉给药组和灌胃给药组,静脉给药组和灌胃给药组分别给予AF-2364 25 mg/kg每周1次,连续4周;每隔2周,各组随机处死3只兔子,取睾丸、附睾等组织;睾丸电镜标本用2.5%戊二醛固定,制作成组织标本,用H-7500透射电镜观察;光镜标本用Bouin液固定,用OLYMPUS CX31电子显微镜观察。结果：光镜检查显示给药后生精细胞脱落,生精上皮变薄,附睾管内精子减少。电镜检查显示精子核头部溶解,尾部中段线粒体数目减少,生精细胞之间以及与支持细胞间的连接点破坏,间隙增大。结论：AF-2364能有效、可逆地抑制兔睾丸精子的发生。     

小鼠睾丸巨细胞病毒感染对精子顶体反应与膜功能的影响

目的探讨小鼠睾丸巨细胞病毒(MCMV)感染对附睾尾部精子顶体反应与膜功能的影响。方法随机选择无MCMV感染史的BALB/c雄性小鼠48只作为实验组,睾丸直接接种MCMV,分别于感染后第1、2、4、6、9、14天处死小鼠,用地高辛标记的MCMVM83mRNA寡核苷酸探针对睾丸组织进行原位杂交,检测睾丸MCMV感染情况,同时取附睾尾部成熟精子进行精子顶体反应与精子膜低渗肿胀功能检测。另设平行对照组雄性小鼠30只(同法随机选择),睾丸接种不含MCMV的细胞培养液,其他处理方法同实验组。结果实验组48只雄性小鼠睾丸组织间质及(或)生精细胞中均出现原位杂交阳性信号。实验组精子顶体反应与膜功能在接种病毒后的第2天、第4天,精子顶体反应率(58%±9%、56%±9%)低于平行对照组(71%±6%、70%±7%)(P均<0.05),精子膜尾部低渗肿胀率(48%±9%、38%±8%)低于平行对照组(60%±7%、50%±4%)(P均<0.05)。结论小鼠睾丸MCMV感染模型成功建立。小鼠睾丸MCMV急性感染可导致精子顶体反应与膜功能的显著下降。     

人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3对雄性生殖功能损伤模型小鼠生殖功能的改善作用

目的：探讨人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3对邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导的雄性生殖功能损伤模型小鼠生殖功能的改善作用,阐明人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3对生殖功能保护作用的相关机制,为其深入开发提供实验依据。方法：28只清洁级雄性C57BL/6小鼠随机分为模型组（400 mg·kg^-1 DBP）、人参皂苷Rg1+DBP组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg1,400 mg·kg^-1 DBP）、人参皂苷Rg3+DBP组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg3,400 mg·kg^-1 DBP）和联合组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg1,20 mg·kg^-1人参皂苷Rg3,400 mg·kg^-1DBP）,每组7只。DBP溶于玉米油于每天上午灌胃给药,人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3溶于生理盐水于每天下午皮下注射给药,每天各给药1次,连续给药35 d。采用WLJY-9000型精子质量检测系统检测各组小鼠的精子密度、精子活力和总畸形率,HE染色观察小鼠睾丸组织病理形态表现,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠血清中睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）水平,采用免疫荧光法检测睾丸组织缝隙连接蛋白43（Cx43）蛋白表达水平。结果：与模型组比较,联合组小鼠睾丸脏器系数明显升高（P<0.05）,人参皂苷Rg1+DBP组、人参皂苷Rg3+DBP组和联合组小鼠精子密度和精子活力明显升高（P<0.01）;与模型组比较,人参皂苷Rg1+DBP组、人参皂苷Rg3+DBP组和联合组小鼠血清中T和LH水平明显升高（P<0.01）,FSH水平明显降低（P<0.01）,小鼠睾丸组织中Cx43蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。HE染色,模型组小鼠睾丸组织生精上皮较薄,管腔中生精细胞严重脱落;与模型组比较,人参皂苷Rg1+DBP组和人参皂苷Rg3+DBP组小鼠睾丸组织生精上皮变厚,管腔中脱落细胞较少;联合组小鼠睾丸组织生精上皮结构完整,各级生精细胞排列规则,腔内精子丰富。析因分析,人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3可致小鼠精子活力（F=6.704,P=0.016）、血清中T水平（F=4.912,P=0.036）和睾丸组织中Cx43蛋白表达水平（F=6.937,P=0.018）升高。结论：人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3单独使用及人参皂苷Rg1与人参皂苷Rg3联合使用,可提高精子密度和精子活力,使小鼠血清中T和LH水平升高,FSH水平降低,减轻小鼠生殖功能损伤,其作用机制可能与上调Cx43表达水平发挥生精保护作用有关,可抑制DBP所致的生殖功能损伤,且人参皂苷Rg1与Rg3联合使用表现为协同作用。