HSP70对缺血预处理诱导大鼠海马缺血耐受的作用

目的 探讨脑缺血时的组织学变化及热休克蛋白70(HSP70)在缺血预处理诱导的脑缺血耐受中的作用.方法 取成年雄性SD大鼠48只,随机分为6组,A组:假手术对照组,手术后7 d处死取脑;B组:全脑缺血3 min,7 d后处死取脑;C组:全脑缺血6 min,2 d后处死取脑;D组:全脑缺血6 min,7 d后处死取脑;E组:3 min缺血预处理后3 d,再缺血6 min,2 d后处死取脑;F组:3 min缺血预处理后3 d,再缺血6 min,7 d后处死取脑.行苏木精-伊红染色观察各组大鼠海马CA1区存活神经元密度,免疫组化染色方法观察大鼠海马CA1区HSP70染色强度,并作相关分析.结果 光镜下A、B组大鼠海马CA1区神经元未见明显缺血性损伤,D组神经元大量坏死,C、E、F组神经元部分坏死,A组与C组、D组,D组与F组比较,差异有显著性(F=19.6,q=4.766～12.447,P＜0.01).免疫组化染色显示,未经预处理的A、C、D组大鼠海马CA1区未见HSP70表达,预处理的E、F组大鼠在整个海马区均可见HSP70表达,C组与E组、D组与F组间差异有显著性(F=210.8,q=8.277～32.133,P＜0.01).结论 在脑缺血耐受中,缺血预处理对第二次致死性缺血表现出保护作用.在这个过程中,HSP70基因的表达上调发挥了重要的保护作用.     

醒神解毒方预处理对全脑缺血再灌注大鼠海马神经元HSP70表达的影响

目的：探讨醒神解毒方预处理减轻全脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤的机制.方法：实验选用20只雄性SD大鼠,随机将20只大鼠分为假手术组、药物预处理组、缺血预处理组、脑缺血再灌注组,采用热凝椎动脉,钳夹双侧颈总动脉建立全脑缺血模型,假手术组暴露双侧颈总动脉不夹闭;缺血再灌注组,夹闭双侧大脑颈总动脉10 min后再灌注;缺血预处理组预缺血3 min,3 d后给予缺血10 min后再灌注24 h后处死;药物预处理组,灌胃2周后,作缺血再灌注处理,免疫组织化学染色观察HSP70的表达.结果：药物预处理及缺血预处理缺血区HSP70表达与与缺血再灌注比较,P＜0.01.结论：药物预处理对随后的脑梗死有明显的保护作用,能诱导缺血耐受的产生.     

蛋白激酶B(Akt)在沙土鼠海马缺血耐受中的表达

目的：探讨沙土鼠海马缺血耐受与CAl区蛋白激酶B(Akt)表达及锥体神经元凋亡之间的关系。方法：沙土鼠16只随机分为A(2min缺血组)、B(5min缺血组)、C：(2min缺血 5min缺血组)、D(假手术组)4组，每组4只。免疫组化(SP法)检测海马CAl区Akt表达，末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测锥体细胞凋亡。结果：A、C两组表达的Akt阳性细胞数明显多于B组，D组无明显从Akt表达;B组锥体细胞凋亡较A、C两组显著，D组未见明显凋亡细胞。结论：Akt可能通过抑制锥体细胞的凋亡参与介导沙土鼠海马缺血耐受。     

快速预缺血处理对兔脑再缺血的保护作用

目的探讨预缺血后短暂灌注(快速预缺血)对兔脑再缺血的影响。方法股动脉放血至平均动脉压35-40mmHg时，阻断双侧颈总动脉诱导脑缺血。20只兔随机分为对照组：脑缺血10min；实验组：脑缺血3mm灌注30mm后、脑再缺血10mm，观察两组脑再缺血3、10d海马CA1区正常神经元密度。结果实验组脑缺血3d后海马CA1区正常神经元密度明显高于对照组，实验组脑缺血10d后海马CA1区正常神经元密度与对照组无明显差异。结论快速预缺血对兔脑再缺血具有保护作用，但仅出现在再灌注3d后而非10d后。     

亚低温通过PI3K/Akt途径对脑缺血/再灌注起保护作用

目的通过观察亚低温（32℃，3h）对大鼠全脑缺血／再灌注5天后海马CA1区锥体细胞的保护作用及P13K抑制剂LY294002的作用，探讨亚低温神经保护的可能机制。方法采用四动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型，15min全脑缺血后再灌注5天。大鼠随机分为假手术组、常温缺血／再灌注组、低温缺血／再灌注组、低温缺血／再灌注给药组和低温缺血／再灌注溶剂对照组。给药方法为缺血前20min脑室注射。复灌5天后用焦油紫染色法检测海马CA1区的细胞。结果3h亚低温可有效降低大鼠缺血／再灌注5天后海马CA1区细胞的死亡；缺血前20min脑室注射P13K抑制剂LY294002显著抑制了3h亚低温对海马CA1区细胞的保护作用。结论3h亚低温对大鼠15min全脑缺血有确切的保护作用。P13K／Akt信号通路介导了亚低温的保护作用。     

锂对沙土鼠脑缺血后热休克蛋白70表达的影响

目的：观察氯化锂预处理对沙土鼠脑缺血一再灌注损伤后海马和脑皮质区热休克蛋白70（HSP70）表达的影响。方法：夹闭沙土鼠双侧颈总动脉5min，制备全脑缺血性脑损伤模型。36只沙土鼠随机分为实验组和对照组。实验组手术前连续5天给予氯化锂5mmol／kg腹腔注射；对照组以等渗盐水代替氯化锂。分别于术后第1、3和7天将动物处死，取海马齿状回互包段制成石蜡切片，进行HSP70的免疫组化分析。结果：全脑缺血后1天，与对照组相比，实验组海马CA1区HSP70表达明显减少（P〈0．05）；相反，在脑皮质HSP70表达增加（P〈0．01）。结论：锂的神经保护作用机制涉及基因表达的改变。     

短暂脑缺血诱导大鼠海马PKC-ε膜转位及HSP70表达

目的 探讨蛋白激酶C-ε(protein kinase C, PKC-ε)和热休克蛋白 70(heat shock protein, HSP70)在脑缺血耐受形成过程中的作用.方法 将80只大鼠分为短暂脑缺血组和假手术组(n=40),每大组根据取材时间又分为缺血后1 h、6 h、1 d、2 d、4 d 5个亚组(n=8).应用大脑中动脉阻闭(middle cerebral artery occlusion, MCAO)方法和免疫印迹(western blot)技术观察大鼠短暂脑缺血20 min后海马神经细胞不同时间点PKC-ε膜转位及HSP70表达的变化.结果 假手术组各时间点的PKC-ε与HSP70无明显变化.在短暂脑缺血组,缺血后1 h海马神经细胞胞质PKC-ε的含量开始下降,至1天达最低点,持续到4天;而胞膜PKC-ε的变化趋势相反,含量于6 h显著增高,1天达到高峰,持续到4天;短暂缺血1 h后HSP70的表达无明显增加,6 h增多明显,1天达最高,持续至4天均处于较高水平.结论 短暂脑缺血诱导海马神经细胞PKC-ε膜转位和HSP70表达增加,可能是短暂脑缺血诱导缺血耐受的机制.     

NMDA受体2B亚单位反义寡核苷酸对缺血性脑损伤影响的实验研究

目的：观察短暂性全脑缺血大鼠海马NMDA受体2B亚单位(NR2B)蛋白质及其mRNA的表达，以及CAl区NR2B在NR2B反义寡核苷酸(ANR2B)作用下的表达情况。方法：成年SD大鼠立体定位注射在体给药，改良四动脉(4AO)全脑缺血动物模型，观察NR2B的表达变化，以及CAl区NR2B的表达在NR2B反义寡核苷酸(ANR2B)作用下的变化。结果：NR2B蛋白质以CAl区免疫组织化学染色最强。短暂性全脑缺血再灌注后早期即出现海马CAl区NR2B蛋白质及其mRNA的急剧升高现象。在体给药，注射点周围NR2B蛋白质及其mRNA表达下降。结论：NR2B及其mRNA在正常大鼠海马CAl区的基础性高表达和缺血复灌后的过表达可能与海马CAl区缺血易损性相关。ANR2B能够降低海马CAl区的基础性高表达和缺血复灌后的过表达，减轻缺血性脑损伤程度。     

秦艽水煎液对家兔全脑缺血再灌注损伤模型HSP70表达的影响

目的观察秦艽水煎液（Gentiana water exact）对家兔全脑缺血再灌注损伤模型热休克蛋白70（HSP70）表达的影响,探讨Gentiana water exact对全脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法参照Pulsinelli等造模方法进行改良,结扎双侧椎动脉,夹闭双侧颈总动脉,制成“四管闭塞法”全脑缺血模型。缺血5 min后分别于再灌注12 h、24 h、48 h取材,使用免疫组化技术检测家兔全脑缺血再灌注损伤模型双侧海马CA1区HSP70的表达。结果Sham组无表达;I/R组与G组阳性表达,且随灌注时间的延长而表达增强,24 h达到高峰;与I/R组相比,G组各时间点的HSP70表达明显增多（P〈0.05）。结论秦艽可以通过对HSP70表达的上调,达到对脑损伤的保护作用。     

川芎嗪联合缺血预处理对沙鼠前脑缺血后学习记忆功能及HSP70表达的影响

目的：研究川芎嗪联合脑缺血预处理对沙鼠前脑缺血再灌后学习记忆及HSP70表达的影响．方法：80只蒙古沙鼠随机分成对照组、前脑缺血组、脑缺血预处理、川芎嗪＋脑缺血预处理组,每组20只动物．参照Kirino法制备脑缺血预处理动物模型．术后第3～7日对沙鼠的学习记忆功能进行评定（4-PTT旱路迷宫法）,HE染色方法观察海马CA1区神经元形态变化,免疫组化法和Western—blot法检测HSP70的表达,TUNE1法标记神经细胞凋亡数,各取均值．结果：与对照组比较,脑缺血后沙鼠的学习记忆能力下降、海马CA1区存活神经元密度降低、HSP70表达水平增加,神经细胞凋亡数量增多（P〈0．05）;与脑缺血组比较,缺血预处理组和川芎嗪联合组中沙鼠的学习记忆能力得到改善、存活神经元密度增加、凋亡神经细胞数量回降、HSP70表达水平进一步增加,且上述改变在川芎嗪联合组中更加明显（P〈0．05）．结论：川芎嗪可增强缺血预处理诱导的脑缺血耐受作用,二者联合应用进一步改善前脑缺血沙鼠的学习记忆能力．其机制可能与协同增强HSP70表达,减少神经细胞的凋亡有关．     

新生大鼠脑缺氧缺血后海马CA1区HSP70表达及GM1作用

HI后新生大鼠海马CA1区仅能检出少量阳性HSP核蛋白(仅在核内表达的蛋白)，海马CA1区神经元呈较严重的缺血损伤性改变。而GM1组可见应激蛋白HSP70明显表达，24h达高峰。结论：GM1可使新生大鼠海马CA1区HSP70表达上调，减轻脑缺氧缺血后病理损伤，对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用。     

新生鼠脑缺血再灌注后海马CA1区HSP70的表达

目的观察新生Wistar鼠脑缺血再灌注后海马CA1区热休克蛋白70(HSP70)表达的意义.方法应用免疫组化的方法观察新生鼠脑缺血再灌注后不同时点脑组织HSP70的表达.结果缺血再灌注6h后HSP70表达开始增高,24h达高峰,持续升高至第3天,其COD值与对照组比较有显著性差异(P＜0.05).结论新生鼠脑缺血早期可诱导海马CA1区HSP70表达和合成增加,表明HSP70参与了脑缺血的病理生理过程,可能与脑缺血后神经细胞的内源性保护机制有关.     

间歇性低压低氧预处理对大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区神经元DND及HSP70表达的影响

目的 探讨间歇性低压低氧预处理(Hypobaric Hypoxia Preconditionin,HHP)对大鼠全脑缺血/再灌注(Global cerebral ischemia and reperfusion,GCIR)后海马CA1区神经元迟发性死亡(Delayed Neuron Death,DND)及热休克蛋白70( HSP70)表达的影响.方法 将Wistar大鼠48只随机分为四组:假手术组(Sham组)、低压低氧对照组(HHP组)、全脑缺血/再灌注组(GCIR组)、低压低氧预处理+全脑缺血/再灌注组(HHP+ GCIR组).采用吴穹改良的复制间歇性低压低氧环境模型,选用四血管闭塞法复制大鼠GCIR模型.硫堇染色下观察海马CA1区锥体神经元组织学分级(Histological grade,HG)和神经元密度(neuronal density,ND),反映锥体细胞DND程度;免疫组织化学方法观察神经细胞HSP70阳性细胞表达变化,将四组结果进行统计学比较.结果 Wistar大鼠HHP+ GCIR组海马CA1区较GCIR组HG分级降低、ND明显增加(P＜0.05),HSP70阳性表达明显增高(P＜0.05).结论 推测间歇性HHP是通过上调神经细胞HSP70的表达,减少神经元DND,发挥对脑组织的保护作用.     

预缺血抑制脑缺血诱导GluR6巯基亚硝基化机制的研究

目的 观察预缺血对SD雄性大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区锥体细胞的保护作用,并探讨其可能的机制.方法 采用四动脉结扎法构建大鼠预缺血模型和全脑缺血模型,缺血6 min后分别灌注6 h或5天.大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、预缺血/再灌注组、预缺血/再灌注溶剂对照组和预缺血/再灌注给药组.预缺血/再灌注给药组腹腔注射5 mg/kg MK801.主要运用SDS-PAGE、免疫印迹和焦油紫染色法等技术检测相关信号蛋白的表达、活化水平及神经元细胞的死亡情况.结果 大鼠缺血/再灌注6 h,预缺血/再灌注组和预缺血/再灌注溶剂对照组的GluR6的巯基亚硝基化水平较缺血/再灌注组明显降低,而预缺血/再灌注给药组较缺血/再灌注组没有明显变化;各组间GluR6的蛋白表达量并没有明显变化.大鼠缺血/再灌注5天后,预缺血/再灌注组和预缺血/再灌注溶剂对照组海马CA1区细胞的存活数量较缺血/再灌注组明显增加,而预缺血/再灌注给药组较缺血/再灌注组没有明显变化.结论 预缺血通过NMDA受体下调大鼠全脑缺血/再灌注诱导的KA受体亚基GluR6的巯基亚硝基化,从而发挥拮抗缺血性脑损伤的作用.     

复方阿魏酸对实验性脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70的作用

目的 研究实验性大鼠脑缺血再灌注损伤时热休克蛋白70（HSP70）的表达及复方阿魏酸对HSP70表达的作用。方法 采用大鼠双侧颈总动脉阻断和尾部放血并重复缺血再灌注的脑缺血模型。应用免疫组织化学方法检测大鼠脑组织HSP70表达，并与病理组织学改变进行对照研究。结果 （1）假手术组脑组织无HSP70表达，模型组大脑皮层可见HSP70表达，复方阿魏酸治疗组大脑皮层HSP70表达明显增强。（2）模型组大脑皮导神经细胞呈轻度缺血改变，复方阿魏酸治疗组大脑缺血损伤程度有减轻。结论 复方阿魏酸可促使缺血大脑皮层HSP70表达增强，减轻皮层神经细胞的缺血损伤，对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

全身亚低温对脑缺血再灌注海马CA1区Bcl-2、Bax表达影响的动态变化

目的　研究脑缺血再灌注后全身亚低温的脑保护作用及其对Bcl- 2、Bax表达的动态影响。方法　 12 6只S -D雄性大鼠随机分为假手术组、常温组和亚低温组。采用Pulsinelli四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型 ,即刻全身亚低温 4h ,分别在 7个时间点取脑标本 ,进行Bcl- 2、Bax免疫组织化学及苏木精 -伊红染色。结果　与常温组相比 :亚低温组海马CA1区死亡细胞数明显减少 (P <0 .0 1) ;Bcl - 2蛋白免疫反应强度峰值增高持续时间延长 ;Bax蛋白免疫反应强度峰值减低 ,持续时间缩短。结论　全身亚低温对缺血再灌注锥体细胞损害有较好的保护作用。可增强具有抗凋亡的Bcl- 2蛋白的表达 ,延长其表达持续时间 ;而减弱具有促凋亡的Bax表达 ,同时缩短其表达持续时间。此可能是亚低温对缺血再灌注脑组织损害产生保护作用的分子机制之一。     

利用冰冻切片技术检测大鼠全脑缺血后海马CA1区线粒体细胞色素C变化

目的利用冰冻切片技术检测大鼠全脑缺血后海马CA1区神经元线粒体CytC的变化.方法采用4-VO法制作全脑缺血模型,将SD大鼠随机分为假手术对照组、全脑缺血组.观察缺血后24 h海马CA1区细胞色素C(Cytochrome C,CytC)变化.结果缺血后24 h,假手术组海马CA1区CytC呈阳性表达,并且呈现出特异性的点状分布,符合CytC线粒体分布的特征,全脑缺血组海马CA1区CytC表达明显降低.结论利用冰冻切片技术能方便、直观的检测脑缺血再灌注后神经元线粒体CytC的变化,再灌注24小时海马CA1区神经元线粒体CytC明显下降.     

对大鼠脑缺血再灌注后tTG表达的影响

目的   研究胱氨酸（Cystamine）对全脑缺血再灌注损伤后大鼠海马组织型转谷氨酰胺酶（tTG）表达的影响。方法    用四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型。将SD大鼠随机分为假手术组（n=8）,全脑缺血组（n=48）及全脑缺血治疗组（n=48）,全脑缺血组和全脑缺血治疗组按照缺血再灌注时间点的不同再将大鼠随机分为6h、12h、1d、3d、5d、7d六个亚组,每个亚组8只。全脑缺血治疗组大鼠给予Cystamine腹腔注射（0.15mg/g）,全脑缺血组和假手术组大鼠给予生理盐水腹腔注射。TUNEL染色法观察细胞凋亡水平的变化,免疫组织化学方法分析再灌注后不同时间点海马CA1区tTG表达水平的变化。另取52只大鼠随机分为假手术组（n=4）、全脑缺血组（n=24）及全脑缺血治疗组（n=24）,全脑缺血组和全脑缺血治疗组按照不同时间点每个亚组4只,免疫印迹方法测定tTG的表达。结果   缺血组再灌注24h后TUNEL阳性细胞明显增加,1、3、5、7d亚组与假手术组差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组与缺血组相比,在1、3、5、7d相应时间点亚组TUNEL阳性细胞数减少（P<0.05）。治疗组海马CA1区tTG平均阳性细胞数于全脑缺血后12h开始下降,3、5、7d亚组均明显低于缺血组（P<0.05）。治疗组海马tTG蛋白水平于缺血再灌注后1d开始降低,3、5和7d亚组显著低于缺血组（P<0.05）。结论   Cystamine可以降低大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区tTG的表达,从而对神经元细胞起到一定的保护作用。     

葛根素对急性缺血脑神经细胞损伤的保护及对HSP70蛋白表达的干预作用

目的探讨葛根素对大鼠急性脑缺血损伤的保护作用和对HSP70表达的影响及其作用机制。方法采用闭夹大脑中动脉造成局部脑缺血模型,对实验标本作HE染色及用免疫组化SP法作HSP70染色,观察其组织病理学改变及HSP70表达情况。结果葛根素干预组死亡神经元数明显少于单纯缺血组,脑水肿程度较轻,而HSP70表达强度显著强于单纯缺血组。葛根素干预暴露因素与神经细胞死亡呈显著负相关（P〈0．01）。结论葛根素对大鼠急性脑缺血损伤有保护作用,其作用机制与上调HSP70的表达有关。