TLR3和IRF3在华支睾吸虫感染C3H／HeN小鼠中表达的初步分析

目的 建立华支睾吸虫感染小鼠模型,初步分析TLR3、IRF3基因在小鼠肝脏中的表达情况.方法 随机选用健康雌性C3H/HeN小鼠感染华支睾吸虫建立感染模型,分别在感染第0、1、7、14、28、56、84天颈椎脱臼处死小鼠,取肝脏组织进行病理学观察,收集粪便检查华支睾吸虫虫卵.同时,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝脏中Toll样受体（TLRs）中的TLR3和IRF3的mRNA的表达情况.结果 自感染后第20~30天检查出华支睾吸虫虫卵;肝脏病理学结果显示,与正常组小鼠相比,随着时间的增加,感染组小鼠肝脏汇管区由少量炎症细胞浸润、胆管上皮反应性增生发展到在该区域出现大量纤维组织增生伴有炎症细胞浸润,表明华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠模型成功建立.与正常组相比,感染组自感染后第1天起TLR3和IRF3的mRNA表达均升高（P〈0.01）,均在第84天开始下降.结论 华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠后可激活TLR3-TRIF途径,提示TLR3-TRIF途径可能在华支睾吸虫致病过程中起了一定的作用.     

华支睾吸虫病的流行概况

华支睾吸虫病又称肝吸虫病，是华支睾吸虫感染引起的人兽共患性疾病。华支睾吸虫成虫寄生于人或其它终宿主的肝胆管内，虫体的代谢产物及虫体本身的机械刺激，可引起胆管，特别是引起次级胆管的炎症反应，中度感染胆管可出现局限性扩张，管壁增厚，管腔狭窄，如合并细菌感染，可引起胆管炎和胆管肝炎，周围纤维组织增生，晚期可发生肝硬化。虫卵、死亡的虫体及其碎片可能构成结石的核心，诱发结石症。越来越多的证据表明，华支睾吸虫感染可使原发性肝胆管癌患病率增加。     

TLR5在华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠肝脏中表达的初步分析 TLR5在华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠肝脏中表达的初步分析

目的 分析小鼠华支睾吸虫感染后小鼠肝脏中Toll样受体5（TLR5）的表达情况.方法 随机选取C3H/HeN雌性小鼠,经口感染35个华支睾吸虫囊蚴建立感染模型.分别在感染0（对照组）、1、7、28、56、84天处死小鼠,取肝脏组织行如下处理：①苏木精-伊红（H-E）染色观察小鼠肝脏病变;②采用免疫组织化学染色观察小鼠肝脏组织TLR5表达情况;③采用逆转录聚合酶链反应（RT-PC R）检测肝脏中TLR5的表达水平.结果 ①肝脏病理结果显示,与对照组小鼠相比,感染第1、7天小鼠肝脏汇管区出现炎症细胞浸润,第28天可观察到肝细胞排列紊乱,出现纤维组织增生和胆管增生;②免疫组织化学染色显示,TLR5在感染华支睾吸虫第1天、7天、28天的小鼠肝内表达增高,其主要表达于汇管区肝细胞、肝胆管上皮细胞和纤维化区域的成纤维细胞;③RT-PCR结果显示,小鼠肝脏中TLR5 mRNA表达量在感染第1天、7天、28天明显高于对照组.结论 C3H/HeN小鼠感染华支睾吸虫可上调肝脏组织TLR5的表达,提示TLR5可能在宿主抵抗华支睾吸虫感染中起着一定的作用。     

血脂水平与华支睾吸虫致病性的初步研究

目的比较高血脂小鼠和正常血脂小鼠感染华支睾吸虫后的肝脏病理变化及炎症因子水平,以研究血脂水平对华支睾吸虫致病性的影响。方法通过向BALB/c小鼠投食高脂饲料建立高血脂小鼠模型,用相同囊蚴数感染高血脂小鼠和正常血脂小鼠,比较感染1个月后小鼠相关病理指标。通过Masson染色(Masson′s trichrome staining)判断肝胆纤维化程度,使用免疫组化和实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝脏α-平滑肌蛋白(α-SMA)定位情况和转录水平,用流式细胞术检测小鼠脾细胞在刀豆素(ConA)刺激48 h培养上清中细胞因子表达水平。结果与正常血脂感染组小鼠相比,高血脂感染组小鼠出现较显著的肝胆管扩张、肝实质及汇管区出现大量的胶原纤维增生、小胆管增生等病变。高血脂感染组α-SMA转录水平升高,并在肝脏组织汇管区及增生的纤维间隔内表达。高脂感染组脾细胞培养上清中白介素6(IL-6)和IL-10表达水平比正常血脂小鼠高(P0.05),高脂感染组IFN-γ水平比高脂未感染组低(P0.05)。结论高血脂可能使华支睾吸虫感染所致的肝脏胶原纤维增生、胆管扩张更明显,血脂水平高低还可影响华支睾吸虫感染后宿主的免疫应答。     

台山市华支睾吸虫病基线调查

目的调查台山市华支睾吸虫病流行现况，为大规模开展华支睾吸虫病防治工作和评价防治效果提供科学依据。方法以随机抽样方法抽取台山市台城镇、大江镇作为调查点，采用改良加藤氏厚片法粪便检查人群华支睾吸虫卵。并开展中间宿主和保虫宿主调查；对华支睾吸虫住院慢性病人进行危害性调查。结果华支睾吸虫总感染率为6．8％；男性感染率为7．0％，女性感染率为6．5％，以20～49岁年龄组最高。解剖淡水鱼、猫、狗、老鼠没发现华支睾吸虫囊幼和成虫，但9份猫肝中均发现华支睾吸虫卵。结论华支睾吸虫已对当地居民的健康造成较严重的危害，应采取综合措施减少华支睾吸虫感染。     

Nrf2和Trx1在华支睾吸虫感染小鼠肝脏中表达的初步研究

目的分析华支睾吸虫感染小鼠肝脏中Nrf2和Trx1编码基因的表达情况,初步探讨Nrf2及Trx1在华支睾吸虫致病过程中的作用。方法选用健康Balb/c小鼠建立华支睾吸虫感染模型,分别在实验第0、3、5、7、10、14、21、28和35d摘除小鼠眼球采血,分离血清,检测血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性;颈椎脱臼处死小鼠取肝脏,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏中Nrf2和Trx1的m RNA表达情况。结果与对照组相比,感染组小鼠在感染第5、7、10、14、21和35d血清ALT活性显著升高(P0.05);分别为(19.9332±1.98180)U/L、(64.3699±14.53874)U/L、(46.7455±6.27572)U/L、(99.0038±25.34329)U/L、(46.7590±8.85478)U/L和(50.3374±14.19886)U/L。感染组小鼠抗氧化应激通路上游基因Nrf2和下游Trx1的m RNA表达升高;其中Nrf2在感染第5天升高显著(P0.05);Trx1在感染第21d升高显著(P0.05)。结论 Nrf2和Trx1 m RNA在华支睾吸虫感染过程中表达升高,提示Nrf2/Trx1通路可能在华支睾吸虫致病过程中发挥一定的作用。     

开平市华支睾吸虫病调查与防治研究

目的：为了解开平市华支睾吸虫感染状况，探索大规模调查华支睾吸虫病流行病学的诊断技术和防治措施。方法：采用改良加藤氏厚涂片法粪检和ELISA法血检水口镇东方红村和黎村人群华支睾吸虫卵和抗体。华支睾吸虫感染患者作腹部B超检查及服用阿苯哒唑驱虫糖。开展中间宿主和保虫宿主调查。结果：华支睾吸虫总感染率为34．1％。其中东方红人群感染率34．8％，黎村感染率33．3％。男、女性感染率分别为44．4％和26．8％。以15～60岁年龄组最高。虫卵密度EPG平均值男、女性分别为200．2和164．8，多属轻度感染。酶标检测感染率36．0％，与粪检的34．1％无显著性差异。服用阿苯哒唑驱虫糖后虫卵阴转率为95．5％。在当地鱼塘的鱼苗中找到华支睾吸虫囊蚴，解剖当地犬和猫发现有华支睾吸虫成虫。结论：开平市已是华支睾吸虫流行区之一，酶标检测可做为大规模流行病学调查。阿苯哒唑驱虫糖可有效防治华支睾吸虫感染。     

陈氏狸殖吸虫与猫及大鼠寄生适宜性的研究

目的研究陈氏狸殖吸虫与猫及大鼠两种宿主的适宜性,为并殖吸虫的实验研究提供依据。方法从陈氏狸殖吸虫流行区采集溪蟹,分离囊蚴,经口感染粪检肺吸虫卵阴性的实验动物家猫、SD大鼠。40d后检查粪便,观察排出虫卵的时间,90-112d内剖杀动物,回收虫体,计算获虫数及成虫率。结果实验家猫阳性感染1只,粪检出现虫卵的时间为感染后第50d;大鼠阳性者4只,排虫卵时间分别为感染后第68、68、70、70d。猫体内获虫8条,成虫率为87.5%;大鼠体内共获虫16条,成虫率为43.75%。结论陈氏狸殖吸虫与猫和大鼠的适宜性均比较好,这两种动物均可作为陈氏狸殖吸虫的实验终宿主。     

华支睾吸虫感染对野生型和Tlr2-/-C57BL/6J小鼠肝胆管损伤差异的研究

目的 观察C57BL/6J野生型、Tlr2-/-两种小鼠感染华支睾吸虫后肝脏的病理变化,探讨Toll样受体2(TLR2)对华支睾吸虫感染致胆管损伤的影响.方法 建立野生型、Tlr2-/-小鼠华支睾吸虫感染模型即每只小鼠灌胃45只华支睾吸虫囊蚴,对照组灌胃等量生理盐水.感染第4周安乐死法处死小鼠,采用比色法检测小鼠血清中...     

恒河猴感染华支睾吸虫的初步观察

用恒河猴感染华支睾吸虫获得成功。两只恒河猴获虫率分别为9.9％及31.59％。所得虫体都已发育成熟。感染后30天所得虫体平均长5.15mm,宽1.005mm。感染后48天所得虫体平均长8.0625mm,宽1.34mm。两猴粪便中都发现成熟虫卵。说明恒河猴可作为华支睾吸虫的终宿主。‘ 猴华支睾吸虫病早期表现主要特点有三:嗜酸性粒细胞增多症(感染后30天);慢性炎症时(感染后48天)病灶区内浆细胞显著增多;肝内胆管上皮细胞腺瘤样增生,其分泌功能亢进,经奥辛蓝染色,上皮细胞核上区呈深蓝色,提示富含酸性粘多糖。     

华支睾吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶的表达定位及其酶活性的研究

目的克隆和表达有酶活性的华支睾吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(CsTPx),并进行组织定位研究,为进一步研究其功能奠定基础。方法利用生物信息学方法从华支睾吸虫基因组文库中识别硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)基因,并对蛋白的结构特征和相关生物学和免疫学功能进行预测。从华支睾吸虫成虫cDNA中扩增目的基因,克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,进行蛋白纯化,免疫印迹鉴定、组织定位及其酶活性的检测。结果华支睾吸虫TPx基因全长2 175 bp,有一大一小的两个内含子,其编码区序列长度为636 bp,编码212个氨基酸;该蛋白第1~17位氨基酸为其信号肽序列,第51~74位氨基酸为跨膜区,属于经典的2-Cys过氧化物还原酶。重组蛋白可被感染了华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该蛋白定位于成虫的皮层、肠支、卵黄腺、虫卵和囊蚴的体壁中。酶活性检测结果表明,在一定范围内,CsTPx还原H2O2呈剂量和时间依赖性。抗体对酶活性有影响,在合适的抗体水平可以促进酶活性。结论 CsTPx可在大肠杆菌中进行功能性表达,其产物具有良好的免疫学和生物学活性。     

Tim-2在日本血吸虫感染小鼠Th2优势应答中的作用

目的观察日本血吸虫感染小鼠T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-2(Tim-2)基因表达与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的动态变化,探讨Tim-2在血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫平衡中的可能机制。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用RT-PCR、ELISA法检测不同感染阶段小鼠脾淋巴细胞中Tim-2和IFN-γ、IL-4水平;HE染色观察组织学改变;免疫组化法检测Tim-2在肝脏虫卵肉芽肿中的表达。结果日本血吸虫尾蚴感染后3周小鼠脾淋巴细胞IFN-γmRNA及其培养上清中蛋白表达水平均显著增高(P<0.01);而IL-4 mRNA及其培养上清中蛋白表达水平于感染6周、9周显著增高(P<0.01);HE染色显示随着血吸虫感染进程的发展,肝脏肉芽肿面积逐步增大,6周达峰值,随后有所下降;RT-PCR结果显示尾蚴感染6周的小鼠脾细胞中Tim-2基因表达较正常对照组显著增高;免疫组化法分析显示,小鼠肝脏虫卵肉芽肿Tim-2表达主要分布在虫卵及其周围。结论慢性血吸虫感染可诱导宿主全身性的Th2优势应答,Tim-2可能参与慢性感染宿主机体Th1/Th2免疫平衡的调节。     

华支睾吸虫病流行区流行病学研究

目的 为了解广州市番禺区华支睾吸虫流行情况，于2000年6月～2002年10月在番禺沙湾镇的紫坭村和石基镇的前锋村开展了华支睾吸虫病流行病学调查。方法 采用改良加藤氏厚涂片法粪便检查人群华支睾吸虫卵；华支睾吸虫感染静脉采血作转氨酶、乙肝表面抗原、核心抗体检测和腹部B超检查；开展中间宿主和保虫宿主调查。结果 华支睾吸虫总感染率13．7％。其中紫坭村感染率18．2％；前锋村感染率8．O％；男性感染率为22．3％，女性感染率为6．6％，以20～50岁年龄组最高。华支睾吸虫感染HBsAg阳性率为20．9％，HBeAb阳性率为40．3％；42．4％感染出现不同的肝胆道病变；在当地鱼塘的鱼苗中找到华支睾吸虫囊蚴；解剖当地犬、猫中，均发现华支睾吸虫成虫。结论 番禺区是华支睾吸虫重点流行区之一，且华支睾吸虫已对当地群众的身体健康造成了严重危害。     

感染华支睾吸虫后小鼠肝脏的病理学观察

目的:了解小鼠感染华支睾吸虫后肝脏的病理变化,为研究华支睾吸虫的致病机制提供参考依据。方法:胃蛋白酶消化法获取华支睾吸虫囊蚴,人工灌胃法感染小鼠,采用病理学方法取材、固定及染色,观察小鼠肝脏的病理学变化。结果:不同感染时间的炎症反应程度存在差异,出现纤维组织增生、胆管壁增厚、嗜酸性囊肿等病理学现象。结论:小鼠感染华支睾吸虫后肝脏出现了显著的病理学改变,这种现象对于研究人体内华支睾吸虫的致病作用具有一定的参考价值。     

斯氏狸殖吸虫动物模型的研究

斯氏狸殖吸虫囊蚴经口感染家兔、小鼠、豚鼠和大鼠,25～120d分期解剖。重点观察肺部虫囊有无成虫及虫卵,以寻求适宜的宿主作为斯氏狸殖吸虫的实验动物。检查结果家兔、小鼠和豚鼠在接种后死亡甚多。均未查到成虫,仅见童虫。接种38只大鼠,感染60d即在肺部出现虫囊;感染90d及110d的肺部虫囊检出童虫及少部分成虫;感染120d时,87.5％虫体成熟,且成虫及卵的形态与感染犬体的斯氏狸殖吸虫的形态相似。提示大鼠是建立斯氏狸殖吸虫动物模型的理想动物。     

生食鱼虾,小心肝吸虫

<正> 肝吸虫病又称华支睾吸虫病,是由华支睾吸虫成虫寄生于肝内胆小管所致,虫卵随患者或受感染动物(猫、大等)的粪例排入水中,被淡水螺吞食,在其体内发育成尾蚴;尾蚴从螺体逸出,浮游水中,钻入淡水鱼是,在其体内成囊蚴,当人或猫、犬等动物吃了生鱼或未煮熟的鱼虾时被感染;蚴虫进入肝内胆小管发育为成虫。肝吸虫是一种人畜共生寄生虫,肝吸虫病的传染源为患者,带虫者和保虫宿主,肝吸虫保虫宿主的动物有40多种,常见的有猫、狗、     

不同宿主来源的华支睾吸虫同工酶比较观察

目的:通过对不同宿主华支睾吸虫的同工酶研究,了解其在不同宿主中的变化情况.方法:应用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶板状电泳(CG-PAGE)对50 d虫体的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、酯酶(EST)、过氧化物酶(PO)进行电泳观察,通过凝胶成像软件对酶(蛋白)带的迁移率、相对浓度分布、光密度等结果进行分析.结果:来自不同宿主(大鼠、犬、豚鼠、兔、猫)的虫体主要酶带特征基本相同,但次要酶带存在一定差异.结论:不同宿主的华支睾吸虫同工酶存在着一定的变化,实验结果为华支睾吸虫在不同宿主中的发育、生理、生化提供实验资料.     

淮南地区发现东方次睾吸虫

目的:了解淮南地区东方次睾吸虫终宿主感染情况。方法:雌性家鸭60只,18月龄,体重(2.5±0.5)kg,分别购自于淮南地区窑河和高溏湖。剖杀家鸭,在其肝胆管内分离虫体,并计算家鸭的感染率。结果:家鸭肝胆管内检出东方次睾吸虫成虫,分离阳检率为18.3%(11/60)。结论:淮南地区沿岸居民饲养的家鸭中可检出东方次睾吸虫成虫。     

华支睾吸虫LAP2基因的生物信息学分析及克隆表达、组织定位

目的利用生物信息学方法分析华支睾吸虫LAP2全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化,为进一步研究LAP2功能奠定基础。方法利用生物信息学相关软件,分析华支睾吸虫LAP2基因及其蛋白的结构、生物学和免疫学功能特征。针对LAP2的EST序列的编码区设计引物,从华支睾吸虫囊蚴cDNA质粒中扩增目的基因,克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,经PCR、双酶切及DNA测序鉴定的阳性克隆诱导目的蛋白表达、亲和层析纯化、免疫印迹鉴定及组化定位。结果华支睾吸虫LAP2基因全长为1761bp,其编码序列长度为1662bp,编码553个氨基酸,理论分子量是59696.5Da,与人的该基因氨基酸序列相似性为26.7%,一致性仅为15.4%。该基因在大肠杆菌中可被高效表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该重组蛋白定位于华支睾吸虫成虫的肠支及表膜。结论华支睾吸虫LAP2在大肠杆菌中呈高效的可溶性表达,具有良好的抗原活性,可能为华支睾吸虫成虫分泌排泄抗原的组份之一。     

人体5种小型吸虫病原形态观察

目的通过对东方次睾吸虫(Metorchisorientalis)、华支睾吸虫(Clonorchissinensis)、钩棘单睾吸虫(Haplorchispumilio)、扇棘单睾吸虫(Haplorchistaichui)和台湾棘带吸虫(Centrocestusformosanus)的形态观察,为鉴别这些人体寄生虫病病原提供科学依据。方法收集5种吸虫的成虫、虫卵、囊蚴,并进行形态、大小测量和寄生部位观察。结果东方次睾吸虫和华支睾吸虫成虫寄生部位完全相同,都是在胆管和胆囊内。其他3种则在小肠内。囊蚴寄生部位:除台湾棘带吸虫在鱼鳃外,其余4种均在鱼肉内。虫卵特征:5种吸虫除卵盖和外壳光洁度有些差别外,其余差别甚微。囊蚴特征:东方次睾吸虫囊壁很厚,而其他4种则很薄。其它特征:台湾棘带吸虫的排泄囊呈“工”字形,扇棘单睾吸虫生殖吸盘上的小棘呈杆状排列成葵扇状;而钩棘单睾吸虫则呈点状并围成一圈。成虫特征:华支睾吸虫最大,呈葵花仔状;东方次睾吸虫其次,呈叶片状;钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫居中,两者均呈鞋状;台湾棘带吸虫最小,呈酒瓶状。结论发现上述5种吸虫的成虫、虫卵及囊蚴时,必须根据各自形态、大小等特征,认真鉴别。