华支睾吸虫成虫抗原纯化及鉴定

用葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析法、三氯醋酸-乙醇提取物DEAE-Cellulose(DE52)柱层析法、尿素提取物Sepharose 4B柱层析法对华支睾吸虫成虫可溶性抗原进行部分纯化,获得8种不同的抗原活性组分.并用免疫电泳、聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳(PAGE)、薄层等电聚焦电泳、微板法动力学酶联免疫吸附试验进行鉴定.认为经纯化的抗原组分较粗抗原更适宜于临床诊断及考核疗效     

全蝎胃蛋白酶酶解混合多肽体外抗凝活性研究及其组成分析

目的采用凝胶过滤层析法分离全蝎酶解液的抗凝活性部位,并检测活性部分的分子量分布范围。方法采用紫外检测法、考马斯亮蓝法检测,合并凝胶层析蛋白流分;以APTT凝血时间为指标,检验各组分体外抗凝活性;通过MALDI-TOF-MASS法检测分离部分的分子量分布范围。结果全蝎酶解液通过凝胶过滤层析分得的2组分抗凝效果显著,分子量分布范围850~5 300。结论体外抗凝试验表明:凝胶过滤层析法纯化分离全蝎胃蛋白酶酶解液方法可行,MALDI-TOF-MASS表明活性组分为小分子肽类。     

不同生长期罗汉果皂苷对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用研究

目的研究不同生长期罗汉果皂苷对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用。方法选用果实生长期为30d、50d、90d的罗汉果皂苷提取物,在α-葡萄糖苷酶与4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)作为底物的反应体系中筛选出具有良好抑制作用的罗汉果提取物,并观察罗汉果皂苷对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结果罗汉果皂苷对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用与剂量正相关,50d罗汉果皂苷提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用强于30d和90d罗汉果皂苷。经酶动力学研究发现,50d罗汉果皂苷对α-葡萄糖苷酶的抑制作用属于混合型抑制。50d罗汉果皂苷在0.05~50μg/ml范围内对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性呈现先促进后抑制的趋势。浓度为5.0μg/ml和10.0μg/ml时的罗汉果皂苷能一定程度上抑制Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性。结论生长期50d的罗汉果皂苷类提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用强于其他生长期(30d、90d)的罗汉果皂苷提取物,能在体外剂量依赖性地直接抑制α-葡萄糖苷酶的催化活性,并抑制Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性。     

十种中药提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的:观察10种中药提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用.方法:以麦芽糖为底物,观察10种中药提取物(500 g/L)对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,设阿卡波糖为阳性对照.取反应液0.01 mL,用氧化酶法测定生成葡萄糖的浓度;另取反应液,采片j酶标仪测定吸光度,计算小同中药提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制率.取3种对α-葡萄...     

高寒菊科植物提取物中α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选

目的:从高寒菊科植物中筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂.方法:采用α-葡萄糖苷酶活性测定方法,对37种经水提取的高寒菊科植物进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性的筛选.结果:在样品浓度0.625mg/mL反应体系下,5种高寒菊科植物水提取物显著抑制α-葡萄糖苷酶活性,抑制率达到50%上.结论:α-葡萄糖苷酶活性测定结果显示,某些高寒菊科植物提取物能显著抑制a-葡萄糖苷酶活性,如果对其进一步的分离、纯化并提取活性部位,有望获得高活性的α-葡萄糖苷酶抑制荆.     

黄杞叶提取物降血糖作用的研究

目的研究黄杞叶提取物对α-葡萄糖苷酶活性以及对正常小鼠糖耐量的影响。方法水煎黄杞叶,得黄杞叶水提物,再经聚酰胺柱色谱分离,得到水洗脱组分(Fr-1)、20%乙醇洗脱组分(Fr-2)、95%乙醇洗脱组分(Fr-3)和90%丙酮水洗脱组分(Fr-4)。采用体外α-葡萄糖苷酶活性筛选模型,测试黄杞叶水提物和各组分样品对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。通过测定小鼠空腹血糖以及糖耐量,评价样品对血糖水平的影响。结果黄杞叶水提物和Fr-3对体外α-葡萄糖苷酶活性具有明显的抑制作用,且呈良好的量效关系,Fr-3的抑制作用较黄杞叶水提物增强,程度与样品浓缩倍数吻合。在小鼠体内实验中,黄杞叶水提物和Fr-3对小鼠空腹血糖没有显著影响,但使负荷高糖的小鼠血糖水平显著降低。结论黄杞叶水提物和Fr-3能显著提高正常小鼠的糖耐量,其作用机制可能与抑制α-葡萄糖苷酶活性相关。Fr-3富集黄杞叶水提物的活性成分,是代表黄杞叶水提物相关作用的有效部位。     

石斛合剂及其各组分对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

为探讨石斛合剂及其各组分对 α-葡萄糖苷酶活力的抑制作用 ,采用建立酶 -抑制剂模型的方法测定α-葡萄糖苷酶活性 ,研究降糖中药石斛合剂及其各组分水提物对 α-葡萄糖苷酶活力的影响 ,结果显示石斛合剂及其各组分对 α-葡萄糖苷酶有不同程度的抑制作用 ,说明石斛合剂的降糖机制中可能含有类拜糖平的作用。     

蝎毒抗癌多肽组分Ⅲ的分离方法研究

目的：探索蝎毒抗癌多肽组分Ⅲ(antineoplastic polypeptide-Ⅲfrom APBMV,AP-Ⅲ)的分离和纯化方法。方法：蝎毒经预处理后,分别采用pharose FF阳离子交换凝胶柱(cm×5 cm交换柱,流速0．8 ml／min,梯度洗脱1 200 min)层析法和Sepharose FF阳离子交换凝胶柱与Sephadex G-50凝胶柱(柱：100cm×5 cm;流速：0．5 ml／min)联合层析法,分离AP-Ⅲ,用HPLC仪检测2种方法分离出的AP-Ⅲ的纯度及产率。结果：单独用Sepharose FF阳离子交换凝胶柱分离,AP-Ⅲ产率为2．24％,纯度为89％。Sephadex G-50凝胶柱与Sepharose FF阳离子交换凝胶柱联用,其产率及纯度分别提高至4．72％和％。结论：Sephadex G-50与Sepharose FF联用可提高AP-Ⅲ的产率及纯度,从而为开发和利用AP-Ⅲ提供了实验依据。     

桂花(晚银桂、窈窕淑女和贵妃红)α-葡萄糖苷酶抑制活性

目的:对3个品种(桂花贵妃红、晚银桂和窈窕淑女)的桂花叶和花石油醚提取物α-葡萄糖苷酶抑制作用进行研究。方法:采用索氏提取法提取桂花的叶和花提取物,以96微孔板法测定α-葡萄糖苷酶抑制作用。结果:3种桂花的叶和花均有较好的α-葡萄糖苷酶抑制作用,其中以贵妃红叶提取物的活性最好(IC50=68.26 mg/L),其次为晚银桂叶和窈窕淑女叶部分提取物(IC50=145.25 mg/L和145.08 mg/L),远低于阳性对照Acarbose(IC50=1081.27 mg/L)。结论:3个品种的叶和花部分提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果均很好。     

虎杖提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的研究虎杖水溶性提取物对α-葡萄糖苷酶的作用。方法采用大孔吸附树脂柱色谱法进行虎杖水溶性总提取物初步分离,研究其总提取物和不同组分对α-葡萄糖苷酶活性的影响及其抑制反应的类型。结果虎杖总提取物(RRPC)与30%醇洗脱物(RRPCⅡ)对α-葡萄糖苷酶的IC50分别为74、15μg/mL,而蒸馏水(RRPCⅠ)、50%乙醇(RRPCⅢ)、70%乙醇(RRPCⅣ)、95%乙醇(RRPCⅤ)洗脱物的IC50均大于200μg/mL。结论RRPC及RRPCⅡ能显著抑制α-葡萄糖苷酶活性,RRPCⅡ的抑制机制为可逆性的非竞争性抑制。     

应用α-葡萄糖苷酶抑制剂高通量筛选模型筛选降血糖中药

目的 建立筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂的体外高通量筛选模型,并对30味常用清热解表中药进行筛选.方法 应用大鼠小肠上段提取的α-葡萄糖苷酶,以蔗糖作为底物,通过测定反应体系中葡萄糖的生成量来检测α-葡萄糖苷酶的活性.通过优化酶促反应条件,建立检测α-葡萄糖苷酶活性的比色测定法及其抑制剂体外筛选的方法,并对30味中药共72个样品进行高通量筛选.结果 阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性与文献报道相近;筛选发现鸭跖草、山慈菇和桑叶等3味中药的不同极性提取物对α-葡萄糖苷酶有可重复的抑制作用.结论 应用比色法建立的筛选模型可进行α-葡萄糖苷酶抑制剂的高通量筛选及中药相关活性物质的发现.     

人成纤维细胞样细胞株产生的肿瘤细胞生长抑制因子的初步提取物及其性质

用Sephadex G-200,DEAE-Bio-Gel A和Blue-agarose层析取得人成纤维细胞产生的肿瘤细胞生长抑制因子(HFDI)的初步提取物。用Sephadex G-200和高效液相层折(HPLC)测定,估算其分子量约为55000。HFDI初提物可耐受56℃,半h,于pH 4～9、4℃下24 h,并可在-70℃保存数周。初提物的肿瘤细胞敏感谱与细胞洗液相似,均未查出干扰素活性。     

加拿大蓬α-葡萄糖苷酶抑制作用

目的:评价加拿大蓬提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。方法:通过建立体外α-葡萄糖苷酶抑制模型,对加拿大蓬甲醇、石油醚、乙酸乙酯提取物进行活性筛选,并对提取物浓度与抑制活性关系进行研究。结果:加拿大蓬石油醚提取物(IC50=197.98 mg/L)与乙酸乙酯提取物(IC50=823.92 mg/L)的α-葡萄糖苷酶抑制活性高于阳性对照Acarbose(IC50=1081.27 mg/L),而甲醇提取物的活性(IC50=1655.51 mg/L)低于Acarbose,3种提取物抑制率均随浓度增加而增长。结论:加拿大蓬3种提取物均有一定的α-葡萄糖苷酶的高抑制活性,其中石油醚提取物的活性最高。     

蝎毒及其分离组分对4种肿瘤细胞生长的抑制作用

目的:观察蝎毒(scorpion venom,SV)及其分离组分对4种人肿瘤细胞(肺癌A549细胞、人低分化胃腺癌细胞BGC-823、人肝癌细胞SMMC-7721、人骨髓细胞白血病细胞HL-60)生长的抑制作用.方法:采用Sephadex G-50柱层析法分离蝎毒;用MTT法检测肿瘤细胞的存活率.分别以丝裂霉素C(MMC)及顺铂(C-DDP)为阳性对照药,以蝎毒及其组分1 mg/L、10mg/L和100mg/L的浓度处理4种人肿瘤细胞,作用48 h后,分别观察蝎毒及其分离各组分对上述细胞的影响.结果:用Sephadex G-50柱层析法分得6个峰(AP Ⅰ1,APⅠ2,APⅡ,APⅢ1,APⅢ2,APⅣ),其中蝎毒组分APⅢ1(antineoplastic polypeptideⅢ1)对HL-60,SMMC-7721,BGC和A549细胞生长有明显的抑制作用,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05,或P＜0.01).对A549细胞和HL-60细胞具有较好的剂量-效应关系.结论:蝎毒分离6个组分中,蝎毒组分APⅢ1对HL-60,SMMC-7721,BGC和A549 4种人肿瘤细胞具有明显的生长抑制作用,剂量效应关系明显.     

我校分离和标记α-银环蛇毒素成功

我校防护医学教研室和369研究室同位素组,于今年一月至四月,用CM Sephadex G-50和Sephadex G-25成功地从银环蛇毒液中分离出纯α-银环蛇毒素,并标记出~(125)I-α-银环蛇毒素。经初步胆硷能受体试验证明,质量良好,接近国外同类产品水平。 ~(125)I或~3H标记的α-银环蛇毒是近代较理     

荔枝核降血糖有效部位的研究（一）

目的：从中药荔枝核中提取分离降血糖的有效部位和对该部位进行化学性质的研究。方法：采用动物实验和α-葡萄糖苷酶活性测定对荔枝核各部位进行活性筛选,采用酚-硫酸等方法对有效部位进行化学性质的研究。结果：荔枝核95%乙醇提取物对Ⅱ型糖尿病大鼠具有明显降血糖作用,正丁醇萃取物水不溶部分具有更强的α-葡萄糖苷酶抑制作用,该部位总皂苷含量为46.06%。结论：荔枝核的乙醇提取物具有明显的降血糖作用,该部位的正丁醇萃取物和正丁醇萃取物的水溶和水不溶部分均具有明显抑制α-葡萄糖苷酶活性。该活性可能为其中含有的皂苷类物质引起。     

夏枯草提取物对α-葡萄糖苷酶抑制作用研究

目的 从夏枯草中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂.方法 采用水提和水提醇沉方法 得到夏枯草水提物、粗多糖、浸膏.通过PNPG比色法检测α-葡萄糖苷酶活性.结果 不同浓度夏枯草水提物、粗多糖对该酶抑制率与浸膏相比差异显著(P<0.01);夏枯草水提物、粗多糖IC50与浸膏IC50相比差异显著(P<0.01),夏枯草水提物与粗多糖IC50之间无显著性差异(P>0.05).结论 夏枯草提取物有抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用.     

铁脚草的化学成分研究

目的：研究铁脚草的化学成分。方法：采用90%乙醇冷渗漉提取,经硅胶柱色谱和凝胶柱色谱Sephadex LH-20进行分离纯化,并采用理化方法和波谱数据分析进行结构鉴定。结果：从铁脚草的90%乙醇提取物中分离并鉴定7个化合物,分别为α-菠菜甾醇、香草醛、槲皮素、木栓酮、丁香脂素、齐墩果酸与α-菠甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。结论：化合物香草醛、槲皮素、木栓酮、丁香脂素、齐墩果酸与α-菠甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷均为首次从该植物中分离得到。     

降糖补阴中药对α-葡萄糖苷酶的影响

α-葡萄糖苷酶 (EC3 .2 .1 2 0 ;α-glucosidase)是一种存在小肠绒毛粘膜细胞刷状缘的酶类 ,通过水解 α-1 ,4糖苷键 ,可以从淀粉和其它有关多糖的非还原端水解葡萄糖。人体对摄入的淀粉、蔗糖等碳水化合物的吸收利用 ,依赖于小肠内该酶的活性[1] 。资料表明 ,α-葡萄糖苷酶的抑制剂在防治糖尿病、肥胖症、抗肿瘤和抗病毒等方面具有重要的作用 [2 ]。对于糖尿病诊治 ,祖国医学有数千年的历史。在历代治疗糖尿病方剂中 ,补阴药应用广泛 ,但其降糖作用的确切环节尚未明了 ,故选取临床常用的补阴中药沙参、麦冬、天冬、石斛、玉竹、百合、枸杞…     

双益方、组方单味中药及其有效成分对α-葡萄糖苷酶、二肽基肽酶-4抑制作用实验研究

目的:研究双益方、组方单味中药及其有效成分对α-葡萄糖苷酶、二肽基肽酶-4的抑制作用。方法:建立体外α-葡萄糖苷酶活性筛选模型,测定、计算各实验组对α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)抑制率和IC50值,检测各成分对α-glucosidase的抑制作用;建立二肽基肽酶4(DPP-4)抑制作用的体外筛选模型,研究双益方及其有效成分对DPP-4的抑制作用。结果:当双益方提取物浓度达到250μg·L-1时,对α-葡萄糖苷酶的抑制率为91.52%,其IC50值为(17.25±1.06)μg·L-1;双益方组方中药中,以黄芪对α-葡萄糖苷酶的抑制作用较好,其IC50值为(7.68±0.32)μg·L-1;双益方有效成分中,以1-脱氧野尻霉素对α-葡萄糖苷酶的抑制作用较好,其IC50值为(0.85±0.04)μg·L-1,与阿卡波糖(0.39±0.02)μg·L-1较为接近;黄芪、山茱萸、黄连、葛根、桑白皮、佩兰、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、熊果酸、马钱苷、小檗碱对DPP-4抑制作用10%;1-脱氧野尻霉素、双益方提取物、黄芪甲苷、葛根素对DPP-4抑制作用10%。选择对DPP-4抑制率10%的双益方提取物、单味药及有效成分进行DPP-4抑制率复筛,对DPP-4抑制作用顺序为磷酸西格列汀1-脱氧野尻霉素双益方提取物黄芪甲苷葛根素。对DPP-4的IC50分别为:1-脱氧野尻霉素(18.78±1.08)μg·L-1,双益方提取物(74.52±3.24)μg·L-1,黄芪甲苷(50.24±2.22)μg·L-1,葛根素(100.24±4.25)μg·L-1。结论:抑制α-葡萄糖苷酶及DPP-4活性可能是该复方治疗2型糖尿病的作用机制。