大白兔胸主动脉平滑肌细胞、成纤维细胞的培养

目的：探讨以简便、高效的方法获取血管平滑肌细胞、成纤维细胞,为相关研究提供实验材料。方法：切取兔胸主动脉,组织块法培养平滑肌细胞、成纤维细胞并进行倒置显微镜下观察、HE染色和α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白免疫组化染色。结果：95%的组织块存活,5代的平滑肌细胞、成纤维细胞纯度达98%以上。组织块于接种后6～8d即有细胞以垂直方向从组织块边缘迁移游出,呈放射状排列。2～4周出现＂峰＂、＂谷＂状生长特点,倒置显微镜、HE染色和α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白免疫组化染色均示平滑肌细胞、成纤维细胞。结论：组织块培养方法可简便、高效地培养、扩增并传代胸主动脉壁平滑肌细胞、成纤维细胞。     

血小板衍生生长因子-BB对平滑肌细胞和成纤维细胞的作用及机制研究进展

血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)具有促有丝分裂、分化、趋化和参与血管生成的特性,是多种不同细胞类型重要的有丝分裂原,包括成纤维细胞和平滑肌细胞(SMCs),可调控细胞增殖、迁移能力以及细胞外基质(ECM)的合成,参与多种疾病发生、发展,如动脉粥样硬化(AS)、肺部相关疾病、肝纤维化等.近年来许多研究揭示了PD...     

尼群地平对猪主动脉平滑肌细胞泡沫化的影响

为了探讨尼群地平抗动脉粥样硬化的机制，本实验观察了不同剂量的尼群地平对培养的猪主动脉平滑肌细胞泡沫化过程的影响。结果表明，剂量为２．５μｇ／ｍｌ的尼群地平能有效地抑制猪主动脉平滑肌细胞泡沫化。     

大鼠主动脉平滑肌细胞的体外培养和观察

目的 建立大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养模型，为动脉粥样硬化等心血管疾病的发病机制的研究提供了重要手段。方法 将大鼠主动脉翻转，两端结扎，用0.1%胶原酶消化血管内皮细胞，剩余血管剪成小块均匀种植于培养瓶底，加入DMEM培养液培养，观察血管平滑肌细胞的生长，结果 平滑肌细胞48h后贴壁生长，早期呈多角形，以后呈梭形伸展，胰酶消化后平滑肌细胞可传6－7代。结论 此方法简单易行，是获得血管平滑肌细胞的一种可靠方法。     

大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养及其临床意义

目的:建立大鼠主动脉平滑肌细胞的组织贴块培养法,进一步探讨其临床应用价值。方法:取大鼠主动脉切成1mm3的小块,均匀的贴在细胞培养瓶壁上,用RPMI1640培养基培养,并用透射电镜和相差显微镜进行鉴定。结果:相差显微镜下可见细胞呈梭形或长梭形,培养3周后细胞可重叠生长达多层,高低起伏呈“峰”“谷”状;透射电镜下见到平滑肌细胞的胞浆内有很多与细胞纵轴平行的肌丝及其相连的致密体,部分细胞周围可见肌膜。结论:贴块法培养平滑肌细胞具有方法简单、成功率高、稳定性强等优点,适于临床进行心血管疾病病因和机理的研究。     

L-精氨酸对高血压大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的 探讨一氧化氮前体L-精氨酸对肾血管性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响.方法 采用两肾一夹(2K1C)型肾血管性高血压大鼠模型.所有大鼠被随机分为4组(每组10只):假手术对照组;高血压对照组(2K1C组);L-精氨酸治疗组,于术后第5周开始给予L-精氨酸200 mg·kg-1·d-1;L-NAME处理组,于术后第5周开始同时给予L-NAME 10 mg·kg-1·d-1及L-精氨酸200 mg·kg-1·d-1.采用标准尾套法间接检测清醒大鼠血压.给药8周后,处死大鼠,用比色法测定血浆一氧化氮(NO)含量;分离胸主动脉检测胸主动脉平滑肌细胞凋亡(原位耒端标记法).结果 与假手术组大鼠相比,2K1C组大鼠血压明显升高,胸主动脉平滑肌细胞凋亡指数升高,而血浆NO含量明显降低.应用L-精氨酸治疗则明显降低了肾动脉狭窄术后高血压大鼠的血压,升高了血浆NO含量,同时也使胸主动脉平滑肌细胞凋亡指数进一步增大.NOS抑制剂L-NAME明显抑制了L-精氨酸的上述作用.结论 长疗程L-精氨酸治疗可刺激高血压血管平滑肌细胞凋亡增加.     

大鼠腹主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的 探讨一种简单、经济获取腹主动脉血管平滑肌细胞的方法,为相关研究提供实验材料.方法 应用改良组织贴块法进行原代培养,胰酶消化传代,运用自然纯化法进行细胞纯化,并使用相差显微镜和SP试剂盒对细胞进行形态学观察以及免疫组化鉴定.结果 90%的组织块接种存活,培养细胞呈典型的"谷峰状"生长,免疫荧光化学技术检测显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达.结论 本法简便可靠,短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞.     

低强度脉冲超声抑制血管平滑肌和成纤维细胞的钙化

目的:探究低强度脉冲超声(low intensity pulsed ultrasound,HPUS)对高钙磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(rat vascu-lar smooth muscle cell,rVSMC)及大鼠血管成纤维细胞(rat vascular adventitial fibroblasts,rVAF)钙...     

MAD1基因在主动脉夹层中的表达及对主动脉平滑肌细胞的影响

收集病变的升主动脉中膜组织标本为主动脉夹层组;收集同期在本院行尸检且无手术史、大血管病变史的升主动脉壁内组织标本18份为对照组; RT-PCR和Western blot检测有丝分裂阻滞缺陷蛋白(MAD1) mRNA和蛋白表达水平。在体外建立MAD1基因高表达人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)模型,检测细胞增殖和凋亡情况以及凋亡相关蛋白。结果显示主动脉夹层组患者主动脉夹层中MAD1 mRNA和蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.05)。随着转染时间的延长,各组细胞增殖水平均逐渐增加,转染48 h、72 h后MAD1过表达组细胞增殖情况低于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。转染48 h后,MAD1过表达组细胞凋亡率明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。MAD1过表达组含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9mRNA和蛋白相对表达量明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.05)。实验结果表明,MAD1过表达可通过抑制细胞增殖,激活细胞外凋亡途径和细胞内凋亡途径来促进人主动脉平滑肌细胞HA-VSMC细胞凋亡,参与主动脉夹层的发生与发展。     

MAD1基因在主动脉夹层中的表达及对主动脉平滑肌细胞的影响

收集病变的升主动脉中膜组织标本为主动脉夹层组;收集同期在本院行尸检且无手术史、大血管病变史的升主动脉壁内组织标本18份为对照组;RT-PCR和Western blot检测有丝分裂阻滞缺陷蛋白(MAD1) mRNA和蛋白表达水平。在体外建立MAD1基因高表达人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)模型,检测细胞增殖和凋亡情况以及凋亡相关蛋白。结果显示主动脉夹层组患者主动脉夹层中MAD1 mRNA和蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.05)。随着转染时间的延长,各组细胞增殖水平均逐渐增加,转染48 h、72 h后MAD1过表达组细胞增殖情况低于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。转染48 h后,MAD1过表达组细胞凋亡率明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。MAD1过表达组含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA和蛋白相对表达量明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.05)。实验结果表明,MAD1过表达可通过抑制细胞增殖,激活细胞外凋亡途径和细胞内凋亡途径来促进人主动脉平滑肌细胞HA-VSMC细胞凋亡,参与主动脉夹层的发生与发展。     

茶多酚对原代培养的大鼠皮肤角朊细胞和成纤维细胞生长的 …

目的 探讨茶我酚对原代培养的皮肤角朊细胞和成纤维细胞生长作用的影响。方法 利用原代２的两种主要的皮肤细胞－－角朊细胞和成纤维细胞,采用丙酮酸比色法、ＴＢＡ比色法和ＤＴＮＢ（双硫代对硝基苯甲酸）法测定细胞２的上清液胞浆酶（ＬＤＨ）释放情况,脂质氧化产物（ＭＤＡ）、谷胱甘这氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）,并测定培养细胞的生长情况,对茶多酚在皮肤中可能起到的作用进行评价。结果 在加入茶多酚后不同时间地多数发现     

对平滑肌细胞再生的实验研究

我们在家兔膀胱壁人工创伤实验中见到了平滑肌细胞受直接创伤后首先出现退化,经15天后创伤灶内充满了平滑肌细胞。在实验过程中我们未见到平滑肌细胞的分裂,只发现了成纤维细胞的分裂。在电镜下见到了由成纤维细胞分化演变为平滑肌细胞的过渡细胞,即肌成纤维细胞。肌成纤维细胞可分化为平滑肌细胞。不排除有些是来源于未完全死亡而恢复的平滑肌细胞。     

人和大鼠胸主动脉成纤维细胞的原代培养

目的培养成纤维细胞,建立不同种属来源的胸主动脉成纤维细胞的培养方法并比较其形态差异。方法用消化法和贴壁法分离不同来源的成纤维细胞,利用差速培养法纯化成纤维细胞,并对所培养的细胞进行倒置显微镜观察和苏木素-伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养细胞行波形蛋白免疫染色鉴定。结果接种24h后细胞全部贴壁,48h后人胸主动脉成纤维细胞体积增大并伸出伪足,形状以梭形或不规则形为主;而大鼠胸主动脉的成纤维细胞生长的相对较慢。结论用Ⅰ型胶原消化动脉的成纤维细胞效果较好,用差速生长纯化的成纤维细胞可用于实验研究。     

内皮素对大鼠主动脉平滑肌作用的研究

浓度为1.0～18.0nmol/L的内皮素可引起大鼠主动脉产生浓度依赖性收缩,其EC_(50)为3.75±0.75nmol/L。正常对照组中平滑肌细胞S+G_2M期细胞的比例基本稳定在26.3～29.6％的范围内;浓度为10.0和100.0pmol/L的内皮素可使S+G_2M期细胞呈浓度依赖性(P<0.01)和时间依赖性(P<0.01)增加。10.0pmol/L的内皮素作用30min后ATP含量经短暂升高后维持在低水平。结果表明内皮素具有缩血管作用及促进平滑肌细胞增生的作用,上述作用可能在高血压发病机制中有一定的意义。     

低温保存对大鼠胚胎脊髓细胞的影响

本实验目的是研究低温存保对大鼠胚胎脊髓细胞的影响。选用胎龄１４天的Ｗｉｓｔａｒ大鼠，分离胚胎脊髓，剪成１ｍｍ＾３的小块。放入冻存液，逐渐降温，最后置于液氮中保存。１５天后取出，快速复温，冲洗，并植入正常大鼠脊髓内，同时对死亡和存活细胞计数和涂片，经计算机图像处理，算出细胞存活率和核质比例。实验结果显示：经低温保存的胚胎脊髓细胞存活率低于未经低温保存组；两组的存活细胞形态和核质比无明显改变。经过低温     

二甲基亚砜和1,2-丙二醇对深低温保存兔颈总动脉平滑肌细胞的影响

①目的 用二甲基亚砜(Me2SO)和1．2-丙二醇(PROH)深低温保存兔颈总动脉,评价两种保护剂对深低温保存复温后血管平滑肌细胞再生能力和超微结构的影响。②方法 将免颈总动脉用含有1.5mol／L的Me2SO或1．5mol／L PROH的低温保护剂深低温保存，并在冰袋中缓慢复温．新鲜血管作为对照。复温后和新鲜血管的平滑肌细胞进行体外培养，观察平滑肌细胞的再生能力;同时在透射电镜下观察平滑肌细胞的超微结构。③结果 体外培养结果显示，新鲜血管的平滑肌细胞体外培养24h后开始生长．PROH保存血管的平滑肌细胞在培养24～36h后开始生长；Me2SO保存血管的平滑肌细胞体外培养36～48h开始生长．而且再生细胞的数目显著少于前者，生长速度慢。透射电镜下，与新鲜血管的平滑肌细胞相比．PROH或Me2SO冷冻保存后血管的平滑肌细胞的线粒体等细胞器均无显著变化。但是Me2SO保存血管的平滑肌细胞核染色质的电子密度发生显著变化，异染色质的电子密度明显降低，与新鲜或PROH深低温保存血管平滑肌细咆核常染色质的低电子密度和异染色质的高电子密度明显不同。④结论 1.5mol／L PROH能够有效地保持平滑肌细胞的活性．并且对细胞的再生能力没有明显的损伤作用。Me2SO损伤平滑肌细胞的再生能力、同时引起平滑肌细胞核染色质超做结构的变化。     

主动脉平滑肌细胞的三维培养研究

目的研究主动脉平滑肌细胞(aortic smooth muscle cell,ASMC)在三维培养中是否仍能产生弹性蛋白。方法取一周龄SD大鼠胸主动脉,经原代、传代培养后,和胶原、血清及培养液混合形成ASMC胶原凝胶,进行三维培养;培养2周后用Comori醛复红弹性纤维染色和弹性蛋白免疫组织化学染色,检测细胞胶原凝胶中所产生的弹性纤维,并进行电镜观察。结果传代细胞经α肌动蛋白免疫组织化学染色鉴定,98％以上为ASMC。培养2周的ASMC胶原凝胶切片用二种染色方法均可显示有弹性纤维存在,电镜观察细胞超微结构呈典型的合成表型。结论 ASM在三难培养中能够产生弹性蛋白,并形成弹性纤维。     

大鼠血管平滑肌细胞中bFGF及其受体FGFR-1的基因表达

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体FGFR-1在大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的表达情况。方法：建立大鼠血管平滑肌细胞原代培养并鉴定；使用原位杂交检测VSMCs中bFGF及其受体FGFR-1的mRNA表达；用免疫组织化学和Western Blot技术鉴定bFGF蛋白表达情况。结果：通过光镜和免疫组织化学技术从细胞形态和结构上使VSMCs得到鉴定；原位杂交证实大鼠VSMCs表达bFGF及其受体FGFR-1的mRNA；免疫组织化学表明VSMCs的胞核和胞浆中有bFGF蛋白表达，Western Blot显示bFGF有18KDa、22KDa、22．5KDa3种异构体形式。结论：大鼠血管平滑肌细胞表达bFGF及其受体FGFR-1 mRNA，bFGF有多种异构体形式并分布在VSMCs的胞核和胞浆中。     

小鼠胰岛细胞MHC—DR抗原的诱导表达

本文报告肿瘤坏死因子和ｒ－干扰素诱导小鼠胰岛细胞ＭＨＣ－ＤＲ抗原表达对胰岛素分泌的影响。