HLA—DQA反相杂交法分型与多聚酶链反应—单链构象多态性配型的…

为了验证多聚酶链反应－单链构象多态性方法在骨髓移植型中的可靠性和准确性，采用掺入生物素的多聚酶链反应对ＨＬＡ－ＤＱＡ位点基因进行特异性扩增。将所选区分ＨＬＡ－ＤＱＡ位点等位基因的特异性探针点于尼龙膜上，用标记的扩增产物与膜上探针杂交，并用碱性磷酸酶显色法杂交信号，确定待测标本的基因型。     

应用PCR－SSP对异基因骨髓移植供受者HLA－DQA1位点的基因分型

为探索一种可靠性和灵敏性高的ＨＬＡⅡ类基因的配型方法，根据Ｏｌｅｒｕｐ提出的１６个特异性引物序列，用多聚酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对ＤＱＡ＿１基因位点的多态性进行检测和分型，并与多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ－ＳＳＯＰＨ）及多聚酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测结果进行比较，获得了一致的分型结果。ＰＣＲ－ＳＳＰ可分辨出ＤＱＡ＿１位点的纯合体和杂合体等位基因，并能检测出单一碱基的点突变；它将ＰＣＲ扩增和检测两个步骤合并为一次完成，操作更简便、快速。并已将ＰＣＲ－ＳＳＰ方法成功地用于１５对异基因骨髓移植的供、受者的分型。ＰＣＲ－ＳＳＰ作为基因分型的有效技术，可为骨髓来源提供直接的科学依据。     

应用PCR—SSP对异基因骨髓移植供受者HLA—DQA1位点的基因分型

为探索一种可靠性和灵敏性高的ＨＬＡⅡ类基因的配型方法，根据Ｏｌｅｒｕｐ提出的１６个特异性引物序列，用多聚酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对ＤＱＡ１基因位点的多态性进行检测和分型，并与多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ－ＳＳＯＰＨ）及多聚酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测结果进行比较，获得了一致的分型结果。ＰＣＲ－ＳＳＰ可分辨出ＤＱＡ１位点的纯合体和杂合体     

多聚酶链反应／单链构型多态性用于骨髓移植供者选择的研究

在１１个家系内进行了骨髓移植的配型工作。用多聚酶链反应（ＰＣＲ）分别扩增了供受者最具多态性的ＤＲＢ１和ＤＱＢ１基因的第二外显子，这些ＰＣＲ产物变性后在内烯酰胺凝胶电泳上显示具有序理特异性带型格局，即单链构型多态性，ＰＣＲ／ＳＳＣＰ具有简单，经济，灵敏，准确，快速等优点，对骨髓移植供者的选择，尤其是对非血缘关系骨髓移植供者的选择上更显突出的优越性。     

聚合酶链反应—单链构象多态性分析与反向杂交法进行骨髓移植…

用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增骨髓移植（ＢＭＴ）受者及７８例无关供者ＨＬＡ－ＤＰＢ１基因，作单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析，初步选出与受者ＨＬＡ－ＤＰＢ１ＳＳＣＰ带型相同者；最后进行反向杂交检测，确定ＨＬＡ－ＤＰＢ１更为相容的供者。应用上述技术，从７８例无关供者中选择出１例与ＢＭＴ受者基因相同的供者。整个过程快速、经济、准确性高。     

PCR—DNA指纹图识别异基因骨髓移植后重建造血的细胞起源

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增多态性小卫星ＤＮＡ的３３．１，３３．６位点，联合地高辛标记寡核苷酸探针杂交方法，以小卫星ＤＮＡ的ＰＣＲ－ＤＮＡ指纹图为特异性遗传标志，识别２例慢性粒细胞白血病患接受同供髓的骨髓移植后造血重建的细胞起源。结果显示均有供源性造血细胞植活。该方法灵敏度高，特异性强，无同位素污染，尤其适用于同性别、同血型、ＨＬＡ全相合的异基因骨髓移植植活指标的监测。     

PCR－DNA指纹图识别异基因骨髓移植后重建造血的细胞起源

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增多态性小卫星ＤＮＡ的３３．１，３３．６位点，联合地高辛标记寡核苷酸探针杂交方法，以小卫星ＤＮＡ的ＰＣＲ－ＤＮＡ指纹图为特异性遗传标志，识别２例慢性粒细胞白血病患者接受同胞供髓的骨髓移植后造血重建的细胞起源。结果显示均有供者源性造血细胞植活。该方法灵敏度高，特异性强，无同位素污染，尤其适用于同性别、同血型、ＨＬＡ全相合的异基因骨髓移植植活指标的监测。     

HLA逆向杂交基因分型技术

逆向杂交是近年用于ＨＬＡ基因分型的技术，它是半一组具有等位基因特异性的探针固定在膜条上，在严格条件下与样本ＤＮＡ杂交分析其多态性。该方法简便，快速，２小时可完成实验，已用于ＨＬＡ－ＤＰ，ＤＲ，ＤＱ等位基因多态性分析，优于传统的寡核苷酸探针杂交技术。     

骨髓移植供受者HLA－DRB的单链构型多态性配型

用ＰＣＲ和单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法检查供受者的ＨＬＡ－ＤＲＢ－１基因座的多态性的一致性，以此做ＤＲＢ的基因配型。１６例同胞供受者对的ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型，有６对相合（６／１６），１０对不合（１０／１６）。此基因配型结果与其它配型结果比较，说明ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型在区分同胞供受者对的Ⅱ类抗原多态性上有较高的灵敏度，同时表明此类配型在应用于骨髓移植前检查同胞供者的意义。     

单倍体相同供受者HLA—DNA配型及临床意义

以人类组织相容性抗原（ＨＬＡ）的ＤＱβ片段ｃＤＮＡ作为探针，用４种限制性内切酶（ＭＳＰＩ、ＥｃｏＲ Ｉ、Ｔａｑ Ｉ和Ｐｓｔ Ｉ）对６对单倍体相同的活体肾移植供受者进行ＤＮＡ配型。结果发现ＨＬＡ－ＤＮＡ分型比血清学配型更高频率地表现其特异性，４种酶中ＥｃｏＲＩ的分型尤与肾移植存活率相关。混合淋巴细胞培养结果也与ＥｃｏＲＩ分型相近。     

微量聚合酶链反应对人类白细胞抗原的基因分型

目的 探讨应用于移植的人类白细胞抗原（ＨＬＡ）二类基因（ＤＲＢ／ＤＱＢ）快速分型新技术。方法 采用快速ＤＮＡ抽提技术,建立了ＨＬＡ＿ＤＲＢ／ＤＱＢ微量序列特异性引物聚合酶链反应基因分型方法,对１４２份供受者ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型,并与单克隆抗体一叔法ＨＬＡ血清学分型技术进行对比研究。结果 应用微量ＰＣＲ－ＳＳＰ方法共检出１３种ＤＲＢ１等位基因和 ＤＱＢ１等位基因,与血清学分型结果     

HLA-A、B、C基因第二外显子的单链构象多态性分析及骨髓移植受供者基因配型

用与HLA-A、B、C座位第二外显子两末端稳定部位互补的,对引物扩增基因组DNA得到HLA-A、B、C三座位的第二外显子包含高变区在内的196bp片断,进行单链构象多态性分析。以此检测HLA-Ⅰ类基因多态性的一致性,为20例骨髓移植供受者对配型,其中11对相合,9对不合。与其它配型结果比较表明,HLA-Ⅰ类基因的聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)配型在区分同胞供受者Ⅰ类抗原多态性上有较高的灵敏度。     

单倍体相同供受者HLA－DNA配型及临床意义

以人类组织相容性抗原（ＨＬＡ）的ＤＱβ片段ｃＤＮＡ作为探针，用４种限制性内切酶（ＭＳＰＩ、ＥｃｏＲＩ、ＴａｑＩ和ＰｓｔＩ）对６对单倍体相同的活体肾移植供受者进行ＤＮＡ配型。结果发现ＨＬＡ一ＤＮＡ分型比血清学配型更高频率地表现其特异性，４种酶中ＥｃｏＲＩ的分型尤与肾移植存活率相关。混合淋巴细胞培养结果也与ＥｃｏＲＩ分型相近。     

骨髓移植供受者MLR与HLA－D基因配型相关性分析

用血清学、混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）和基因配型法分析了骨髓移植供受者ＨＬＡ－ＩＩ类抗原的匹配程度。结果ＨＬＡ－ＤＲ血清型相合的８５对供受者中仅有３１对基因配型相合；ＤＲ血清不合的８对中有７对ＤＲβ＿１基因不合。说明基因配型较血清配型有较高的不匹配率和灵敏度。混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）的配对刺激指数（ＲＲＩ）＞１５％时大部分供受者对的ＨＬＡ－ＩＩ类基因配型是不合的，而ＲＲＩ＜１５％时则不能肯定地反映供受者对ＩＩ类基因的相容性。     

应用PCR—SSCP法探讨外周血B细胞参与多发性骨髓瘤的发病

为探讨多发性骨髓瘤的克隆起源，经形态学及ＡＢＣ法筛选１８例外周血无浆细胞污染的ＭＭ患者，采用多聚酶链反应技术扩增免疫球蛋白ＣＤＲ３区编码基因，并经单链构象多态性法分析其单链构象多态性。     

HLA-DRB1基因分型在移植配型及亲子鉴定中的应用

应用聚合酶链反应－序列持异性引物（ＰＣＲ＿ＳＳＰ）方法对南京地区汉族人群ＨＬＡ－ＤＲＢ１位点基因特异性及骨髓移植配型、亲子鉴定等进行了分析。ＤＲＢ１基因频率范围在０．００３３～０．１８３３之间，以ＤＲ９１ＤＲ４占多数；骨髓移植通过配型移植成功３例，２例存活情况良好；ＤＲＢ１位点排除亲子关系５例，其中２例为ＨＬＡ－ＤＲＢ１单独排除亲缘关系。本法具有操作简单、快速、结果可靠的特点，不仅适用于移植配型、     

骨髓移植供受者HLA—DRB的单链构型多态性配型

用ＰＣＲ和单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法检查供受的ＨＬＡ－ＤＲＢ－１基因座的多态性的一致性，以此做ＤＲＢ的基因配型。１６例同胞供受对的ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型，有６对相合（６／１６），１０对不合（１０／１６）。此基因配型结果与其它配型结果比较，说明ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型在区分同胞供受对Ⅱ类抗原多态性上有较高的灵敏度，同时表现此类配型在应用于骨髓移植前检查同胞供的意义     

应用序列特异引物PCR法对广西壮族HLA－DQA_1进行基因分型

应用序列特异引物多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法对８２名无血缘关系的广西壮族健康人的ＨＬＡ－ＤＱＡ＿１进行基因分型。共检出７种ＤＱＡ＿１等位基因，以ＤＱＡ＿１＊０３０１的频率最高，达３１％，其次为ＤＱＡ＿１＊０１０４，０１０２和０５０１，检出率分别为２４．３％，１６．９％和１１．７％。未检出的等位基因有ＤＱＡ＿１＊０２０１，０３０２和０６０１。结果表明，壮族的ＨＬＡ－ＤＱＡ＿１等位基因频率分布除与中国南方人相似外，尚有其特点。序列特异引物ＰＣＲ方法不需要放射性同位素，简便快速、准确可靠的ＨＬＡ－ＤＱＡ＿１基因分型新方法。     

两个糖尿病家庭HLA—DQA1和—DQB1等位基因比较

糖尿病是一种多病因的疾病，具有遗传因素的作用。胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）的遗传与ＨＬＡ－ＤＱ基因具有高度相关性。本文通过对ＭＯＤＹ和ＩＤＤＭ两个糖尿病家庭成员的ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＱＡ１和ＤＱＢ１基因ＰＣＲ扩增，以Ｂｉｏ－１１－ｄＵＴＰ标记核苷酸探针杂交分析，证实：１，ＭＯＤＹ的遗传与ＨＬＡ－ＤＱ基因无关联。２．ＩＤＤＭ的遗传不仅与ＨＬＡ－ＤＱ基因高度相关而且具有环境因素作用。３．易感基因之间     

应用序列特异引物PCR法对广西壮族HLA—DQA1进行基因分型

应用序列特异引物多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法对８２名无血缘关系的广西壮族健康人的ＨＬＡ－ＤＱＡ１进行基因分型。共检出７种ＤＱＡ１等位基因，以ＤＱＡ１＊０３０１的频率最高，达３１％，其次为ＤＱＡ＾０１０４，０１０２和０５０１，检出率分别为２４．３％，１６．９％和１１．７％。未出的等位基因有ＤＱＡ１＊０２０１，０３０２和０６０１。结果表明，壮族的ＨＬＡ－ＤＱＡ１等位基因频率分布除与中国南方人相似外。