细胞周期抑制剂对糖氧剥夺诱导神经元凋亡的保护机制研究

目的:探讨细胞周期抑制剂Roscovitine(Ros)对糖氧剥夺(OGD)诱导的鼠大脑皮质神经元凋亡的保护作用及可能机制。方法:体外培养大鼠皮质神经元,随机分为对照组、OGD1h后恢复糖氧供给(OGD/R)3h、6h、12h、24h组及Ros(100μM)组。Western Blot检测各组神经元磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白(p-Rb)和E2F1的表达情况;免疫荧光细胞化学染色观察OGD/R12h组及Ros组神经元p-Rb表达;TUNEL法检测OGD/R12h组及Ros组神经元凋亡情况。结果:OGD/R各组神经元p-Rb及E2F1的表达均较对照组增高(P<0.05),12h达最高;Ros组p-Rb及E2F1的表达减少,少于OGD/R12h组(P<0.05);Ros组p-Rb和TUNEL阳性细胞率均低于OGD/R 12h组(P<0.01),两组中大部分TUNEL阳性细胞与p-Rb表达共定位。结论:Ros可能通过抑制Rb磷酸化及E2F1介导的凋亡机制来减少缺血缺氧后的神经元凋亡。     

大鼠原代脑微血管内皮细胞氧糖剥夺/复氧模型中内参基因的选择

目的筛选大鼠原代脑微血管内皮细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型中合适的内参基因。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测3种常用管家基因:3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、β-肌动蛋白(ACTB)、核糖体蛋白L13A(RPL13A)在大鼠原代脑微血管内皮细胞中的表达水平;并采用Ge Norm程序分析得到最稳定的内参基因。结果 RPL13A、GAPDH、ACTB基因表达稳定度的平均值(M值)分别为0.590、0.570、0.397。结论在大鼠原代脑微血管内皮细胞OGD/R模型中表达最不稳定的内参基因是RPL13A,最稳定内参基因是ACTB。     

睡眠剥夺引起大鼠海马神经元凋亡及相关基因表达的变化

背景：睡眠剥夺是否引起细胞变性，其信号传导是否与某些基因调控有关。目的：探讨睡眠剥夺引起的神经元凋亡与相关基因表达的变化。设计：随机对照实验研究。地点和材料：实验地点：郑州大学医学院生理学实验室。成年健康SD大鼠，雌雄不限，体质量(200&;#177;20)g，由河南省实验动物中心提供。干预：采用TUNEL染色观察了快眼动睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化，应用原位杂交检测了快眼动睡眠剥夺大鼠海马bcl-2．bax mRNA表达。主要观察指标：睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化；海马bcl-2和bax mRNA表达。结果：快眼动睡眠剥夺大鼠海马CA1，CA3区神经元阳性凋亡细胞数增多，异相睡眠剥夺组海马CA1～CA4区细胞凋亡率分别为(6．60&;#177;2．24)％，(1．69&;#177;0．45)％，(6．87&;#177;1．32)％，(1．74&;#177;0．98)％。CA1，CA3区细胞凋亡率和CA2，CA4区相比较差异有显著性意义(t=5．26～6．95，P&;lt;0．05)。bc1-2mRNA阳性信号表达积分值较强，四个区之间差异无显著性意义，bax mRNA表达增强[CA1为(211．12&;#177;59．85)；CA3为(205．56&;#177;56．99)]与CA2和CA4区[(123．42&;#177;22．80)。(124．21&;#177;20．47)]比较差异有显著性意义(t=3．20～4．36．P&;lt;0．05)。结论：睡眠剥夺可引起大鼠海马神经元凋亡，与凋亡相关的bc1-2。bax mRNA基因表达的变化可能涉及神经元的凋亡机制。     

miR-27a-3p靶向Rnd3对氧糖剥夺/复氧诱导的神经细胞凋亡的影响

目的 探讨miR-27a-3p调控Rho家族GTP酶3(Rnd3)在氧糖剥夺/复氧（OGD/R）神经细胞凋亡中的作用及机制。方法 体外培养大鼠PC12神经细胞,氧糖剥夺2 h后分别复氧3、6、9和12 h,检测各时刻细胞活力、miR-27a-3p和Rnd3 mRNA的表达筛选最适复氧时间点。采用慢病毒分别转染miR-27a-3p Mimic、miR-27a-3p Inhibitor及二者的阴性对照、转染shRnd3及其阴性对照、或共转染shRnd3和miR-27a-3p Inhibitor入细胞后,CCK-8法检测细胞的活力;流式细胞术检测细胞的凋亡率;RT-qPCR检测miR-27a-3p和Rnd3 mRNA的表达;Western blot检测凋亡相关蛋白和Rnd3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a-3p和Rnd3的靶向关系。结果 上调miR-27a-3p提高了细胞活力,降低了细胞的总凋亡率、抑制了促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3(C-caspase-3)、Bax和促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,差异有统计学意义（P <0.05）;下调miR-27...     

白藜芦醇对暂时性氧糖剥夺致神经元损伤的保护作用

目的:探讨白藜芦醇对暂时性氧糖剥夺致神经元损伤的保护作用及机制.方法:以小鼠大脑皮层原代神经元氧糖剥夺4 h"再灌注"20 h 模型为对照.白藜芦醇浓度分别为10、25、50、100 p.mol/L,治疗时间从缺氧开始,直至试验结束.台盼蓝染色法和LDH漏出率评估细胞活力.采用免疫印迹法分析基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达,采用RT-PCR检测MMP-9 mRNA水平.结果:台盼蓝染色和 LDH漏出率结果显示,50μmol/L白藜芦醇即可对离体神经元缺血再灌注损伤具有良好保护作用,浓度高达100μmol/L亦没有发现明显的副作用.免疫印迹和半定量RT-PCR结果显示,与损伤组比较.50和100μmoL/L两种浓度的白藜芦醇可降低MMP-9蛋白的表达及MMP-9mRNA的水平(P<0.01).结论:白藜芦醇可抑制神经元MMP-9的表达,从而发挥其对暂时性氧糖剥夺致神经元损伤的保护作用.     

睡眠剥夺引起大鼠海马神经元凋亡及相关基因表达的变化

背景:睡眠剥夺是否引起细胞变性,其信号传导是否与某些基因调控有关。目的:探讨睡眠剥夺引起的神经元凋亡与相关基因表达的变化。设计:随机对照实验研究。地点和材料:实验地点:郑州大学医学院生理学实验室。成年健康SD大鼠,雌雄不限,体质量(200±20)g,由河南省实验动物中心提供。干预:采用TUNEL染色观察了快眼动睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化,应用原位杂交检测了快眼动睡眠剥夺大鼠海马bcl-2,baxmRNA表达。主要观察指标:睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化;海马bcl-2和baxmRNA表达。结果:快眼动睡眠剥夺大鼠海马CA1,CA3区神经元阳性凋亡细胞数增多,异相睡眠剥夺组海马CA1～CA4区细胞凋亡率分别为(6.60±2.24)%,(1.69±0.45)%,(6.87±1.32)%,(1.74±0.98)%。CA1,CA3区细胞凋亡率和CA2,CA4区相比较差异有显著性意义(t=5.26～6.95,P<0.05)。bcl-2mRNA阳性信号表达积分值较强,四个区之间差异无显著性意义,baxmRNA表达增强犤CA1为(211.12±59.85);CA3为(205.56±56.99)犦与CA2和CA4区犤(123.42±22.80),(124.21±20.47)犦比较差异有显著性意义(t=3.20～4.36,P<0.05)。结论:睡眠剥夺可引起大鼠海马神经元凋亡,与凋亡相关的bcl-2,baxmRNA基因表达的变化可能涉及神经元的凋亡机制。     

大鼠海马神经细胞体外缺糖缺氧模型制备方法的改进

目的:改进培养大鼠海马神经细胞体外缺糖缺氧模型制备方法,并通过兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂进行验证。方法:实验于2004-09/2005-06在南方医科大学基础医学院神经生物学教研室进行。实验材料:出生1d内清洁级SD大鼠,由南方医科大学实验动物中心提供(合格证号为粤证监字2004B023号)。N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂5-甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸(MK-801)和D-2-氨基-5-磷酰基戊酸(d-APV)购自Sigma公司。实验方法:取新生1dSD大鼠海马组织作神经细胞分散细胞原代培养,培养到13d时进行氧/葡萄糖剥夺模型的制备:将neurobasal培养基更换为不含葡萄糖的BSSo培养基,连续充以50mL/LCO2 950mL/LN2(体积比)混合气体。缺氧30,45,60,90min后取出细胞,更换为正常neurobasal培养基,恢复正常条件继续培养。将神经细胞随机分为正常对照组、单纯缺氧组、无糖缺氧组、MK-801组和d-APV组。将10μmol/LMK-801和500μmol/Ld-APV在通50mL/LCO2 950mL/LN2混合气前加入到BSSo培养基,缺氧结束后随BSSo培养基一起去掉。复氧24h后采用MTT比色法测神经细胞成活率及Hoechst荧光染料法测神经细胞凋亡率。结果:①随着氧/葡萄糖剥夺时间延长,神经细胞存活率下降。氧/葡萄糖剥夺30,45,60,90min再复氧24h,神经细胞存活率分别为(81.48±3.84)%、(63.14±3.14)%、(41.73±2.97)%和(16.78±2.12)%。②N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂MK-801(10μmol/L)和d-APV(500μmol/L)均能明显增加神经细胞存活率(P<0.05),并且两组细胞存活率与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:实验制备的海马神经细胞短时间氧/葡萄糖剥夺模型可对神经细胞造成迟发性死亡,兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂可保护氧/葡萄糖剥夺诱导的神经细胞损伤,说明本实验建立的缺氧模型有效并简便可靠,并且缩短了缺氧时间。     

氧糖剥夺-氧糖恢复诱导乳鼠心肌细胞凋亡模型的建立

目的通过乳鼠心肌细胞原代培养进行氧糖剥夺．氧糖恢复,诱导心肌细胞凋亡。方法取1～3天的新生SD乳鼠心室肌培养,采用氧糖剥夺2小时模拟缺血,氧糖恢复模拟再灌注,根据氧糖恢复时间,随机分为OGR2小时组、OGR4小时组、OGR6小时组,正常培养为sham组。用Annexin V-FITC／PI双染色及JC-1染色流式细胞术分别检测细胞凋亡和膜电位,western blot检测细胞凋亡相关蛋白等。结果OGR4小时组、OGR6小时组与sham组相比,Annexin V-FITC／P1双染色示细胞早期凋亡率均增高,差异有统计学意义（P〈0．05）,但OGR6小时组细胞坏死率高于OGR4小时组（P〈0．05）;与sham组比,OGR2小时组、OGR4小时组、OGR6小时组绿色荧光比例均增高,差异有统计学意义（P〈0．05）;OGR4小时组、OGR6小时组与sham组比较,胞浆／线粒体cytc比例增高,细胞裂解液caspase．3增高;OGR6小时组与OGR4小时组相比,胞浆／线粒体cyt c比例下降,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论乳鼠心肌细胞氧糖剥夺2小时．氧糖恢复4小时可诱导线粒体途径细胞凋亡。     

大蒜多糖预处理对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠心肌细胞的拮抗作用

目的:研究大蒜多糖(GP)预处理对缺氧缺糖/复氧复糖损伤大鼠心肌细胞的拮抗作用研究,并初步探讨其作用机制。方法:采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立乳鼠心肌细胞糖氧剥离的A/R损伤模型,不同剂量GP(10、30和100mg/L)预处理24h后,比色法测定细胞培养液中iNOS和NO含量,测定细胞内SOD活性及MDA含量。结果:与A/R模型组比较,GP预处理可增加胞内SOD活性和培养液中iNOS活力,降低NO释放量和胞内MDA含量。结论:GP预处理对A/R损伤心肌细胞具有明显的抗氧化作用,可能与清除自由基的产生有关。     

Mdivi-1对糖氧剥夺后神经元凋亡蛋白Bax活化、嵌入及细胞色素C释放的影响

目的:研究线粒体分裂蛋白抑制剂Mdivi-1对糖氧剥夺(OGD)后神经元凋亡蛋白Bax活化、嵌入及细胞色素C(Cyt C)释放的影响。方法:体外培养原代皮质神经元并制备OGD模型,采用不同浓度的Mdivi-1干预细胞,MTT测定神经元存活率。之后采用10μmol/L Mdivi-1干预细胞,免疫共沉淀或细胞碱处理后测定细胞凋亡蛋白Bax的活化和嵌入情况。抽提线粒体和细胞浆蛋白,Western Blot测定线粒体内Cyt C释放情况。结果:Mdivi-1可以剂量依赖地改善OGD后神经细胞的存活,10μmol/L Mdivi-1干预可以减少凋亡蛋白Bax的激活和嵌入,并且减少Cyt C的释放。结论:线粒体分裂蛋白抑制剂Mdivi-1在OGD后具有明确的神经保护作用,其机制可能和其抑制细胞凋亡有关。     

丙泊酚对缺氧无糖损伤大鼠海马脑片的保护作用

目的探讨丙泊酚对缺氧无糖(OGD)损伤脑片的保护作用。方法采用缺氧无糖的人工脑脊液灌流离体大鼠海马脑片模拟缺血损伤,根据给药方式不同分为:OGD前给药组和OGD给药组,均给予1、10和20μmol·L-1的丙泊酚和脂肪乳(溶剂对照)。记录海马脑片顺向群峰电位(OPS)和缺氧损伤电位(HIP)的变化。结果OGD给药组应用10μmol·L-1的丙泊酚,与应用脂肪乳相比OPS消失时间推迟(P<0.05),OPS恢复率升高(P<0.05),HIP出现时间推迟(P<0.01),HIP出现率降低(P<0.05)。结论在缺氧过程中应用10μmol·L-1的丙泊酚对缺氧无糖损伤海马脑片具有保护作用。     

微波辐射对大鼠海马神经元的损伤效应及其机制研究

目的 观察微波辐射对海马神经元的损伤效应及其对细胞膜和[Ca^2＋]的影响，以探讨微波致海马损伤的机制。方法 采用10mW／cm^2微波辐射源辐射原代培养的海马神经元，采用MTT法测定细胞活力；流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死率；Fluo232AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度；原子力显微镜观察细胞膜的改变。结果 辐射后6h，海马神经元生长活力下降（P〈0．01）；辐射后1d，细胞凋亡和坏死率增加（P〈0．01）；辐射后即刻，神经元内[Ca^2＋]荧光强度增加（P〈0．01），细胞膜穿孔。结论 微波辐射后海马神经元生长活力下降，凋亡和坏死率增加；神经元膜穿孔及胞内[Ca^2＋]增加是其损伤重要机制。     

Effects of activin A and its downstream ERK1/2 in oxygen and glucose deprivation after isoflurane-induced postconditioning

BackgroundIsoflurane postconditioning (ISPOC) plays a neuroprotection role in the brain. Previous studies confirmed that isoflurane postconditioning can provide better protection than preconditioning in acute hypoxic–ischemic brain damage, such as acute craniocerebral trauma and ischemic stroke. Numerous studies have reported that activin A can protect rat’s brain from cell injury. However, whether activin A and its downstream ERK1/2 were involved in isoflurane postconditioning-induced neuroprotection is unknown.MethodsA total of 80 healthy Sprague–Dawley rats weighing 50–70 g were randomly divided into 10 groups of 8: normal control, oxygen and glucose deprivation (OGD), 1.5% ISPOC, 3.0% ISPOC, 4.5% ISPOC, blocker of activin A (SB431542), blocker of ERK1/2 (U0126), 3.0% ISPOC + SB431542, 3.0% ISPOC + U0126, and vehicle (dimethyl sulfoxide(DMSO)) group. Blockers (SB431542 and U0126) were used in each concentration of isoflurane before OGD. Hematoxylin–eosin staining, 2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride staining, and propidium iodide (PI) staining were conducted to assess the reliability in the brain slices. Immunofluorescence, Western blot, and quantitative real-time PCR(Q-PCR) were performed to validate the protein expression levels of activin A, Smad2/3, P-Smad2/3, ERK1/2, and phosphorylation ERK1/2 (P-ERK1/2).ResultsThe number of damaged neurons and mean fluorescence intensity(MFI) of PI staining increased, but formazan generation, expression levels of activin A and P-ERK1/2 protein, and mRNA synthesis level of activin A decreased in the OGD group compared with the normal control group (p < 0.05). The number of damaged neurons and MFI of PI staining decreased, but formazan production, expression levels of activin A, P-Smad2/3, and P-ERK1/2, and mRNA synthesis level of activin A increased significantly in the 1.5% ISPOC and 3.0% ISPOC groups (p < 0.05) compared with the OGD group. The result in the 4.5% ISPOC group, was completely opposite to the 1.5% ISPOC and 3.0% ISPOC groups. The number of damage neuron and MFI of PI staining increased, but formazan production, expression levels of activin A, P-Smad2/3, and P-ERK1/2, and mRNA synthesis level of activin A decreased in the 4.5% ISPOC group. However, the expression levels of activin A, P-Smad2/3, and P-ERK1/2, and mRNA synthesis level of activin A in the 4.5% ISPOC group were higher than the OGD group (p < 0.05). The other results were compared between the SB431542 group/the U0126 group and 3.0% ISPOC group. The MFI of PI staining increased, but the expression levels of activin A, P-Smad2/3, and P-ERK1/2 decreased (p < 0.05). The expression level of ERK1/2 protein in all groups exhibited no change (p > 0.05).ConclusionResults of this study showed that 3.0% concentration of isoflurane postconditioning provided better neuroprotection than 1.5% and 4.5% concentrations of isoflurane. Activin A/Smad 2/3 and activin A/ERK1/2 signaling pathway may be involved in ISPOC-induced neuroprotection.     

急性缺糖缺氧通过增强胆碱酯酶表达促进肾小管细胞的炎性损伤

目的探讨急性缺糖缺氧导致肾小管细胞损伤的机制。方法分离培养大鼠肾内巨噬细胞、肾小管上皮细胞,构建两者共培养(transwell)模型,细胞分成对照组及缺糖缺氧(Oxygen and glucose deprivation,OGD)组,给予缺糖缺氧处理细胞1h后再正常培养24h,ELISA法检测两组上清液TNF-α,IL-1β和IL-10的浓度,噻唑蓝(MTT)检测肾小管细胞活力及RTq PCR及Western Blot检测AChE的mRNA和蛋白的表达。结果在共培养上清液中,对照组与OGD相比,TNF-α(pg/ml):(231.67±36.28)VS(428.67±43.16)(P0.05),IL-1β(pg/ml):(116.67±21.64)VS(219.63±43.86)(P0.05),IL-10(pg/ml):(235.67±39.35)VS(432.67±49.72)(P0.01)。肾小管细胞活力明显降低,分别为(88.41±18.25)VS(46.98±13.87)(P0.01),OGD组巨噬细胞AChE mRNA和蛋白水平均高于对照组,分别上调了(3.82±0.73)和(2.17±0.46)倍(P0.01)。结论急性缺糖缺氧增强了肾脏巨噬细胞胆碱酯酶的表达,通过炎症介质,介导了急性缺糖缺氧性肾小管细胞损伤。     

促红细胞生成素对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的抗凋亡作用及机制研究

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对缺氧/复氧心肌细胞凋亡的影响,并初步探讨蛋白激酶C(PKC)和线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)与EPO在抗凋亡信号通路中的相互关系.方法 分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,并分为对照组、缺氧/复氧组、EPO组和PKC抑制剂白屈菜红碱组,建立缺氧/复氧模型;用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜扫描观察细胞黄素蛋白自体荧光强度变化,监测钾通道开放情况.结果 缺氧/复氧组心肌细胞凋亡率明显高于对照组[(42.56±8.00)%比(17.88±2.00)%,P<0.053,黄素蛋白自体荧光强度值与对照组比较差异无统计学意义[(0.278±0.170)×10-2比(0.149±0.050)×10-2,P>0.05];EPO组心肌细胞凋亡率明显低于缺氧/复氧组[(22.73±5.00)%比(42.56±8.00)%,P<0.05],黄素蛋白自体荧光强度值则较缺氧/复氧组明显增强[(2.201±1.090)×10-2比(0.278±0.170)×10-2,P<0.01];白屈菜红碱对EPO抗凋亡和增强黄素蛋白自体荧光强度有阻断作用[细胞凋亡率:(46.72±17.00)%比(22.73±5.00)%,荧光强度:(0.986±0.320)×10-2比(2.201±1.090)×10-2,P<0.01和P<0.05].结论 通过激活PKC继而开放mitoKATP通道可能是EPO抗缺氧/复氧心肌细胞凋亡的信号通路之一.     

电磁脉冲对海马神经元的损伤效应及其对［Ca2+］i的影响

目的观察电磁脉冲(EMP)对海马神经元的损伤效应及其对[Ca2+]i的影响,以深入探讨EMP致脑损伤的机制. 方法 EMP辐射条件为6×104V/m,脉冲上升时间为20 ns,脉宽为30 μs,频率为2.5脉冲/min,作用2 min.原代培养的海马神经元经EMP辐射后,采用MTT法对细胞活力进行测定;FACS法检测细胞凋亡和坏死;Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度,即[Ca2+]i. 结果细胞被EMP辐射后0～6 h活力明显下降(P<0.05),12 h开始回升,24 h基本接近正常水平;EMP辐射后0～12 h细胞凋亡率显著升高,坏死也有增加;EMP辐射后即刻引起神经元内的Ca2+荧光强度明显增加. 结论 EMP致海马神经元活力下降、凋亡增加、胞内钙超载.     

骨髓间充质干细胞及补脑Ⅰ号处理后血清对小鼠海马神经元缺氧缺糖模型ICAM-1、NF200表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞（BMSCs）、补脑Ⅰ号血清对小鼠海马神经元缺氧缺糖（OGD）模型神经中丝200（NF200）、细胞间黏附因子-1（ICAM-1）的影响。 方法分离培养BMSCs、海马神经元,对海马神经元进行OGD造模。制备补脑Ⅰ号血清与正常血清。经MTT法筛选补脑Ⅰ号血清对海马神经元OGD模型干预的最佳浓度为10%,时间为72 h。实验分为正常组、模型组、BMSCs组、正常血清组、中药血清组、BMSCs＋正常血清组、BMSCs＋中药血清组。qRT-PCR检测细胞NF200、ICAM-1 mRNA表达;Western Blot检测细胞NF200、ICAM-1蛋白表达。 结果与正常组比较,模型组、BMSCs组、正常血清组、BMSCs＋正常血清组、中药血清组、BMSCs＋中药血清组ICAM-1、NF200 mRNA及蛋白表达升高（P＜0.05）;与模型组比较,BMSCs组、BMSCs＋正常血清组、中药血清组、BMSCs＋中药血清组NF200 mRNA及蛋白表达升高,ICAM-1 mRNA及蛋白表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;BMSCs＋中药血清组较BMSCs组、正常血清组、中药血清组及BMSCs＋正常血清组的NF200 mRNA及蛋白表达升高,ICAM-1 mRNA及蛋白表达减少,差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论BMSCs和补脑Ⅰ号血清可能通过抑制炎症、促进神经再生及双重作用修复OGD损伤的海马神经元,两者联合应用效果优于单独使用。     

银杏叶提取物对缺血-再灌流神经元损伤的保护作用及其信号转导机制

目的研究银杏叶提取物(EGB761)对缺糖缺氧/复糖复氧神经元损伤的保护作用,并探讨其主要细胞内信号转导机制。方法利用原代培养的皮层神经元,通过去除培养液中的糖和氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)模拟缺血缺氧,恢复糖氧供给模拟再灌流。通过免疫蛋白印迹法测定Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达。再灌流时加用银杏叶提取物(EGB761)观察其对神经元保护作用以及对Akt、p-Akt表达的调节作用。结果缺糖缺氧/复糖复氧后神经元p-Akt表达明显下降,EGB761可剂量依赖地保护神经元活性,并可上调因缺糖缺氧/复糖复氧而降低的p- Akt蛋白的表达,但该作用不被Ly294002所阻断。结论EGB761对培养的神经元缺糖缺氧/复糖复氧损伤有保护作用,该作用可能与非PI3K依赖的p-Akt信号转导通路激活有关。     

Protective effect of mesenchymal stem cell-derived exosomal treatment of hippocampal neurons against oxygen-glucose deprivation/reperfusion-induced injury

BACKGROUND:Individuals who survive a cardiac arrest often sustain cognitive impairments due to ischemia-reperfusion injury.Mesenchymal stem cell(MSC)transplantation is used to reduce tissue damage,but exosomes are more stable and highly conserved than MSCs.This study was conducted to investigate the therapeutic effects of MSC-derived exosomes(MSC-Exo)on cerebral ischemia-reperfusion injury in an in vitro model of oxygen-glucose deprivation/reperfusion(OGD/R),and to explore the underlying mechanisms.METHODS:Primary hippocampal neurons obtained from 18-day Sprague-Dawley rat embryos were subjected to OGD/R treatment,with or without MSC-Exo treatment.Exosomal integration,cell viability,mitochondrial membrane potential,and generation of reactive oxygen species(ROS)were examined.Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated 2’-deoxyuridine 5’-triphosphate nickend labeling(TUNEL)staining was performed to detect neuronal apoptosis.Moreover,mitochondrial function-associated gene expression,Nrf2 translocation,and expression of downstream antioxidant proteins were determined.RESULTS:MSC-Exo attenuated OGD/R-induced neuronal apoptosis and decreased ROS generation(P<0.05).The exosomes reduced OGD/R-induced Nrf2 translocation into the nucleus(2.14±0.65 vs.5.48±1.09,P<0.01)and increased the intracellular expression of antioxidative proteins,including superoxide dismutase and glutathione peroxidase(17.18±0.97 vs.14.40±0.62,and 20.65±2.23 vs.16.44±2.05,respectively;P<0.05 for both).OGD/R significantly impaired the mitochondrial membrane potential and modulated the expression of mitochondrial functionassociated genes,such as PINK,DJ1,LRRK2,Mfn-1,Mfn-2,and OPA1.The abovementioned changes were partially reversed by exosomal treatment of the hippocampal neurons.CONCLUSIONS:MSC-Exo treatment can alleviate OGD/R-induced oxidative stress and dysregulation of mitochondrial function-associated genes in hippocampal neurons.Therefore,MSCExo might be a potential therapeutic strategy to prevent OGD/R-induced neuronal injury.