小鼠颌下腺组织培养上清液促进粒-单系和巨核系造血的实验研究

目的　证实颌下腺是否合成影响造血的细胞因子 ,并探讨其对粒 -单系和巨核系造血祖细胞增殖分化有何影响 ,为重新认识颌下腺的生理功能提供实验证据。方法　采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测 CD13膜抗原及细胞周期 ,研究小鼠颌下腺组织培养上清液 (SGCM)对小鼠粒 -单系和巨核系造血发生的影响。结果　 SGCM对粒 -单系祖细胞 (CFU- GM)集落生长有明显促进作用 ,能明显促进巨核系造血祖细胞 (CFU- Meg)集落生成 ,而且雄性 SGCM刺激活性高于雌性 SGCM,IL- 3与雌性 SGCM有叠加作用 ,贫血雄性 SGCM对 CFU-GM和 CFU- Meg的刺激活性高于正常小鼠 ,SGCM能促进小鼠骨髓细胞进入增殖活跃期 (S/G2 )。结论　颌下腺能合成与粒 -单系、巨核系造血相关的造血因子。提示颌下腺与造血调控可能有关     

小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类 ,进一步研究颌下腺对血发生的调控 ,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示 ,小鼠颌下腺组织培养上清液(SGCM)在体外培养中 ,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用 ,实验组集落数远远高于阴性对照组 (P<0 .0 5 ) ;晚期红系祖细胞 (CFU- E)培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雌性组 (P<0 .0 5 ) ,早期红系祖细胞 (BFU- E)培养体系没有明显差异 (P>0 .0 5 ) ,贫血模型小鼠颌下腺促进 BFU- E和 CFU- E增殖和分化的活性高于正常小鼠 (P<0 .0 5 ) ,IL- 3与 SGCM有协同刺激作用 ,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子 ,雄性小鼠颌下腺促进 CFU- E增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本实验为进一步研究小鼠颌下腺合成造血因子和其与造血调控的关系提供了实验依据。     

小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类,进一步研究颌下腺对血发生的调控,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示,小鼠颌下腺组织培养上清液（ＳＧＣＭ）在体外培养中,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用,实验组集落数远远高于阴性对照组（Ｐ〈０．０５）;晚期红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雄性组（Ｐ〈０．０５）,早期红系祖 细胞（ＢＦＵ－Ｅ）培养体系没有明显差异（Ｐ〉０．０５）,贫血模型小鼠颌下腺促进ＢＦＵ－Ｅ和ＣＰＵ－Ｅ增殖和分化的活性高于正常小鼠（Ｐ〈０．０５）,ＩＬ－３与ＳＧＣＭ有协同刺激作用,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子,雄性小鼠颌下腺促进ＣＦＵ－Ｅ增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本     

三七总皂甙对粒单系造血祖细胞增殖调控机理的研究

采用造血祖细胞体外培养与造血生长因子生物活性检测等实验血液学技术,研究三七总皂甙（ＴＳＰＮ）,对小鼠粒单系造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）增殖凋控的影响及其机理。结果表明：在有粒单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）存在的条件下,ＴＳＰＮ能促进正常或贫血小鼠ＣＦＵ－ＧＭ的集落形成;经ＴＳＰＮ诱导制备的肌条件培养液,Ｌ细胞条件培养液和脾细胞条件培养液能显著提高ＣＦＵ一ＧＭ的集落产率。研究提示,ＴＳＰＮ可能通过诱导机体产生造血凋控因子或协同这些因子促进机体单系血发生。     

肺泡巨噬细胞培养上清液对小鼠粒—单系造血祖细胞和造血干细胞的…

目的：观察肺泡巨噬细胞培养上清液（ＡＭψＳ）对粒－单系造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）和造血干细胞的影响。方法：采用脾集落形成和造血祖细胞体外培养技术。结果：ＡＭψＳ对ＣＦＵ－ＧＭ的增殖具有双向调控作用，即低浓度有促进作用，高浓度有抑制作用，但它对ＣＦＵ－Ｓ无明显影响。结论：ＡＭψＳ中含有粒－单系集落刺激因子（ＣＳＦ－ＧＭ）和前列腺素样活性物质，这些物质浓度的变化可以调控ＣＦＵ－ＧＭ的增殖，大肠杆菌脂多     

螺旋藻多糖对骨髓造血干/祖细胞增殖能力影响的实验研究

目的 了解丁钝螺旋藻多糖（SPP）对造血干／祖细胞的刺激活性，以期发现恢复放射损伤造血功能的新药。方法 用内外源性脾集落和体外琼脂培养法。观察放射损伤小鼠注射SPP后CFU－S、CFU－GM及骨髓有核细胞数的改变。结果 给药组小鼠CFU－S、CFU－GM及骨髓有核细胞数均有显著的升高，与对照组比较有非常显著的差异（P＜0.001)。结论 SPP对造血干／祖细胞有显著的促增殖和分化的作用。     

维生素A缺乏对红系早期祖细胞增殖影响的研究

采用造血祖细胞体外培养。造血生长因子生物活性检测等实验血液学技术，研究维生素Ａ缺乏（ＶＡＤ）对大鼠红系早期祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）增殖调控的影响。结果发现，与对照组比较，ＶＡＤ使ＢＦＵ－Ｅ集落增殖明显减少；用ＶＡＤ的脾及骨髓基质细胞培养上清液明显抑制ＢＦＵ－Ｅ集落增殖。结果提示，ＶＡＤ可能通过抑制造血生长因子白细胞介素３（ＩＬ－３）和粒单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）等表达而影响红系造血。     

人参总皂甙对人血细胞生成的研究

从人参中提取有效成份人参总皂甙（ＴＳＰＧ），测定它对人骨髓粒单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ），红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ，ＢＦＵ－Ｅ）和多向祖细胞（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）的刺激增殖作用。结果显示：在培养中加入不同浓度的ＴＳＰＧ５．２５，５０，７５，１００ｍｇ／Ｌ，可促进造血细胞增殖，在体外形成集落。在ＴＳＰＧ５－７５ｍｇ／Ｌ时，ＣＦＵ－ＧＭ集落产率均明显高于不加ＴＳＰＧ的对照组浓度的ＴＳＰＧ使集落产率明显高于对     

小蘖胺对小鼠升白细胞作用机理的研究

本文采用小鼠体内扩散盒及脾结节法,结合骨髓有核细胞计数,探讨了小蘖胺对小鼠骨髓白细胞系造血功能的影响.该药能显著提高小鼠骨髓有核细胞数,量效关系显著,促进骨髓造血干细胞及粒系祖细胞的集落生成率.认为其作用机理与促进骨髓造血干细胞及粒系祖细胞的增殖、分化有关.     

脐血库造血干/祖细胞的分离、保存和集落培养

目的探讨脐血库脐血分离、保存方法及造血干祖细胞的体外培养条件。方法采用建立在密度梯度离心基础上的HES分离法对脐血进行有核细胞分离、冻存及粒巨系造血祖细胞集落（CFU—GM）培养。结果离心管收集分离和四联袋采集分离的方法均可获得较高的单个核细胞量。但四联袋采集分离在回收率和浓缩程度上更为优越，且粒巨系造血祖细胞（CFU—GM）含量丰富。10％DMSO冻存液保存复苏后仍可获得较高活率和CFU—GM。结论我们建立的HES分离结合密度梯度离心分离脐血造血干祖细胞以及脐血长期冻存的方法为广泛、大规模地建立脐血库提供了基础。     

内皮细胞对小鼠粒系、红系和巨核系造血的调控作用

目的　了解内皮细胞对小鼠粒系、红系和巨核系造血功能的影响 ,为进一步研究血发生及其调控提供理论依据。方法　取剖腹产术后 12小时以内的人脐静脉内皮细胞 ,按 Jaffe法进行培养 ,建立内皮细胞体外培养模型。而后收集原代培养的内皮细胞上清液 ,应用造血祖细胞体外培养方法进行体外粒 -单系祖细胞克隆形成单位 ( CFU - GM)、早期红系祖细胞克隆形成单位 ( BFU - E)、晚期红系祖细胞克隆形成单位 ( CFU - E)和巨核系祖细胞克隆形成单位 ( CFU - MK)半固体培养。结果　在有内皮细胞上清液存在的各培养体系中 ,集落形成良好。而在同样培养条件下 ,在无内皮细胞上清液存在的体系中 ,需加入外源性的 GM- CSF、EPO和 IL - 3才能表现出对粒系、红系和巨核系造血的刺激作用。结论　 1内皮细胞能够通过分泌造血生长因子 ,支持各系祖细胞的增殖与分化 ;2内皮细胞上清液可作为标准的生长因子来源 ,用于体外干细胞的扩增和某些血液病的治疗 ;3内皮细胞和造血干细胞 /祖细胞的相互作用在体内的造血调控中也可能起了重要作用 ;4在内皮细胞上清液中可能含有尚未能证明的其他造血生长因子。这些因子单独或协同地发挥作用 ,支持了各系祖细胞的增殖     

血虚证小鼠模型骨髓细胞红系祖细胞、粒单系祖细胞变化规律及中药复方对其的影响

目的：研究血虚证小鼠模型骨髓造血祖细胞体外增殖水平及变化规律,以及中药复方地甘口服液,红霖四物口服液对其的影响。方法：以Balb/c小鼠为实验对象,分别采用免疫介导法和综合放血法制作血虚证模型。采集其骨髓有核细胞进行培养;并分组灌服地甘口服液,红霖四物口服液,比较观察各组小鼠骨髓细胞体外培养CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落的形成情况。结果：两种血虚证小鼠模型的CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落形成较空白对照组显下降,尤以前为甚;两种中药复方均可促进模型小鼠骨髓细胞的增殖,但对于免疫介导血虚证模型,两治疗组的效果存在一定差异。结论：血虚证小鼠模型骨髓造血干（红9系,粒单系）细胞的体外增殖较正常小鼠明显下降,而地甘口服液,红霖四物口服液可以促进骨髓CFU－E,BFU－E,CFU－GM集落的形成。     

维甲酸对正常造血祖细胞集落形成的影响

用细胞培养方法观察了不同浓度（１０－９～１０－５ｍｏｌ／Ｌ）的全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）对正常造血祖细胞集落形成的影响。结果表明，随着浓度的增加，ＡＴＲＡ对红系祖细胞集落形成单位（ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ）的抑制作用增加，但在１０－８～１０－６ｍｏｌ／Ｌ内对粒单系祖细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）的形成有促进作用，１０－６ｍｏｌ／Ｌ的ＡＴＲＡ对巨核系祖细胞集落形成单位（ＣＦＵ－Ｍｅｇ）生长也有促进作用，提示在急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）用ＡＴＲＡ治疗过程中，ＡＴＲＡ参与了其正常造血功能的恢复。     

补益中药复方对环磷酰胺处理小鼠粒系造血的影响

为了从传统中药中寻找防治化疗和放疗所致骨髓粒系造血抑制的药物，通过建立实验性环磷酰胺（Cy：0．08g／kg）低白细胞血症小鼠模型，观察了参芪补苦复方（GAFS：13．9g／kg·dip6d）对粒系造血的影响。结果表明：GAFS对Cy所致外周血白细胞和中性粒细胞数下降具有对抗和促恢复作用（P＜0．01），能防治骨髓有核细胞数、粒-巨噬系祖细胞（CFU－GM）数的减少（P＜0．01），促进CFU－GM增殖并诱导其向粒系、巨噬系分化，且其促粒系造血作用优于鲨肝醇。     

当归多糖对骨髓巨噬细胞的影响及其与造血调控的关系

目的研究当归多糖(APS)对骨髓巨噬细胞(BMMФ)生物活性的影响及其与造血调控的关系，从而阐明当归的活血机制。方法采用骨髓造血祖细胞和巨噬细胞体外培养，造血生长因子生物活性检测，免疫细胞化学，核酸探针原位杂交等技术。结果经APS诱导的BMMФ的培养上清液可提高髓系造血祖细胞的集落产率；经APS诱导后，BMMФ表达促红细胞生成素(EPO)、粒一巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-6(IL-6)的蛋白水平有不同程度的提高；EPO mRNA和GM-CSF mRNA的表达水平和强度明显提高。结论APS可以直接和(或)间接地刺激造血诱导微环境中的BMM中，从基因水平和蛋白水平上促进造血调控因子的合成和分泌，进而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、晚期红系祖细胞(CFU-E)、粒单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化。     

神经生长因子对正常和放化疗复合损伤小鼠粒-巨噬系血发生的影响

目的 探讨神经生长因子(NGF)对小鼠粒-巨噬系血细胞发生的影响.方法 采用流式细胞术、祖细胞集落分析、血细胞计数、实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附分析法(ELISA),检测注射NGF对正常和经60Coγ射线照射 腹腔注射环磷酰胺(放化疗复合损伤)小鼠骨髓细胞(BMC)增殖周期、粒-巨噬系祖细胞集落(CFU-GM)产率、外周白细胞总数、骨髓细胞粒-巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达及血清中GM-CSF和IL-3浓度的影响.并观察在体外培养体系中加入不同浓度的NGF时CFU-GM集落产率的变化及与GM-CSF的关系.结果 在体外CFU-GM培养中,加入重组小鼠GM-CSF (rmGM-CSF)时,NGF剂量依赖性地提高集落产率.注射NGF[7.5 μg/(kg·d)或10 μg/(kg·d)]持续7 d,正常和放化疗复合损伤小鼠外周血白细胞总数、小鼠骨髓细胞中S G2/M期细胞比例、CFU-GM集落产率显著高于注射生理盐水的对照组;放化疗复合伤小鼠血清中的GM-CSF和IL-3也显著升高.结论 NGF可与体外培养体系中的造血刺激因子协同作用,促进正常和放化疗复合损伤小鼠CFU-GM的形成.NGF在体内可促进正常和放化复合损伤小鼠骨髓细胞进入有丝分裂,促进造血干细胞向粒-巨噬系方向分化,促进CFU-GM的形成,提高外周血白细胞数;NGF还可刺激放化疗复合损伤小鼠体内GM-CSF和IL-3的分泌,这可能是NGF促进放化疗复合损伤后粒-巨噬系造血恢复的途径之一.     

IL—1影响L—细胞造血调节作用的实验研究

目的：研究白细胞介素－１与Ｌ－细胞在造血调控中的可能关系,丰富造血调控理论。方法：在体外祖细胞培养中以不同浓度的ＩＬ－１诱导和未经诱导的Ｌ－细胞条件培养液替代造血生长因子,观察集落产率的变化,并与ＩＬ－１和ＬｃＣＭ共同作用后的集落产率作比较。结果：ＩＬ－１在１２．５￣１００ｕ／ｍｌ浓度范围内,ＬｃＣＭＩＬ－１作者后的粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）,早期红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）,晚期红系祖细胞（ＣＦ     

苦参促粒系造血机制及对白血病HL—60细胞的诱导凋亡作用

目的：进一步探讨苦参促粒系造血机制及新的抗白血病作用机理。方法：建立实验性环磷酰胺（Cy:0.08g/kg)低白细胞血症小鼠模型,观察苦参对粒系造血的影响和对白血病HL－60细胞的诱导凋亡作用。结果：苦参对Cy所致外周血白细胞和中性粒细胞数下降具有对抗和促恢复作用（P＜0．01）,能增加骨髓有核细胞、粒－巨噬系祖细胞（CFU－GM）数（P＜0．01）促进CFU－GM增殖并诱导其向粒系、巨噬系分化,且其促粒系造血作用与鲨肝醇一致。此外,苦参与明显诱导白血病HL－60细胞凋亡,呈药物浓度－粒应关系。结论：苦参有望用于防治化疗所致的白细胞减少及通过诱导细胞凋亡发挥其抗肿瘤作用。     

钝顶螺旋藻多糖对辐射所致小鼠造血功能抑制的对抗影响

目的　观察钝顶螺旋藻多糖 (Spirulinaphatensispolysaccharide ,SPP)对辐射损伤小鼠造血功能的影响。方法　小鼠5Gy全身照射后 5、10、15d分别取材 ,作骨髓粒单系、红系造血祖细胞培养 ,造血干细胞集落测定 ,以及外周血常规计数等。SPP用量为 12 5mg·kg 1 ·d 1 ,ip,伤后连续注射 6d。结果　辐射损伤后骨髓有核细胞数、粒单系CFU GM、红系CFU E、BFU E及造血干细胞CFU S集落数均显著低于正常对照组 (P <0 .0 1) ,但应用SPP后 ,上述各项指标数值 ,均比同伤情的不用药组显著提高 ,尤以伤后10d恢复最快 (P <0 .0 1)。结论　SPP对辐射损伤有明显保护和促进造血恢复的作用。     

无细胞胎肝液对大剂量化疗后小鼠骨髓造血细胞的影响

采用小鼠体内液体扩散盒及脾结节法观察了胎鼠和成年小鼠肝脏无细胞液对大剂量环磷酰胺化疗后小鼠骨髓造血细胞增殖与分化的影响。发现无细胞胎肝液能明显促进受抑制骨髓中多能造血干细胞(CFU—S)的集落形成率,但对扩散盒内粒系祖细胞(CFU—D)的增殖分化无促进作用。成年鼠肝无细胞液则对造血细胞的增殖无刺激活性,不能促进化疗后小鼠骨髓中造血干细胞恢复。认为无细胞胎肝液中存在的造血刺激因子能有效缓解细胞毒剂对骨髓多能造血干细胞的抑制。