喉癌患者树突状细胞体内诱导高效而特异的抗喉癌免疫

目的 探讨健康人外周血树突状细胞（DCs）在体内能否诱导出高效而特异的抗喉癌免疫应答。方法 从喉癌患者外周血诱导DCs回输荷瘤鼠，或DCs免疫后用癌细胞攻击。流式细胞术检测两组DCs的表面分子表达，MTT法检测其细胞毒作用．观察其免疫治疗及免疫保护作用。结果 （1）健康人外周血贴壁PBMCs经细胞因子诱导后可获大量DCs-纯度达70％以上。流式细胞术分析显示：两组DCs均高表达CD86、CD40、CD83、HLA—DR、CD54．负载抗原后的Db表达稍有下降．但两者差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）负载抗原的DCs能诱导同种异体T淋巴细胞增殖分化为CTLs．经MTT检测实验组的OD值为（0．57±0．12），与对照组相比．差异有统计学意义（t=12．55．P〈0．01）。经过负载抗原的DCs诱导的CTLs可特异性抑制和杀伤Hep-2细胞，差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）免疫保护实验：与对照组、未负载抗原D氏组、抗原粗提物组小鼠相比，负载抗原DCs组的成瘤率低（84％）、潜伏期长[（14±3）d，P〈0．01]、肿瘤体积及重量小（P〈0．01）。（4）免疫治疗实验：与其他三组相比．负载抗原DCs组的肿瘤体积及重量较小（P〈0．01）。结论 用GM—CSF及IL-4从人外周血诱导的DCs能有效提呈Hep-2喉癌抗原给T淋巴细胞，并且在体内诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫，有望成为有效的肿瘤特异性免疫治疗新途径。     

不同细胞制备方法对CIK细胞亚群比例的影响

目的研究不同细胞制备方法对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞亚群比例的影响。方法将42份CIK细胞随机均分为实验组和对照组。对照组按常规CIK细胞制备方法制备;实验组在对照组基础上于第2天加入重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)10ng/ml。待细胞成熟后采用流式细胞术检测两组CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD56+T淋巴细胞比例的变化。结果与对照组相比,实验组CD3+CD4+T细胞比例下降(P<0.01),CD3+CD56+T细胞比例升高(P<0.05);CD3+CD8+T细胞比例稍高,但无统计学差异(P>0.05)。结论在CIK细胞制备过程中加入rhG-CSF可抑制CD3+CD4+T细胞,增加CD3+CD56+T细胞生成。     

小鼠树突状细胞体外培养的实验研究

目的研究体外大量扩增小鼠树突状细胞(DCs)的实验方法。方法用细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-4(IL-4)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)]组合体外诱导培养DCs,混合淋巴细胞实验检测DCs的免疫刺激活性。结果培养6-8 d,细胞表面有大量毛刺状突起生长,即DCs;该DCs具有很强的刺激T淋巴细胞增殖的能力,且在T细胞与DCs比值为10∶1时最强。结论 TNF-α、IL-4、GM-CSF组合是诱导体外扩增DCs的较佳方法。     

前列腺癌微环境中树突状细胞分布及功能状态的初步研究

目的:探讨前列腺癌微环境中树突状细胞(DC)分布、功能状态的变化及其与记忆性T细胞的关系.方法:选取40例前列腺增生(BPH),40例前列腺上皮内瘤(PIN)及46例前列腺癌(Pca)石蜡组织标本,用S100标记组织中总DC、CD83标记成熟DC、CD45RO标记组织中记忆性T细胞,用SP法行免疫组化染色;观察阳性细胞分布,计算阳性细胞浸润密度,分析DC与T细胞的相关性.结果:由BPH、PIN到Pca的S100+DC、CD45RO+T浸润密度逐渐降低,前列腺癌组织降低明显(P<0.01);Pca中CD83+DC浸润密度高于BPH和PIN(P<0.05).前列腺癌组织中,S100+DC主要分布在肿瘤间质(P<0.01),CD83+DC主要分布在癌上皮间及癌周(P<0.01),且CD83+DC与CD45RO+T浸润密度呈正相关(rs=0.831,P<0.05).结论:前列腺癌组织中,DC数量减少且存在功能缺陷,不同功能状态的DC存在区域性分布;成熟DE数量的减少可能导致T细胞免疫功能下降.     

慢性特发性血小板减少性紫癜患者树突状细胞亚群改变及临床意义

目的探讨树突状细胞(DC)在慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病中的作用及糖皮质激素治疗对外周血DC亚群的影响。方法四色荧光流式细胞术分析35例ITP患者糖皮质激素治疗前、治疗后及20名健康人(对照组)外周血DC前体细胞亚群pDC1/pDC2(CD11c+CD123-/CD11c-CD123+)比值。结果35例ITP患者中,6例外周血pDC缺乏,其余29例患者外周血pDC1/pDC2比值为0.77±0.16,低于对照组(1.94±0.44)(P<0.05);治疗后无外周血pDC缺乏患者,血小板计数>100×109/L者27例,pDC1/pDC2比值为1.83±0.43,较治疗前显著升高(P<0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);血小板计数<100×109/L者8例,pDC1/pDC2比值为1.17±0.24,较治疗前显著升高(P<0.05),但与对照组比较,仍显著降低(P<0.05)。结论慢性ITP患者外周血pDC数量缺乏或pDC1相对减少;糖皮质激素治疗可提升患者外周血pDC数量,完全或部分纠正DC亚群失衡。     

粒细胞集落刺激因子对心肌梗死大鼠心肌T细胞亚群的影响

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对心肌梗死大鼠心肌T淋巴细胞亚群的影响。方法:29只大鼠随机分为干细胞动员组(GAMI,n=9)、心肌梗死对照组(AMI,n=10)和假手术组(SO,n=10)。GAMI组和AMI组结扎左冠状动脉造成心肌梗死,SO组行相似的手术操作但不结扎冠状动脉。GAMI组给予rhG-CSF(50μg·kg-1·d-1),皮下注射,共7d。AMI组及SO组则每日皮下注射同等体积的生理盐水,共7d。心肌梗死后4周,通过免疫组化染色检测心肌CD3 、CD4 和CD8 细胞计数并计算CD4 /CD8 比率。结果:AMI组大鼠有3只分别于术后第3、7、8天死亡,GAMI组与SO组大鼠至观察结束无一只死亡。与AMI组相比较,GAMI组CD3 和CD8 细胞计数降低(均P<0.01),CD4 细胞计数无明显变化(P>0.05),CD4 /CD8 比率升高(P<0.01)。结论:G-CSF可降低心肌梗死后大鼠心肌CD3 和CD8 T淋巴细胞计数、升高CD4 /CD8 比率,提示G-CSF可减轻心肌梗死后的免疫损伤。     

不同集落刺激因子对完全缓解急性髓系白血病患者树突状细胞亚群的影响

目的研究粒系集落刺激因子（G—CSF）和粒单系集落刺激因子（GM-CSF）对完全缓解急性髓系白血病（AML）患者树突状细胞（DC）的功能及其亚群变化。方法将36例化疗达完全缓解的AML患者根据随机数字表法分为三组,G组给予G-CSF200μg/d皮下注射,GM组给予GM—CSF200μg/d皮下注射,对照组（c组）皮下注射0．9％氯化钠注射液。比较其疗效。结果G组DC表面CD80、CD83和CD86表达均低于GM组和C组（t=4．34、5．43、4．54、4．54、5．25、3．54,均P〈0．05）,GM组DC表达CDllc高于G组和C组（t=4．54、4．27,均P〈0．05）。G组和GM组DC促淋巴细胞增殖能力均高于c组（t=4．54、5．64,均P〈0．05）;GM组DC促进CD4＋T淋巴细胞增殖的能力高于G组（t=3．54,P〈0．05）。ELISA法检测发现,GM组DC分泌IL-12高于G组和C组;G组DC分泌IL-10高于GM组和c组（t=3．54、4．23、4．32、3．87,均P〈0．05）。结论G-CSF和GM—CSF可使完全缓解AML患者DC亚群发生偏移,G-CSF促使其偏向DC2而具有一定免疫抑制作用,而GM-CSF使DC亚群偏向DC1而促进细胞免疫。     

回哞与展望——细胞集落刺激因子的临床评价

目的:回顾细胞集落刺激因子进展,借以评价其疗效及安全性.方法:采用近年来国内、外文献进行综述.结果与结论:于20世纪90年代上市的细胞集落刺激因子,作为生物工程药品中多肽类的代表,进展十分迅猛,临床应用也同步增多,近期国内、外专业文献的有关报道亦浩如烟海.大量文献证实,应用细胞集落刺激因子可克服肿瘤化疗和放疗引起的骨髓毒性,有利于大量强化治疗,缩短应用肿瘤化疗周期,并减少感染的并发症.     

GM-CSF分泌型肝癌疫苗对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的 研究粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)分泌型肝癌疫苗对小鼠移植性肝癌H22的免疫调节效应.方法 将构建完成的GM-CSF分泌型H22肝癌瘤苗免疫ICR小鼠(肝癌组),同时设立无GM-CSF基因修饰H22肝癌瘤苗组及PBs对照组;应用流式细胞术检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群,CCK-8法检测脾细胞细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活性.结果 肝癌组免疫小鼠外周血中CD8+T的含量高于瘤苗组及对照组(P<0.01);肝癌组CTL杀伤活性亦远高于其他两组(P<0.01).结论 GM-CSF分泌型肝癌细胞疫苗可抑制肿瘤细胞生长,并且诱导自体T细胞向CTL方向增殖分化CTL的增殖是该瘤苗引起特异性抗瘤免疫的基础,而GM-CSF的分泌则极大的增强了该瘤苗的免疫效果,此免疫效果主要通过直接活化CD8+CTL细胞产生.     

重组人粒细胞集落刺激因子对健康供者脾脏大小的影响及其相关因素研究

目的：观察重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对健康造血干细胞捐献者脾脏大小的影响及其相关因素。方法：28例健康供者皮下注射rhG-CSF5μg/（kg.d）,连续5d动员造血干细胞。在注射前和最后一次注射后第1、7及30天对健康供者进行脾脏超声检查,测量脾脏大小（长径×厚度）;同时计数外周血中性粒细胞数量并检测细胞表面CD11b表达的相对平均荧光强度（MFI）。结果：供者脾脏的大小在注射前为（40.3±3.4）cm2,最后一次注射后第1、7和30天分别为（48.2±6.1）、（47.8±6.6）和（39.2±5.0）cm2,最后一次注射后第1、7天与注射前相比差异均有统计学意义（均P〈0.013）;供者外周血中性粒细胞数量在注射前为（3.4±1.0）×109/L,最后一次注射后第1和7天分别为（29.3±6.9）×109/L和（3.2±0.7）×109/L,最后一次注射后第1天与注射前相比差异有统计学意义（P〈0.017）;中性粒细胞表面CD11b表达的相对MFI在注射前为（57.1±43.5）,最后一次注射后第1和7天分别为（96.8±51.3）和（66.9±30.4）,最后一次注射后第1天与注射前相比差异有统计学意义（P〈0.017）。线性回归分析结果显示,最后一次注射后第1天脾脏的增大与外周血中性粒细胞数量及细胞表面CD11b的表达均具有相关性（r=0.603,P=0.000;r=0.436,P=0.023）。结论：rhG-CSF可使健康供者脾脏在短期内明显增大,这与中性粒细胞数量以及细胞表面CD11b的表达相关。     

特应性皮炎患儿外周血DC1／DC2亚群的检测及临床意义

目的:探讨特应性皮炎(AD)患儿外周血树突状细胞亚群(DC1/DC2)的其临床意义。方法:采用免疫荧光三标记流式细胞术检测38例AD患儿外周血DC亚群(DC1/CD11c+和DC2/CD123+),并以35例正常儿童作为对照。结果:AD患儿外周血CD123+DC百分率(1.28±0.59)%,比对照组(0.69±0.25)%明显增高(P<0.05),CD11c+DC百分率(2.81±1.44)%与对照组(2.56±0.78)%相比,差异无显著性(P>0.05);AD患儿CD11c+DC和CD123+DC与疾病严重程度无关(P>0.05)。结论:特应性皮炎患儿外周血中DC2亚群占优势,导致Th1/Th2细胞向Th2类方向偏移,可能与特应性皮炎的发病机制有关。     

小鼠髓源性树突状细胞分离培养及鉴定

目的 建立小鼠髓源性树突状细胞分离培养及鉴定方法。方法 取小鼠股骨和胫骨骨髓细胞,使用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, rmGM-CSF)20 ng·mL^-1联合白细胞介素-4(interleukin 4,IL-4)10 ng·mL^-1诱导小鼠骨髓前体细胞分化为树突状细胞(dendritic cell)。体外培养10 d,使用流式细胞术鉴定细胞表面树突细胞特异性标志物CD11c、MHCⅡ、CD80、CD86、CD40及CCR7的表达。进一步使用OVA_257-264多肽处理细胞48 h,流式细胞术分析该多肽与MHC I形成的复合物的表达,验证该细胞的抗原提呈功能。结果 依据本文方法,培养第10天每只小鼠可获得1.5×10⁷～2×10⁷个细胞。其中,38.4%细胞表达CD11c, CD11c阳性的细胞中有15.2%细胞表达MHCⅡ、32.3%细胞表达CD80、...     

过期妊娠外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的观察

Objective To study the expressions of T cell subsets and NK cells in peripheral blood of postterm pregnancy without symptoms of labor.And to explore the relationship between postterm pregnancy and maternal cell immune function.Methods The plasma levels of t cell subsets and NK cells were detected by using flow cytometry in 100 patients with postterm pregnancy and 100 patients with threatened labor from 37 weeks to 41 weeks.And their propo~ions were calculled with the WBC of blood routine.Results The proportion of NK cell,CD3+,CD8+in the experimental group were lower than those of the control group.There is no significant difference(P＞0.05)between them;CD4+,CD4+/CD8+are significantly lower than those of the control group(P＜0.05).Conclusion The immune function of the patients with postterm pregnancy is significantly lower than that of the normal labor.     

过期妊娠外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的观察

Objective To study the expressions of T cell subsets and NK cells in peripheral blood of postterm pregnancy without symptoms of labor.And to explore the relationship between postterm pregnancy and maternal cell immune function.Methods The plasma levels of t cell subsets and NK cells were detected by using flow cytometry in 100 patients with postterm pregnancy and 100 patients with threatened labor from 37 weeks to 41 weeks.And their propo~ions were calculled with the WBC of blood routine.Results The proportion of NK cell,CD3+,CD8+in the experimental group were lower than those of the control group.There is no significant difference(P＞0.05)between them;CD4+,CD4+/CD8+are significantly lower than those of the control group(P＜0.05).Conclusion The immune function of the patients with postterm pregnancy is significantly lower than that of the normal labor.     

复方甘草甜素对寻常型银屑病的疗效及对T细胞亚群影响

目的探讨复方甘草甜素治疗寻常型银屑病的临床疗效及对细胞免疫的影响。方法应用甘草甜素片剂对30例寻常型银屑病患者进行临床治疗观察,用流式细胞术检测患者外周血T细胞亚群。同时设32例为治疗对照组。结果寻常型银屑病患者外周血CD8+、CD25+T细胞水平升高,治疗后明显降低,皮损好转,PASI评分显著下降,在临床疗效方面与治疗对照组无显著性差异(P>0.05)。结论甘草甜素对寻常型银屑病有明显疗效,可能通过调节细胞免疫而发挥作用。     

过期妊娠外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的观察

目的 对过期妊娠无产兆孕妇进行外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的观察,观察过期妊娠与母体细胞免疫是否有关.方法 选择过期妊娠无产兆孕妇100例为过期组,同时选择孕37～41周先兆临产孕妇100例为对照组.对两组孕妇外周血T淋巴亚群和NK细胞进行测定,同时行血常规检查,结合外周血白细胞计数计算其百分比.结果 正常先兆临产组...     

CD8阳性T细胞亚群在肺癌外周血的检测及分析

目的 检测肺癌患者外周血清中CD8⁺T细胞亚群CD28⁺及CD57⁺的表达程度,探讨其临床意义。 方法 合肥市第二人民医院经细胞学或病理学诊断为肺癌的初次治疗患者30例, TNM分期(UICC,第7版)Ⅲ期12例,Ⅳ期18例。病理类型腺癌15例,鳞癌8例,小细胞肺癌7例。流式细胞仪分别检测肺癌患者组治疗前后及健康对照组人群的血清中CD8⁺T细胞CD28⁺和CD57⁺的表达水平,分析该表达水平变化及与肺癌临床分期和病理学类型之间的关系。 结果 肺癌患者治疗前血清中CD28⁺T细胞亚群比例为(12.34±3.72)%,CD57⁺ T细胞亚群比例为(19.53±5.26)%。而健康对照组血清中CD28⁺T细胞亚群比例为(23.53±4.15)%,CD57⁺ T细胞亚群比例为(11.37±2.73)%,差异有统计学意义(P<0.05),该类指标与肿瘤病理类型无关,而随着不同临床分期增加,CD8⁺CD57⁺T细胞未见差异,而CD8⁺CD28⁺T细胞表达差异有统计学意义(P<0.05)。经两周期化疗后,缓解组(完全缓解+部分缓解)患者血清中CD28⁺、CD57⁺T细胞亚群比与健康对照组患者相比,差异无统计学意义(P>0.05),而未缓解组(稳定+进展)患者的CD28⁺、CD57⁺T细胞亚群比例分别为(10.62±2.74)%、(20.45±4.36)%.与健康对照组差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 肺癌患者血清中CD8⁺CD28⁺T细胞表达较正常人群明显减低,而CD8⁺CD57⁺T细胞表达较正常人群明显升高,联合该两种T细胞亚群检测不仅可以了解肺癌患者免疫状况,同时可以评估肺癌患者预后,有一定临床应用价值。     

儿童支气管哮喘患儿外周血DC细胞数量和功能的分析研究

目的 观察支气管哮喘患儿外周血树突状细胞(DC)数量和亚型细胞的变化,研究DC细胞在支气管哮喘发病中的作用及可能的发病机理.方法 38例支气管哮喘患儿作为哮喘组,将哮喘组患儿随机分为控制组(21例)及新诊断组(17例),选取17例同期本院保健科体检健康儿童作为对照组,利用流式细胞技术先分选DCs细胞,后分选出亚型细胞:...     

小鼠骨髓来源树突状细胞对T细胞的活化作用

目的 从小鼠骨髓中体外诱导、扩增树突状细胞(DCs),检测DCs对T细胞的活化作用.方法 从小鼠骨髓中分离单个核细胞(MNCs),在重组鼠粒细胞-巨噬细胞集落因子(rmGM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的诱导下培养扩增DCs.光学显微镜观察其形态特征,流式细胞仪分析其表型特征,混合淋巴细胞反应(MLR)检测DCs刺激同种异体T细胞增殖的能力.结果 MNCs经过rmGM-CSF、IL-4和TNF-α诱导培养12 d后,具有典型的DCs形态,高表达MHCⅡ类分子、CD11c、CD80、和CD86抗原.具有极强的激发刺激同种异体T细胞增殖的能力.结论 体外诱导、扩增DCs具有极强的激发刺激同种异体T细胞增殖的能力.