赛特铂对人卵巢癌细胞A2780的凋亡诱导作用

目的：观察赛特铂对人卵巢癌细胞A2780的凋亡诱导作用及对细胞周期的影响。方法：MTT法观察药物对细胞增殖的抑制作用，碘化丙锭染色分析细胞周期变化，电镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化，多参数流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡率，并测定caspase-3的活性变化及caspase抑制剂对细胞存活率的影响。结果：赛特铂可抑制A2780细胞的增殖并诱导凋亡，具有明显的剂量依赖性，作用与顺铂相当。赛特铂主要导致A2780细胞S期细胞明显增加，G2／M期细胞少许增加。经赛特铂作用后漂浮细胞呈现典型凋亡细胞形态学改变。caspase-3活性随着细胞凋亡率增加而增加，caspase抑制剂不完全抑制细胞死亡。结论：赛特铂影响A2780细胞周期分布，可体外诱导A2780细胞凋亡。caspase依赖性和caspase非依赖性途径参与了其凋亡过程，其中caspase依赖性途径又包括caspase-3依赖性和非easpase-3依赖性途径。     

二氢杨梅素激活内质网应激促进卵巢癌A2780细胞凋亡

本研究应用体内、外实验探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin, DHM)通过作用于内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)通路而诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用及机制。结果发现, DHM处理人卵巢癌A2780细胞后,可引起细胞内ERS标志性蛋白葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78, GRP78)、应激性凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein, CHOP)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-12 (cysteinyl aspartate specific proteinase-12, caspase-12)的表达增加;经ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenyl butyric acid, 4-PBA)预处理并进行DHM干预后,细胞活力出现降低并伴随着凋亡率升高。动物实验遵循重庆医科大学动物伦理委员会的规定。将DHM混悬液以腹腔注射方法注射至卵巢癌模型裸鼠后,可明显抑制裸鼠体内移植瘤的生长,提高组织内GRP78和CHOP的表达水平并促进促凋亡蛋白caspase-...     

奥沙利铂诱导人白血病细胞株凋亡的研究

目的：研究第三代铂类化合物奥沙利铂对人早幼粒细胞白血病细胞株(HL—60)的影响。方法：采用MTT法检测奥沙利铂对HL—60细胞作用的时间效应和剂量效应；流式细胞仪检测细胞的DNA含量，分析细胞周期的改变；光镜和电镜观察奥沙利铂作用后细胞形态变化。结果：随着作用时间及药物浓度的增加，奥沙利铂对HL-60细胞增殖的抑制作用就越明显。0．032mmol/L奥沙利铂作用72小时，细胞生长抑制率86．5％，流式细胞仪检测HL-60细胞Q／M期细胞增多，形态学显示细胞凋亡。结论：奥沙利铂有明显抑制恶性白血病细胞生长和促进细胞凋亡的作用。     

诱导细胞凋亡的抗肿瘤抗生素

细胞凋亡是肿瘤防治的一个非常重要的机制，诱导细胞凋亡的抗肿瘤抗生素的面世开辟了肿瘤化疗药物研发的新途径。概述诱导细胞凋亡的抗肿瘤抗生素种类、来源、抗肿瘤谱及实验研究，并对其作用机制进行探讨。     

分枝石蕊多糖诱导人白血病K562细胞凋亡

目的：研究分枝石蕊多糖（CFP-1）是否能诱导K562细胞凋亡。方法：抑制细胞增殖的测定采用MTT法;用荧光显微镜和透射电镜观察细胞的形态学变化;采用琼脂糖凝胶电泳法观测DNA碎片;用流式细胞仪检测凋亡细胞数。结果：CFP-1（50-800mg/L）明显抑制K562细胞增殖,并且呈浓度依赖性,K562细胞与CFP-1300mg/L共同培养5d后,观察到典型的凋亡形态变化,电泳呈现梯形条带。结论：CFP-1诱导人白血病K562细胞凋亡。     

去甲斑蝥素诱导人卵巢癌SK-OV-3细胞发生有丝分裂期阻滞与凋亡

目的考察去甲斑蝥素(NCTD)对人卵巢癌SK-OV-3细胞生长的抑制作用,探究其诱导细胞发生有丝分裂期阻滞及凋亡的过程及相关性。方法 NCTD 30,60,120和240μmol.L-1分别作用人卵巢SK-OV-3细胞24,48和72 h后,MTT法检测细胞存活率;NCTD 60μmo.lL-1分别作用SK-OV-3细胞0,6,12和24 h后,流式细胞术测定细胞周期的变化;NCTD 60μmol.L-1分别作用SK-OV-3细胞0,6,12和24 h,倒置显微镜下检测其对细胞形态学变化的影响;Giemsa染色检测细胞核的变化;间接免疫荧光术结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测细胞内微管分布及有丝分裂期纺锤体形成的影响。NCTD 60μmol.L-1分别作用12和36 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况;再将NCTD 60μmo.lL-1作用12 h后的细胞,采用温和的机械振荡法分离为悬浮细胞和贴壁细胞,继续作用24 h,流式细胞术及Giemsa染色检测分析两个时相两种细胞凋亡的影响。结果 MTT结果显示,NCTD 30～240μmol.L-1对SK-OV-3细胞的生长抑制作用存在明显的时间(P<0.05)和浓度依赖性(P<0.05);NCTD作用SK-OV-3细胞24,48和72 h的IC50分别为(261.3±2.4)μmo.lL-1,(48.3±1.7)μmol.L-1和(10.9±1.0)μmol.L-1。NCTD 60μmol.L-1分别作用于SK-OV-3细胞0,6,12和24 h,SK-OV-3细胞逐渐表现出G2/M期阻滞,呈时间依赖性;倒置相差显微镜下观察,NCTD引起SK-OV-3细胞逐渐收缩变圆,与周围细胞分离;Giemsa染色可见处于有丝分裂期的细胞显著增多,多个核细胞比例增多;免疫荧光染色发现,NCTD组细胞的微管系统受到干扰,有丝分裂期细胞纺锤体形成异常。NCTD作用细胞12和36 h凋亡率分别达20.4%和62.3%;将NCTD作用12 h的细胞,人工振荡分离为悬浮细胞和贴壁细胞,检测凋亡情况,同时检测继续作用24 h后两组细胞凋亡情况,发现处于有丝分裂间期的SK-OV-3细胞凋亡率大于处于有丝分裂期的细胞。结论 NCTD主要通过诱导人卵巢癌SK-OV-3细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡抑制细胞生长。干扰细胞有丝分裂过程中微管的组装和纺锤体的形成可能是NCTD诱导SK-OV-3细胞M期阻滞的原因之一。NCTD诱导的SK-OV-3细胞发生凋亡可不依赖细胞M期阻滞。     

左炔诺孕酮诱导体外人子宫肌瘤细胞凋亡的抗肿瘤机制初步研究

目的：探讨左炔诺孕酮诱导体外人子宫肌瘤细胞凋亡的抗肿瘤机制。方法：单层细胞培养后,使用MTT法分析左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞增殖作用;使用流式细胞术分析左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞周期与凋亡的影响;使用Western-blot法分析左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞P53凋亡通路的影响。结果：左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞的增殖具有明显抑制作用;左炔诺孕酮促使人子宫肌瘤细胞周期阻滞于G₂/M期,并诱导细胞发生凋亡;左炔诺孕酮激活人子宫肌瘤细胞P53凋亡通路而引起细胞发生凋亡。结论：左炔诺孕酮引起人子宫肌瘤细胞周期阻滞于G₂/M期,并使细胞发生凋亡,进而抑制其增殖,这可能与该药物上调P53蛋白的表达,并激活Bcl-2介导的线粒体凋亡途径有关。     

人卵巢癌细胞株3AO诱导凋亡的研究进展与评价

目的：细胞凋亡是各种抗癌药物诱导癌细胞正常死亡的主要方式，本文旨在对人卵巢癌细胞株3AO诱导凋亡进行评价。方法：采用国内外文献综述方法。结果及结论：通过对人卵巢癌细胞株3AO诱导及促进凋亡的因素及抑制凋亡的因素进行阐述，更多地了解诱导、促进及抑制3AO凋亡的作用机制，更好地指导抗癌药物的临床应用。     

TRAIL联合顺铂诱导骨肉瘤HOS-8603细胞凋亡研究

目的研究TRAIL联合顺铂诱导HOS-8603细胞的凋亡及其机制。方法 MTT法分别测定TRAIL,顺铂,和TRAIL+顺铂对HOS-8603细胞的抑制率,流式细胞法测定亚G1期细胞百分率及PI和Rh123双染色后细胞的ΔΨm。结果三组分别由TRAIL、顺铂、TRAIL+顺铂处理过的HOS-8603细胞用MTT法测抑制率分别为29%、33.6%、58.5%。随着药物作用时间增加,HOS-8603细胞凋亡数增加和ΔΨm降低(P<0.01),两者呈直线相关。结论 TRAIL和顺铂能协同诱导HOS-8603细胞凋亡,其机制可能是通过使线粒体膜通透性转运孔开放,ΔΨm降低来实现的。     

原白头翁素衍生物诱导人乳腺癌细胞的凋亡机制

目的:探讨原白头翁素衍生物诱导MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡的作用机制。方法:采用体外培养方法培养MCF-7人乳腺癌细胞;应用免疫组织化学技术检测实验组和对照组中死亡受体蛋白(Fas),天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、Caspase-8,细胞核转录因子(NF)-κB的表达。结果:对照组中Fas、Caspase-3和Caspase-8蛋白低表达于细胞质或细胞核,呈弱阳性;实验组细胞这些蛋白表达增高,呈强阳性;2组3种蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。对照组细胞中NF-κB高表达于细胞浆和细胞核,而实验组NF-κB表达较对照组下降,呈弱表达于细胞质。结论:原白头翁素衍生物通过外源性途径即死亡受体通路完成凋亡的启动和执行,抑制NF-κB信号转导途径可能是促进MCF-7细胞凋亡的原因。     

地塞米松对卵巢癌SKOV-3细胞的影响

目的研究地塞米松对体外培养条件下的卵巢癌细胞SKOV-3细胞增殖的影响及诱导其凋亡的情况。方法取对数生长期的SKOV-3细胞（细胞数为5×10^4／mL）分别接种于不同细胞培养板上,试验组每孔加入200μL不同浓度的地塞米松,空白对照组加入等体积PRMI-1640培养液孵育,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测吸光度（A490值）并计算SKOV-3细胞增殖抑制率;PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点的细胞凋亡率。结果MTT法检测结果显示,SKOV-3细胞增殖抑制率随着地塞米松浓度和作用时间的增加均明显增大,以40μmol／L浓度的试验组培养48h的抑制率最高,达（45．25±3．12）％。流式细胞仪检测显示。地塞米松处理后可引起G0／G1期细胞明显增加（P〈0．05）,且SKOV-3细胞凋亡率随着地塞米松浓度增加有升高趋势。结论地塞米松能诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡。     

封闭野生型p53表达使卵巢癌细胞药物敏感性增加的机制

目的：观察p53状态对卵巢癌细胞的顺铂药敏性的影响。方法：将pCMV-MDM2质粒转染于p53状态为野生型A2780卵巢癌细胞系，同时转染pCMV空载体作为对照。通过Western blot证明转染后细胞在受到损伤时p53表达被封闭。通过集落形成实验检验A2780在p53状态改变前后细胞药敏性，并通过流式细胞技术检测其细胞周期的改变，原子吸收光谱仪测定DNA-顺铂结合物以检验其核苷酸切除修复功能是否丧失。结果：(1)p53失表达的细胞集落形成率与对照组相比，在给予顺铂后明显下降，提示对顺铂的药物敏感性增加。(2)实验组细胞在给以顺铂治疗后，出现了明显的S期阻滞，而在p53功能完整的对照组细胞却主要出现G2／M期阻滞。(3)给予顺铂后，所有细胞的铂吸收量相同。p53被封闭后，细胞的铂结合量增加。结论：封闭野生型p53表达增加了卵巢癌细胞A2780对顺铂的敏感性，这是由于p53参与细胞周期检查点的调节和DNA修复过程而致。     

Caspase-3在survivin反义寡核苷酸诱导人结肠癌细胞 HT29凋亡时的表达

目的：靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位合成反义寡核苷酸（ASODN）并将其转染至survivin表达阳性的HT29细胞中，观察HT29细胞中caspase-3的表达。方法：将survivin ASODN转染至HT29细胞中。噻唑蓝（Mar）法观察survivin ASODN的细胞毒作用，测定IC50；Hoechst 33342／PI双荧光染色，观察转染HT29细胞核变化；提取各组细胞总RNA，RT-PCR观察Caspase-3的表达。结果：不同浓度的survivin ASODN分别处理HT29细胞44h后，IC50值为1000nmol/L。1000nmol/L survivin ASODN处理HT29细胞36h后，荧光显微镜下可见凋亡小体。PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳，紫外透射仪下明显观察到500bp条带，产物经过序列测定证实为Caspase-3。结论：survivin ASODN可显著抑制HT29细胞增殖，诱导其凋亡。Caspase-3基因表达是其诱导HT29细胞凋亡的机制之一。     

乙酰氧基胡椒酚乙酸酯对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡与侵袭的影响

目的:研究乙酰氧基胡椒酚乙酸酯(ACA)对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡与侵袭的影响。方法:通过RT-PCR法检测ACA对人乳腺癌MCF-7细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达的影响,免疫细胞化学法检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达。结果:MCF-7细胞经50、100、150μmol·L-1ACA干预后,Bcl-2 mRNA表达显著下降,Bax mRNA表达显著升高(P<0.01);50、100、150μmol·L-1ACA作用后细胞中MMP-2和MMP-9的蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:ACA诱导的Bcl-2 mRNA表达的下调和Bax mRNA表达的上调可能参与了其诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用。ACA能抑制人乳腺癌MCF-7细胞中MMP-2和MMP-9的蛋白表达从而抑制其侵袭。     

甘草酸通过线粒体膜去极化诱导HPV18阳性的人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用研究

目的 分析甘草酸对人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）18阳性的人宫颈癌HeLa细胞的抗增殖和促凋亡特性及其可能的作用方式,探讨甘草酸在预防HPV感染的作用和治疗宫颈癌的潜力。方法 MTT法检测甘草酸在caspase-8,caspase-9,caspase-3抑制剂存在的情况下对HeLa细胞增殖的抑制作用,相差显微镜观察细胞形态学,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色检测细胞核凝结和Hoechst 33342染色检测核形态,Annexin V-FITC/PI法分析细胞凋亡,采用caspase-8,caspase-9和caspase-3比色试剂盒测定宫颈癌细胞中caspase的活性,通过Mito Tracker Red CMX Ros染色评估线粒体膜电位（ΔΨm）。结果 与对照组相比,甘草酸可显著降低HeLa细胞活力,并伴随着核浓缩和DNA碎片的增加,呈剂量依赖性。甘草酸可通过线粒体去极化诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,并诱导caspase-8,caspase-9和caspase-3活化。结论 甘草酸对宫颈癌细胞的抗增殖和促凋亡特性可能是通过诱导线粒体膜电位的破坏,激活细胞内和细胞外途径的caspases活性,甘草酸可作为预防和控制宫颈癌的一种辅助手段。     

槲皮素诱导人结肠癌细胞HT-29凋亡的机制研究

目的 探讨槲皮素在体外对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响,并对其诱导机制进行研究。方法 体外常规培养HT-29细胞,随机设定对照组和高、中、低剂量（32,16,8 μg·mL^-1）槲皮素组,药物干预24 h后,采用CCK-8试剂盒检测槲皮素对HT-29细胞增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态变化,蛋白免疫印迹法检测MKK3/6/p38信号通路蛋白表达,并同时检测凋亡相关蛋白Caspase 8、Caspase 3、Bax及Bcl-2的表达水平。结果 槲皮素干扰HT-29细胞24 h后,CCK-8实验发现槲皮素可明显抑制细胞的增殖;形态学观察发现细胞密度明显减小、细胞体积变小;免疫印迹实验发现槲皮素可诱导MKK3/6及p38的磷酸化,进而促进促凋亡蛋白Caspase8、Caspase3及Bax的表达,抑制了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 槲皮素可诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡,其作用机制可能与激活MKK3/6/p38信号通路有关。     

紫杉醇对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨紫杉醇在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法测定紫杉醇对A549细胞增殖的影响;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用48h后的细胞周期和凋亡率;Western Blot检测的Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:紫杉醇抑制A549细胞增殖呈时效和量效关系;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后可见凋亡细胞;紫杉醇作用48h后药物组G2～M期细胞百分比均高于对照组(均P<0.01),药物组细胞凋亡率高于对照组(均P<0.01),且凋亡率随药物浓度增加而增加;Western Blot显示,不同浓度紫杉醇作用于A549细胞48h,Bax的表达随药物浓度增加而增加,Bcl-2的表达随药物浓度增加而减低。结论:紫杉醇能抑制肺腺癌A549细胞株的增殖,其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G2～M期和通过上调Bax、下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的,并且紫杉醇抑制A549细胞增殖和诱导凋亡作用随药物浓度增加而增加。