加味四君子汤诱导小鼠肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的:从诱导肿瘤细胞凋亡的角度探讨中药复方加味四君子汤抗肿瘤作用的机理。方法:1.运用透射电镜观察肿瘤组织中凋亡细胞的超微结构。2.运用原位末端标记法观察凋亡细胞形态并计数,计算凋亡指数。3.运用流式细胞仪分析加味四君子汤对肿瘤细胞增殖周期的影响。结果:1.透射电镜观察到凋亡细胞超微结构发生了一系列典型变化。2.原位末端标记法镜下可见不同时期的凋亡细胞,加味四君子汤组凋亡指数为12.29%,与生理盐水组比较差异非常显著(P<0.01)。3.流式细胞仪分析发现加味四君子汤组G0-G1期细胞增加,S期和G2-M期细胞减少,中药组处于G0-G1期的细胞占57.88%,与生理盐水组比较差异非常显著(P<0.01)。结论:加味四君子汤抗肿瘤作用机理之一可能是将细胞周期阻滞在G0-G1期,继而导致受阻滞的细胞发生凋亡。     

VP16诱导Raji肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的 从细胞凋亡角度探讨ＶＰ１６抗肿瘤作用的机理。方法 用光学显微镜及电子显微镜观察了ＶＰ１６诱导Ｒａｊｉ细胞凋亡的形态学变化;用琼脂糖凝胶电泳观察了ＤＮＡ的梯形改变。结果 ＶＰ１６可明显诱导Ｒａｊｉ细胞调亡,５ｕｇ．ｍｌ＾－１ＶＰ１６作用４８ｈ时,凋亡指数为５８．３３％±３．０６％。与对照组相比有显性差异（Ｐ〈０．０１）。凋亡指数与药物浓度的对数呈正相关（ｒ＝０．９４０７,Ｐ〈０．０１）。结论 诱导凋亡是ＶＰ１６抗肿瘤作用的机理之一。     

加味四君子汤诱导Raji细胞凋亡实验研究

<正>由于胫骨内侧软组织覆盖较少,进入胫骨下段滋养血管少,手术治疗易发生内固定失败,保守治疗易引起骨折畸形愈合、延期愈合、不愈合、关节僵硬等并发症。笔者自2007年2月—2013年6月,在本院应用胫骨远端外侧L形解剖钢板固定配合中药治疗胫骨下段骨折55例,获得满意效果,现报告如下。1临床资料55例均为我院骨伤科住院病人,伴腓骨骨折35例;男30例,女25例;左侧29例,右侧26例;闭合骨     

X射线诱导Raji细胞凋亡的实验研究

目的探讨X射线对人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖及凋亡的影响。方法用不同剂量X射线照射细胞,并在不同时间段用倒置显微镜观察照射后细胞的形态变化及生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期,并观察X射线对克隆形成的影响。结果 16Gy照射后48h对Raji细胞的抑制率(92.67±1.20)%最显著;8Gy照射后48h早期凋亡率(42.04±3.62)%最高;8Gy照射后24h细胞周期G2/M期细胞(57.86±3.31)%,明显大于正常对照组(14.54±2.32)%;8Gy照射后第7天无克隆形成,第14天克隆数为(5.33±2.40),明显小于正常对照组第7天(116.67±20.28)和第14天(263.33±20.27)。结论 X射线可抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡,照射后细胞周期阻滞在G2/M期,X射线8Gy照射后不能完全抑制Raji细胞的增殖。     

三氯化锑对Raji细胞增殖抑制和凋亡诱导作用的实验研究

目前,诱发细胞凋亡已成为治疗恶性肿瘤的新思路.近年来,我国学者利用砷剂对白血病细胞凋亡原理治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的有关研究取得了重大进展,三氧化二砷以及复方青黛片(主要成分为四硫化四砷)对APL治疗均有较高完全缓解率[1-2],因此细胞凋亡已成为白血病治疗的新思路,锑剂可用于黑热病的治疗[3],不同锑剂可诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡[4].     

雄黄对Raji细胞凋亡的影响

目的：了解雄黄体外抗肿瘤的细胞谱。方法：采用MTT法测定细胞的活力,利用流式细胞仪测定细胞周期、Annexin V和bcl-2的表达。结果：雄黄体外对Raji细胞的生长有明显的抑制作用,对细胞周期的影响表现为G2/M期的阻滞,Annexin V阳性的凋亡细胞明显增加,并且可使bcl-2的表达下调。结论：雄黄有诱导Raji细胞凋亡的作用。     

苦参碱诱导Raji细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响

目的:观察苦参碱(Matrine,Mat)对体外人淋巴瘤Raij细胞增殖及细胞凋亡的影响,探讨 Mat 诱导 Raji 细胞凋亡的作用机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察Mat对Raji细胞增殖的影响;流式细胞术检测凋亡率;免疫细胞化学技术检测 Mat对Raji 细胞株 Bcl-2 蛋白表达的影响;RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA表达.结果:不同浓度的 Mat 对 Raji 细胞均有一定的增殖抑制作用,且呈量效和时效关系;Mat能明显诱导Raji细胞凋亡;免疫细胞化学结果显示 Bcl-2 在实验组中的表达显著低于对照组.RT-PCR 显示 Bcl-2 mRNA 表达明显减弱,且随剂量增加越明显.结论:Mat 能抑制人淋巴瘤 Raji 细胞的增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调 Bcl-2 表达有关.     

组蛋白甲基化酶抑制剂对人淋巴瘤Raji细胞生存、凋亡及细胞周期的影响

  目的  研究组蛋白甲基化酶Zeste基因增强子同源物2（enhancer of Zeste homolog 2,EZH2）的3种抑制剂（UNC1999、DZNep及GSK343）对人B细胞非霍奇金淋巴瘤Raji细胞的影响。  方法  PCR扩增EZH2基因16（Y641）和18（A677）外显子,Sanger测序检测其突变情况;蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测正常成年人淋巴细胞及Raji细胞EZH2的表达;使用不同浓度的UNC1999、DZNep及GSK343处理Raji细胞,CCK-8技术检测Raji细胞的生存情况;流式细胞术检测Raji细胞的凋亡情况和细胞周期变化;Western blot检测药物处理后EZH2及H3K27 me3的表达。  结果  Sanger测序显示Raji细胞不携带EZH2基因Y641和A677突变位点。Western blot显示,相比正常成年人淋巴细胞,Raji细胞EZH2蛋白高表达。CCK-8法结果显示UNC1999、DZNep及GSK343对Raji细胞均有抑制生存的作用,DZNep抑制能力最弱。流式细胞术凋亡检测显示UNC1999、DZNep及GSK343促进Raji细胞的凋亡,UNC1999作用强于GSK343与DZNep;3种抑制剂均阻滞Raji细胞于G₁/G₀期,UNC1999组细胞周期阻滞最显著。Western blot显示UNC1999和GSK343抑制EZH2组蛋白甲基化酶的活性,降低H3K27 me3的表达。  结论  EZH2抑制剂可通过降低H3K27 me3的表达抑制Raji细胞生存,促进细胞凋亡,改变细胞周期。UNC1999作用效果优于GSK343及DZNep,且EZH2抑制剂对Raji细胞的作用不依赖于EZH2的突变。     

IL-21对Raji细胞增殖抑制和凋亡诱导作用的实验研究

目的 探讨IL-21对淋巴瘤Raji细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用及其机制。方法 MTT比色法检测观察IL-21对Raji细胞增殖的影响;流式细胞仪观察24h后IL-21对细胞凋亡的影响;RT-PCR检测Livin及caspase-3mRNA水平,观察IL-21对基因表达的影响。结果 IL-21对Raji细胞增殖有抑制作用,呈时间和剂量依赖性（P〈0.05）;0、10、100μg/L组细胞凋亡率分别为7.26%、15.12%、22.57%,药物组与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01或〈0.05）;随着IL-21浓度升高,LivinmRNA的表达水平逐步下降,caspase-3mRNA表达逐步升高（P〈0.05）。结论 IL-21可以抑制淋巴瘤细胞的增殖和促进细胞的凋亡,可能与调节Livin、caspase-3基因表达有关。     

次声治疗对Raji细胞的影响

目的 研究次声治疗对人B淋巴瘤细胞株Raji细胞的影响.方法 Raji细胞分为次声组和对照组.以hfrasound 8TM次声治疗仪作为处理因素,分别处理15、30、60、90、120min.对照组关闭次卢治疗仪电源,余同次声组.各组细胞经相应时间的次声处理或对照处理后培养24,48 h后m采用MTT法测试细胞增殖活性,采用流式细胞术观察细胞凋亡情况,应用扫描电镜和透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果 MTT法检测结果显示.各次声组的OD值与相应对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);流式细胞仪检测结果显示各组总体无显著差异(P>0.05);扫描电镜观察结果显示,经次声处理后培养24 h的Raji突起明显变短、凹陷变浅,细胞表面突起和微绒毛减少或变短明显,细胞表面光滑.透射电镜观察结果示,次声组细胞表面微绒毛有明显减少,细胞核呈均质化,胞质呈出芽脱落.结论 本实验采用的次声处理(次声信号声强级均小于90 dB)对Raji细胞的生长及凋亡影响不明显:但改变细胞膜的突起,可对细胞膜的超微结构产生直接作用.     

PDTC增强TRAIL对人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对EBV阳性的人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法应用MTT法检测TRAIL（1、10、100ng／mL）及TRAIL（1、10、100ng／mL）＋100μmol／mLPDTC时Raji细胞的生长抑制率;原位末端酶标记技术（TUNEL）检测Raji凋亡细胞。结果①TRAIL 1、10ng／mL组12hRaji细胞生长抑制率分别为-35．52％及-15．07％;TRAIL 100ng／mL组12hRaji细胞生长抑制率为6．68％,并且呈时间依赖性（P〈0．05）。②TRAIL（1、10、100ng／mL）加入PDTC后,12hRaji细胞生长抑制率分别为1．18％、4．96％、14．63％,均显著高于TRAIL单用组（均P〈0．01）。③TRAIL（100ng／mL）联合PDTC时Raji细胞凋亡指数最高为79．49％,较TRAIL 100ng／mL（28．84％）有显著性升高,1、10ng／mL TRAIL联合PDTC后Rail凋亡细胞也均显著高于TRAIL单用组（均P〈0．01）。与MTT法检测结果具有一致性。结论TRAIL能诱导Raji细胞凋亡但作用不敏感。PDTC能显著增强TRAIL对Raji细胞的诱凋亡作用。     

加味四君子汤抗小鼠宫颈癌作用的实验研究

目的:观察加味四君子汤对小鼠移植型宫颈癌的治疗作用。方法:实验一:将小鼠宫颈癌U14瘤株细胞悬液注射于小鼠(30只)右腋窝皮下,24h后随机分为3组:一组为生理盐水组,二组为加味四君子汤组,三组为顺氯氨铂(DDP)组,每组10只。分别给予相应药物10d后处死实验动物,剥取瘤块、称重,计算抑瘤率。实验二:将U14细胞悬液注射于小鼠腹腔24h后随机分为3组,分组方法同上。连续给药8d后停药。观察本方对荷腹水型宫颈癌小鼠存活期的影响。结果:加味四君子汤组抑瘤率为37.3%,与生理盐水组比较差异非常显著。加味四君子汤组小鼠存活期为18.6d±4.40d,生理盐水组为14.4d±2.07d,两者比较差异显著(P<0.05)。结论:加味四君子汤具有抗小鼠实体型宫颈癌(U14)的作用,并能显著延长荷腹水型宫颈癌(U14)小鼠的生存期。     

加味四君子汤的临床与实验研究

加味四君子汤治疗脾虚型慢性浅表—萎缩性胃炎,肠道吸收不良综合征和糖尿病患者,总有效率分别为92.9%、76.6%及70.1%,与对照组有显著差异。用大黄和利血平造成脾虚动物模型,产生消化系统的吸收分解和运动障碍及适应调节和营养代谢失调,用四君子汤治疗均有改善,为临床提供了依据。     

卡介苗感染人B细胞诱导细胞凋亡

目的 探究卡介苗(BCG)是否能感染人B细胞及观察感染后对细胞的影响。方法 人B细胞系Raji细胞与BCG共培养, 4、12和24h后分别用共聚焦及透射电镜观察Raji细胞对BCG的结合和摄取情况,用CCK-8法检测细胞毒性,流式Annexin Ⅴ-PI双标法检测细胞凋亡和坏死情况。结果 培养4、12和24h后,感染了BCG的细胞比例分别为12.4%±2.0%, 23.8%±5.1%, 25.2%±4.8%。 BCG感染可引起细胞毒性,4h后Raji细胞存活率为75.5%±8.8%,12h后细胞存活率降至51.0%±5.3%,24h后细胞存活率仅为21.6%±4.2%,而感染灭活BCG的细胞存活率均在95%以上。进一步用流式检测凋亡坏死发现,与未感染细胞相比,Raji细胞感染BCG后凋亡,坏死均有所增加,以凋亡增加为主。结论 BCG可以感染人B细胞并诱导细胞凋亡。     

蛋白酶体抑制剂MG132对Raji细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人Burkitt’s淋巴瘤Raji细胞体外增殖和凋亡的影响。方法：不同浓度（0．5、1．0、5．0、10．0和50．0μmol／L）的MG132处理Raji细胞24h和48h,MTT法检测细胞增殖情况;5．0μmol／LMG132处理Raji细胞24h,流式细胞术进行细胞凋亡率及细胞周期分析。结果：浓度为1．0、5．0、10．O、50．0μmol／L的MG132作用于Raji细胞24h和48h后,细胞增殖OD（A490nm）值均显著低于对照组（P〈0．05）,增殖抑制率（20．60±10．28）％～（60．40±2．75）％,随MG132浓度的增加和作用时间的延长细胞增殖抑制率增高,抑制作用呈现剂量和时间依赖性;5．0μmoL／L的MG132作用Raji细胞24h后,实验组细胞凋亡率为25．86％,对照组为0．06％,实验组s期细胞比率（51．70％）较对照组（39．83％）上升,而G0／G1期细胞比率（33．54％）较对照组（46．04％）下降。结论：蛋白酶体抑制剂MG132可显著抑制Raji细胞的增殖并诱导其发生凋亡和G2／M期阻滞。     

加味四君子汤治疗复发性口疮83例

目的 探讨加味四君子汤治疗复发性口疮效果。方法 以脾气不足致使阴液亏虚，虚火上炎为辨证特点，用加味四君子汤治疗83例口疮患者。结果 治愈80例，有效3例，总有效率100％。结论 加味四君子汤健脾益气、养阴清热，并能增强机体的免疫功能，疗效显著。     

苦参碱对Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Fas/FasL表达的影响

目的：探讨中药苦参碱对人Burkitts淋巴瘤Raji细胞凋亡的作用及其可能机制.方法：应用MTT法测定苦参碱对Raji细胞生长的抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;WesternBlot检测Fas,FasL,Caspase-3蛋白的表达量.结果：苦参碱0.2～1.6g/L作用Raji细胞24,48,72h后,对Raji细胞生长具有增殖抑制作用,且呈明显的量效和时效关系,48h半数抑制浓度（IC50）为1.34g/L.苦参碱0.4,0.8,1.6g/L组作用48h后,Raji细胞总凋亡率分别为15.10%,27.88%,48.08%,与对照组8.78%相比较差异具有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）.Western Blot检测结果显示Fas,FasL,Caspase-3蛋白表达水平随苦参碱浓度的提高而增加.结论：一定浓度苦参碱可诱导Raji细胞发生凋亡,其凋亡机制可能与上调Fas,FasL蛋白的表达以及激活Caspase-3有关.     

加味四君子汤干预脾气虚肺癌survivin基因研究

目的:探讨加味四君子汤对脾气虚肺癌survivin基因的影响。方法:用苦寒泻下、劳倦、饮食节制复合因素法成功建立小鼠脾气虚证模型后,按实验设计方案处理各组小鼠,同时观察小鼠的整体情况。第17天,摘取肺组织,检测肺组织匀浆上清液中TNF-α。造模后以加味四君子汤灌胃14 d,脱颈椎处死小鼠,剥取肿瘤组织计算瘤重及采用RT-PCR方法检测肿瘤组织中survivin基因表达。结果:脾气虚小鼠的整体状况低下,肺组织匀浆中TNF-α与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01)。加味四君子汤可明显改善脾气虚肺癌小鼠的整体情况,升高小鼠脾指数,抑制肺癌生长且可下调脾气虚肺癌组织survivin基因表达。结论:加味四君子汤可以抑制脾气虚证肺癌小鼠肿瘤的生长,其机制可能与下调survivin基因表达有关。     

蛋白酶体抑制剂MG132对Raji细胞凋亡、细胞周期及UBE1基因表达的影响

 【目的】 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞凋亡、细胞周期及泛素活化酶(UBE1)基因表达的影响。【方法】 5 μmol/L的MG132处理Raji细胞24 h,形态学观察细胞生长情况;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡、PI单染法分析细胞周期;荧光定量RT-PCR检测UBE1 基因mRNA表达, Western blot 检测UBE1 蛋白表达。【结果】 MG132处理组细胞生长缓慢,死亡及凋亡多见,细胞凋亡率(26.06 ± 1.10)% 较对照组(0.30 ± 0.26)%上升(P < 0.05),G2/M期细胞比率(33.2 ± 1.2)%较对照组(12.5 ± 1.1)%升高(P < 0.05);MG132处理组UBE1 mRNA表达量(0.35 ± 0.05)较对照组(1.00 ± 0.08)下降(P < 0.05),抑制率为65%; UBE1蛋白表达量(0.93 ± 0.07)较对照组(1.62 ± 0.22)下调(P < 0.05),蛋白表达率为(58 ± 6)%。【结论】蛋白酶体抑制剂MG132可诱导Raji细胞发生凋亡和G2/M期阻滞,同时抑制UBE1的mRNA和蛋白表达,机制仍待深入研究。     

腺苷和脱氧腺苷对Raji细胞生长影响的实验研究

本文研究了不同浓度的腺苷和脱氧腺苷对Raji细胞中ADA活性和细胞生长的影响，结果：加入腺苷或脱氧腺苷之后，ADA活性峰提前；腺苷和脱氧腺苷对Raji细胞生长具有抑制作用，浓度增加，抑制作用增强，持续抑制时间延长，且脱氧腺苷的抑制作用强于腺苷。