绞股兰皂甙对光损伤Balb/C小鼠皮肤核转录因子kappa-B的IκB和IKK蛋白表达的影响

目的研究绞股蓝皂甙（GP）抗小鼠皮肤光损伤作用,探讨其抗损伤作用的可能机制.方法采用7次隔日UVB照射Balb/C小鼠建立皮肤光损伤的动物模型,应用Brad-Ford进行蛋白浓度的测定后用Western Blot法检测小鼠皮肤中核转录因子kappa-B（NF-κB）IκB蛋白（kappaB抑制蛋白）及IKK蛋白（κB抑制蛋白激酶）的表达.结果（1）UVB照射组的小鼠表皮中IκB蛋白水平与其它组相比明显减低,而IKK蛋白与其它组相比表达较高;（2）应用1.5%绞股蓝皂甙霜组及6%绞股蓝皂甙霜组IκB蛋白表达明显高于UVB照射组;IKK蛋白表达明显低于UVB照射组,与阳性对照VitE组小鼠皮肤中IκB蛋白、IKK蛋白的表达结果相似;（3）预先使用VitE霜组,1.5%绞股蓝皂甙霜组Balb/C小鼠皮肤组织中IκB蛋白表达高于先照紫外线UVB后用VitE霜组及1.5%绞股蓝皂甙霜组;（4）预先使用VitE霜组,1.5%绞股蓝皂甙霜组其IKK蛋白表达低于先照紫外线UVB后用VitE霜组及1.5%绞股蓝皂甙霜组.结论UVB辐射可以显著抑制Balb/C光损伤小鼠皮肤组织中抑制蛋白IκB蛋白的表达,促使IKK蛋白高表达,促使NF-κB（核转录因子-kappaB）活化;1.5%绞股蓝皂甙霜及6%绞股蓝皂甙霜可使UVB照射后光损伤Balb/C小鼠皮肤组织中IkB蛋白表达升高,恢复IκB抑制蛋白的活性;IKK蛋白表达活性受到抑制,进而抑制NF-κB通路的激活.     

绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤细胞p38MAPK和MMP-1的影响

目的：研究绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤p38促分裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和基质金属蛋白酶-1（MMP-1）的影响。方法：制备空白大鼠血清和绞股蓝含药血清,将人角质形成细胞（HaCaT）分为4组：空白对照组（A）、UVB模型组（B）、空白血清组（C）和含药血清组（D）;将成纤维细胞（HSF）分为6组：空白对照组（Ⅰ）、UVA模型组（Ⅱ）、HaCaT培养上清液A组（Ⅲ）、HaCaT培养上清液B组（Ⅳ）、HaCaT培养上清液C组（Ⅴ）、HaCaT培养上清液D组（Ⅵ）。对HaCaT细胞B、C、D组和HSF细胞Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组分别用UVB和UVA照射,制备光老化细胞模型。将4组HaCaT细胞培养上清液分别加入HSF细胞的Ⅲ~Ⅵ组。采用RT-PCR和Western blotting方法检测Ⅰ~Ⅵ组细胞p38MAPK和MMP-1mRNA和蛋白的表达水平。结果：与Ⅰ组比较,Ⅱ组细胞p38MAPK和MMP-1 mRNA和蛋白的表达水平显著上调（P〈0.01）;与Ⅱ组比较,Ⅳ组p38MAPK和MMP-1mRNA和蛋白表达均上调（P〈0.01）,而Ⅲ组变化不显著;与Ⅳ组比较,Ⅵ组p38MAPK和MMP-1 mRNA和蛋白表达均显著下调（P〈0.01）,而Ⅴ组变化不显著。结论：光老化HaCaT细胞分泌细胞因子促进光老化HSF细胞p38MAPK和MMP-1 mRNA和蛋白的表达。绞股蓝总皂苷对光老化HaCaT细胞培养上清液作用的光老化HSF细胞中MAPK信号转导通路中相关基因和蛋白的表达具有抑制作用。     

中波紫外线诱导小鼠皮肤急性光损伤模型中ASC和caspase-1的表达

目的观察凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC）和caspase-1在小鼠耳部皮肤急性光损伤模型中的表达并探讨其在急性光损伤中可能的作用机制。方法将10只小鼠分为5组,每组2只,分别对耳部照射30、90、150、300、600 mJ/cm2剂量的中波紫外线（ultraviolet B,UVB）,测最小红斑量（minimal erythemadose,MED）。将20只BALB/c小鼠随机分为正常对照组和照射4倍MED剂量UVB实验组,比较两组耳部皮肤临床和病理改变,免疫组化方法检测耳部皮肤ASC和caspase-1的表达。结果与对照组相比,实验组小鼠耳部皮肤出现红斑、水肿、毛细血管扩张。组织病理改变见表皮细胞水肿、核固缩,真皮血管扩张、管周淋巴细胞浸润等。免疫组化染色显示与对照组相比,实验组耳部表皮ASC和caspase-1表达增强,两组差异有统计学意义（t=65.0、56.5,P〈0.01）。结论 ASC和caspase-1在UVB致小鼠急性光损伤中具有一定的促损伤作用。     

绞股蓝总皂苷对光老化HaCaT细胞中p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达的抑制作用

目的：观察绞股蓝总皂苷含药血清对光老化HaCaT细胞p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白和Jun基因（c-Jun ）mRNA表达的影响,探讨绞股蓝总皂苷含药血清抗皮肤光老化的作用机制。方法：采用中波紫外线(UVB)照射建立光老化HaCaT细胞模型,加低、中、高剂量绞股蓝总皂苷含药血清于光老化HaCaT细胞模型培养液中培养,并设空白对照组、空白血清组和UVB模型组。采用Western blotting和RT-PCR方法检测各组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA的表达水平。结果：与空白对照组比较,UVB模型组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达显著上调,差异有统计学意义（P<0.01）;与UVB模型组比较,低、中和高剂量含药血清组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达显著下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与空白血清组比较,低、中和高剂量含药血清组细胞p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达下降(P<0.01)。结论：绞股蓝总皂苷含药血清可能通过抑制p38MAPK蛋白和c-Jun mRNA表达抑制皮肤光老化。     

绞股蓝总苷对血管性痴呆小鼠海马组织神经元损伤及pCREB表达的影响

目的探讨绞股蓝总苷对血管性痴呆模型小鼠海马组织神经元损伤和pCREB表达的影响。方法反复夹闭两侧颈总动脉致缺血再灌注制作小鼠血管性痴呆模型。将雄性C57BL/6J小鼠80只随机分假手术（Sham）组、血管性痴呆模型（VD）组、绞股蓝总苷低、中、高剂量（100、200、400mg/kg）处理组。苏木精伊红染色法示小鼠海马组织CA1区神经元损伤的变化情况;Real-time PCR检测海马组织pCREBmRNA的表达量。结果绞股蓝总苷干预可显著减轻VD小鼠的海马神经元损伤;VD模型组海马pCREBmRNA的表达明显低于假手术组（P〈0.05）;绞股蓝总苷各剂量处理组海马pCREB mRNA的表达水平明显高于VD模型组（P〈0.05）。结论血管性痴呆小鼠海马神经元损伤可被绞股蓝总苷减轻,上调海马神经元pCREB的表达。     

紫外线致成纤维细胞损伤及VitE保护作用的研究

目的观察UVB辐射对体外培养的真皮成纤维细胞的损伤作用及VitE对细胞的光保护作用。方法由健康人皮肤中分离培养成纤维细胞,用紫外线以一定时间(1、5、10、15分钟)进行照射,并加入VitE进行干预处理。MTT法检测细胞增殖活性,荧光显微镜检测各受试组细胞凋亡率。结果UVB照射后24h,上述细胞均出现增殖活性下降,活性下降程度与照光时间成正比;加入VitE处理后,细胞活性可有一定程度恢复。UVB照射可诱导真皮成纤维细胞产生凋亡,其凋亡率随UVB照射时间延长而增加。加入VitE处理后,各组HeLa上皮细胞和成纤维细胞凋亡率均明显下降。结论紫外线辐射可引起真皮成纤维细胞损伤,VitE可抑制紫外线辐射的损伤效应。     

CpG ODN对哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ、FcγRⅡb表达的影响

目的观察CpGODN对哮喘小鼠肺组织FcaRI、FcTRIIb表达的影响,探讨其诱导免疫耐受的相关机制。方法将48只清洁级雄性Balb／c小鼠随机分为正常对照组（A组）、哮喘组（B组）、地塞米松（DXM）治疗组（C组）、CpGODN治疗组（D组）,每组12只。以卵白蛋白（OVA）作用建立小鼠哮喘模型。收集支气管肺泡灌洗液（bronchialalveolarlavagefluid,BALF）计数细胞总数并分类,取肺组织作病理,反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）法测定肺组织中FcεRⅠ、FcγRⅡbmRNA的表达。结果（1）电镜观察肺组织超微结构：B组显示支气管及血管周围有较多炎性细胞浸润,肺泡隔内嗜酸粒细胞浸润,c组和D组与B组相比明显减轻。（2）BALF中炎症细胞表达变化：与B组相比,C组、D组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞（eosino—phil,EOS）绝对值以及EOS占细胞总数的百分比（EOS％）均显著减少（P〈0．01）。（3）RT—PCR结果：C组、D组FcεRⅠ mR—NA表达均显著低于B组（P〈0．01）,C组、D组FcγRⅡb mRNA表达均显著高于B组（P〈0．01）。（4）相关分析：小鼠肺组织FcεRⅠ和FcγRⅡb表达呈显著负相关（P〈0．01,n=40）。结论CpGODN能降低哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ的表达,增加FcγRⅡb的表达,具有改善气道炎症和诱导免疫耐受的作用。     

虾青素脂质体对小鼠皮肤紫外线损伤干预机制的初步研究

目的 探讨虾青素脂质体对小鼠皮肤中波紫外线（UVB）损伤的干预作用及机制。方法 将40只C57BL/6J小鼠随机分为4组,即空白组（不行UVB照射,不用药）、模型组（UVB光损伤组,只照射不用药）、对照组（照射+虾青素）、实验组（照射+虾青素脂质体）,每组10只。UVB照射（辐照强度为2 mW·cm2,辐照时间为60 s;前5日每日照射1次,后9日隔日照射1次,2周共照射10次）及药物干预（每次辐照前10 min用4 mL 0.2‰虾青素或4 mL 0.2‰虾青素脂质体涂抹于暴露皮肤）2周后,HE染色分别观察皮肤组织病理学改变,免疫组织化学染色观察皮肤 Ki-67抗原、8-羟基-2-脱氧鸟苷（8-OHdG）表达情况,试剂盒测定皮肤超氧化物岐化酶（SOD）活力和血清基质金属蛋白酶-13（MMP-13）质量浓度。结果 模型组和对照组的HE染色显示真皮变薄、真皮胶原纤维细长、排列疏松紊乱,与空白组比较,Ki-67、MMP-13及8-OHdG表达增加以及SOD活力降低,其差异均有统计学意义（P＜0.05）。实验组与模型组相比皮肤组织病理变化得到明显改善,Ki-67、MMP-13及8-OHdG表达减少及SOD活力升高,其差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 外用虾青素脂质体可改善小鼠皮肤光损伤引起的病理变化及减轻胶原损伤,其强抗氧化作用可能是干预机制之一。     

雷帕霉素对肝脏缺血再灌注损伤修复的影响

目的 应用小鼠肝脏缺血损伤模型研究雷帕霉素对损伤肝脏修复的延迟作用并初步探讨其机制.方法 建立Balb/c小鼠肝左中叶缺血损伤模型.将实验小鼠随机分为4组,A组(n=16):雷帕霉素手术组;B组(n=16):生理盐水手术组;C组(n=12):雷帕霉素假手术组;D组(n=12):生理盐水假手术组.给药后第4天对各组小鼠行手术及假手术处理.术后第1天、第4天分批处死各组动物,取出损伤肝组织作组织病理学榆测;免疫组织化学方法检测组织内增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白D1(Cyclin D,)的表达.结果 ①在术后各检测时间点,A组小鼠肝组织病理学变化明显重于B组,表现为肝细胞有明显肿胀变性,肝板结构紊乱,肝窦结构不清晰,伴有肝细胞坏死;C组及D组未见明显组织病理损伤.②在各时间点.A组小鼠肝组织中PCNA阳性率显著低于B组;而且Cyelin D1的阳性率也低于B组,差异有统计学意义(均P<0.05).C组及D组未见明显PCNA及Cyclin D1的表达.结论 雷帕霉素阻抑了缺血再灌注损伤肝脏的修复过程,而对正常肝脏无明显损伤作用.     

连续外用维A酸皮肤刺激反应中维A酸受体mRNA的表达

目的研究小鼠皮肤中维A酸受体mRNA表达水平在连续外用维A酸引起皮肤刺激反应发生中的变化规律。方法连续外用0．1％维A酸和基质,应用RT—PCR方法检测Balb／C小鼠皮肤中维A酸受体（RARα、RARγ、RXRα）mRNA的表达水平。结果外用0．1％RA霜,皮肤中RARα mRNA表达水平6d时升高,12d时降至正常,直至24d,一直维持在正常水平。而RARγ、RXRαmRNA表达水平在用药期间未见改变。RA霜基质对这三种受体mRNA的表达没有影响。结论在Balb／C小鼠,连续外用0．1％RA霜,皮肤中RARαmRNA表达水平呈现“上升-高峰-下降”的一过性规律,这与外用RA霜引起的一过性皮肤刺激反应规律相同。外用RA霜引起的一过性皮肤刺激反应可能是由RARd介导的RA霜作用。     

软皮汤对硬皮病小鼠模型皮肤组织中p-SMAD3、FLI1因子表达的影响

目的前期研究显示软皮汤能改善硬皮病小鼠疾病模型皮肤纤维化程度,本研究进一步探讨软皮汤对纤维化重要通路TGF-β途径的活化因子SMAD3和抑制因子FLI1的影响。方法构建硬皮病小鼠疾病模型,采用Masson三色染色皮肤组织,Western Blot法检测皮肤CollagenⅠ、Fibronectin、p-SMAD3和FLI1表达水平。结果 （1）Masson染色结果显示,模型对照组动物皮肤中胶原纤维含量明显高于正常对照组（P〈0.05）;软皮汤可减少软皮汤处理组小鼠皮肤中胶原纤维含量。（2）Western Blot结果显示,模型对照组小鼠皮肤中CollagenⅠ、Fibronectin、p-SMAD3的表达水平高于正常对照组,     

比亚芬预防鼻咽癌放射性皮肤损伤的效果观察

目的观察应用比亚芬乳膏预防鼻咽癌急性放射性皮肤损伤的临床疗效。方法将80例需要放射治疗的鼻咽癌患者分为两组,40例在第1次放射治疗后给予比亚芬涂抹（治疗组）,40例行常规放射治疗（对照组）。结果对照组和治疗组均发生了程度不等的皮肤反应。轻度放射反应（I＋Ⅱ度）对照组为35％（14／40例）,治疗组为82．5％（33／40例）。较严重的放射反应（Ⅲ＋Ⅳ度）对照组为65％（26／40例）,治疗组为17．5％（7／40例）。皮肤反应发生剂量对照组为82．5％（33／40）出现于照射40Gy以前,治疗组为37．5％（15／40）。结论比亚芬能有效地预防鼻咽癌放射性皮炎的发生,可保证放射治疗的顺利进行。     

老年慢性肺心病患者GPⅡb／Ⅲa和P—selectin的变化及意义

摘要：目的探讨老年慢性肺心病患者血小板活化标志物GPⅡb／Ⅲa、p-selectin的变化及其与Pa02、PaC02的关系。方法用三色全血流式细胞术测定36例老年慢性肺心痛患者外周血中血小板GPⅡb／Ⅲa、P—selectin的表达水平,检测患者动脉血氧分压、二氧化碳分压,并与28例老年健康对照者及28例非老年健康对照者比较。结果老年慢性肺心病GPⅡb／Ⅲa、P-selectin均明显高于老年健康对照组及非老年健康对照组（均P〈0．001）。且与动脉血氧分压呈负相关、与动脉血二氧化碳分压呈正相关。老年健康对照组GPⅡb／Ⅲa、P—selectin阳性表达率亦高于非老年健康对照组（均P〈0．05）。结论老年慢性肺心病患者血小板明显活化,其活化程度与PaO2、PaCO2关系密切。     

温和灸对肛门瘙痒模型小鼠背根节TRPV1表达的影响

目的　观察温和灸对肛门瘙痒模型小鼠背根节TRPV1表达的影响。方法　2016年12月—2017年12月选取SPF级C57BL/6J小鼠40只,随机分为空白组、模型组、治疗组Ⅰ（38 ℃艾灸）和治疗组Ⅱ（46 ℃艾灸）,每组10只。适应性喂养1周后,肛周皮肤剪毛,模型组、治疗组Ⅰ和治疗组Ⅱ分别于肛周皮下注射辣椒素 （50 mg/kg）造模,空白组注射相同剂量的0.9%氯化钠溶液。造模成功后,治疗组Ⅰ和治疗组Ⅱ选取小鼠“长强穴”“神阙穴”去毛后行艾灸治疗,根据水银温度计测量艾灸温度,治疗组Ⅰ于距离长强穴、神阙穴（45±5）mm处艾灸10 min,1次/d;治疗组Ⅱ于距离长强穴、神阙穴（35±5）mm处艾灸10 min,1次/d。空白组与模型组小鼠每日陪同抓取和固定,无任何治疗。治疗时间为1周。治疗1周后取各组小鼠背根节,Western blotting法检测小鼠背根节TRPV1表达水平,实时荧光定量PCR法检测小鼠背根节TRPV1 mRNA表达水平。结果　模型组小鼠背根节TRPV1、TRPV1 mRNA表达水平高于空白组（P<0.05）;治疗组Ⅰ、治疗组Ⅱ小鼠背根节TRPV1、TRPV1 mRNA表达水平低于模型组（P<0.05）;治疗组Ⅱ小鼠背根节TRPV1、TRPV1 mRNA表达水平低于治疗组Ⅰ（P<0.05）。结论　温和灸对肛门瘙痒模型小鼠背根节TRPV1的表达具有抑制作用,且46 ℃艾灸较38 ℃艾灸对小鼠背根节TRPV1表达的抑制作用更强。     

绞股蓝总皂苷对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的：观察绞股蓝总皂苷对大鼠肝纤维化转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法：将Wistar雄性大鼠设为正常组、模型组、绞股蓝总皂苷组、秋水仙碱组,除正常组外采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型。造模第7周开始予相应的药物干预,每日给药剂量为股蓝总皂苷200 mg/kg、秋水仙碱0.1 mg/kg,共3周。观察大鼠一般情况变化,肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量,肝组织病理及胶原沉积;检测肝组织肝星状细胞（HSC）活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达,肝组织TGF-β1/Smad信号通路指标TGF-β1、TGF-β1受体1（TβR-Ⅰ）、TGF-β1受体2（TβR-Ⅱ）、Smad2/p-Smad2、Smad3/p-Smad3蛋白表达。结果：模型组大鼠一般状态较差,肝组织Hyp含量较正常组显著增高,肝小叶被破坏,肝细胞脂肪变性伴炎性细胞浸润,并有大量纤维结缔组织增生;大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均显著升高,而Smad3蛋白表达与正常组比较无差异。绞股蓝总皂苷组及秋水仙碱组大鼠肝组织Hyp含量显著降低,肝组织病理改善;绞股蓝总皂苷组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达均较模型组显著下降,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及Smad3蛋白表达无显著变化;秋水仙碱组大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、Smad2、p-Smad3蛋白表达均较模型组显著下降,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、p-Smad2及Smad3蛋白表达无显著变化。结论：绞股蓝总皂苷对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有显著的干预作用,其作用机制可能与抑制HSC活化、TGF-β1分泌及其信号通路中p-Smad2、p-Smad3表达有关。