胃癌及癌前组织中端粒酶RNA与端粒酶活性检测及其临床意义

目的：研究胃癌及癌前病变胃粘膜端粒酶RNA与端粒酶活性检测及其意义。方法：选取经病理组织学证实的有粘膜活检标本共150例，包括慢性浅表性胃炎（CSG）32例、肠上皮化生（IM）36例、不典型增生（AH）34例、胃癌（GC）48例，分别采用原位逆转录聚合酶链反应（PCR）、端粒酶重复序列扩增法（TRAP）检测上述胃粘膜端粒酶RNA与端粒酶活性。结果：原位逆转录PCR检测胃粘膜活检标本的端粒酶RNA阳性率为55．3％（83／150），显高于TRAP法检测端粒酶活性检出率（40．0％、60／150，P＜0．05）。在不同胃粘膜病变中，IM、AH及GC的端粒酶RNA阳性率分别为47．2％、52．9％、100％，而CSG胃粘膜中未检出端粒酶RNA；IM、AH组端粒酶RNA阳性率亦明显低于GC组（P＜0．05）。端粒酶RNA主要分布于胃粘膜癌细胞及癌前病变上皮细胞的胞核内。结论：端粒酶RNA与胃癌的发生密切相关。原位逆转录PCR检测胃粘膜端凿酶RNA对胃粘膜癌变的早期诊断和预测有重要价值，而且可能是较端粒酶活性更灵敏的生物学指标。     

逆转录—聚合酶链反应同步法检测血清HCV RNA方法的建立与应用

丙型肝炎病毒(HCV)RNA的检测,国外虽已有较多报道,国内广州和北京也建立了类似的方法。但现行的检测方法,由于将逆转录(RT)合成cDNA和聚合酶链反应(PCR)分步进行,既繁琐费时,又耗资很大。为此,我们就血清HCV RNA的检测方法进行了一些探索,根据逆转录酶和DNA聚合酶活性均依赖镁离子,DNA聚合酶在42℃左右可长时间保持活性并具有聚合能力的原理,建立了     

双PCR检测丙型肝炎病毒RNA

本文报告了丙型肝炎病毒RNA检测方法的建立及临床初步应用结果。应用该方法的特点是:(1)微量,可从100μl血清中提取RNA;(2)操作程序精简,不用超速离心机等特殊设备;(3)快速,从提取HCV RNA-逆转录可在4小时内完成,1～2天可报告结果。临床初步应用结果表明,在14例输血后肝炎血清中13例检出HCV RNA,此结果表明输血后肝炎主要为HCV感染引起发病,提示供血员筛选的重要性。     

原发性肝癌患者庚型肝炎病毒感染的临床研究

目的：探讨原发性肝癌患者庚型肝炎病毒（HGV）感染的分布。方法：根据中国株HGV5’端非编码序列设计引物，采用逆转录套式聚合酶链反应方法。用此技术对107例原发性肝癌、45例慢性肝炎、43例肝硬化患者血清进行了检测分析。结果：107例原发性肝癌患者中有10例HGV－RNA阳性（9．3％）；45例慢性肝炎患者中有5例HGV－RNA阳性（11．1％）；43例肝硬化患者中有3例HGV－RNA阳性（7．0％）。结论：庚型肝炎病毒感染可能与原发性肝癌发生有一定关系，但不是引起肝癌的主要的因素。     

Gankyrin在肝癌细胞系中的表达

目的检测肝癌细胞系中癌基因Gankyrin的表达。为在肝癌细胞中对Gankyrin基因进行RNA干涉研究的体外实验筛选靶细胞。方法对肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、HHCC进行逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及Western blotting检测。结果Gankyrin基因在3种肝癌细胞系中均有表达。结论多种肝癌细胞系中均有Gankyrin基因的表达，HepG2、SMMC-7721、HHCC均可作为阳性靶细胞，进行Gankyrin基因的RNA干涉研究。     

仙台病毒RT-PCR检测方法的建立及灰仓鼠中流行情况调查

目的建立仙台病毒(SV)RT-PCR检测方法,并对灰仓鼠仙台病毒感染情况进行调查。方法根据NCBI发表的SV(gi:9627219)基因组序列设计引物,建立RT-PCR方法,对方法的特异性和灵敏性进行验证,并用该方法检测60份灰仓鼠的肺脏样本。结果建立的SV RT-PCR方法显示有较好的敏感性和特异性:以仙台病毒为模板扩增产生197 bp的单一目的条带,经测序比对与NCBI数据库中SV相关序列的一致率为98%,而以猴副流感病毒(SV5)、犬瘟热病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒III型及腮腺炎病毒为对照无任何条带产生;能检出的SVcDNA最低浓度是96.8 ng/mL;用该方法检测60份灰仓鼠,SV的感染率为3.33%(2/60)。结论建立的SV RT-PCR方法可用于实验类啮齿动物动物SV的常规检测,自然条件下灰仓鼠感染SV的问题不容忽视。     

逆转录原位PCR检测博尔纳病病毒感染

目的:建立逆转录原位PCR检测博尔纳病病毒(BDV)的方法,并与其它检测方法进行比较.方法:构建包含BDV GFP-P24质粒的模拟BDV感染的OL细胞模型,检测其核酸的表达.对构建的OL细胞模型和各种阴性对照进行逆转录原位PCR的检测.使用逆转录原位PCR、荧光定量PCR和ELISA对BDV阳性的人和动物样本及阴性对照进行检测,并比较检测结果.结果:成功构建了含BDV-GFP-P24质粒模拟BDV感染的OL细胞.建立了逆转录原位PCR检测BDV的方法;对荧光定量PCR和ELISA的检测呈阳性的4个病例和检测呈阴性的10个病例,使用原位PCR检测可以得到基本一致的结果.结论:逆转录原位PCR原位可以用于检测人和动物的BDV感染和BDV感染机制研究.     

唐氏综合征无创性产前诊断的研究

目的探讨应用逆转录-多重链接探针扩增技术(RT-MLPA)检测RNA-SNP进行临床无创产前诊断唐氏综合征的可行性。方法收集217例14孕周以上(含14孕周)孕妇的外周血血清,抽提胎儿游离RNA,RT-MLPA技术扩增SNP位点片段,并对其进行毛细管电泳分析,通过对杂合SNP位点峰面积比值进行判断,并选择唐氏综合征产前诊断金标准-染色体核型分析结果作为对照方法。结果检测到阳性样本61例,检测的灵敏度和特异度分别为92.42%和99.30%。结论逆转录-多重链接探针扩增技术检测RNA-SNP进行临床无创产前诊断唐氏综合征的方法在唐氏综合征的产前筛查中具有广泛的应用前景。     

应用逆转录——聚合酶链反应快速诊断临床标本登革病毒血清型

用改良的碘化钠法提取登革热患者血清中登革病毒核糖核酸（DEN－RNA）作为模板，通过逆转录反应（RT）合成cDNA，在DEN型特异引物，TaqDNA多聚酶作用下，对DEN的E基因特异片段进行体外扩增。应用琼脂糖凝胶电泳，EB染色检测扩增结果；以地高辛配基标记的型特异cDNA探针与扩增产物作Southern转印和斑点杂交鉴定扩增产物的特异性，可在2天内直接检出登革热患者血清中DEN－RNA，并确定其血清型。本文用RT－PCR检测16份登革热患者血清，15份检出DEN1，4份同时检出DEN1和DEN2，结果提示1991年广州市流行的登革热可能是由DEN1和DEN2引起的。     

几类高脂血症动物模型的比较

目的:为高脂血症的预防和治疗选择理想的高脂血症动物模型.方法:对近十几年国内外较常用的鼠类、鸟类、兔等高脂血症动物模型及其特点进行比较.结果:金黄地鼠和豚鼠在脂质代谢方面与人有较多相似之处,在实验研究中有独特优势;而大鼠、小鼠、鸟类高脂血症模型与人类差异较大;兔在调脂新药和动脉粥样硬化实验研究中是首选的动物模型之一.结论:选择最符合所作实验各项要求的动物模型,应从实验要求时间、实验指标、实验经费、模型形成时间等多因素全面考虑.     

甲磺酸培氟沙星注射液特殊安全性试验研究

目的:观察甲磺酸培氟沙星注射液的过敏性、溶血性和血管刺激性,为其临床静脉给药的安全性提供参考。方法:过敏性采用豚鼠全身主动过敏试验(ASA)和大鼠被动皮肤过敏试验(PCA);溶血性采用常规体外试管法;刺激性采用家兔同体左右侧自身对比法。结果:甲磺酸培氟沙星注射液豚鼠全身主动过敏试验和大鼠被动皮肤过敏试验均呈阴性;对家兔红细胞无溶血和凝集反应;对家兔耳静脉给药部位无明显刺激性;结论:试验所用的甲磺酸培氟沙星注射液静脉滴注给药符合临床用药安全性要求。     

兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶多克隆抗体的制备

目的：制备兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶（NRDR）多克隆抗体。方法：应用原核表达的兔NRDR免疫豚鼠,制备豚鼠抗兔NRDR多克隆抗体,并以Western blot法分析抗体特异性。结果：免疫豚鼠获得了高效价抗血清,效价为1：2000时检测极限为160rig蛋白,与NRDR蛋白能特异性结合。结论：获得的多克隆抗体应用于Western blot中检测兔NRDR效果良好。为NRDR的进一步研究打下基础。     

神经肽Y在L-NAME致孕鼠高血压中的作用

目的研究神经肽Y（NPY）在一氧化氮（NO）合酶抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯（L-NAME）致孕鼠高血压中的变化与作用。方法妊娠大鼠随机分为L-NAME组1、L-NAME组2、生理盐水组1、生理盐水组2（上述4组用于不同时间点的NPY含量检测）、NPY抗血清组、无抗体血清组和正常妊娠组（上述3组用于不同时间点的动脉血压观察）,每组各6只。通过腹腔注射L-NAME形成晚期妊娠大鼠高血压,应用放射免疫分析法测定血浆和部分脑区NPY免疫活性物质（ir-NPY）含量的变化;通过静脉注射NPY抗血清（每只5μL,3次）观察其对孕鼠平均动脉压的影响。结果给予L-NAME后孕鼠平均动脉压显著升高;与注射等量生理盐水的孕鼠相比,L-NAME高血压孕鼠血浆ir-NPY的含量于妊娠后d21,下丘脑的含量于妊娠后d21、分娩后d2,延髓的含量于妊娠后d21均显著升高。静脉给予NPY抗血清后,L-NAME高血压孕鼠平均动脉压显著低于无抗体血清组,但仍显著高于正常妊娠组。结论外周与中枢NPY同时参与L-NAME致孕鼠高血压的病理生理过程,其水平的升高是形成和维持孕鼠高血压的因素之一。     

HSL表达和活性与豚鼠血清睾酮水平的相关性

目的研究不同发育阶段的豚鼠睾丸和附睾组织中激素敏感性脂肪（hormone-sensitive lipase,HSL）的表达及活性与生殖能力成熟的关系。方法取不同天龄阶段的豚鼠18只分为3组：6d龄幼鼠组;16d龄青春期豚鼠组;70d龄成年豚鼠组。用RT-PCR方法检测睾丸和附睾组织中HSL的mRNA表达,37℃下比色法对酶活性进行测定,放免法测定血清中睾酮水平,HE染色睾丸和附睾组织切片进行组织形态学分析。结果发育阶段的豚鼠随着天龄的增加,睾丸特异性HSL mRNA表达也增加（P〈0.05）,酶活性增强（P〈0.05）,血清中睾酮水平升高（P〈0.01）。组织病理学显示16d的豚鼠睾丸和附睾中开始出现精子,70d精子发育成熟。HSL的表达和酶活性与血清睾酮水平高度相关（r=0.75,P〈0.01;r=0.96,P〈0.01）。结论发育成熟豚鼠睾丸和附睾组织有较强的HSL表达及活性,HSL与睾丸的发育成熟以及精子发生可能存在相关关系。     

大黄素对高脂血症金黄地鼠脂代谢紊乱的改善作用

目的 研究大黄素对高脂血症金黄地鼠脂代谢的改善作用。方法 将40只金黄地鼠随机分成4组,正常对照组(Con组)、模型对照组(HFD组)、阳性对照组(Simvastatin组,6 mg/kg)及大黄素组(emodin组,70 mg/kg),除Con组外,各组给予高脂饮食诱导形成高脂血症模型,并于给药治疗4周后测定血中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,收取血浆样品绘制脂蛋白谱及进行核磁共振代谢组学研究。结果 1高脂血症金黄地鼠给予大黄素治疗后,血中TG、TC和LDL-C含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);2脂蛋白谱分析显示,大黄素可调节脂代谢紊乱金黄地鼠血清脂蛋白亚型的分布及不同脂蛋白亚型内的脂质含量,调节高密度脂蛋白脂质运载能力;3核磁共振代谢组学结果表明,大黄素可改善血浆内源性分子的代谢轮廓,其改善效果与辛伐他汀相当。结论 大黄素具有改善高脂血症金黄地鼠的脂代谢紊乱的作用。     

几种维生素对猪血清免疫性肝纤维化大鼠抗氧化损伤的研究

①目的 探讨几种维生素对肝纤维化大鼠的抗氧化损伤作用.②方法 用维生素C（vitamin C,VC）,维生素E（vitamin E,VE）,维生素A（vitamin A,VA）和β-胡萝卜素（β-carotene β-CAR）,干预免疫性肝纤维化大鼠,检查大鼠肝组织病理学变化,检测血清中超氧化歧化酶（superoxide dismutase,SOD）的活性、肝脏中过氧化氢酶（catalase,CAT）的活性,以及血清和肝脏中的丙二醛（malonaldehyde,MDA）含量变化.③结果 VC、VE、VA和β-CAR组的肝纤维化半定量计分,分别为（13.13±7.54）、（5.06±3.60）、（8.00±4.14）、（6.25±4.47）分;各维生素处理组的抗氧化指标（SOD,CAT和MDA）和模型对照组相比均有不同程度的改善（P＜0.05）.④结论 VC、VE、VA和β-CAR均有抗肝纤维化作用,且对免疫性肝纤维化大鼠有不同程度的抗氧化损伤的作用.     

Attenuation of hyperacute rejection from xenograft by reseeding of endothelial cell]

The potential solution to palliate the critical shortage of suitable donor organs for transplantation may be xenogenic transplantation. However, hyperacute rejection (HAR) after xenotransplantation is the main problem in this process. Since the vascular endothelial cell of donor organ is the primary target cell in rejection, the replacement of endothelium in donor organs with endothelial cell from recipients themselves may be beneficial to the prevention of HAR. Discordant xenotransplantation model (guinea pig-to-rat) was adopted in this study. Firstly, endothelial cell from rat abdominal aorta was separated and cultured. Secondly, the guinea pig abdominal aorta of which the endothelium had been removed was cultured with the suspension containing rat endothelial cells (4 x 10(6)/ml). The viability of cultured vessel was assessed using light microscopy and transmission electron microscopy. The guinea pig vessel reseeded with rat endothelial cell was then examined by immuno-fluorescence staining assay to find out whether IgM and C3 in rat serum were bound to it after preincubation with rat serum. It was found that rat endothelial cells grew into the monolayer endothelium on the inner surface of guinea pig vessel with previous endothelial loss. IgM and C3 in rat serum did not deposit along the new endothelium of guinea pig vessel in the treated group as shown by immuno-fluorescence microscopy, whereas possive results were observed in the untreated normal guinea pig aorta. These findings indicate that donor vessel reseeded with endothelial cell from recipients undergoes less severe rejection and this technique may be very useful for the attenuation of HAR.     

硫化氢对异丙肾上腺素所致早后除极和触发活动的影响

目的探索硫化氢对异丙肾上腺素所致豚鼠乳头肌早后除极及触发活动的影响。方法应用细胞内玻璃微电极技术记录豚鼠乳头肌动作电位,用异丙肾上腺素诱发早后除极和触发活动,观察硫化氢对早后除极和触发活动的影响。结果 1)含异丙肾上腺素(50 nmol/L)的K-H液灌流可引起豚鼠右心室乳头肌产生早后除极并出现触发活动,有时触发活动会出现持久的节律性活动。2)NaHS(100、200μmol/L)预处理可显著降低异丙肾上腺素诱发的早后除极波幅及发生率和触发活动的发生率(**P<0.01),NaHS 200μmol/L还明显延长早后除极的潜伏期(*P<0.05)。结论硫化氢抑制异丙肾上腺素所致早后除极及触发活动的发生。     

种植受者血管内皮细胞对抗异种移植超急性排斥反应的初步探讨

为探讨种植受者血管内皮细胞在抗异种移植超急性排斥反应方面的意义,选用豚鼠→大鼠移植模型,先分离、培养大鼠动脉内皮细胞,然后将其种植于去内皮的豚鼠动脉内壁,并以免疫组化技术检测了种植大鼠内皮细胞的豚鼠动脉与大鼠血清反应的情况。结果显示：大鼠血清与正常的豚鼠动脉一起培养后,前者所含IgM、C3沿后者内皮细胞表面沉积;种植大鼠内皮细胞的豚鼠动脉与大鼠血清反应后免疫荧光反应呈阴性,即无IgM和C3。以上结果表明,血管内皮细胞可在异种血管壁上种植,如将受者血管内皮细胞预先种植于供者的血管内壁,可能避免超急性排斥反应的发生。