荧光素酶标记人胃癌细胞裸鼠原位移植模型的建立

目的 建立荧光素酶标记人胃癌原位异种移植模型.方法 将萤火虫荧光素酶作为标记基因导人人胃癌MGC803细胞,建立稳定表达荧光素酶的细胞,将其接种裸鼠胃壁浆膜下,建立胃癌裸鼠原位肿瘤模型.用活体荧光成像系统检测肿瘤的发生发展,并进行小动物超声影像和病理学分析.结果 裸鼠原位成瘤率为100%,活体荧光成像观察发现在接种第7天,就可以观察到肿瘤发光.21 d后肿瘤进入对数生长期,28 d后肿瘤出现明显坏死,平均荧光光子数晕现下降趋势.超声成像发现小鼠胃部有直径为8.39 mm,面积为28.92 mm2瘤块.结论 荧光素酶标记可以实时监测原位异种移植人胃癌生长状况.     

人肝癌原位移植瘤的活体动态观察

目的 建立GFP（绿色荧光蛋白）/Luciferase（荧光素酶,Luc）双标高效表达的人肝癌细胞系SMMC-7721-GFP/Luc,并建立该细胞的裸小鼠肝原位移植瘤动物模型,利用小动物活体成像系统观察裸小鼠肝原位移植瘤的生长及转移情况.方法 应用慢病毒转染的方法建立GFP/I.alC双标的SMMC-7721细胞系,接种于裸小鼠肝原位,采用活体成像技术监测该细胞在小鼠体内深部组织的表达情况.结果 成功建立了GFP/Luc双标表达率接近100%的SMMC-772l-GFP/Luc细胞系,进行裸小鼠肝原位移植后,应用活体成像系统可观察到裸小鼠肝原位早期的微小病灶和晚期移植瘤的生长情况.而且,随着肿瘤移植时间的延长,移植瘤体积的增大,活体成像检测到的发光面积逐渐增大,发光强度也逐渐增加.结论 活体荧光成像系统可直接观察肝原位移植瘤模型中肿瘤的生长及转移,有助于了解人肝癌的生物学行为及其特性,鉴于其敏感、直观,动态、可靠的优点,它将为肝癌的进一步研究提供极其有益的帮助.     

日本2005年实验动物学会第52届年会将召开

目的探讨裸小鼠和SCID小鼠两种免疫缺陷动物人胃癌原位移植后肿瘤生长和转移等生物学特性的差异。方法将MKN-45细胞株接种至裸小鼠皮下,成瘤后采用组织学完整的组织块移植于裸小鼠和SCID小鼠胃壁建立原位移植模型,观察所建模型的原位成瘤率、移植瘤生长、侵袭和转移情况。结果①两种免疫缺陷动物的原位成瘤率都为100%;②裸小鼠原位移植瘤平均体积2884±1337mm3,腹腔淋巴结、肝、肺、膈转移率分别为67%、83%、33%和8%;③SCID小鼠原位移植瘤平均体积4582±1326 mm3(P<0.05),肝转移率90%(P>0.05),与裸小鼠较为接近, 腹腔淋巴结转移率90%,肺和膈转移率分别为100%(P<0.01)和60%(P<0.05)。结论证明应用T、B细胞联合免疫缺陷的SCID小鼠较裸小鼠更适用于建立胃癌的原位移植模型。     

人结肠癌原位移植瘤裸小鼠模型的活体成像观察

目的 建立人结肠癌原位移植瘤裸小鼠模型,探讨小动物活体成像系统在结肠癌原位移植瘤模型中的应用.方法 应用慢病毒转染的方法建立同时表达绿色荧光蛋白及荧光素酶(GFP/Luc)的人结肠癌细胞HCT-116,分别采用组织决法及培养细胞法建立裸小鼠结肠癌原位移植瘤模型,通过小动物活体成像系统动态观察肿瘤在肠原位的生长及转移情况.结果 成功建立了稳定表达GFP/Luc的人结肠癌细胞,并应用该细胞成功建立了结肠癌原位移植瘤动物模型.经连续7周动态观察表明,随着肿瘤移植时间的延长,腹部皮下触诊显示肿瘤逐渐增大,小动物活体成像显示荧光素表达面积和强度也逐渐增大.结论 小动物活体成像系统能够客观评价结肠癌的原位生长及转移情况,为体内深部肿瘤的观察和研究提供了有效的参考依据.     

时空表达可控的转基因动物模型调控体系的研究

目的通过筛选建立裸小鼠人胃癌肝靶向高转移模型。方法采用原位移植技术，将组织学完整的MKN-45肿瘤组织块移植至裸小鼠胃壁上，按照胃原位移植→肝转移→皮下扩增→胃原位移植方法进行反复筛选，观察肿瘤原位移植成瘤率、侵袭和转移及形态学特征（光镜、电镜）。结果筛选出一个裸小鼠人胃癌肝靶向高转移模型，将其命名为MKN-45sci，已传至第5代。肿瘤的原位移植成瘤率、肝转移率和腹腔淋巴结转移率皆为100％，部分动物伴发肺、脾、膈等脏器转移及血性腹水。组织病理学和电镜观察结果证明其特征与原肿瘤相似。结论建立的裸小鼠人胃癌肝转移模型完整地再现了胃癌患者的临床过程，为探讨人胃癌肝转移的生物学机制和抗转移治疗提供了理想的实验动物模型。     

Smad3基因剔除的骨髓细胞移植对小鼠的影响

目的建立GFP（绿色荧光蛋白）／Luc（荧光素酶）双标高效表达的人肺癌细胞系和人肝癌细胞系,利用活体成像系统观察裸小鼠肺原位移植瘤和肝原位移植瘤的生长情况。方法应用慢病毒转染的方法建立GFP／Luc双标的SPC-A-1和SMMC-7721细胞系,结合流式细胞分选技术使GFP／Luc双标表达率接近100％,分别接种于裸小鼠肺原位和肝原位,采用活体成像技术监测各稳定转染细胞在小鼠体内深部组织的表达情况。结果成功建立了GFP／Luc双标表达率接近100％的SPC-A-1-GFP／LHC和SMMC-7721-GFP／Ltic细胞系,进行裸小鼠肺原位移植和肝原位移植后,应用活体成像系统观测到裸小鼠肺原位和肝原位早期的微小病灶和晚期移植瘤的生长情况,而且,随着肿瘤移植时间的延长,移植瘤体积的增大,活体成像检测到的发光面积逐渐增大,发光强度也逐渐增加。结论所建立的稳定表达GFP／Luc的细胞系,结合活体成像技术,能够对动物模型深部的肿瘤病灶进行活体、实时、定量检测,且灵敏度极高,为进一步研究肿瘤的发生及发展提供了理想的技术手段。     

裸大鼠人肝癌原位模型的建立及其生物学特性的初步观察

目的 探讨人肝癌原位移植后肿瘤在裸大鼠（rnu/rnu）生长和转移等生物学特性.方法 Huh-7细胞株接种于裸小鼠皮下成瘤组织块移植于裸大鼠皮下成瘤,之后将裸大鼠皮下肿瘤移植至其肝脏以建立原位移植模型,观察所建立模型原位成瘤率、移植瘤生长、侵袭和转移情况,同时进行病理组织学、超微结构、细胞增殖周期和异倍体的观察.结果 原位移植瘤模型裸大鼠成瘤率高达90.0%,其肺转移率形成率为50.0%.结论 应用裸大鼠建立肝癌原位移植模型,为探讨肝癌转移的生物学机制和抗转移治疗提供了理想的实验动物模型.     

人宫颈癌细胞Hela移植模型肿瘤生长的荧光分析和卡尺测量的比较

目的建立稳定表达绿色荧光蛋白的人宫颈癌细胞系,建立移植瘤模型并比较移植模型肿瘤生长的荧光分析和卡尺测量的优缺点。方法以Lipofectamine 2000介导chickenβ-actin-GFP-NEO转染人宫颈癌细胞Hela,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养。BALB/cA-nu裸鼠皮下接种1×106个发光细胞使其成瘤,利用活体荧光成像系统和游标卡尺观察肿瘤的生长情况。结果获得了稳定表达GFP的人宫颈癌细胞株,将其接种到裸鼠体内可成瘤。活体荧光成像观察发现,1至3周随着肿瘤体积逐渐增大,平均荧光光子数逐渐增加;4周时随着肿瘤出现明显坏死,平均荧光光子数呈现下降趋势,而游标卡尺测量结果显示肿瘤在4至5周仍然不断的增大。结论绿色荧光蛋白能够在人宫颈癌细胞Hela中长期稳定表达,用绿色荧光蛋白标记的人宫颈癌细胞Hela建立的裸鼠肿瘤模型可以为人宫颈癌研究提供理想的实验材料,应用小动物活体成像系统能够客观定量评价活的肿瘤细胞在动物体内的生长情况,而不是肿瘤体积的变化。     

工程化人胃癌裸鼠原位模型的建立及其活体荧光成像观察

目的建立工程化人胃癌裸鼠原位模型,并利用活体荧光成像技术进行观察。方法以胶原为支架材料,表达绿色荧光的人
胃癌BGC823-EGFP细胞为种子细胞,建立人胃癌体外模型;倒置显微镜观察肿瘤细胞生长状态;通过注射将体外模型移植到裸
鼠体内;活体荧光成像评估胃癌原位模型的建立;解剖观察原位肿瘤的移植成功率,生长及转移情况;冰冻切片及HE染色进行
组织学观察。结果工程化人胃癌体外模型中肿瘤细胞呈立体生长;原位肿瘤成瘤率100%,可见腹腔重要脏器转移;组织学特征
呈典型低分化腺癌;活体荧光观察可见原位肿瘤形成,但效果不理想。结论建立了工程化人胃癌裸鼠原位模型;绿色荧光成像
效果较差,活体荧光成像观察应选用穿透力较强的荧光。
     

健脾为基础中药方对人胃癌MKN-45裸小鼠皮下移植瘤生长及瘤组织内P-Stat3蛋白表达的影响

目的研究健脾为基础中药方对人胃癌MKN-45裸小鼠皮下移植瘤生长及瘤组织内P-Stat3蛋白表达的影响。方法将裸小鼠皮下移植瘤模型随机分为中药组及生理盐水组,比较第31天2组实验鼠皮下移植瘤生长及瘤组织内P-Stat3的蛋白表达情况。结果中药组的抑瘤率为23.68%,P-Stat3蛋白表达相对定量值为(0.33±0.52),与生理盐水组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。结论健脾为基础的中药方可抑制人胃癌细胞MKN-45裸小鼠皮下移植瘤的生长,并能抑制P-Stat3的蛋白表达。     

人胃癌裸鼠胃原位种植转移模型的建立和改进

目的：建立人胃癌裸鼠胃原位种植转移模型。方法：用人胃癌细胞SGC-7901悬液接种于裸鼠皮下，形成稳定传代的皮下移植瘤。将皮下移植瘤组织再接种于裸鼠胃浆肌层，观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率和自发转移的发生率及组织学变化等生物学特性。结果：肿瘤组织块保留了人胃腺癌的组织学特点，人胃癌裸鼠原位移植模型成瘤率为100％(20／20)，肝脏转移率为45％(9／20)。结论：人胃癌裸鼠原位移植瘤模型的生物学行学与人胃癌自然生长和转移过程相似，为研究人胃癌转移机制提供了理想的模型。     

绿色荧光蛋白标记的人卵巢癌裸鼠原位移植模型的建立

目的 应用绿色荧光蛋(GFP)基因标记人卵巢癌细胞株H08910,建立新型裸鼠原位移植瘤模型.方法 将处于对数生长期的人卵巢癌细胞株H08910/GFP 2×106个细胞注射于裸鼠腋下,收集瘤块后接种于左侧卵巢包膜下,共6只.术后利用荧光体视显微镜连续观察肿瘤生长情况,4周后处死荷瘤鼠,观察肿瘤生长及转移情况.结果 种植的原位移植瘤成瘤率100%,移植后2周可观察到左侧肋脊角处绿色荧光团,并逐渐增大,4周后,可见肿瘤侵及腹膜、网膜、肠管、脾脏、肝脏、子宫、盆腔淋巴结,转移率达66.7%.结论 成功建立新型裸鼠原位人卵巢癌的动物模型.     

原位肝肿瘤血管生成及自发转移的荧光成像

目的建立增强型绿色荧光蛋白标记的腺样囊性癌肺高转移株（ACC-M-GFP）的原位肝肿瘤种植模型,探讨通过荧光成像观察肿瘤血管生成及侵袭转移的可行性和影响因素。方法2只BALB／cnu／nu裸小鼠上肢皮下注射10^7／ml ACC-M-GFP细胞悬液0．2ml。瘤结节直径接近0．5cm时切取皮下肿块,分割成1mm^3瘤块,采用隧道包埋法植入另外8例裸小鼠肝左叶。从第4周起,每隔2周同时采用整体荧光成像系统及体视荧光显微镜观察肿瘤生长转移及肿瘤血管生成情况;每次观察结束后随机处死裸鼠1只,取出肝、肺及邻近脏器,如纵隔淋巴结,行脏器荧光成像观察。肝肿瘤组织行连续冰冻切片,荧光显微镜下直接观察肿瘤血管生成。荧光成像结果与常规石蜡切片苏木素-伊红（HE）染色对照。结果8只裸鼠原位肝肿瘤均种植成功。采用整体荧光成像,肝肿瘤种植后第6-8周需通过皮瓣窗方能观察到肿瘤荧光;第8-10周透过皮肤可直接观察肿瘤荧光;第12-14周时肿瘤巨大,可观察到腹腔脏器转移荧光;第16-18周观察到肺转移及淋巴结转移。体视荧光显微镜下肝肿瘤种植后第4周可观察到肿瘤血管生成;第12-14周后,体视荧光显微镜下可观察到大量丰富的肿瘤血管形成,呈现为绿色背景下的树枝状黑色条纹。瘤组织冰冻切片后荧光显微镜观察发现肿瘤血管呈绿色背景下的黑色管状结构。结论采用荧光成像可实现对肝肿瘤生长浸润转移和肿瘤血管生成的实时动态观察。     

人胃癌裸鼠胃原位移植转移模型的建立

目的 :建立人胃癌裸鼠原位移植转移模型 .方法 :用人胃癌细胞悬殊液接种于裸鼠皮下 ,形成稳定传代的皮下移植瘤 ,将皮下移植瘤组织再接种于裸鼠胃浆膜下 ,称为间接胃原位移植模型 ,并与直接用细胞悬液接种于裸鼠胃浆膜下、皮下、腹腔、尾静脉的移植瘤模型比较 ,观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率和自发转移的发生率及组织学变化及细胞动力学改变等生物学特性 .结果 :肿瘤组织块保留了人胃腺癌的组织学特片 ,尾静脉注射与直接原位接种成瘤率均为6 0 % ,间接原位接种模型移植成瘤率为 80 % ,皮下与腹腔接种成瘤率均为 10 0 % .间接胃原位移植模型肝脏转移率为6 0 % ,直接胃原位移植模型肝脏转移率为 33.3% (P <0 .0 5 )尾静脉移植瘤模型仅见肝脏转移 ,实验过程中裸鼠衰竭处死后的肺脏经连续组织切片未见瘤细胞侵袭 .移植瘤细胞具有分泌CEA的功能 ,细胞动力学检测显示以五倍体细胞为主 .结论 :人胃癌裸鼠皮下 -胃原位移植瘤模型的生物学行学与人胃癌自然生长和转移过程相似 ,为研究人胃癌转移机制提供了理想的模型 .     

裸小鼠胃癌原位移植模型的建立

目的建立一种新的裸小鼠胃癌原位移植模型。方法采用Matrx VIP 3000型气体麻醉系统对实验动物进行麻醉。分别用"包埋法"、"挂线法"、和"胃囊法"建立BALB/c裸小鼠胃癌原位移植瘤模型。术后用Caliper IVIS Kinetic小动物活体成像系统对实体瘤的生长情况进行检测和分析。术后28 d对肿瘤组织进行组织病理学检查。结果采用包埋法建立胃癌原位移植裸小鼠模型,除了与其它常用方法一样具有高移植成功率以外,还具有操作简便、时间短、难度低、肿瘤组织不易与其它组织直接接触等特点。结论包埋法能快速制备大批量小鼠胃癌原位移植模型,为胃癌原位移植模型相关研究提供便利。     

THE ESTABLISHMENT OF A NEW ANIMAL MODEL FOR GASTRIC CANCER STUDY BY ORTHOTO PIC IMPLANTATION OF GASTRIC CANCER CELLS INTO ATHYMIC NUDE MICE

An animal model mimicking human gastric cancer by gastric wall implantation technique in athymic nude mice was reported. Two human gastric cancer cell lines. MKN-45 and MKN-28, were used in this study. All animals with gastric wall implantation of cancer cells of these two cell lines developed grossly visible gastric tumors after 3-4 weeks of implantation. Histopathological examination showed that tumors prirnarily grew at serosal side of stomach, and progressively invaded the gastric mucosa, but none showed metastasis in this study. All tumor-bearing animals died within 5-8 weeks after implantation. These results indicated that gastric wall of nude mice provided a good soil for growth and propagation of human gastric cancer cells. The model was useful for in vivo study on biological behavior of various types of human gastric cancers.     

裸大鼠人乳腺癌皮下移植瘤模型的建立和评价

 目的  采用细胞悬液种植法和组织块移植法建立裸大鼠人乳腺癌皮下移植瘤模型并观察其生物学特性。 方法  体外培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,注射于10只同种雌性裸大鼠皮下,2周后处死2只成瘤裸大鼠,将皮下瘤修剪成2 mm3的组织块移植入10只同种雌性裸大鼠皮下。4周后将所有裸大鼠处死,取出皮下瘤。通过巨检、镜检、免疫组化等观察肿瘤的生物学特性。 结果  采用细胞悬液种植法的10只雌性裸大鼠皮下均成瘤,采用组织块移植法的10只雌性裸大鼠中8只皮下成瘤。两种方法的成瘤速度基本相似。HE染色和免疫组化染色证实两种方法建立的裸大鼠人乳腺癌模型的特性基本一致。结论  采用细胞悬液种植法和组织块移植法均能成功建立裸大鼠人乳腺癌模型,为乳腺癌的体内实验和新型治疗等研究提供了较理想的动物模型。     

人膀胱肿瘤细胞的荧光标记及其移植模型的整体荧光成像

目的对人膀胱移行细胞癌T24细胞进行荧光标记并建立其可在活体荧光成像系统下直接观察肿瘤生长及转移的简便、可靠的原位移植模型。方法以绿色荧光蛋白作为标记基因导入人类膀胱移行细胞癌T24细胞株中,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养,然后接种于裸小鼠膀胱壁内及颈部皮下,活体荧光成像系统直接观察肿瘤的生长与转移,并与常规石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色比较。结果经绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光,并可在体内、外持续稳定表达。膀胱原位接种5×105个转染后的膀胱肿瘤细胞后1周即可在荧光成像系统下观察到下腹部新生膀胱肿瘤发出绿色荧光,2周后膀胱肿瘤可被触及,4周后经解剖可在荧光成像系统下观察到腹膜后及盆腔淋巴结等远处转移。结论绿色荧光蛋白能够在T24人膀胱肿瘤细胞中长期稳定表达,用绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞建立的裸鼠原位移植模型为进一步研究膀胱肿瘤提供了一种简便、可行的新方法。