人参皂甙R_g1协同诱生LAK细胞的抗瘤活性

用51Cr释放试验检测人参皂甙Rg1协同诱生LAK细胞对K_(562)细胞的杀伤活性。9例正常人PBL诱生的LAK细胞对K_(562)细胞的杀伤活性(30.86±16.58％)高于8例NK细胞(12.18±5.47％)。5～50μg/ml人参皂甙Rg1对LAK细胞活性皆有增强作用,尤以50μg/ml人参皂甙Rg1作用明显,其协同诱生LAK细胞的活性(56.43±12.18％)高于对照组(43.18±20.32％,P<0.05)。     

~(51)Cr释放方法测定LAK细胞活性若干实验条件的选择

本文探讨了(51)~Cr释放试验测定LAK细胞活性的若干实验条件。应用200μCi国产铬酸钠(Na_2~(51)CrO_4),在细胞浓度2×10~8/ml、容积0.5ml、2小时的标记条件下,1×10~4k_(562)细胞的同位素掺入量大于1800cpm,自然释放率为17～20％。以IN HCI与等容量k_(562)靶细胞共育为最大释放,其最大释放率为70.08％。效/靶比例为50∶1、共育6小时的基本条件下,(51)~Cr释放方法测定的LAK细胞杀伤K_(562)细胞活性为65.33±7.4％。     

LAK细胞对直肠腺癌细胞杀伤的观察

采用体外培养方法,在恒温(37℃)和5％CO_2条件下,连续观察LAK细胞对直肠腺癌细胞系(HR8348)的结合率。杀伤活性及杀伤动态。结果表明:HR8348细胞对LAK细胞杀伤较敏感,在相同的效靶比例条件下,4h时效靶细胞结合率为52.0±3.6,LAK细胞杀伤率为49.0±2.3％。效靶细胞结合率及杀伤率呈正相关(P<0.01),LAK细胞的杀伤取决于效靶细胞的稳定结合。LAK细胞杀伤HR8348的动态过程是:效靶细胞主动趋向运动→相互识别→接触与结合→LAK细胞发挥杀伤作用→靶细胞溶解。LAK细胞杀伤作用随效靶共育时间延长乃效靶比例的增高而增强。     

短期培养和长期培养的自体LAK细胞的制备和应用研究

用密度梯度离心法分离单个核细胞,在体外经短期(3~5d)和长期培养(7~15d)后将自体LAK细胞回输给病人。结果显示:长期培养LAK细胞的扩增细胞数明显多于短期培养LAK细胞扩增数(P<0.005);两者在体外均能杀伤人髓样白血病K_562细胞,前者的平均杀伤活性为39.24±2.81%,后者的平均杀伤活性为35.99±1.31%,病人经自体LAK细胞治疗后,共症状和体征均有所改善。     

AML骨髓LAK细胞抗肿瘤活性的体外研究

采用体外半固体培养技术,研究了10例急性髓细胞白血病(AML)患者和其中5例缓解期患者经IL-2体外诱导激活的骨髓LAK细胞对K_(562)白血病细胞系集落形成的抑制作用,以及对正常骨髓粒单系造血祖细胞集落(CFu-GM)的效应。结果显示:AML初诊及缓解期骨髓LAK细胞对K_(562)肿瘤细胞均有杀伤活性,缓解期骨髓LAK活性明显高于急性期,而对正常CFu-GM集落产率无明显抑制作用。为临床使用,尤其是ABMT的骨髓净化提供了实验依据。     

应用~(125)I—UdR释放法检测LAK细胞的杀伤作用

本文利用~(125)I-UdR标记K562、Raji靶细胞技术,建立体外测定LAK细胞的细胞毒方法。Raji细胞与K562细胞的标记条件相似,即在标记时间为4h、5×10~(-5)SMFUdR条件下,标记1×10~6细胞/ml。~(125)I-UdR最适用量为2—3μCi,效靶细胞孵育最佳时间为16-18h。~(125)I-UdR释放法检测的结果符合LAK细胞的一般特性。     

胎脾、胸腺LAK细胞制备及治疗晚期肿瘤患者初试

本文报道了一种从人胎儿脾脏和胸腺细胞制备LAK细胞的方法。经IL-2激活后LAK细胞的NK活性由16.2±6.7％提高到32.4±17.6％。用此LAK细胞治疗了14例患进展期转移癌的患者。每例患者经外周静脉输注LAK细胞4～5次,每次接受的细胞剂量为2～23×10~8LAK细胞。结果表明,这一疗法是安全有效的。14例患者中有11例在治疗后4～23个月病情稳定,其中2例局部转移癌灶完全消失,另1例缩小50％。另外3例治疗期间病情继续进展。     

四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用的比较

目的：比较四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用。方法：选用脐带血制备LAK细胞，并与临床常用的外周血、胎脾及胸腺LAK细胞在体外扩增及抗肿瘤作用方面比较。结果：脐带血的扩增能力显著高于其余3种LAK细胞（P＜0．01），每份脐带血LAK细胞总数可增殖至2．5×1010；抗肿瘤活性以脐带血LAK对SMMC-7221肝癌细胞出现最早（第3d）、活性最强（85％±3％），明显强于其余三者（P＜o．01）；对K562的杀伤作用仍属脐带血LAK最强；而胸腺LAK的活性最弱。结论：脐带血LAK细胞体外增殖快，杀伤活性强，可用于肿瘤的过继性免疫治疗。     

白细胞介素-1对骨髓瘤细胞粘附诱导骨髓基质细胞分泌白细胞介素-6的影响

目的探讨白细胞介素-1(IL-1)对骨髓瘤细胞粘附诱导骨髓基质细胞(BMSCs)分泌白细胞介素-6(IL-6)的影响及多发性骨髓瘤(MM)患者和正常对照BMSCs分泌IL-6的差异.方法建立人BMSCs培养方法,采用MTT比色法检测BMSCs培养上清中IL-6量.结果(1)MM患者BMSCs具有异常增殖能力;(2)单纯KM3细胞培养上清中IL-6量为7±2.3u/ml;(3)单纯BMSCs培养时,MM患者BMSCs分泌IL-6量为26±7.5u/ml,高于正常对照16±4.7u/ml(P＜0.01);(4)KM3细胞与MM患者或正常对照BMSCs共培养24小时后,其培养上清中IL-6量分别为49±181u/ml和27±6.9u/ml,均高于单纯BMSCs培养上清中IL-6量(P＜0.01);(5)将BMSCs经1%多聚甲醛固定,再与KM3细胞共培养24小时后,其培养上清中IL-6量与单纯KM3细胞培养上清比较差异无显著性;(6)单纯BMSCs培养体系中加入IL-1,IL-6分泌量差异无显著性;(7)在KM3细胞与BMSCs共培养体系中加入IL-1,IL-6分泌量达74±20.5u/ml(MM组)和46±10.5u/ml(正常对照组),均高于单纯KM3与BMSCs共培养(P＜0.01).结论MM患者BMSCs具有异常增殖和分泌IL-6能力,IL-1通过骨髓瘤细胞介导可促进BMSCs分泌IL-6.     

探讨胎脾LAK细胞对不同的T淋巴白血病细胞的杀伤作用

目的探讨胎脾LAK细胞对不同的T淋巴白血病细胞的杀伤作用.方法采用低浓度的重组人白介素-2(rhIL-2)诱导的胎脾LAK细胞杀伤两种不同的T淋巴白血病细胞系MOLT-4和HPB-ALL的51Cr释放实验.结果发现不同的LAK效应细胞和靶细胞比(ET)条件下,胎脾LAK细胞对两种不同的T淋巴白血病细胞杀伤能力随ET的增大而增强(P<0.01).相同ET比时,对MOLT-4的杀伤显著强于对HPB-ALL的杀伤(P<0.001).各ET比的平均杀伤率MOLT-4为(58.24±12.93)%,HPB-ALL为(34.33±13.20)%(P<0.001).结论胎脾LAK细胞对不同的T淋巴白血病细胞的杀伤能力存在着差异,其可能与T淋巴白血病细胞的分化程度相关.ET比越大,杀伤能力越强.     

脐血LAK细胞活性的诱导及调节

应用~(51)Cr释放试验研究了人脐血LAK细胞对K562细胞及Raji细胞的杀伤率,以及OK-432、干酪乳酸杆菌对脐血LAK细胞的调节作用。结果表明,rIL-2可诱导人脐血淋巴细胞产生LAK细胞活性,杀伤Raji细胞的能力由10%增至50%,对K562细胞的杀伤力也明显增强,统计学处理有显著意义。培养4天的LAK细胞杀伤力最强,杀伤率随效靶比例的增加而增强。OK-432及干酪乳酸杆菌均能增强rIL-2诱导的脐血LAK细胞的抗瘤活性。     

T—AK细胞上清液抑瘤活性的研究

本文应用ＭＴＴ比色法检测了ｒＩＬ－２和抗ＣＤ３单抗共同诱导激活的Ｔ－ＡＫ细胞培养上清液对Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制效应，并观察了Ｔ－ＡＫ上清液抑瘤活性与Ｔ－ＡＫ细胞杀伤活性的相关性，结果表明：（１）Ｔ－ＡＫ细胞能够自发分泌一些抑制Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制因子，但活性很低；（２）Ｔ－ＡＫ细胞在杀伤Ｋ５６２细胞过程中释放的抑制肿瘤细胞生长的物质，抑瘤活性比较高，共     

恶性肿瘤患者自体CIK细胞的实验研究

目的通过比较CIK细胞和LAK细胞的增殖、表型和抗瘤效应,为临床应用CIK细胞过继免疫治疗提供资料。方法取12例恶性肿瘤患者外周血,常规分离成单个核细胞,用不同细胞因子培养诱导出LAK细胞和CIK细胞,观察两种细胞的增殖、表型和抗瘤效应。结果培养后12天,CIK细胞数量达原来的11.5倍,而LAK细胞数量只有原来的5.2倍;比较培养前后CIK细胞的表型,可发现CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+、CD25+在培养后均有明显增高(P<0.05或0.001)。CIK细胞杀伤K562细胞和Raji细胞的能力均明显优于LAK细胞(P<0.05或0.001)。结论CIK细胞不仅具有强大的增殖功能,并且对不同的肿瘤细胞系显示出较LAK细胞更强的杀伤活性。因此,它是一种新型的过继免疫治疗方法。     

Experimental studies on the antitumor activity of glioma-infiltrating lymphocytes against autologous glioma]

In the present study, antitumor activity of glioma-infiltrating lymphocytes (GILs) was compared to that of lymphokine-activated killer (LAK) cells. Results suggested that killing activity of GILs against autologous glioma cells was significantly higher than that of LAK cells (P less than 0.05), but their activity against allogeneic glioma cells was not different from that of LAK cells (P greater than 0.05). Analysis of cell surface phenotypes showed that CD4+ cells were a main portion of LAK cells, and CD8+ were predominant in the GILs. In the beginning, growth of GILs was slower than that of LAK cells. As time went on, generation of GILs was faster than that of LAK cells. The results suggested that GILs were superior to LAK cells for adoptive immunotherapy in patients with brain glioma.     

人参茎叶皂甙对LAK细胞抗肿瘤活性的正向调节作用

体外实验,79例正常人PBL诱生的LAK细胞分别对13例新鲜急性白血病细胞和K562细胞的杀伤活性,较7例未经IL—2激活的PBL对同样靶细胞的杀伤活性明显高。适宜浓度的人参茎叶皂甙可明显增强LAK细胞抗肿瘤活性。提示人参茎叶皂甙对辅助LAK细胞联合IL—2过继输入治疗恶性肿瘤有潜在的使用价值。     

LC-CW对人LAK细胞的影响及其机理的研究

提取干酪乳酸杆菌细胞壁成分(LC-CW),研究其对人外周血LAK细胞的影响及其作用机理。结果表明,1.LC-CW可以单独或与IL-2协同,促进PBL的增殖。2.LC-CW可以增强rIL-2诱导的人外周血LAK细胞杀伤Raji细胞的作用,统计学分析有显著意义。但是单独使用LC-CW不能诱导LAK细胞杀伤活性。3.LC-CW可使PBL的CD_4~+,CD_(16)~+抗原表达增加,与IL-2协同,可增加CD_3~+、CD_4~+、CD_8~+和CD_(25)~+抗原的表达。4.LC-CW可促进PHA-P诱导的IL-2的产生。本研究结果提示LC-CW是一种重要的LAK细胞活性增强因子。     

激活骨髓和淋巴因子激活的杀伤细胞生物活性的实验研究

目的 :证实激活骨髓 (Activated bone marrow,ABM)具有与淋巴因子激活的杀伤 (LAK)细胞不同的生物学效应。方法 :应用重组白细胞介素 - 2 (r IL - 2 )、抗 CD3 单抗体外激活骨髓和外周血单个核细胞 ,以 MTT比色分析法测定 ABM、L AK细胞的杀伤活性 ,采用甲基纤维素半固体培养法进行粒 -巨噬细胞系祖细胞 (CFU- GM)、红系祖细胞 (BFU- E)培养。结果 :r IL- 2 +抗 CD3 单抗激活的 ABM组杀伤活性最强 (6 5 .8± 9.2 ) % ,r IL - 2激活的 ABM组次之为 (5 6 .3± 7.9) % ,活性强于相同条件下的 L AK组 ,两组差异具有显著性 (P<0 .0 1)。增殖倍数与相同条件下的 LAK细胞相比差异亦具有显著性。体外激活 3～ 5 d的 ABM与同期培养的未激活的骨髓细胞相比 BFU- E、CFU- GM形成率差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,LAK细胞则不具有造血祖细胞活性。结论 :ABM的杀伤活性和增殖效应明显强于 L AK细胞 ,且能保持造血祖细胞活性 ,抗 CD3 单抗能够促进 r IL - 2诱导的 ABM抗肿瘤活性和增殖效应 ,不损伤造血祖细胞活性 ,是优于 LAK细胞的过继免疫疗法。     

Determination of IL-2 and cytotoxicity of killer cells in MTT colorimetry

Summary The activity of interleukine 2 (IL-2) in culture supernatants of lymphokine-activated killer (LAK) cells and tumor infiltrating lymphocytes (TIL) as well as cytotoxicity of LAK cells on cultured leukemic cells were determined by MTT colorimetry. The results showed that higher activity of IL-2 in culture supernatant of LAK and TIL cells was found it could be used to support the culture of IL-2 dependent cell lines. The significant cytotoxicity of LAK cells on leukemic cell lines could be found in vitro, and it was consistent with the ratio of effector cells to target cells. The number of living leukemic cells is consistently related with the concentration of formazan metabolite of MTT. It suggested that the numbers of living cells and cytotoxicity of LAK cells could be estimated by determination of formazan metabolite OD value.     

LAK细胞对白血病多药耐药细胞的杀伤作用

目的:研究淋巴因子激活的杀伤(LAK) 细胞对白血病多药耐药细胞的杀伤效应。方法:采用改良的四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测LAK细胞对白血病多药耐药细胞株K562/VCR的杀伤率,并与敏感株K562 相比较。结果:LAK 细胞对K562/VCR 细胞的杀伤率明显高于对K562 细胞的杀伤率,并且当效靶比为40∶1 时,这种杀伤率最高。结论:LAK细胞在体外对白血病多药耐药细胞株具有显著的杀伤作用,提示临床上用LAK细胞治疗多药耐药的白血病是可行的     

LAK细胞体外杀伤直肠腺癌细胞的扫描电镜观察

应用扫描电镜观察体外LAK细胞与直肠腺癌细胞相互作用时的形态学变化。结果表明:LAK细胞与HR8348细胞均具有主动互相趋向运动,效靶细胞借其细胞突起及微绒毛相互接触。LAK细胞及肿瘤细胞的细胞突起及微绒毛由早期的平面接触逐渐发展为犬牙交错状结合。效靶细胞紧密结合后,靶细胞鼓泡,细胞膜出现环形穿孔。互相接触,结合的微绒毛及细胞突起在靶细胞的溶解过程中起到一个物理微桥的作用。LAK细胞分泌的杀伤物质通过微桥介导靶细胞的溶解。效靶细胞互相结合的微绒毛间形成关闭小室,它可能与维持局部杀伤物质浓度有关。