子宫内膜癌组织的FNDC10水平及临床意义

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织的Ⅲ型纤维连接蛋白域蛋白10(FNDC10)水平及临床意义。方法采用GEPIA分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中EC组织的FNDC10水平,实时定量PCR(QPCR)检测97例EC组织、67例不典型增生子宫内膜组织和42例正常子宫内膜组织的FNDC10水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线以评估组织FNDC10水平诊断EC的效能和最佳阈值,进一步分析FNDC10水平与EC临床病理特征的关系,通过Kaplan-Meier Plotter数据库在线分析FNDC10水平与EC预后的关系。结果GEPIA在线分析显示,174例EC组织的FNDC10水平高于13例正常组织(P<0.05);QPCR结果显示,97例EC组织、67例不典型增生子宫内膜组织和42例正常子宫内膜组织的FNDC10水平依次为2.788±1.253、1.874±0.759和1.041±0.541,EC组织的FNDC10水平高于其余子宫内膜组织,而不典型增生子宫内膜组织的FNDC10水平也高于正常子宫内膜组织,以上差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析显示,组织FNDC10水平诊断EC的曲线下面积为0.900(95%CI:0.850~0.951,P<0.05),当以1.911为最佳诊断阈值时对应的约登指数最大,敏感度和特异度分别为73.20%和97.62%。FNDC10水平与年龄和病理类型无关(P>0.05),而与组织学分级、FIGO分期、肌层浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.05)。Kaplan-Meier Plotter在线分析显示EC组织FNDC10水平与总生存期(OS)有关,其中高水平的中位OS为36.03个月,短于低水平的103.73个月(HR=1.98,95%CI:1.31~3.00)。结论EC组织的FNDC10水平升高且促进了该恶性肿瘤的病情进展,与预后有关,其水平有助于判断EC的组织学分级、FIGO分期、肌层浸润深度和淋巴结转移情况,在EC诊治和预后判断上有重要价值。     

PIM1基因通过调控STAT3信号通路蛋白表达对食管癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨原癌基因PIM1通过调控信号转导子与激活子3(STAT3)信号通路对食管癌KYSE150细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响.方法:分别以PIM1 siRNA和siRNA Control转染KYSE150细胞,命名为PIM1-siRNA组和NC组,同时设置空白对照Control组.采用实时荧光定量PCR(qRT-...     

miR-200c 通过靶向细胞能量代谢和多种信号通路调控三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的恶性生物学行为

目的：考察miR-200c对三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）细胞MDA-MB-231的增殖、凋亡和迁移的影响及其代谢相关的分子机制。方法：以过表达miR-200c的MDA-MB-231（miR-200c-231）细胞、无过表达miR-200c的阴性对照细胞miR-NC-231及其移植瘤裸鼠模型为研究对象,qPCR检测细胞和移植瘤组织中miR-200c及其他相关基因的表达水平,免疫组化技术分析瘤组织中Ki67阳性细胞数量,Transwell小室法检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blotting检测细胞及组织中增殖、迁移和代谢相关信号通路多种蛋白的表达,Seahorse能量代谢检测仪检测细胞的基础耗氧率（oxygen comsumpition rate,OCR）、细胞外酸度（extracellular acidification rate,ECAR）和代谢表型变化,液相质谱联用技术检测细胞中代谢产物的变化。结果：miR-200c-231细胞及其移植瘤组织中 miR-200c 表达较 miR-NC-231细胞显著增加（P<0.05或P<0.01）,miR-200c-231移植瘤质量和体积均显著下降、瘤组织中Ki67阳性细胞数明显减少（P<0.01）,miR-200c-231细胞的迁移能力下降、细胞凋亡率提高（均P<0.01）。同时伴随着ZEB1/2、Vimentin、cyclinD1的表达下调及cleaved PARP表达的提高（P<0.05或P<0.01）,STAT1/3和NF-κB的磷酸化水平降低（均P<0.05）而cAMP通路蛋白的磷酸化水平提高（P<0.05）。miR-200c-231细胞的OCR提高和ECAR降低、色氨酸2,3-加二氧酶（tryptophan-2,3-dioxygenase 2,TDO2）表达下降（P<0.05或P<0.01）,细胞内10种抗肿瘤代谢物质含量提高（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-200c靶向TDO2调控TNBC细胞MDA-MB-231胞内抗肿瘤代谢产物水平、促使细胞代谢类型由依赖糖酵解为主向有氧呼吸类型转化,并失活STAT3和NF-κB通路而激活cAMP通路,从而影响MDA-MB-231细胞的恶性生物学行为。     

miR-1297 通过下调TET3 促进乳腺癌MCF-7 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的：探讨miR-1297 对乳腺癌细胞恶性生物学行为的调控作用及其潜在机制。方法：选用2016 年5 月至2018 年5月乐山市人民医院甲乳外科手术切除的20 例乳腺癌组织和癌旁组织标本以及乳腺癌细胞系MCF-7、SW626、HCC1937 和人乳腺上皮细胞MCF-10A,用qPCR检测乳腺癌组织和细胞系中miR-1297 的表达水平。实验分为对照组、miR-1297 inhibitor 组、TET甲基胞嘧啶双加氧酶3（TET3）过表达组及同时过表达TET3 和miR-1297 组,用CCK-8、Transwell 实验检测MCF-7 细胞的增殖、迁移和侵袭能力,用WB检测MCF-7 细胞中TET3 和EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin 和vimentin）的表达水平。用双荧光素酶报告基因验证miR-1297 与TET3 的靶向关系。结果：miR-1297 在乳腺癌组织和细胞系中均高表达（P<0.01 或P<0.05）。敲降miR-1297 后,MCF-7 细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT均明显受到抑制（P<0.05 或P<0.01）。转染pcDNA3.1-TET3 后,MCF-7 细胞TET3的表达水平显著上调（P<0.05）;同时过表达TET3 和miR-1297 能够逆转MCF-7 细胞中TET3 的表达水平及TET3 对MCF-7 细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用。双荧光素酶报告基因结果显示,miR-1297 靶向结合TET3 的3'' UTR,miR-1297 靶向下调TET3 从而促进MCF-7 细胞的恶性生物学行为。结论：miR-1297 在乳腺癌组织和细胞中高表达,其通过靶向下调TET3 的表达水平促进MCF-7 细胞增殖、迁移、侵袭和EMT等恶性生物学行为。     

lncRNA HOTAIR通过miR-519d-3p/CCND1 分子轴促进乳腺癌SKBR3细胞的恶性生物学行为

目的：探究lncRNA HOTAIR/miR-519d-3p/CCND1 分子轴对乳腺癌细胞增殖和转移的影响及其可能机制。方法：收集2017 年3 月至2019 年2 月南昌市第三医院乳腺外科手术切除的乳腺癌患者的乳腺癌组织及配对癌旁组织各50 例,qPCR检测癌及癌旁组织中HOTAIR 的表达水平,乳腺正常上皮细胞及乳腺癌细胞系中HOTAIR 和miR-519d-3p 的表达水平。将乳腺癌SKBR3 细胞分为NC 组、si-HOTAIR 组、miR-519d-3p mimics 组,miR-519d-3p mimics+pcHOTAIR 组、miR-519d-3p mimics+pcCCND1 组和si-HOTAIR+pcCCND1 组,CCK-8 法检测各组SKBR3 细胞增殖能力、Transwell 检测细胞侵袭和迁移能力、Western blotting 检测SKBR3 细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 以及CCND1 表达水平。双荧光素酶报告基因检测HOTAIR 和miR-519d-3p 以及miR-519d-3p 和CCND1 的靶向关系。结果：HOTAIR在癌组织以及乳腺癌细胞系中呈高表达,且在SKBR3 细胞系中表达最高。敲降HOTAIR可显著抑制SKBR3 细胞增殖、侵袭和迁移,并显著增加E-cadherin 的表达水平、降低N-cadherin 和Vimentin的表达水平（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因检测显示,HOTAIR 靶向下调miR-519d-3p 的表达,miR-519d-3p 靶向下调CCND1 的表达。敲降HOTAIR可增强miR-519d-3p 对CCND1 的下调作用,抑制SKBR3 细胞EMT、增殖、侵袭和迁移能力（均P<0.05）。结论：敲降HOTAIR可抑制SKBR3 细胞增殖和转移,其机制是通过调控miR-519d-3p/CCND1 分子轴实现的。     

白介素22活化STAT3信号通路促进结直肠癌细胞的增殖及其可能机制

目的： 探究白介素22（interleukin-22,IL-22）对结直肠癌细胞增殖的影响,并阐明其信号通路机制。 方法： Real-time PCR检测结直肠癌细胞SW480和SW620中IL-22受体1（IL-22 receptor 1, IL-22R1 ）mRNA的表达;采用不同质量浓度IL-22(0、1、5、10 ng/ml) 处理结直肠癌细胞,MTT法及克隆形成实验检测IL-22对SW480和SW620细胞增殖的影响;IL-22处理SW480和SW620细胞不同时间后,采用Western blotting检测其STAT3、AKT、ERK、JNK、P38蛋白磷酸化的情况;观察特异性STAT3磷酸化抑制剂LLL12处理是否影响IL-22诱导的结直肠癌细胞的促增殖效应。 结果： IL-22R1 mRNA在结直肠癌SW480、SW620细胞中均有表达。IL-22剂量依赖性地促进SW480和SW620细胞增殖,10 ng/ml IL-22作用后,SW480与SW620细胞增殖倍数均明显增高[（5.18±0.212） vs （2.64±0.27）,（8.14±0.61） vs （6.08±0.096）;均P<001];且IL-22可提高SW480与SW620细胞克隆形成能力,细胞克隆数明显多于空白对照组[（1 680.67±124.05） vs （730±64.29）,(2 668±116.37） vs （1 294±171.61）;均P<0.01]。Western blotting证实IL-22能显著活化STAT3通路,而对AKT、ERK、JNK、P-38通路影响不明显;STAT3抑制剂LLL12处理后,IL-22对SW480和SW620细胞的促增殖效应明显减弱。 结论： IL-22通过活化STAT3信号通路促进结直肠癌细胞SW480和SW620的增殖。     

miR-6775-3p在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：微小RNA（microRNA,miRNA）与肿瘤的发生、发展过程密切相关。探讨miR-6775-3p在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测4种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468和BT-549中miR-6775-3p的表达水平,选取miR-6775-3p表达水平最低的乳腺癌细胞系过表达miR-6775-3p后,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）法检测细胞的增殖情况,同时采用transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化。通过RTFQ-PCR和蛋白［质］印迹法（Western blot）检测miR-6775-3p过表达的乳腺癌细胞系中细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（cyclin-dependent protein kinase 4,CDK4）和CDK6,以及侵袭转移标志物基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）17和MMP24 mRNA以及蛋白的表达变化。结果：RTFQ-PCR结果显示,乳腺癌细胞系MDA-MB-453中miR-6775-3p的表达最低,在MDA-MB-453细胞中转染miR-6775-3p mimics后,miR-6775-3p的表达水平明显升高（P<0.001）。CCK-8实验结果显示,MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后,细胞的增殖能力明显降低（P<0.01）。Transwell迁移和侵袭实验结果显示,MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后,细胞的迁移（P<0.001）和侵袭能力（P<0.01）明显降低。RTFQ-PCR和Western blot实验结果显示,CDK4、CDK6及MMP17、MMP24的mRNA表达和蛋白水平均显著降低（P<0.01）。结论：miR-6775-3p可能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-28-3p通过抑制BIN1表达促进三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞的恶性生物学行为

目的：探讨 miR-28-3p 在三 阴 性 乳 腺 癌（triple negative breast cancer,TNBC）组 织 和 细 胞 系 中 的 表 达 及 其 对MDA-MB-468细胞恶性生物学行为的影响。方法：收集2013年1月至2014年1月河北医科大学第四医院乳腺中心手术切除的、经病理证实的 83 例女性 TNBC 患者的癌组织和癌旁组织标本,以及 TNBC 细胞系 MDA-MB-468、HCC-1937、MDA-MB-231、MDA-MB-436、MDA-MB-453和人正常乳腺上皮细胞MCF10A,用qPCR检测组织和细胞系中miR-28-3p的表达水平并分析其表达与患者临床病理特征的相关性。用miR-28-3p抑制剂转染MDA-MB-468细胞后,用CCK-8、流式细胞术、细胞划痕和Transwell实验分别检测miR-28-3p抑制剂对MDA-MB-468细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响,用Western blotting检测MDA-MB-468细胞中桥接整合因子1（bridging integrator-1,BIN1）蛋白的表达水平。通过生物信息学工具预测miR-28-3p的靶基因BIN1,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-28-3p对BIN1的调控作用。结果：TNBC组织及细胞系中miR-28-3p表达水平显著高于癌旁组织及MCF10A细胞（均P<0.01）;83例TNBC组织中共有56例（67.47%）高表达miR-28-3p,其高表达与患者的Ki-67表达水平、肿瘤大小和TNM分期密切相关（均P<0.05或P<0.01）。与miR-NC组比较,miR-28-3p抑制剂组MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高（均P<0.05或P<0.01）。双荧光素酶报告基因和实验证实BIN1是miR-28-3p的靶基因,miR-28-3p抑制剂可上调MDA-MB-468细胞中BIN1蛋白的表达（P<0.05）。结论：miR-28-3p在TNBC组织及细胞中呈高表达状态,miR-28-3p抑制剂上调BIN1表达进而抑制MDA-MB-468细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进其凋亡。     

circ_0072088 通过调控 miR-545-3p/STAT3 轴促进非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探究环状RNA(circular RNA,circRNA)0072088在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞中的生物学功能及其作用机制.方法:在公共基因芯片数据库Gene Expression Omnibus(GEO)中下载GSE101684数据集,通过GEO2R...     

大荨麻提取物对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及其可能的机制

目的:探讨大荨麻提取物对乳腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法:用不同质量浓度的大荨麻提取物(0、1、2、4、8、16、32、64 mg/ml)处理乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-23124 h,MTT法检测细胞增殖活力,选择中位抑制浓度附近的浓度(5和10 mg/ml)作为给药浓度...     

乳腺癌组织和细胞中低表达的LZTS2 通过PI3K/AKT信号通路抑制癌细胞增殖、迁移和EMT

[摘要] 目的：探讨亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2（leucine zipper tumor suppressor 2, LZTS2）基因在人乳腺癌组织和细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和EMT的影响及其作用机制。方法：收集2016 年1 月至2016 年12 月开封中心医院乳腺外科收治的50 例女性乳腺癌患者的癌及癌旁组织标本和乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468 以及正常人乳腺上皮细胞株HBL-100,用qPCR 和Western blotting 检测乳腺癌组织和细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平。构建pcDNA-LZTS2 真核表达载体并采用脂质体转染MCF-7 细胞,同时转染pcDNA3.1 作为阴性对照。用Western blotting 检测转染48~72 h 后MCF-7 细胞中LZTS2 蛋白表达水平;用MTT法、Transwell 小室法检测LZTS2 过表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时用Western blotting检测细胞中EMT相关蛋白Cyclin D1、波形蛋白、神经钙黏蛋白、上皮钙黏蛋白以及PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达。结果：人乳腺癌组织中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁组织（P<0.05 或P<0.01）;乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231 和MDA-MB-468 细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平显著低于乳腺上皮细胞HBL-100（P<0.05 或P<0.01）。与空白对照组和pcDNA3.1组相比,pcDNA-LZTS2 组MCF-7 细胞中LZTS2 蛋白表达水平明显上调（P<0.01）,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著受到抑制（P<0.05 或P<0.01）,同时过表达LZTS2 细胞中Cyclin D1、波形蛋白和神经钙黏蛋白表达水平均明显降低（P<0.05 或P<0.01）、上皮钙黏蛋白表达水平明显升高（均P<0.01）,显示LZTS2 过表达通过降低p-PI3K和p-AKT 表达而抑制PI3K/AKT信号通路。结论：LZTS2 在乳腺癌中低表达,过表达LZTS2 能够抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能与抑制细胞EMT过程的PI3K/AKT信号通路有关。     

Involvement of Ras GTPase-activating protein SH3 domain-binding protein 1 in the epithelial-to-mesenchymal transition-induced metastasis of breast cancer cells via the Smad signaling pathway

In situ models of epithelial-to-mesenchymal transition (EMT)-induced carcinoma develop into metastatic carcinoma, which is associated with drug resistance and disease recurrence in human breast cancer. Ras GTPase-activating protein SH3 domain-binding protein 1 (G3BP1), an essential Ras mediator, has been implicated in cancer development, including cell growth, motility, invasion and apoptosis. Here, we demonstrated that the upregulation of G3BP1 activates the EMT in breast cancer cells. Silencing Smads almost completely blocked this G3BP1-induced EMT, suggesting that this process depends on the Smad signaling pathway. We also found that G3BP1 interacted with the Smad complex. Based on these results, we proposed that G3BP1 might act as a novel co-factor of Smads by regulating their phosphorylation status. Moreover, knockdown of G3BP1 suppressed the mesenchymal phenotype of MDA-MB-231 cells in vitro and suppressed tumor growth and lung metastasis of 4T1 cells in vivo. Our findings identified a novel function of G3BP1 in the progression of breast cancer via activation of the EMT, indicating that G3BP1 might represent a potential therapeutic target for metastatic human breast cancer.     

剪接因子SF3b6通过MAPK信号通路促进胃癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨剪接因子3b亚基6(splicing factor 3b subunit6,SF3b6)对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等的影响及其作用机制.方法:通过组织芯片检测SF3b6在胃癌和癌旁组织中的表达,采用WB和qPCR检测SF3b6在正常永生化胃上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞系(HGC27、AGS、BGC8...     

miR-130a-3p通过HGF/MET信号通路抑制乳腺癌细胞MCF-7 侵袭

目的：探究miR-130a-3p 通过HGF/MET信号通路调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）影响乳腺癌细胞侵袭转移的分子机制。方法：收集承德医学院附属医院2018 年1 月至10 月收治的22 例乳腺癌患者癌组织和配对癌旁组织标本,乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-231 和MDA-MB-453）和正常乳腺上皮细胞MCF10A来自承德医学院基础研究所,然后采用qPCR检测组织和细胞系中miR-130a-3p 的表达情况;将实验分为对照组、miR-130a-3p mimics 组、miR-130a-3p inhibitor组、PHA665752（MET小分子抑制剂）转染组及共转PHA665752+miR-130a-3p inhibitor 组,然后采用CCK-8 法和Transwell 实验分别检测MCF-7 细胞增殖活力、侵袭和迁移能力;WB实验检测MCF-7 细胞EMT和HGF/MET信号通路相关蛋白的表达情况;此外,采用双荧光素酶报告基因检测miR-130a-3p 与MET之间的靶向关系。结果：miR-130a-3p 在乳腺癌组织和细胞系中呈低表达;过表达miR-130a-3p 可抑制MCF-7 细胞增殖、侵袭、迁移和EMT;而抑制miR-130a-3p 出现相反的结果。双荧光素酶报告基因结果证实miR-130a-3p 靶向下调MET的表达水平,且miR-130a-3p 负调控HGF/MET信号通路的表达;进一步实验证明,miR-130a-3p 通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7 细胞增殖、侵袭、迁移和EMT。结论：miR-130a-3p 通过阻断HGF/MET信号通路抑制MCF-7 细胞EMT过程,进而抑制MCF-7 细胞侵袭转移。     

miR-455-3p 通过靶向调控转脂蛋白4 抑制卵巢癌细胞SKOV-3 的增殖、迁移及上皮间质转化

[摘要] 目的：探讨miR-455-3p 对卵巢癌细胞SKOV-3 增殖、迁移能力及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,并研究其作用机制。方法：人卵巢上皮细胞株IOSE80、卵巢细胞系SKOV-3 和A2780 细胞培养完成后,将miR-455-3p mimic 及其阴性对照分别瞬时转染至细胞中。qPCR 实验检测IOSE80、SKOV-3 和A2780 细胞miR-455-3p 和转脂蛋白4（fatty acid-binding protein 4,FABP4）mRNA表达水平,Wb检测FABP4 和EMT相关蛋白的表达水平,CCK-8 法检测细胞增殖活性,Transwell 实验用于评估细胞迁移能力,生物信息学预测miR-455-3p 的靶基因,应用双荧光素酶报告基因验证miR-455-3p 与FABP4 的靶向关系。结果：与正常卵巢上皮细胞IOSE80 相比,卵巢癌细胞SKOV-3 和A2780 中miR-455-3p 低表达（均P<0.05）,而FABP4 高表达（均P<0.05）。此外,过表达miR-455-3p 明显抑制SKOV-3 细胞的增殖和迁移能力（均P<0.05）。过表达miR-455-3p 通过上调E-cadherin 表达、下调N-cadherin 和Vimentin 表达而抑制EMT进程（均P<0.05）。FABP4 是miR-455-3p 的靶基因,且miR-455-3p 能特异性结合FABP4 3’-UTR,并负调控其表达水平（P<0.05）。过表达FABP4 能够明显逆转miR-455-3p 对SKOV-3细胞增殖和迁移的抑制作用（均P<0.05）。结论：miR-455-3p 在卵巢癌中作为一个抑癌蛋白,通过靶向调控FABP4 从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及EMT,有望成为卵巢癌新的潜在治疗靶点。