亚低温对局灶性脑缺血大鼠血管新生的影响

目的探讨亚低温对局灶性脑缺血大鼠血管新生的影响。方法采用改良的线栓法制作大鼠永久性大脑中动脉闭塞模型，将造模成功的大鼠分为常温组和亚低温组。造模后14d通过股静脉注射异硫氰酸荧光素右旋糖酐（FITC-dextran）标记微血管，结合共聚焦显微镜和3DDoctor3．5版软件分析梗死灶周围区微血管的直径、面积及血管分支数目，并采用TTC染色观察脑梗死灶体积的变化。结果脑梗死后14d，梗死侧微血管直径明显小于对侧，但是血管分支数目及面积较对侧增加，且亚低温组梗死侧微血管直径、面积及分支数目明显大于常温组梗死侧；亚低温组梗死体积也明显小于常温组，差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论亚低温治疗能减小脑梗死灶体积并促进脑梗死后血管新生：     

针刺对脑缺血再灌注模型大鼠脑缺血皮质区神经血管单元微血管再生的影响

目的:观察电针对局灶性脑缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion model/reperfusion model,MCAO/R)大鼠脑缺血皮质区VEGF、VEGFR-2、CD34表达水平的影响,探讨针刺调控脑缺血皮质区神经血管单元(neurovascular unit,NVU)微血管再生,促进MCAO/R大鼠神经功能重塑的作用机制。方法:雄性SD大鼠27只随机分为假手术组,模型组,针刺组,每组9只。采用大脑中动脉线栓法制备MCAO/R大鼠。MCAO/R后1d行针刺治疗,取大鼠"百会"穴及"足三里"为针刺穴位,每次刺激时间为20min,每日1次,连续治疗14d。神经功能缺损评分法评价神经功能缺损情况,HE染色观察MCAO/R大鼠脑梗死侧脑组织病理形态变化,免疫组织化学法检测MCAO/R大鼠脑缺血灶周围皮质VEGF、VEGFR-2、CD34的表达。结果:与假手术组比较,造模组造模后出现神经功能缺损,神经功能缺损评分明显增高(P0.05);HE染色见明显脑缺血灶;脑缺血灶周围皮质VEGF、VEGFR-2、CD34表达增高(P0.05)。与模型组比较,针刺组神经功能缺损评分逐渐降低(P0.05);针刺3、7、14d时,针刺组神经缺损评分低于模型组(P0.05);电针14d后,针刺组脑缺血灶周围皮质VEGF、VEGFR-2、CD34的表达明显高于模型组(P0.05)。结论:电针可以改善MCAO/R大鼠神经功能,其作用可能与提高MCAO/R大鼠缺血灶周围皮质VEGF、VEGFR-2、CD34表达水平,促进脑缺血皮质区NVU微血管再生有关。     

低频电刺激改善脑梗死大鼠神经功能障碍的机制研究

目的探讨低频电刺激(LFS)对脑梗死大鼠神经功能和梗死侧脑组织神经干细胞(NSC)增殖、血管再生的影响。方法制作大鼠永久性大脑中动脉梗死模型(MCAO),随机分为假手术组、对照组和实验组,每组又分为7 d 和14 d 两个亚组,每个亚组12 只。术后2 d 开始进行LFS治疗。采用大鼠神经功能缺损评分(NSS)评估大鼠神经功能缺损程度,运用免疫荧光染色检测大鼠梗死侧大脑侧脑室的室管膜下层(SVZ)的5-溴尿嘧啶脱氧核糖核苷酸(BrdU),应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠梗死侧大脑的基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果LFS治疗后14 d,实验组大鼠NSS评分明显低于对照组和假手术组(P<0.01);LFS 治疗后各时间点实验组大鼠梗死侧大脑的SDF-1、BrdU 和VEGF 水平均较对照组有不同程度的上调(P<0.01)。结论LFS 能改善脑梗死大鼠功能障碍,其可能机制是通过激活SDF-1/CXCR4 轴,进而发挥促进NSC增殖和血管再生作用。     

缺血预处理对大鼠局灶性脑梗死的影响

目的：探讨缺血预处理（IP）对局灶性脑梗死预后的影响。方法：SD大鼠38只,随机分为模型组和IP组各19只。模型组建立大鼠局灶性大脑中动脉闭塞（MCAO）再灌注模型;IP组在行MCAO再灌注手术前7d内先行2次15min的IP。2组均于MCAO再灌注术后3h及7d时行Zea longa神经功能评分,然后断头取脑行TTC染色检测梗死体积。结果：MCAO术后3h2组大鼠均有程度不同的神经功能缺失。7d时IP组Zea longa神经功能缺失程度评分明显低于模型组,梗死体积明显小于模型组（均P〈0.01）。结论：IP对大鼠局灶性脑梗死具有保护作用。     

电针对大脑中动脉梗塞大鼠EphrinB2/EphB2信号通路上突触重塑相关因子的影响

目的:观察电针对大脑中动脉梗塞模型(MCAO)大鼠促红细胞生成素产生肝细胞配体-B2(erythropoietin-producing hepatocyte receptor interacting protein-B2,Ephrin B2)/受体-B2(erythropoietin-producing hepatocyte receptor-B2,Eph B2)信号通路上突触重塑相关因子表达的影响,以期揭示针刺治疗脑缺血的可能机制。方法:120只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、穴位组、非穴位组(n=30);各组再分为术后3d,14d及21d三个亚组(n=10)。除假手术组外,其余各组大鼠用Zea-longa线栓法制备MCAO模型;穴位组和非穴组电针治疗,其余两组只绑不针。对大鼠行神经功能评分,采用免疫组化、免疫荧光和蛋白质印迹法行相应指标检测。结果:模型组术后3d梗死灶周Ephrin B2/Eph B2表达明显减少,但随时间呈递增趋势,21d恢复到假手术水平。穴位组较模型组和非穴组增加更明显,术后21d表达高于假手术组(P0.05)。Ras相关的C3肉毒毒素底物1(ras-related C3 botulinum toxin substrate-1,Rac-1)和微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein-2,MAP-2)的表达随时间逐渐递增,且均与神经功能改善相吻合;其中穴位组增加最明显,术后21d超假手术组水平(P0.05)。结论:Ephrin B2/Eph B2信号通路参与了MCAO大鼠突触重塑,电针肝俞、肾俞穴可能通过激活Ephrin B2/Eph B2信号通路,促进MCAO大鼠神经功能的康复。     

运动训练对脑缺血大鼠神经功能及梗死边缘区细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨运动训练对急性脑缺血大鼠神经功能及脑皮质梗死边缘区细胞增殖与凋亡的影响.方法:采用改良Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,将大鼠随机分成运动训练组(n=15)、对照组(n=15)和假手术组(n=9).运动训练组大鼠从术后1d开始每天予以跑笼运动训练;对照组和假手术组大鼠置于普通笼内饲养,不予以任何针对性训练.3组大鼠在造模术后1d、8d和15d分别进行神经功能评分(mMSS),并采用Ki67免疫荧光、TUNEL法分别观察脑皮质梗死边缘区细胞增殖、凋亡,以Western印迹法检测Bcl-2与Bax蛋白表达的情况.结果:在造模术后8d和15d,训练组大鼠的神经功能评分(mNSS)均明显优于对照组,差异有显著性意义(P＜0.05);免疫荧光结果显示,训练组大鼠脑皮质梗死边缘区Ki67阳性细胞增加,且以造模术后8d最明显,与对照组相比,差异有显著性意义(P＜0.05);在造模术后8d和15d,训练组TUNEL阳性细胞数较对照组明显减少,同时,训练组梗死边缘区Bcl-2的表达高于对照组,Bax的表达低于对照组.结论:运动训练能够促进急性脑梗死大鼠神经功能的恢复,其机制可能与促进皮质梗死边缘区细胞增殖、减少细胞凋亡有关.     

运动预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血区脑组织血管新生及HIF-1α和VEGF蛋白表达的影响

目的 观察运动预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧脑组织缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）的影响，探讨运动预处理通过促进血管新生改善缺血再灌注损伤的可能机制。 方法 采用随机数字表法将36只SD雄性大鼠分为假手术组、模型组和运动预处理组，每组12只。3组大鼠给予适应性跑步训练3 d后，运动预处理组给予正式跑步训练，速度15 m/min，每天1次，每次30 min，持续14 d；假手术组与模型组大鼠不给予其它处理。正式跑步训练结束后,模型组和运动预处理组大鼠采用Zea-Longa栓线法加以改良制备大脑中动脉栓塞（MCAO）再灌注大鼠模型，假手术组仅切开颈部皮肤，暴露右侧颈动脉。造模麻醉清醒后，采用Zea-Longa评分进行神经功能缺损评分；造模24 h后，3组大鼠均采用Zea-Longa评分和改良的神经严重程度评分（mNSS）进行神经功能缺损评分，TTC染色法检测脑相对梗死面积，HE染色观察缺血侧大脑皮质组织形态学改变，免疫组化法观察缺血侧大脑皮质CD31、HIF-1α和VEGF的表达情况。 结果 ①造模麻醉清醒后，模型组和运动预处理组大鼠Zea-Longa评分均较假手术组有明显增高（P＜0.01），且模型组与运动预处理组相比，组间差异无统计学意义；②造模24 h后，模型组Zea-Longa评分、mNSS评分、脑相对梗死面积均较假手术组显著增高(P＜0.01）；与模型组相比，运动预处理组Zea-Longa评分(P＜0.05）、mNSS评分(P＜0.01）、脑相对梗死面积(P＜0.05）均明显降低；③HE染色显示，与假手术组相比，模型组大鼠缺血侧大脑皮质出现组织疏松、神经细胞数量减少、胞核溶解、呈空泡状等病理学改变；与模型组相比，运动预处理组大鼠缺血侧大脑皮质病理学改变减轻；④免疫组化显示，与假手术组相比，模型组大鼠缺血侧大脑皮质中CD31（P＜0.05）、HIF-1α（P＜0.01）和VEGF（P＜0.05）显著升高；与模型组相比，运动预处理组CD31（P＜0.01）、HIF-1α（P＜0.01）和VEGF（P＜0.05）进一步升高。 结论 运动预处理可有效促进脑缺血后血管新生，减轻脑缺血再灌注损伤；其作用机制可能与运动预处理激活了HIF-1α或VEGF信号途径有关。     

补阳还五汤对缺血性脑卒中大鼠神经元自噬的保护作用及机制分析

目的探究补阳还五汤中药对大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠再灌注24 h后抗神经元缺血损伤的治疗效果,并分析其改善神经元自噬相关的可能作用机制。方法采用MCAO法对成年雄性SD大鼠进行大脑中动脉闭塞处理2 h,再灌注24 h后成模,分为假手术组、模型组和治疗组。模型组和治疗组大鼠在MCAO造模手术后进行24 h再灌注,治疗组腹腔注射补阳还五汤方剂,模型组和假手术组大鼠均腹腔注射接受等体积的生理盐水,共计14 d。再灌注损伤后1 d、7 d、14 d进行神经系统损伤严重程度(NSS)评分;第14天进行平衡木行走试验;采用苏木精-伊红染色法测定大脑梗死体积;采用免疫组化分析皮质缺血区存活神经元密度;采用免疫印迹法对自噬相关蛋白表达水平(Beclin1,LC3)和线粒体动力学蛋白水平(Parkin,DRP1,OPA1)。结果与假手术组比较,模型组在MACO术后1 d、7 d、14 d NSS评分显著升高;第7天模型组和治疗组间NSS评分无显著差异(P> 0. 05),第14天时治疗组大鼠NSS评分显著低于同时间点的模型组大鼠评分(P <0. 01)。与假手术组相比,模型组大鼠通过平衡木的时间均显著延长(P <0. 01);而与模型组相比,治疗组大鼠通过平衡木的时间显著缩短(P <0. 01)。第14天后,与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死面积百分比显著升高,缺血皮质缺血区神经元密度显著下降(P <0. 01);与模型组比较,治疗组大鼠脑梗死面积百分比显著降低,皮质区神经元丢失程度显著缓解(P <0. 01)。与假手术组相比,模型组大鼠皮质区Beclin1、LC3-II、Parkin、DRP1和OPA1水平显著均下降(P <0. 001),而与模型组相比,治疗组皮质区Beclin1、LC3-II、Parkin、DRP1和OPA1蛋白表达下降程度显著缓解(P <0. 01)。结论补阳还五汤通过调节大鼠脑卒中后皮质缺血区域自噬,稳定线粒体功能,发挥神经保护作用。     

神经元谷氨酸转运体反义寡核苷酸对急性脑缺血损伤大鼠的神经保护作用

目的:测定神经元谷氨酸转运体(excitaforyaminoacidcarrierl,EAAC1)反义寡核苷酸对急性脑缺血损伤大鼠的神经功能缺损评分、梗死体积和海马数密度值的影响,探讨脑缺血神经保护新方法。方法:将大鼠分为假手术组、模型组、反义寡核苷酸组(简称反义组)和正义寡核苷酸组(简称正义组),用插线法建立大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO)。运用Westernblot法、神经功能缺损评分、TTC染色、尼氏染色观察缺血区EAAC1表达和EAAC1反义寡核苷酸对缺血大鼠神经功能缺损评分、梗死体积和海马数密度值的影响。结果:模型组缺血区EAAC1表达(0.61±0.03)明显高于假手术组(0.20±0.01),差异有显著性意义(F=49.49,P<0.01),而反义组表达(0.31±0.01)低于模型组,差异有显著性意义(F=49.33,P<0.05)。反义组大鼠梗死体积(101.33±15.08)mm3显著小于模型组(140.5±20.27)mm3,差异有显著性意义(F=6.66,P<0.01),反义组大鼠神经功能缺损评分(3.33±0.41)分,显著高于模型组(1.42±0.34)分,差异有显著性意义(F=48.51,P<0.01),海马各区数密度值均高于模型组(P<0.01和P<0.05)。结论:EAAC1反义寡核苷酸对急性脑缺血损伤有神经保护作用。     

针刺百会、四神聪对MCAO模型大鼠缺血半暗带脑组织中IL-1、IL-6、TNF-α的影响

目的:通过观察针刺百会、四神聪干预MCAO模型大鼠脑组织的病理及脑缺血半暗带组织中IL-1、IL-6、TNF-α表达水平的检测,探讨针刺百会、四神聪穴对MCAO模型大鼠的抗炎作用。方法:SPF级SD大鼠60只,采用分层随机法分为假手术组(15只)、造模组(45只)。模型复制成功后,将造模组大鼠随机分为非穴区对照组和针刺组。针刺组给予百会、四神聪穴针刺干预;非穴区对照组于穴区周边5mm处进行针刺皮肤干预。末次针刺后1h,评定神经功能缺损评分;处死大鼠,取脑组织,显微镜下观察其病理改变,并检测缺血半暗带脑组织IL-1、IL-6、TNF-α含量检测。结果:干预后,3组神经功能缺损评分比较,非穴区对照组高于针刺组(P0.01),针刺组高于假手术组(P0.01)。假手术组脑组织病理切片未见异常,针刺组梗死灶局限,梗死灶周围炎性细胞数量较非穴区对照组明显减少。缺血半暗带组织中IL-1、IL-6、TNF-α含量:与假手术组比较,非穴区对照组和针刺组显著升高(P0.01),与非穴区对照组比较,针刺组显著降低(P0.01)。结论:针刺百会、四神聪穴可明显降低MCAO模型大鼠神经功能缺损评分,减小梗死百分比,减轻炎症浸润程度,降低半暗带脑组织中细胞因子含量,具有一定的抗炎作用。