猪卵母细胞在不同培养液中成熟后的发育潜力

目的 优化猪胚胎体外生产培养系统。方法 将猪卵母细胞在不同培养认中行体外成熟、体外受精，比较成熟率和卵裂率。结果 促性腺激素明显提高猪卵母细胞成熟率，其中以15IU／ml FSH 30IU/ml LH成熟率、卵裂率最高，分别为62％和15％。M199和NCSU－23基础培养液中的成熟率相近，但二者的卵裂率差异显著（15.7% vs 36%)；两种基础培养液中添加150μmol/L半胱氨酸后，仅M199培养液中出现促卵裂效应（P＜0.05)；添加1mmol/L dbcAMP后，卵母细胞的GVBD被阻止，去除dbcAMP后继续培养22h，实验组的成熟率和卵裂率分别为76.1%-83.3%和43.9%-52.9%率，显著高于基础液组和半胱氨酸单独添加组。结论 促性腺激素是猪卵细胞体外成熟的重要调节因子；dbcAMP通过调节卵体外成熟动力学，促卵母细胞分裂同步化，提高成熟和发育能力。     

昆明小鼠成熟卵母细胞体外受精及受精卵体外培养的研究

目的通过比较获能受精液成分及成熟卵母细胞的处理方法，观察对昆明小鼠体外受精(IVF)效果的影响和用于早期胚胎培养的三种发育培养液培养效果，探讨并建立起适合于昆明小鼠卵子体外受精与受精卵体外发育的实验体系。方法用T6或FM两种获能受精液对采自昆明雄鼠附睾尾的精子与成熟卵母细胞进行体外受精(IVF)，受精前对成熟卵母细胞选用透明质酸酶去除卵丘细胞和不去卵丘细胞(对照组)两种方法进行处理，受精卵分别用M16、改良的CZB液(mCZB)和改良的M16液(mM16)三种发育培养液对体外受精胚进行培养。结果选用FM获能受精液的受精率极显著高于T6液(92．3％对64．7％)，且体外受精前先用透明质酸酶处理的成熟卵母细胞比对照组成熟卵母细胞受精率要低(59．2％对64．7％)，但差异不显著；用mM16培养液进行培养时桑胚率及囊胚率(55．3％和35．6％)显著高于mCZB(13．3％和8．1％)和M16培养液(17．3％和14．7％)，后两者差异不显著。结论昆明小鼠卵子体外受精时宜选用FM受精获能液，不宜用透明质酸酶去除卵丘细胞，且宜选用mM16培养液对昆明小鼠体外受精卵进行早期培养，其中的亚硫磺酸钠可有效的克服2-细胞胚后的体外发育阻滞现象。     

表皮生长因子对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠卵母细胞体外成熟及受精的作用.方法 在体外成熟液中分别添加0、0.1、1、5、10ng/Mlegf,12h后检查成熟率,并观察EGF对体外受精的影响.结果 添加5ng/Ml和10ng/Mlegf组卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),并且5ng/Ml组的效果显著高于其他各组(P<0.05);比较培养液中添加以上浓度EGF对体外受精胚发育的影响,结果发现添加5ng/Ml EGF虽不能显著提高囊胚发育率(P>0.05),但可显著提高其通过二细胞阻滞率和囊胚孵化率(P<0.01).结论 EGF对小鼠卵母细胞体外成熟及受精有促进作用,可提高体外成熟率及囊胚孵化率,还可促进受精卵通过二细胞阻滞.     

两种未成熟卵母细胞体外成熟培养液的运用效果比较

目的:通过比较自行研配的培养液与商品化培养液在卵母细胞体外成熟中的运用效果,为进一步优化体外成熟培养体系提供依据?方法:分别选择使用自行配制培养液的(IVM-A组)110个周期和使用商品化(IVM-B组)培养液的99个周期,并以同期行ICSI的治疗周期为对照(ICSI-C1和ICSI-C2),比较两组在体外成熟?胚胎发育?胚胎种植?临床妊娠及结局等方面的差异?结果:在两对照ICSI-C1和ICSI-C2各项指标无差异的情况下,IVM-A组体外成熟和胚胎发育等方面均高于IVM-B组,且可移植胚胎率?优质胚胎率明显提高(P < 0.05或P < 0.01),可移植胚胎率已达到ICSI组水平?虽然表面上IVM-A组在胚胎种植率?妊娠率(临床妊娠率)?活产率等指标低于IVM-B组,但不同阶段的对照组其指标明显改变,ICSI-C2(2006年以后)明显好于ICSI-C1?这种差异可能与近年来的临床治疗方案的改善及宫腔镜的使用有关?值得注意的是,IVM-A的流产率只有10.53%,显著低于其他3组,而同期的对照(ICSI-C1)却明显高于ICSI-C2,提示使用自行配制培养液培养的胚胎可显著降低流产的发生?但由于样本量还不够大,结果尚待进一步验证?结论:自行配制的培养液具有较好的运用效果,可能与其中额外添加的mHFF及E2等有关?但系统尚需进一步优化,以保证其高效?安全?价廉?     

卵母细胞成熟调控及体外成熟影响因素的研究

自 1993年以来 ,有关未成熟卵母细胞体外成熟培养的研究成为生殖医学领域的又一热点。女性不孕症的主要病因之一是由患顽固性多囊卵巢综合症等因素造成的卵子成熟障碍 ,这种病因即使采用体外授精技术也无法受孕 ;在进行体外授精 胚胎移植(IVF ET)治疗时 ,药物超促排卵可使妇女在同一周期产生多个卵子 ,有成熟和未成熟的 ,其卵子的成熟度直接关系到卵子的受精效率、卵裂效率和妊娠效率。所谓理论指导实践 ,因此深入研究卵子发生发育的机理 ,了解卵母细胞成熟的调控及影响因素至关重要。1　卵母细胞成熟的机制目前 ,人们对哺乳动物卵母细胞…     

卵母细胞体外成熟评价标准的改良研究

目的探讨改良式人未成熟卵母细胞评分标准的可行性和颗粒细胞指标的合理性及其对卵子发育潜能的影响。方法体外培养卵丘-卵母细胞复合体,按改良式人未成熟卵母细胞评分标准,将未成熟卵母细胞分为优质卵和非优质卵,对成熟卵母细胞进行受精,并对胚胎进行评价;用琼脂糖凝胶电泳检测两类卵的颗粒细胞凋亡。结果优质卵的成熟率、卵裂率和优质胚胎率都优于非优质卵,优质卵成熟数和优质胚胎数与非优质卵比较差异有统计学意义（P<0.01）;非优质卵其卵丘细胞DNA凝胶电泳后形成明显DNA 梯带,凋亡程度高于优质卵的卵丘细胞。 结论改良式人未成熟卵母细胞评分标准在临床上具有可行性。     

氯化锌对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的探讨氧化锌对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法采用细胞体外培养的方法,观察卵母细胞在分别含有低、中、高浓度(0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)氯化锌的M199培养液中体外成熟率和减数分裂的变化情况。结果1μg/mlZnCl2组GVBD发生率在4、8h明显高于对照组(P<0.01),16、24h高于对照组(P<0.05);而10μg/mlZnCl2组GVBD发生率在各时间点均明显低于对照组(P<0.01)。8h后,1μg/mlZnCl2组PB1排出率明显高于对照组(P<0.05),而10μg/mlZnCl2组PB1排出率明显低于对照组(P<0.05)。结论锌对体外小鼠卵母细胞成熟和减数分裂有重要的影响。     

排卵前成熟卵泡液对卵母细胞体外成熟的影响

目的 :探讨成熟卵泡液、促性腺激素对人类生殖泡期 (germinalvesicle,GV)不成熟卵母细胞体外成熟 (invitromaturation ,IVM)的影响。方法 :在基本培养液中加入 5 0 %成熟卵泡液 (folliclefluids ,FF) (Ⅰ组 )、或促性腺激素 (gonadotrophin ,Gn) (Ⅱ组 )或单用基本培养液即对照组 (Ⅲ组 )用于GV期卵母细胞的体外培养 ,观察成熟率及进一步发育能力。结果 :三组之间GVBD(生殖泡期破裂 )率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,MⅡ期率和受精率 ,Ⅰ、Ⅱ组明显高于Ⅲ组 (P <0 .0 1)、Ⅰ组与Ⅱ组之间无差异 (P >0 .0 5 ) ;Ⅰ组卵裂至 8细胞的比例为 6 2 .5 % ,明显高于Ⅱ组的33.3% (P <0 .0 1)。结论 :GV期卵母细胞尽管在基本培养液中可完成核成熟 ,但胞质不成熟 ,加入 5 0 %FF或Gn均能促卵母细胞的成熟 ,两者相比 5 0 %FF效果更好。     

雌二醇和孕酮对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的 研究雌二醇(E2)、孕酮(R4)对昆明小鼠卵母细胞体外成熟的影响.方法 小鼠经注射孕马血清促性腺激素(PMSG)后48 h,摘取卵巢获得未成熟卵母细胞,分别在单独含不同浓度的E2或R4的成熟液中,或在同时含有不同浓度E2和P4的成熟液中,进行体外成熟,并对经过E2和P4处理成熟的卵母细胞进行体外受精.结果 经15～16 h的成熟培养,各E2处理组的卵母细胞第一极体排出率虽然均略高于对照组,但它们之间无显著差异;各组卵母细胞体外受精48 h后,1000 ng/mL E2处理组的卵裂率显著低于其他各处理组和对照组,但各组的囊胚率之间无显著差异.各P4处理组的极体率和卵裂率,与对照组相比无显著差异,但是各处理组的囊胚率均极显著低于与对照组;两种激素协同处理组中[1000 ng/mL E2 1000 ng/mL P4]组的极体率显著高于其他各处理组;而与对照组的极体率差异不显著.结论 P4对小鼠卵母细胞的后期发育能力有一定的抑制作用,而E2却对小鼠卵母细胞的成熟及其发育潜力无明显作用.     

改良卵黄培养基培养空肠弯曲菌的生物学性状初步研究

目的探索改良弯曲菌卵黄培养基对空肠弯曲菌生长以及生物学性状的影响.方法采用改良布氏无血琼脂培养基以及改良弯曲菌蛋黄培养基在相同条件下培养空肠弯曲菌,观察其生长状况及生物学性状.结果改良弯曲菌卵黄培养基培养的空肠弯曲菌生长良好,性状典型.结论改良弯曲菌卵黄培养基可用于空肠弯曲菌的大量繁殖,可供疫苗生产候选.     

雷公藤甲素微透析体外回收率的研究

目的测定雷公藤甲素微透析体外回收率及其影响因素。方法建立微透析样品中雷公藤甲素高效液相色谱法（HPLC）分析方法。利用增量法、减量法对比雷公藤甲素体外回收率,并考察流速、浓度对体外回收率的影响。结果所建立的高效液相色谱法,方法灵敏可靠,在所需浓度范围内线性良好;在同一浓度下,体外回收率随着流速的增大而减小;在同一流速下,浓度的改变对体外回收率的影响不大。结论本研究确定了影响微透析体外回收率因素,反透析法可作为微透析研究雷公藤甲素体外回收率的测定方法。     

两种不同的上游法处理精液对常规体外受精结果的影响

目的：探讨使用两种不同的上游法分离的精子对常规体外受精（in-vitro fertilization,IVF）结果的影响。方法：本研究共287个周期,将患者夫妇,女方卵子分为约等的两份,男方精液分为等量的两份,并分别使用两种上游法优选精子,并将分离的精子与相应卵子行常规体外受精操作。观察两组受精卵的受精情况,并将受精卵的受精率、卵裂率、优质胚胎率作分析比较。结果：先离心组完全受精失败14个周期,受精率为72.4%,卵裂率为91.2%,优质胚胎率为52.5%;先上游组完全受精失败12个周期,受精率为75.1%,卵裂率为93.2%,优质胚胎率为53.9%,各对照指标未发现差异有统计学意义（P〉0.05）。结论：此两种上游方法对于受精结果的影响虽无统计学意义,但结合相关文献报道,先上游法应优于先离心法。     

体外授精胚胎移植在不孕症治疗中的应用

目的 评价体外授精-胚胎移植（IVF-ET）治疗不孕症的价值。方法 分析在本中心行IVF-ET治疗60例不孕症患者的临床资料。结果 60例不孕症患者进行61个IVF周期治疗,其中10个周期因卵巢反应不良而取消。周期获卵率10.34个,卵子授精率72.5%,卵裂率67%,周期胚胎移植数4.9个。其中14例妊娠,占27.45%。自然流产5例,占35.7%。重度OHSS发生率7.8%。结论 IVF-ET是治疗输卵管因素、子宫内膜异位症、不明原因等不孕症的重要手段,可解除部分不孕症患者终身不孕的痛苦。     

体外受精/卵胞浆内单精子注射中鲜胚移植妊娠结局的影响因素分析

目的:综合分析体外受精/卵胞浆内单精子注射(IVF/ICSI)中鲜胚移植妊娠结局的相关影响因素,为临床个体化移植策略的制定和优化提供参考.方法:回顾性分析在本中心进行IVF/ICSI的635个鲜胚移植周期的临床数据资料,根据妊娠结局分为临床妊娠组(n=354)和未妊娠组(n=281),收集2组患者的一般资料、促排情况和...     

PCR技术在鼠肺支原体检测中应用的初步研究

目的　研究不同培养条件对小鼠卵母细胞体外成熟及体外受精率的影响。方法　小鼠卵母细胞分别在含有FSH、BSA和胰岛素的培养液中体外成熟,在Whitten 氏液中体外受精,比较体外成熟率、体外受精率。结果　1- 裸卵(DO) 的体外成熟率、体外受精率(81-4% ,31-0 % ) 均高于卵丘卵母细胞复合体(COC)(48-6 % ,27-1% ) 。2- 在培养液中添加FSH、胰岛素和BSA,卵母细胞的体外成熟率为77-9 % ,82-3% 、60-7% ;体外受精率为77-2 % 、72-6 % 、26-7% ;2 - 细胞率为49-2 % 、34-2 % 、10-0% 。胰岛素组的卵母细胞IVM 率最高,但IVF率、2 - 细胞率低于FSH 组。3- 添加BSA的两组的体外受精率只有26-7 % 、25-8 % ,显著低于其他组,其体外成熟率也较添加FSH 和胰岛素的组成。4- 排出第一极体(PbI) 的卵母细胞的体外受精率和2 - 细胞率(85-9 % ,22-4% ) 均高于GV期卵母细胞(71-1 % ,12-9 % ) 。结论　1- 卵丘卵母细胞(COC) 较裸卵(DO) 的体外成熟率、体外受精率都低,差异显著(P成熟< 0-01;P受精< 0-05) 。2-FSH 和胰岛素均能提高小鼠卵母细胞的体外成熟率、体外受精率。3-BSA可以降低小鼠卵母细胞体外受精率,差异极显著。4-GV 期卵母细胞的体外受精率显著低于体外培养的排出第一极体的卵母细胞(P2 - cell < 0-05,P受精<0-05)     

未成熟卵母细胞体外培养治疗不孕症的临床研究

目的:评价未成熟卵母细胞体外培养成熟(IVM)治疗不孕症的临床价值.方法:40例不孕患者接受54个IVM周期治疗,包括26例难治性多囊卵巢综合征(PCOS)和14例月经周期正常但经其他辅助生育技术失败的患者.测定卵泡早期的性激素、抑制素-A(INH-A)、抑制素-B(INH-B).未经任何药物刺激,于月经周期的9～12 d在超声引导下经阴道对两侧卵巢内的小卵泡进行穿刺获卵.体外培养24～48 h,进行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI),18 h后观察受精情况,继续培养24～48 h,直至胚胎移植,移植前行激光辅助孵化.结果:7个周期取消,取消率为13%(7/54).1例生化妊娠,19例临床妊娠,每取卵周期的临床妊娠率为35.2%(19/54),每移植周期的临床妊娠率为40.4%(19/47).47个移植周期共获得未成熟卵母细胞857个,平均每周期18.2个,体外培养48 h后总成熟率为73.7%(632/857),正常受精率为75.3%(476/632),卵裂率为91.2%.妊娠组的获卵数显著多于非妊娠组[(22.4±16.2)个vs(15.2±7.1)个,P＜0.05],取卵日和胚胎移植日的子宫内膜厚度显著大于非妊娠组[(8.0±1.5)cm vs(6.8±0.9)cm;(9.5±1.6)cm vs(8.3±1.3)cm,P＜0.05],但两组患者的年龄、不孕年限、体重指数、基础性激素、INH-A、INH-B各参数相比均无显著性差异.结论:未经药物刺激的IVM技术是治疗不孕症的一种有效方法,获卵数和子宫内膜厚度与成功率有关.     

小鼠生殖泡期卵母细胞体外培养成熟、受精和胚胎发育的研究

为研究性成熟小鼠生殖泡期(GV)卵母细胞的体外成熟,同时比较体外成熟(IVM)和体内成熟组卵子的受精、胚胎发育情况,机械法分离性成熟小鼠卵巢中的GV期卵母细胞及刺激后的成熟卵母细胞,直接培养于[α-MEM+1 mg/ml Fetuin+10％FCS+1.5 IU/ml rHCG±5 ng/mlrEGF]中,16 h后移入f-HTF+10％FCS体外受精4 h,再在M16+10％FCS中培养72 h。记录其成熟、受精和胚胎发育情况,并与体内成熟的卵子比较。结果:GV期卵母细胞在含HCG培养液中成熟率为89.68％,培养液中添加EGF后,卵子成熟率无显著上升,但受精率、卵裂率均有显著提高(P<0.05)。体内成熟卵子的受精率可达62.83％,卵裂率60.18％;IVM组受精率仅48.92％,卵裂率36.69％,明显低于前者(P<0.01)。结论:小鼠GV期卵母细胞可体外培养成熟、受精和胚胎发育。培养液中添加促性腺激素和EGF都促进卵母细胞体外成熟、受精和胚胎发育能力。但IVM组卵母细胞的受精率、卵裂率低于体内成熟组,培养系统仍需改进。     

液体-固体联合培养法检测泌尿生殖道支原体的临床研究

目的 通过对比液体培养法、固体培养法、液体-固体联合培养法的支原体检测结果,探讨支原体检测的优化方法。 方法 收集2016年10月至2017年8月宫颈分泌物标本1 642份,采用液体培养法、固体培养法和液体-固体联合培养法平行检测支原体,于24、48 h分别判读解脲支原体(Uu)和人型支原体(Mh)液体培养结果,48 h判读固体培养结果,根据检测结果计算阳性率和假阳性率,用χ²检验分析数据。 结果 液体培养法总阳性率为40.38%,其中Uu、Mh及混合感染阳性率分别为 30.09%、5.42%、4.87%,假阳性率为5.67%;固体培养法总阳性率为39.46%,其中Uu、Mh及混合感染阳性率分别为32.22%、2.80%、4.44%,假阳性率为0.37%;液体-固体联合培养法的阳性率为32.70%,其中Uu、Mh及混合感染阳性率分别为25.70%、2.74%、4.26%,假阳性率为0.12%。液体-固体联合培养法与固体培养法/液体培养法在支原体阳性率上差异有统计学意义(P<0.05),液体培养法与固体培养法/液体-固体联合培养法在假阳性率上差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 液体-固体联合培养法能够准确培养鉴定Uu和Mh,既能排除女性生殖道支原体的正常定植,同时又能够显著降低由于细菌或真菌污染所导致液体培养法产生假阳性结果的情况。