片仔癀通过PI3K/Akt信号通路诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡

目的探讨片仔癀诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）途径的关系。方法采用不同浓度片仔癀（0.4，0.8，1.2mg/mL）作用U2OS细胞，采用MTT法检测片仔癀对U2OS细胞增殖的影响；Hoechst 333258染色观察细胞凋亡情况；Western blot检测PI3K调节亚基p85α（PI3K p85α）、磷酸化PI3K调节亚基p85α（p-PI3K p85α）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核多聚（ADP-核酶）聚合酶（PARP）、裂解PARP（Cleaved PARP）等PI3K/Akt途径相关蛋白的表达。结果片仔癀可明显抑制U2OS细胞的增殖，呈时间和浓度依赖性，诱导U2OS细胞凋亡；Western blot显示p-PI3K p85α、p-Akt蛋白表达明显下调，Cleaved PARP表达量增加，与空白对照组相比有明显差异（P<0.05）。结论片仔癀可通过抑制PI3K/Akt信号途径PI3K p85α、Akt磷酸化，促进PARP裂解，诱导骨肉瘤U2OS凋亡。     

片仔癀对人骨肉瘤MG63细胞相关凋亡蛋白表达的影响

目的观察不同浓度片仔癀对人骨肉瘤MG63细胞相关凋亡蛋白表达的影响。方法不同浓度片仔癀溶液干预人骨肉瘤MG63细胞24h后,采用Westernblot法检测各组骨肉瘤MG63细胞凋亡标志蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax的表达。结果片仔癀通过内源性的线粒体途径,促进人骨肉瘤MG63细胞Caspase-3、Caspase-9的激活,诱导骨肉瘤细胞的凋亡,同时可以调节Bcl-2、Bax的表达,有剂量依赖性。结论片仔癀促进骨肉瘤MG63细胞凋亡可能通过调节相关凋亡蛋白表达而实现。     

浅蓝菌素在诱导骨肉瘤细胞株U2-OS凋亡过程中对Bcl-2和Bax的影响

目的研究凋亡蛋白Bcl-2、Bax是否参与浅蓝菌素（Cerulenin）诱发骨肉瘤细胞株U2-OS凋亡信号传导。方法采用Western—blotting检测Cerulenin作用前、后骨肉瘤细胞株U2—OS中凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达变化情况,了解不同的Cerulenin剂量和作用时间骨肉瘤细胞株U2-OS中凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达变化情况。结果骨肉瘤细胞株U2-OS中Bcl-2和Bax呈阳性表达,Cerulenin作用细胞株后Bcl-2表达量随着浓度增加和作用时间延长而递减,Bax表达量随着浓度增加和作用时间延长而递增。结论Cerulenin可能通过下调Bcl-2的表达和上调Bax的表达而诱导骨肉瘤细胞凋亡。     

植酸对人胶质瘤细胞U118MG增殖和凋亡的影响

目的研究植酸（IP6）对人胶质母细胞U118MG生长及增殖的影响并探讨其作用机制。方法体外培养U118MG细胞,使用MTT实验法检测植酸对U118MG细胞的增殖抑制影响;Western blot检测Bcl-2、Caspase-3、p53的蛋白水平。结果 MTT实验表明植酸具有抑制U118MG细胞生长的作用（P〈0.05）,并与剂量、时间呈正关系;植酸可抑制Bcl-2蛋白表达,且诱导Caspase-3、p53的活化,具有统计学差异（P〈0.05）。结论植酸具有抑制U118MG细胞增殖、诱导凋亡的作用,Bcl-2、Caspase-3、p53可能参与植酸对人胶质母细胞U118MG的诱导凋亡机制。     

p53抑制剂PFT-α对热化疗所致肠上皮细胞损伤的保护效应

目的探讨p53抑制剂PFT-α(p-fiftythreeinhibitor,PFT-α)对热化疗诱导原代培养肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IECs)凋亡及p53靶基因Bax和MDM2表达的影响.方法原代培养IECs分为正常对照组、热化疗组和PFF-α加热化疗组,运用顺铂联合温热(43℃)处理IECs 30 min,对比加入不同浓度的PFT-α后,Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡.MTT法分析PFT-α对热化疗杀伤DLD1的影响.Western blot检测IECs的p53、Bax和MDM2蛋白表达.结果热化疗导致IECs发生凋亡,Bax和MDM2蛋白表达明显高于对照组.10、20、30、40μmol/L PFT-α作用于顺铂联合温热处理IECs后,细胞凋亡率下降且呈剂量依赖性,p53在IECs胞核/胞浆表达比例下降,Bax和MDM2的表达随PFT-α的剂量升高而逐渐下降.热化疗杀伤肿瘤细胞的效应并未受到低剂量PFT-α影响.结论 PFF-α对热化疗损伤肠上皮细胞具有保护作用,其机制可能与改变p53核转位和抑制促凋亡基因Bax和MDM2的表达相关,抑制p53可作为克服热化疗抗肿瘤治疗副效应的新策略.     

异黄酮改构化合物F11对人乳腺癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究异黄酮改构化合物F11对人乳腺癌细胞凋亡的影响及其机制.方法 采用DNA Ladder、DAPI细胞核染色检测F11对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP、p53的表达.结果 异黄酮改构化合物F11可诱导人乳腺癌细胞发生凋亡,增加Caspase-3和PARP蛋白的表达(P<0.01),抑制p53蛋白的表达(P<0.05,P<0.01).结论 异黄酮改构化合物F11诱导MCF-7发生凋亡,可能是通过诱导Caspase-3和PARP蛋白表达的增加,抑制p53蛋白的表达实现的.     

蝙蝠葛碱对恶性胶质瘤U87细胞的抑制及分子机制研究

目的 探讨蝙蝠葛碱对恶性胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 以人恶性胶质瘤细胞株U87为研究对象,采用MTT法检测不同浓度蝙蝠葛碱在48h内对U87细胞增殖的作用;平板克隆形成实验检测蝙蝠葛碱对U87细胞克隆形成能力的影响;Hoechst染色法检测不同浓度蝙蝠葛碱对U87细胞凋亡的作用;Western blot检测蝙蝠葛碱对凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl-2、Caspase-3和PARP表达的影响。结果 与对照组相比,蝙蝠葛碱可以浓度依赖性地抑制U87细胞增殖,促进细胞凋亡;增加p53、Bax、Caspase-3和PARP蛋白并下调Bcl-2蛋白表达。结论 蝙蝠葛碱对神经胶质瘤的增殖抑制作用可能是通过调控凋亡相关蛋白实现。     

隐丹参酮对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制

目的探讨隐丹参酮(CPT)对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的活力;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;Real Time RT-PCR法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21 mRNA表达的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21表达的变化。结果 CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901 24 h后,可明显抑制细胞生长,诱导细胞发生凋亡;在转录水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53 mRNA的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达;在翻译水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 CPT对人胃癌细胞SGC-7901具有诱导凋亡的作用,其机制可能与线粒体途径相关。     

抑癌基因IDH1在骨肉瘤中的表达

目的:探讨IDH1和P53基因在入骨肉瘤MG63、U2OS细胞株及病理组织标本中的表达及其与骨肉瘤组织临床病理学特征之间的关系.方法:培养入骨肉瘤细胞MG63、U2OS,以Western Blot法检测MG63、U2OS细胞中IDH1、P53蛋白的表达情况;以免疫组织化学染色法检测44例骨肉瘤临床病理标本中IDH1、P...     

干扰素α对人骨肉瘤U2OS细胞化疗敏感性的影响

目的 了解干扰素α(IFN-α)对骨肉瘤U2OS细胞化疗敏感性的影响.方法 细胞分为对照组、IFN-α组、顺铂组和IFN-α+顺铂组,处理72 h,应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,通过Hochest 33258荧光染色和DNA梯形条带检测凋亡,Caspase-3、8、9的表达由Western blot检测,细胞经Z...     

IFN-α调控miR-214-5p/MFGE8通路对人脑血管外膜成纤维细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨干扰素α(IFN-α)调控miR-214-5p/乳脂肪球表皮生长因子8(MFGE8)通路对人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAFs)增殖、凋亡的影响。方法 将HBVAFs细胞分为NC组、IFN-α组、IFN-α+ anti-miR-con组、IFN-α+ anti-miR-214-5p组、IFN-α+ pcDNA组、IFN-α+ pcDNA-MFGE8组、IFN-α+ anti-miR-214-5p+ si-con组和IFN-α+ anti-miR-214-5p+ si-MFGE8组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-214-5p和MFGE8 mRNA的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印记(Western blot)法检测MFGE8、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blot法验证miR-214-5p和MFGE8的靶向调控关系。结果 与NC组比较,IFN-α组HBVAFs细胞miR-214-5p的表达显著升高,MFGE8和Bcl-2的表达显著降低,Cleaved caspase-3和Bax的表达显著升高,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P <0.05)。与IFN-α+anti-miR-con组比较,IFN-α+anti-miR-214-5p组HBVAFs细胞miR-214-5p、Cleaved caspase-3和Bax的表达显著降低,Bcl-2表达显著升高,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。miR-214-5p靶向负性调控MFGE8表达。与IFN-α+pcDNA组比较,IFN-α+pcDNA-MFGE8组HBVAFs细胞Cleaved caspase-3和Bax的表达显著降低,MFGE8和Bcl-2表达显著升高,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与IFN-α+anti-miR-214-5p+si-con组比较,IFN-α+anti-miR-214-5p+si-MFGE8组HBVAFs细胞Cleaved caspase-3和Bax的表达显著升高,MFGE8和Bcl-2表达显著降低,细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论IFN-α通过调控miR-214-5p/MFGE8通路抑制人脑血管外膜成纤维细胞增殖并促进细胞凋亡。     

NADH抗紫外线诱导的肝细胞株L02凋亡

目的研究还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)抗紫外线照射所致的细胞损伤的分子机制。方法采用UVB紫外线照射正常肝细胞株L02(照射剂量为200J/m2),实验组加/对照组不加NADH(400μg/ml)培养24h。AnnexinV/PI法检测细胞凋亡率,DNA凝胶电泳观察DNA断裂片断,流式细胞仪检测p53、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果NADH可明显抑制紫外线诱导的肝细胞凋亡,并且能够上调Bcl-2蛋白表达,下调p53、Bax蛋白表达。经紫外线照射后的肝细胞存在自身修复。结论NADH能够抗紫外线诱导的细胞凋亡,其机制可能与上调Bcl-2,下调p53、Bax表达有关。     

槲皮素诱导耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U2-OS/MTX300凋亡

 【目的】 研究槲皮素对耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞株U2-OS/MTX300的增殖抑制和诱导凋亡作用及相关机制。【方法】 以不同浓度槲皮素及甲氨蝶呤处理U2-OS及U2-OS/MTX300。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及平板克隆检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Hochest 33258 染色及流式细胞仪检测凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved-PARP,Bax,Bak,Bcl-2及Bcl-XL表达。【结果】 槲皮素可明显抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞U2-OS/MTX300的增殖,72 h IC50值为(22 ± 4)μmol/L、10、25、50μmol/L可显著抑制U2-OS/MTX300克隆形成数量,且随剂量增加抑制作用明显增强。槲皮素与甲氨蝶呤之间不存在交叉耐药性。槲皮素能诱导U2-OS/MTX300细胞S期阻滞,并可诱导胞内产生典型凋亡小体,流式细胞仪可检测到明显凋亡。其作用机制是通过上调Bax,Bak及下调Bcl-2表达,促进cytochrome C释放及诱发PARP等重要胞内蛋白断裂来实现。【结论】 槲皮素可显著抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U2-OS/MTX300细胞增殖并诱导其凋亡,线粒体途径可能是其诱导凋亡的重要机制。     

山楂酸抑制食管鳞癌细胞增殖、迁移与诱导凋亡的作用研究

目的 探讨山楂酸对食管鳞癌细胞增殖、迁移与诱导凋亡的影响及可能机制。方法 分别以不同浓度的山楂酸处理ECA-109细胞,MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Annexin V-FITC/PI双染凋亡法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2和p53蛋白的表达。结果 山楂酸剂量依赖性抑制ECA-109细胞的增殖和迁移,Annexin V-FITC/PI双染检测到细胞经给药后发生凋亡,且细胞中Bax、p53蛋白表达上升,Bcl-2蛋白表达下降。结论 山楂酸对食管鳞癌细胞的增殖和迁移有抑制作用,且通过上调Bax、p53和下调Bcl-2的表达来诱导该细胞凋亡。     

PARP-1抑制剂对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨PARP-1抑制剂3-aminobenzamide（3-AB）对骨肉瘤U2OS细胞增殖及凋亡的影响。方法常规培养骨肉瘤U2OS细胞,采用CCK-8法检测U2OS细胞的增殖和流式细胞术检测细胞凋亡,并用caspase-3活性测定试剂盒检测caspase-3活性和Western-blot技术检测Bcl-2、Bax的表达。结果 3-AB能抑制骨肉瘤细胞的增殖,且与剂量和时间呈相关性,流式细胞术检测结果显示3-AB能促进骨肉瘤细胞的凋亡,且呈时间相关性,3-AB刺激早期caspase-3活性增高,Western-blot显示3-AB刺激后随时间延长Bax的表达量逐渐升高,而Bcl-2的表达量则轻度升高后降低。结论 PARP-1抑制剂3-AB能抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进其凋亡,这为PARP-1作为骨肉瘤治疗的新靶点提供了初步实验依据。     

NADH抗紫外线诱导的肝细胞株L02凋亡

目的 研究还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）抗紫外线照射所致的细胞损伤的分子机制。方法 采用UVB紫外线照射正常肝细胞株L02（照射剂量为200J／m^2），实验组加／对照组不加NADH（400μg/ml）培养24h。AnnexinV/PI法检测细胞凋亡率，DNA凝胶电泳观察DNA断裂片断，流式细胞仪检测p53、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 NADH可明显抑制紫外线诱导的肝细胞凋亡，并且能够上调Bcl-2蛋白表达，下调p53、Bax蛋白表达。经紫外线照射后的肝细胞存在自身修复。结论 NADH能够抗紫外线诱导的细胞凋凋亡，其机制可能与上调Bcl-2，下调p53、Bax表达有关。     

hBMP9在人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS和143B中的内源性表达

目的:研究人骨形态发生蛋白(Human bone morphogenetie protein,hBMP)9在人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS和143B中的内源性表达,为下一步研究hBMP9对骨肉瘤的体内外作用奠定实验基础.方法:利用免疫细胞化学法和Western blot法检测hBMP9在人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS和143B中的内源性表达.结果:在MG63、U2OS和143B中,hBMP9均呈不同程度的阳性表达,并且两种检测方法所得结果一致.结论:hBMP9在人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS和143B中均有内源性表达.     

熊果酸诱导人急性白血病细胞凋亡及其作用机制

目的 探讨熊果酸诱导人急性白血病细胞凋亡的作用机制.方法 将0、5、10、15、20 μmol/L的熊果酸作用于U937细胞6、12 h,观察昔效关系.用20 μmol/L熊果酸作用U937细胞1、3、6、9、12、24 h,观察时效关系.采用AnnexinV/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡.用Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-9及Bcl-2家族基因Mcl-1、Bcl-2、Bcl-xL、Bax、Bad的表达,用β-actin做内参照.20 μmol/L熊果酸作用于不同类型的急性自血病细胞(U937、Jurkat、HE60)12 h,用流式细胞仪检测细胞凋亡,并用Western blot方法 检测Caspase-3、Caspase-9、PARP的表达.结果 熊果酸作用于U937细胞引起细胞发生凋亡,并呈明显的量效和时效关系.Western blot结果表明,熊果酸引起凋亡蛋白酶Caspase-3、Caspase-9的降解/活化增加,促进凋亡作用底物PARP的降解增加.熊果酸还可引起抗凋亡蛋白Mcl-1的表达降低,但对Bcl-2、Bcl-xL、Bax、Bad的表达均无明显影响.结论 熊果酸可诱导多种急性白血病U937、Jurkat、HL60细胞发生凋亡.Mcl-1的下调可能在熊果酸诱导急性白血病细胞凋亡中起着重要的作用,其作用机制可能为熊果酸引起Mcl-1的下调,随后引起凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9的降解/活化及PARP的降解,最终促进细胞凋亡发生.     

三氧化二砷对小鼠B16细胞p53、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨三氧化二砷(As₂O₃))对小鼠B16细胞的生长抑制作用,对p53、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响,为临床治疗恶性黑素瘤提供理论和实验依据。方法 将不同剂量的As₂O₃作用于小鼠B16细胞后,吉姆萨染色和荧光染色观察B16细胞的凋亡变化;Western blot检测p53、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 染色后镜下可见As₂O₃可致B16细胞出现凋亡现象; As₂O₃能诱导p53、Bax蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达(P＜0.01)。结论 As₂O₃能诱导B16细胞凋亡,这一现象可能是通过诱导B16细胞的p53、Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降来实现。     

IRAK-4基因沉默对人成骨样细胞凋亡的影响

【目的】研究siRNA沉默白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)基因对人成骨样细胞株MG63凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。【方法】 以Lipofectamine 2000为载体将IRAK-4-siRNA转染入MG63细胞(CON组:不加入任何转染试剂;SC组:以scrambled siRNA序列进行转染;KD组:以特异性IRAK-4-siRNA序列进行转染),应用流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡水平,western blotting检测Bcl-2、Bax基因的表达。【结果】 与对照组相比,靶基因沉默组(KD组)细胞的IRAK-4 mRNA及蛋白表达水平显著降低;转染48h后,KD组细胞增殖变缓,凋亡增加,Bcl-2蛋白的表达明显下调且Bcl-2/BaxSC>Bcl-2/BaxKD; Spearman等级相关分析显示MG63细胞凋亡比例与Bcl-2/Bax的比值间有显著的相关性。 【结论】 siRNA沉默IRAK-4基因能够诱导人成骨样细胞株MG63凋亡,且靶细胞凋亡水平与Bcl-2、Bax基因表达水平的比值相关.