LncRNA HOTAIR对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和EMT的影响和作用机制

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)HOTAIR对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和上皮细胞-间充质转化(EM T)的影响及潜在的作用机制.方法 收集培养的宫颈癌细胞(Hela细胞)、人永生化宫颈上皮细胞(H8细胞),同时收集宫颈癌组织、癌旁正常组织标本,利用实时荧光定量PCR检测LncRNA HOTAIR、miR-...     

气功外气对肿瘤作用的实验研究

本文观察了气功师外气对小鼠肝癌的作用。气功在距癌细胞悬液10厘米处发放外气15分钟,平均每10~5个癌细胞中有5.8×10~3个死亡。将此细胞悬液植入小鼠腹腔,腹水癌发生率较对照组降低20％,而且癌性腹水发展缓慢,量少。将未经外气作用的癌细胞植入小鼠腹腔后,气功师连续20天对小鼠发放外气,每次15分钟,每日二次。腹水癌发生率降低15％,死亡癌细胞数为4.0×10~3/10~5,然而腹水发展速度比对照组快而且量也多。但癌细胞增殖分裂受到抑制,对照组分裂指数为45‰,气功组为25％。作者认为气功对治疗肿瘤的效应问题,有待深入研究。     

多种乳酸杆菌粘附活性的研究

目的比较热灭活状态和活苗状态乳酸杆菌对宫颈癌细胞(Hela)的粘附活性。方法运用光镜分析乳酸杆菌活菌和热灭活两种生物状态对Hela细胞的粘附指数。结果两种生物状态的乳酸杆菌对Hela细胞的粘附具有显著性,而热灭活状态对Hela细胞的粘附指数显著高于活菌状态。结论经热灭活的乳酸杆菌对Hela细胞有较强粘附性。     

姜黄素体外抗肿瘤作用的观察

目的观察姜黄素对不同肿瘤细胞的作用及光学显微镜下形态学变化、以证实其抑瘤效应。方法应用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞(SMMC-7721)、宫颈癌细胞(Hela)、结肠癌细胞(SW480)、红白血病细胞(K562)、舌癌细胞(Tca-8113)、T淋巴瘤细胞(Jurkat)、喉癌细胞(Hep-2)的影响,且同步观察形态学变化。结果20μmol/L的姜黄素对Jurkat抑制作用较强,对SMMC-7721有抑制作用,对其余细胞无影响。40、60μmol/L姜黄素对SMMC-7721、Hela、K 562、Jurkat有抑制作用,对SW480、Tca-8113抑制率较低,对Hep-2无抑制作用;且姜黄素对除Hep-2之外的6种细胞之形态均有影响。结论姜黄素能抑制多种肿瘤细胞增殖且相应引起细胞形态学改变。     

S-亚硝基谷胱甘肽对肿瘤细胞增殖的影响

目的:研究S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)对肿瘤细胞增殖的影响。方法:实验于2003-09/2004-03在解放军总医院生化科完成。以人宫颈癌细胞(Hela)为对象,用二硫双硝基苯甲酸法检测Hela细胞还原型谷胱甘肽GSH含量、四甲基偶氮唑法检测Hela细胞的增殖活性。()结果:肿瘤细胞富含GSH和GSNO,引起Hela细胞增殖活性下降。四甲基偶氮唑法显示GSNO(浓度为1000μmol/L)作用于Hela细胞时,其增殖活性由(2.021±0.069)μkat/L降到(1.549±0.234)μkat/L。结论:肿瘤细胞可消耗GSH生成GSNO,而抑制肿瘤细胞的增殖。     

阳离子脂质体转染Hela细胞的实验冰

背景;基因载体是基因治疗中重要的影响因素,阳离子脂质体细胞毒性低,转染效率高,是一种很有前景的基因转染载体.目的:评价两种阳离子脂质体介导基因转染宫颈癌细胞的转染效果,优化它们对宫颈癌细胞的转染条件.设计、时间及地点:以Hela细胞为观察对象,分组设计.实验于2008-03/06在大连民族学院生命科学学院国家民委一教育部重点实验室完成.材料:质粒pGFP.N2购自Clontech公司,Hela细胞由大连民族学院的实验室保存.方法;.首先采用DNA延滞实验考察阳离子脂质体与DNA的结合能力,然后用进行细胞转染实验研究脂质体的转染效率,最后通过四甲基偶氮唑盐法考察脂质体对细胞的毒性.主要观察指标:采用DNA延滞实验观察阳离子脂质体Lipofectamine 2000和DOTAP与DNA的结合能力,以报告基因(绿色荧光蛋白基因pGFP-N2),分析阳离子脂质体Lipofectamine 2000和DOTAP转染Hela细胞转染效率和细胞毒性.结果:Lipofectamine 2000和DOTAP与DNA均有很强的结合力:以绿色荧光蛋白基因为报告基因,Lipofectamine 200C转染率较高;当Lipofectamine 2000与DNA质量比为3:1时,转染效率最高,约72%,是DOTAP转染细胞最高活性的2.5倍;在最佳转染剂量时,2种试剂的细胞存活率均在75%以上,Lipofectamine 2000的毒性相对较小.结论:对Hela细胞而言,Lipofectamine 2000较DOTAP具有更高的转染效率和较低的细胞毒性.     

S—亚硝基谷胱甘肽对肿瘤细胞增殖的影响

目的：研究S—亚硝基谷胱甘肽(GSNO)对肿瘤细胞增殖的影响。方法：实验于200309／2004—03在解放军总医院生化科完成。以人宫颈癌细胞(Hela)为对象，用二硫双硝基苯甲酸法检测Hela细胞还原型谷胱甘肽(GSH)含量、四甲基偶氮唑法检测Hela细胞的增殖活性。结果：肿瘤细胞富含GSH和GSNO，引起Hela细胞增殖活性下降。四甲基偶氮唑法显示GSNO(浓度为1000μmol／L)作用于Hela细胞时，其增殖活性由(2．021&;#177;0．069)μkat／L降到(1．549&;#177;0．234)μkat／L。结论：肿瘤细胞可消耗GSH生成GSNO，而抑制肿瘤细胞的增殖。     

醋酸对宫颈脱落细胞样本TCT和HPV-DNA检测结果影响的探讨

目的探讨5%醋酸对宫颈脱落细胞形态学以及HPV-DNA检测结果的影响。方法用5%醋酸处理Hela细胞,分别在0、2、5、10、15、20、25、30 min观察细胞形态变化规律。此外,取5%醋酸处理宫颈脱落细胞10 min后进行TCT制片,然后进行巴氏染色,观察细胞形态变化。另取5%醋酸处理宫颈脱落细胞10 min后,提取DNA,并进行HPV-DNA检测。结果5%醋酸处理前、后,Hela细胞、宫颈脱落细胞的形态学未见异常,HPV-DNA检测结果也未见差异(P>0.05)。结论5%醋酸对宫颈脱落细胞TCT和HPV-DNA检测结果没有影响。     

体外高频热疗治疗原发性肝癌的中西医护理

目的观察姜黄素对不同肿瘤细胞的作用及光学显微镜下形态学变化、以证实其抑瘤效应。方法应用MTT法检测姜黄素对肝癌细胞（SMMC-7721）、宫颈癌细胞（Hela）、结肠癌细胞（SW480）、红白血病细胞（K562）、舌癌细胞（Tca-8113）、T淋巴瘤细胞（Jurkat）、喉癌细胞（Hep-2）的影响，且同步观察形态学变化。结果20μmol／L的姜黄素对Jurkat抑制作用较强，对SMMC-7721有抑制作用，对其余细胞无影响。40、60μmol／L姜黄素对SMMC-7721、Hela、K562、Jurkat有抑制作用，对SW480、Tca-8113抑制率较低，对Hep-2无抑制作用；且姜黄素对除Hep-2之外的6种细胞之形态均有影响。结论姜黄素能抑制多种肿瘤细胞增殖且相应引起细胞形态学改变。     

MTA1基因沉默对宫颈癌细胞增殖及转移能力的影响

【】 目的 探讨MTA1基因沉默对宫颈癌细胞转移增殖的影响。方法 用慢病毒转染法稳定转染Siha细胞,转染同时进行实验分组。用RT-PCR技术和蛋白印迹法测定宫颈癌Siha、Hela细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达。Transwell体外侵袭实验检测转染后Siha细胞的迁移能力,MTT检测法和克隆形成实验法检测转染后Siha细胞的细胞增殖能力,FACS细胞凋亡法检测转染后Siha细胞的细胞凋亡率,PI-FACS细胞周期法检测转染后Siha细胞的各个生长周期的细胞数。结果 (1)Transwell体外侵袭实验：相比NC组,KD组Transwell转移率经T-Test分析P=2.61E-08<0.05。(2)MTT检测结果表明：相比NC组,KD组细胞增殖减缓。(3)克隆形成实验结果显示：相比NC组,KD组克隆数经T-Test分析P值=0.0006<0.05。(4)FACS细胞凋亡：相比两个对照组,KD组凋亡率经T-Test分析P<0.05。结论 MTA1基因促进宫颈癌细胞的转移和增殖,沉默MTA1基因表达能使宫颈癌细胞增殖及迁移能力下降,加速宫颈癌细胞的凋亡,为抑制肿瘤转移奠定实验基础,最后为宫颈癌的新型药物性靶向治疗提供有力的实验依据。     

光动力疗法对耐药性宫颈癌患者组织中GST-π、P-gp和Topo-Ⅱ表达的影响

选取2011年6月~2015年10月期间我院实验中心保存及提供的宫颈癌细胞株Hela细胞96株,依据随即分配原则分为观察组和对照组各48例。观察对比两组细胞增殖情况,细胞凋亡率,组织中GST-π、P-gp和Topo-Ⅱ表达情况。结果观察组组织中细胞生长抑制率、凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);观察组组织中GST-π、P-gp和Topo-Ⅱ阳性表达率明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。光动力疗法可有效抑制耐药性宫颈癌细胞的生长,具有灭杀宫颈癌细胞的作用,可有效抑制宫颈癌组织中耐药性因子的表达,有利于提高耐药性宫颈癌的临床疗效。     

MTA1基因沉默对宫颈癌细胞增殖及转移能力的影响

目的:探讨MTA1基因沉默对宫颈癌细胞转移增殖的影响。方法:用慢病毒转染法稳定转染Siha细胞,转染同时进行实验分组。用RT-PCR技术和蛋白印迹法测定宫颈癌Siha、Hela细胞中MTA1 m RNA和蛋白的表达。Transwell体外侵袭实验检测转染后Siha细胞的迁移能力,MTT检测法和克隆形成实验法检测转染后Siha细胞的细胞增殖能力,FACS细胞凋亡法检测转染后Siha细胞的细胞凋亡率,PI-FACS细胞周期法检测转染后Siha细胞的各个生长周期的细胞数。结果:(1)Transwell体外侵袭实验:相比NC组,KD组Transwell转移率经T-Test分析P=2.61E-080.05。(2)MTT检测结果表明:相比NC组,KD组细胞增殖减缓。(3)克隆形成实验结果显示:相比NC组,KD组克隆数经T-Test分析P值=0.000 60.05。(4)FACS细胞凋亡:相比两个对照组,KD组凋亡率经T-Test分析P0.05。结论:MTA1基因促进宫颈癌细胞的转移和增殖,沉默MTA1基因表达能使宫颈癌细胞增殖及迁移能力下降,加速宫颈癌细胞的凋亡,为抑制肿瘤转移奠定实验基础,最后为宫颈癌的新型药物性靶向治疗提供有力的实验依据。     

阳离子脂质体转染Hela细胞的实验

背景：基因载体是基因治疗中重要的影响因素,阳离子脂质体细胞毒性低,转染效率高,是一种很有前景的基因转染载体。目的：评价两种阳离子脂质体介导基因转染宫颈癌细胞的转染效果,优化它们对宫颈癌细胞的转染条件。设计、时间及地点：以Hela细胞为观察对象,分组设计。实验于2008-03/06在大连民族学院生命科学学院国家民委-教育部重点实验室完成。材料：质粒pGFP-N2购自Clontech公司,Hela细胞由大连民族学院的实验室保存。方法：首先采用DNA延滞实验考察阳离子脂质体与DNA的结合能力,然后用进行细胞转染实验研究脂质体的转染效率,最后通过四甲基偶氮唑盐法考察脂质体对细胞的毒性。主要观察指标：采用DNA延滞实验观察阳离子脂质体Lipofectamine2000和DOTAP与DNA的结合能力,以报告基因（绿色荧光蛋白基因pGFP-N2）,分析阳离子脂质体Lipofectamine2000和DOTAP转染Hela细胞转染效率和细胞毒性。结果：Lipofectamine2000和DOTAP与DNA均有很强的结合力;以绿色荧光蛋白基因为报告基因,Lipofectamine2000转染率较高;当Lipofectamine2000与DNA质量比为3∶1时,转染效率最高,约72%,是DOTAP转染细胞最高活性的2.5倍;在最佳转染剂量时,2种试剂的细胞存活率均在75%以上,Lipofectamine2000的毒性相对较小。结论：对Hela细胞而言,Lipofectamine2000较DOTAP具有更高的转染效率和较低的细胞毒性。     

miR-29靶向调控CDK6对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-29靶向调控细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)对宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法收集20例接受手术且术前未行任何治疗的宫颈癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织,经细胞培养生长至80%左右时消化细胞进行传代和冻存。行定量实时聚合酶链反应检测miR-29在宫颈癌组织与癌旁正常组织中的表达差异;行四甲基偶氮唑盐比色实验检测miR-29对宫颈癌细胞增殖能力的影响,平板克隆实验检测miR-29对宫颈癌细胞凝聚功能的影响;行双荧光素酶实验观察miR-29对CDK6转录活性的影响。结果miR-29在宫颈癌组织中表达较癌旁正常组织显著降低[(1.23±0.45)vs(1.91±0.35),P0.001];LVmiR-29和LV-miR-Ctrl转染Hela、Siha细胞后,MTT实验证实miR-29显著抑制Hela、Siha细胞的增殖能力,平板克隆实验证实miR-29显著抑制Hela、Siha细胞的凝聚能力;双荧光素酶实验结果显示miR-29和CDK6之间有直接的结合位点,miR-29靶向调控CDK6的转录活性。结论 miR-29通过靶向调控CDK6可抑制宫颈癌细胞的增殖和凝聚能力,可能作为新的宫颈癌靶向标志物。     

用喉癌细胞,宫颈癌细胞及鼠肝细胞检测ANA的比较

抗核抗体(ANA)检测一般以小鼠或大鼠组织切片,鸡红细胞及人末梢血白细胞等为核材。1987年奥材等报告用来自于人体的培养细胞株做核材时ANA 检出率上升.1989年茂木等将人的喉癌细胞(HEP-2)用于ANA 及ACyA 的检测。我们用传代细胞HEP-2、Hela(宫颈癌细胞)及鼠肝细胞三种核材以免疫荧光法(IF)检测ANA.方法与结果如下.     

RNA干扰Ku70基因对宫颈癌Hela细胞放射敏感性影响的实验研究

目的观察ku70基因短干扰RNA(siRNA)对宫颈癌Hela细胞放射敏感性的影响。方法采用集落形成技术测定不同剂量射线照射对Hela细胞存活率的影响,观察Hela细胞对射线照射的敏感性。采用时定量PCR技术(quantitiv real time PCR,QRT-PCR)检测Ku70 mRNA水平表达。采用Western Blot免疫印记技术检测Ku70蛋白表达。采用RNA干扰(RNAi)技术抑制Hela细胞中Ku70蛋白的表达,观察Ku70蛋白表达下调对Hela细胞放射敏感性的影响。采用集落形成技术测定4.0 Gy射线照射对Hela细胞存活率的影响。进而分析Hela细胞对射线的放射敏感性。结果宫颈癌Hela细胞对1.0-4.0 Gy射线照射不够敏感,有相当高的辐射抗性。量效实验证实,1.0-6.0 Gy射线照射后,HeLa细胞中Ku70 mRNA及Ku70蛋白表达均明显增高。时效实验证实,4.0 Gy射线照射后8 h-72 h,HeLa细胞中Ku70 mRNA及Ku70蛋白表达均明显增高。本实验成功的构建了Ku70基因RNA干扰载体pSilencer-4.1-Ku70,稳定转染HeLa细胞后,有效抑制Ku70蛋白的表达。稳定转染pSilencer-4.1-Ku70干扰质粒并抑制Ku70蛋白表达后,HeLa细胞对射线照射的放射敏感性显著增高(P0.001)。结论 Ku70 siRNA有效下调Ku70 mRNA水平,抑制Ku70蛋白的表达,可明显提高Hela细胞对辐射的敏感程度。本研究结果还提示,Ku70基因可作为衡量宫颈腺癌辐射敏感性指标,为临床合理筛选患者进行放疗、预测放疗疗效提供一条适用途径。     

酒石酸布托啡诺对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的 探究酒石酸布托啡诺对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法 将人宫颈癌细胞Hela分为对照组和酒石酸布托啡诺低、中、高浓度组,对照组细胞不加干预培养,酒石酸布托啡诺低、中、高浓度组分别加入1 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL的酒石酸布托啡诺对细胞进行干预培养。CCK-8法检测各组细胞增殖率;克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力;流式细胞术测定各组细胞凋亡率;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测各组细胞中核因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果 与对照组相比,酒石酸布托啡诺低、中、高浓度组Hela细胞增殖率、细胞克隆形成能力、NF-κB p65表达水平以及TNF-α和IL-6水平均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),且呈现浓度依赖性。结论 酒石酸布托啡诺可能通过抑制NF-κB通路、减少炎性因子的释放,从而抑制宫颈癌细胞的增殖,并促进癌细胞凋亡。     

DADS对人宫颈癌细胞生长及VEGF蛋白表达的影响

【目的】探讨二烯丙基二硫（DADS）对人宫颈癌Hela细胞生长及血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的影响。【方法】体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用MTT比色法测定DADS对Hela细胞增殖活性的影响;裸鼠皮下注入人宫颈癌Hela细胞建立人宫颈癌裸鼠并种移植模型,观察腹腔注射DADS对宫颈癌移植瘤在Balb／c-nu裸鼠体内生长情况的影响,HE染色后进一步观察DADS对移植瘤组织形态的改变,SP免疫组织化学法观察移植瘤细胞VEGF蛋白酌表迭情况。【结果】DADS对人宫颈癌Hela细胞增殖有一定抑制作用,并呈浓度依赖性,以DADS60mg／L高剂量药物组抑制活性最强;腹腔注射DADS剂量为50mg／kg、100mg／kg和200mg／kg时,细胞增殖抑制率分别为28．1％、38．6%、55．3％,瘤重抑制率分别是35．9％,49．9％,55．4％;HE染色结果示DADS具有杀伤人宫颈癌裸鼠移植瘤细胞作用;SP免疫组织化学法示DADS下调移植瘤细胞VEGF表达。[结论]DADS具有抑制人宫颈癌细胞的生长作用,此作用可能与下调移植瘤细胞VEGF表达有关。     

阿司匹林对宫颈癌Hela细胞COX-2mRNA表达的抑制作用

目的研究COX-2非选择性抑制剂阿司匹林（Aspirin）对宫颈癌细胞株Hela的细胞增殖的抑制作用及COX-2mRNA表达量的影响。方法Hela细胞分4组培养在6孔板上设对照组及实验组，观察不同剂量阿司匹林作用后细胞的增殖状态及采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PcR）检测阿司匹林作用前后Hela细胞COX-2mRNA量的变化。结果阿司匹林能抑制Hela细胞增殖及细胞中COX-2mRNA的转录，且抑制强度随阿司匹林的浓度的提高而增加。结论体外阿司匹林抑制癌细胞Hela生长，并从mRNA水平抑制COX-2蛋白的表达，对宫颈癌可能有潜在治疗意义。     

HSV-TK和IL-12联合基因对宫颈癌的杀伤作用

目的观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)丙氧鸟苷(GCV)自杀基因系统联合IL-12基因对人宫颈癌hela细胞系体外杀伤作用。方法采用脂质体转染法将HSV-TK及IL-12联合基因转染hela细胞,并将其用于体外实验,观察GCV对转染联合基因的Hela的杀伤作用及旁观者效应等。结果加入GCV后体外培养联合基因转染的Hela细胞,24 h后细胞明显发生形态上改变,正常对照组细胞生长旺盛;随着GCV剂量的加大,转染联合基因的Hela细胞的存活率呈逐渐下降的趋势,GCV对转染细胞的杀伤作用较对正常细胞的杀伤作用明显增强。并观察到自杀基因系统具有明显的旁观者效应。结论脂质体可介导HSV-TK及IL-12联合基因转入人宫颈癌hela细胞并获得稳定表达,GCV对HSV-TK及IL-12联合基因转染的hela细胞具有明显的杀伤作用。