p38MAPK对甲胎蛋白诱导的树突细胞凋亡的影响

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在甲胎蛋白（AFP）诱导树突状细胞凋亡过程中的作用。方法联合细胞因子体外诱导培养人外周血来源树突状细胞。Western Blot检测树突状细胞caspase-3及p38MAPK的表达情况。结果AFP诱导树突状细胞凋亡的过程中伴随caspase-3及p38MAPK的表达增加,SB203580能够明显抑制Cas-pase-3及p38MAPK的表达,DEVD-fmk未能阻断p38MAPK的高表达。结论p38MAPK信号转导通路可能是AFP诱导树突状细胞凋亡的上游信号,并起到促进树突状细胞凋亡的作用。     

以人甲胎蛋白启动子控制表达HIV-lvpr基因的重组腺病毒诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡作用的研究

目的 研究人甲胎蛋白（AFP）启动子控制表达HIV-1vpr基因的重组腺病毒对AFP（＋）肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡的作用，评估以该策略利用vpr进行肿瘤特异性基因治疗的可行性。方法 将以AFP启动子控制HIV-1vpr表达的重组腺病毒rvAdAFP-vpr和空白载体rvAd-mull分别感染AFP（＋）的肝癌细胞BED-7402和AFP（-）的肝癌细胞SMMC-7721，利用流式细胞仪检测Vpr的特异性表达和细胞周期分布，用细胞荧光染色和线粒体膜电位检测等方法观察细胞凋亡。结果 与对照病毒rvAd-mull相比，重组腺病毒rvAdAFP-vpr只在AFP（＋）肝癌细胞中表达HIV-1Vpr，并诱导肝癌细胞的细胞周期G2期阻滞和细胞凋亡，而在AFP（-）肝癌细胞中不明显表达Vpr，不能显著诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡。结论 重组腺病毒rvAdAFP-vpr对于Vgr的表达是AFP表达特异性的，可有效诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡，有望用于AFP（＋）肝癌的基因治疗研究。     

柚皮素诱导K562细胞凋亡与Caspase-3／Caspase-8酶活性及FAS／FASL蛋白表达的关系

本研究旨在探讨柚皮素（naringenin）在体外诱导K562细胞凋亡及其相关机制。采用体外培养K562细胞，用不同浓度的柚皮素处理；用MTT法测定细胞增殖抑制率；流式细胞仪检测柚皮素作用后细胞凋亡率；透射电子显微镜观察柚皮素对K562细胞形态学的影响；caspase分光光度计法检测柚皮素作用后细胞内caspase-3和csa—pase-8活性的改变；细胞免疫化学染色检测柚皮素作用后细胞内FAS和FASL的表达。结果表明：柚皮素对K562细胞具有增殖抑制作用，并呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）；在柚皮素作用下，出现典型亚G1峰，细胞凋亡率随柚皮素浓度的增高而增高（P〈0．05）；电子显微镜下细胞形态呈现凋亡征象；随着柚皮素浓度的增高，细胞内caspase-3和caspase-8酶活性增高（P〈0．05），FAS表达上升，FASL表达下降（P〈0．05）。结论：柚皮素在体外对K562细胞有诱导凋亡作用，而提高FAS的表达，降低FASL的表达，诱导caspase-3和caspase-8活化，可能是其作用机制。     

丙戊酸诱导白血病HL-60细胞凋亡及其对h-tert基因表达的影响

为了探讨丙戊酸（valproic acid,VPA）对白血病HL-60细胞诱导凋亡的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验（CCK-8法）观察不同浓度VPA在不同作用时间对HL-60细胞增殖的影响,采用荧光显微镜检及流式细胞术检测细胞凋亡,并观察VPA作用后HL-60细胞端粒酶亚单位h-tert基因、凋亡相关蛋白表达和caspase-3活性的变化。结果表明：VPA呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖（r=-0.87）.,诱导细胞凋亡;同时,抗凋亡蛋白BCL-2表达明显下降,促凋亡蛋白BAX表达上调,caspase-3活性增强,h-tert mRNA表达逐渐下降,HL-60细胞的凋亡率与h-tert mRNA表达呈负相关。结论：VPA可抑制白血病HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;VPA可能通过下调h-tert mRNA、BCL-2蛋白表达,上调BAX表达及增强caspase-3活性而发挥抗白血病作用。     

阴性突变Rac-N17基因转染对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨基因转染对内皮细胞凋亡的影响及其相关机制。方法 采用凝血酶诱导法诱导人脐静脉内皮细胞株（HUVECs）凋亡，检测细胞凋亡情况及caspase-3活性。结果 结果显示，凝血酶诱导48 h后，HUVECs细胞浆内颗粒和空泡增多，细胞凋亡率明显增高，caspase-3活性明显增加，而加入RacN17干预后，细胞凋亡率明显降低、caspase-3活性明显下降。结论 Rac-N17基因转染能防止细胞的凋亡与衰老，保护血管内皮细胞。     

维生素K2诱导人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞凋亡机制的研究

为了研究维生素K2（VK2）诱导人骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的作用机制，采用流式细胞术Annexin—V^FITC／PI双染分析细胞凋亡率和PI染色分析细胞周期的改变。用RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、survivin和促凋亡基因bax的表达，用发光比色法检测caspase-3活性。研究结果显示：细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长逐渐增高并呈明显的时间浓度依赖性（P〈0．05），且随着药物浓度的增加和作用时间的延长S期和G2期细胞逐渐减少（P〈0．05），G0／G1期细胞逐渐增多（P〈0．01），细胞被阻滞在G0／G1期，并且在G0／G1期前出现明显的亚G1峰，即凋亡峰；抗凋亡基因bcl-2、survivin的表达随着VK2浓度的增高明显下调（P〈0．05），而促凋亡基因bax表达无明显变化（P〉0．05）；caspase-3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。结论：VK2主要是通过激活caspase-3途径诱导MUTZ-1细胞发生凋亡，同时抗凋亡基因bcl-2、survivin在细胞凋亡过程中也起重要作用。     

哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡与胱冬酶-3及bcl-2基因家族的关系

本研究探讨哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡及其机制。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察哇巴因对Jurkat细胞生长的抑制作用，应用流式细胞术、原位末端标记技术（TUNEL）等观察细胞凋亡，应用Western—blot测定胱冬酶-3（caspase-3）的活性亚单位及Bcl-2、Bax蛋白表达水平，用比色法检测caspase-3活性。结果表明：哇巴因能诱导Jurkat细胞凋亡，在细胞凋亡过程中，Bax蛋白表达增加，easpase-3活性明显升高。结论：哇巴因可能通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达，从而激活caspase途径诱导Jurkat细胞凋亡。     

藤梨根乙酸乙酯制剂诱导食管癌细胞凋亡机制的观察

目的：探讨藤梨根（Actinidia arguta）乙酸乙酯制剂促进人食管癌Eca-109细胞凋亡的机制。方法采用MTT比色法,检测藤梨根乙酸乙酯药液在不同浓度（1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml等）及不同时间（24h、48h、72h等）对Eca-109细胞生长抑制作用;采用TUNEL法检测其对癌细胞生长的诱导凋亡效应;采用免疫组化SP法,检测凋亡相关蛋白Bax 、Bcl-2及caspase的表达。结果藤梨根乙酸乙酯药液对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用,随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强,其生长抑制率可达87.2%。藤梨根制剂对瘤细胞有明显的凋亡效应,而在对照组,未见有明显凋亡现象。瘤细胞作用24h、48h、72h后分别与对照组比较,用药组Bax蛋白表达明显增强（P〈0.01）;同时伴有Bcl-2表达减弱,72h后最明显,差异有统计学意义（P〈0.01）。藤梨根药液促进caspase-3、caspase-9表达明显增强,而对caspase-8表达影响较小。结论藤梨根可通过下调Bcl-2表达,激活caspase-9、caspase-3诱导Eca-109细胞凋亡。     

奥沙利铂诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡机制的实验研究

本研究探讨奥沙利铂对人骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖抑制作用及其分子机制。将奥沙利铂作用于骨髓瘤细胞,用MTT法检测细胞增殖抑制率,光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,半定量RT—PCR检测Bcl-2、caspase-8及caspase-3mRNA表达量的变化,Western blot检测Bcl-2蛋白表达量变化。结果表明,奥沙利铂可抑制RPMI8226细胞增殖,抑制率呈时间（r=0．979）和浓度（r=0．949）依赖性增强;24h后在光学显微镜下可见奥沙利铂组细胞数量减少,排列紊乱,细胞形态变得不规则,体积变小,细胞碎片增多,可见凋亡细胞;48h电子显微镜下可见细胞典型凋亡改变,凋亡小体形成。流式细胞术检测结果显示,奥沙利铂组RPMI8226细胞凋亡率明显增高（P〈0．05）;奥沙利铂作用24h后,骨髓瘤细胞被阻滞于S期（P〈0．05）;而作用48h后G0／G1期细胞所占比例明显增高（P〈0．05）;奥沙利铂作用48h,细胞既l-2mRNA与Bcl-2蛋白表达量未见明显变化,caspase-8及caspase-3mRNA表达量增加（P〈0．05）。结论：奥沙利铂可诱导RPMI8226细胞凋亡,其机制可能与其将细胞阻滞于S期,上调caspase-8、caspase-3mRNA表达有关;奥沙利铂诱导RPMI8226细胞凋亡可能不通过调节bcl-2基因表达实现。     

去铁胺激活半胱天冬酶3诱导HL-60凋亡

为了研究铁螯合剂-去铁胺（deferoxamine,DFO）诱导人白血病细胞株HL-60凋亡时半胱天冬酶-3（caspase-3）活性的变化并探讨DFO诱导凋亡的可能机制.HL-60细胞经HE染色,在光学显微镜下观察其形态结构变化,用TUNEL法和流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测caspase-3活性,原位杂交法检测凋亡基因bax的转录水平.结果表明,HL-60经去铁胺处理后,典型的细胞形态改变、DNA末端原位标记和FCM检测均证实DFO可诱导细胞凋亡,凋亡率与药物剂量和作用时间呈依赖性.在DFO诱导HL-60凋亡过程中,caspase-3活性明显升高,凋亡基因bax的转录水平均较对照组增高（P＜0.05）.caspase广谱抑制剂Z-AVD可明显降低DFO诱导的细胞凋亡率.结论：DFO通过激活caspase-3和增强bax活性而诱导HL-60凋亡.     

小鼠髓系树突状细胞的体外扩增和超微结构

背景:树突状细胞可激发初始型T细胞,是目前所知机体功能最强的专职抗原递呈细胞,但对其超微结构的研究鲜见报道.目的:观察小鼠髓系树突状细胞不同发育阶段以及CD40配基化和肿瘤坏死因子α刺激后树突状细胞的超微结构特征.方法:无菌取小鼠骨髓前体细胞,采用粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4联合方案体外诱导获得未成熟树突状细胞,负载早期凋亡的肿瘤细胞后采用小鼠CD40L转基因CHO细胞和肿瘤坏死因子α刺激48 h,按常规方法制备超薄切片,透射电镜观察树突状细胞的超微结构特征.结果与结论:前体细胞及未成熟树突状细胞内有清晰可见的吞饮泡,未成熟树突状细胞的胞质内可见"C"形和环形溶酶体;凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞可见凋亡小体被吞噬或包裹的现象,小鼠CD40L转基因CHO细胞和肿瘤坏死因子α均可促进树突状细胞成熟,但肿瘤坏死因子α作用后,部分树突状细胞有自噬和凋亡改变.结果提示,小鼠骨髓来源树突状细胞在不同分化发育阶段有其特殊的超微结构表现,肿瘤坏死因子α可介导树突状细胞发生自噬和凋亡.     

Human dendritic cells mediate cellular apoptosis via tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL).

TRAIL (TNF-related apoptosis-inducing ligand) is a member of the TNF family that induces apoptosis in a variety of cancer cells. In this study, we demonstrate that human CD11c(+) blood dendritic cells (DCs) express TRAIL after stimulation with either interferon (IFN)-gamma or -alpha and acquire the ability to kill TRAIL-sensitive tumor cell targets but not TRAIL-resistant tumor cells or normal cell types. The DC-mediated apoptosis was TRAIL specific, as soluble TRAIL receptor blocked target cell death. Moreover, IFN-stimulated interleukin (IL)-3 receptor (R)alpha(+) blood precursor (pre-)DCs displayed minimal cytotoxicity toward the same target cells, demonstrating a clear functional difference between the CD11c(+) DC and IL-3Ralpha(+) pre-DC subsets. These results indicate that TRAIL may serve as an innate effector molecule on CD11c(+) DCs for the elimination of spontaneously arising tumor cells and suggest a means by which TRAIL-expressing DCs may regulate or eliminate T cells responding to antigen presented by the DCs.     

RNA干扰抑制SOCS1表达增强树突状细胞抗肿瘤作用

目的采用RNA干扰技术抑制树突状细胞（DCs）SOCS1的表达，并检测其对树突状细胞抗肿瘤活性的影响，为树突状细胞的临床应用奠定基础。方法针对SOCS1基因，采用化学合成法合成3对SOCS1 siRNA，并转染树突状细胞。Western blot检测树突状细胞SOCS1的表达情况，筛选出有效的siRNA序列，MIT法测定SOCS1沉默的树突状细胞抗肿瘤活性的变化。结果与空白对照组相比，序列3组SOCS1蛋白质表达水平明显降低；SOCS1沉默的树突状细胞抗肿瘤活性显著提高。结论RNA干扰技术能显著下调树突状细胞SOCS1的表达，提高树突状细胞的抗肿瘤活性，为树突状细胞的临床应用提供了新的思路和手段。     

多发性骨髓瘤间充质干细胞对树突状细胞功能的影响

目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓来源的间充质干细胞（MSC）对树突状细胞（DC）分化、成熟和细胞因子分泌及其对DC辅助T细胞杀伤骨髓瘤细胞作用的影响。方法将从MM患者骨髓来源的MSC、正常供者外周血来源的DC及骨髓瘤细胞系U266细胞进行混合培养。流式细胞术测定DC的免疫表型,ELISA法测定上清液IL-12的含量,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术测定骨髓瘤细胞凋亡比例。结果MSC能抑制rhTNF-α诱导的不成熟和成熟DC的CD1a、CD11c、CD80、CD86和HLA-DR表达（P〈0.01）,并显著减少成熟DC分泌IL-12（P〈0.01）。MSC可以下调成熟DC的CD83表达,使其趋于不成熟状态（P〈0.01）。与未加入MSC组相比,MSC混合培养组凋亡骨髓瘤细胞明显减少（P〈0.01）;比较MM患者与正常供者骨髓来源的MSC对DC辅助T细胞诱导骨髓瘤细胞凋亡的影响,前者U266细胞凋亡比例比后者明显减少（P〈0.01）。结论MM患者骨髓来源的MSC可以抑制DC的分化、成熟和分泌细胞因子;无论是MM患者或正常供者骨髓来源MSC均可以抑制DC辅助T细胞对骨髓瘤细胞的凋亡诱导作用,且MM患者来源的MSC的作用更强。     

Fas及FasL和Caspase-3在青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡中的表达

背景:青蒿琥酯具有减轻肺纤维化的作用,但相关机制的研究罕见报道.目的:探讨青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞凋亡的作用及其与Fas,FasL,Caspase-3表达的关系.方法:用1,10,100 mg/L青蒿琥酯分别干预体外培养的人胚肺成纤维细胞.采用CCK-8法检测青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞增殖的影响,流式细胞术测定细胞凋亡率,RT-PCR法测定Fas,FasL,Caspase-3 的mRNA的表达.结果与结论:青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制人胚肺成纤维细胞增殖,细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加(P < 0.05或P < 0.01),Fas,FasL,Caspase-3 mRNA的表达显著高于对照组(P < 0.05).结果证实,青蒿琥酯可通过上调Fas,FasL,Caspase-3 mRNA的表达抑制人胚肺成纤维细胞增殖、并促进细胞凋亡,发挥抗肺纤维化作用.     

Fas及FasL和Caspase-3在青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡中的表达

背景：青蒿琥酯具有减轻肺纤维化的作用,但相关机制的研究罕见报道。目的：探讨青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞凋亡的作用及其与Fas,FasL,Caspase-3表达的关系。方法：用1,10,100mg/L青蒿琥酯分别干预体外培养的人胚肺成纤维细胞。采用CCK-8法检测青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞增殖的影响,流式细胞术测定细胞凋亡率,RT-PCR法测定Fas,FasL,Caspase-3的mRNA的表达。结果与结论：青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制人胚肺成纤维细胞增殖,细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加（P〈0.05或P〈0.01）,Fas,FasL,Caspase-3mRNA的表达显著高于对照组（P〈0.05）。结果证实,青蒿琥酯可通过上调Fas,FasL,Caspase-3mRNA的表达抑制人胚肺成纤维细胞增殖、并促进细胞凋亡,发挥抗肺纤维化作用。     

Immunolipoplexes: an efficient, nonviral alternative for transfection of human dendritic cells with potential for clinical vaccination.

Genetic manipulation of dendritic cells (DCs) is important in the context of using either mature DCs to immunize patients or immature DCs to induce tolerance. Here, we describe a novel method of transfecting monocyte-derived human DCs using immunolipoplexes containing anti-CD71 or anti-CD205 monoclonal Abs. This results in up to 20% transfection, which can be increased to 20-30% if the immunolipoplexes are used to transfect CD14+ monocytes prior to differentiation into DCs. Transfected DCs can be substantially enriched using a drug-selection protocol during differentiation. Unlike adenoviral transduction, this nonviral transfection does not alter the expression of costimulatory molecules or the production of proinflammatory cytokines by DCs. In addition, DC function is unaltered, as assessed by mixed lymphocyte reactions. To test the feasibility of the immunolipoplexes and selection protocol for therapeutic intervention, we transfected DCs with the immunomodulatory enzyme indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO). Allogeneic T cells exposed to IDO-expressing DCs did not proliferate, secreted more IL-10 and less Th1 and Th2 cytokines, and had a higher amount of apoptosis than T cells incubated with control DCs. Furthermore the remaining T cells were rendered anergic to further stimulation by allogeneic DC. These immunolipoplexes, which can be easily and rapidly assembled, have potential for clinical immunization, in particular for tolerance induction protocols.     

人参皂苷Rg3促树突状细胞诱导作用的实验研究

目的 研究人参皂苷Rg3联合细胞因子对单核细胞来源树突状细胞(DC)的诱导及其免疫功能的影响.方法 选取8例健康志愿者分离外周血单核细胞,利用人参皂苷Rg3联合细胞因子(GM-CSF、IL-4、TNF-α)培养14 d诱导DC,光镜和电镜观察细胞形态,用流式细胞仪检测细胞免疫表型,同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)检测其抗原呈递能力.结果 (1)单核细胞经人参皂苷Rg3联合细胞因子诱导均产生了不同比率的具有树突状细胞形态学特征的DC.这些细胞表达DC的表面分化抗原,能刺激产生MLR反应.(2)Rg3(5.0 μg/ml)联合细胞因子(GM-CSF 150 ng/ml,IL-4 50 ng/ml,TNF-α 40 ng/ml)使单核细胞-DC获得率(以CD80、CD86双阳性定义DC)由43.31%提高到59.75%,并提高了DC刺激淋巴细胞的增殖能力.结论 人参皂苷Rg3联合细胞因子可以将正常人单核细胞体外诱导成为形态、表型和功能符合DC特征的细胞,可使单核细胞诱导DC产率增加,并提高其抗原呈递功能.     

青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞负载树突状细胞后的免疫应答

本研究探讨凋亡白血病细胞负载的树突状细胞（dendritic cells,DC）能否诱导特异性细胞毒T淋巴细胞反应。用青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡,从正常人外周血单个核细胞诱生DC,将凋亡U937细胞负载DC,并添加TNF-α诱导DC成熟,然后与自体T淋巴细胞共育,并联合IL-2以诱生细胞毒性T淋巴细胞（CTL）;应用流式细胞术分析DC和T细胞免疫表型,采用Dextran-FITC内吞试验检测DC的抗原摄取能力;用ELISA法检测IL-12p70的产生;采用MTT法检测凋亡U937细胞负载及未负载DC诱导的自体T淋巴细胞对不同的靶细胞（U937细胞和NB4细胞）的杀伤效应。结果表明：青蒿琥酯1μg/ml作用于U937细胞48小时后,U937细胞的凋亡率达51.52%,DC在未成熟阶段时吞噬Dextran-FITC的能力最强,负载凋亡U937细胞之后并不能促使未成熟DC（iDC）分化为成熟DC（mDC）。凋亡U937细胞负载后的iDC在TNF-α的作用下能够成为mDC。与未负载的mDC相比,凋亡U937细胞负载后的mDC（mDC-^ApoU937）分泌IL-12p70水平明显增高,而且由其所激发和扩增的T细胞以CD8^＋的T细胞为主。细胞毒性实验显示：mDC-^ApoU937诱导的T细胞的对U937细胞的杀伤显著超过对NB4细胞的杀伤。结论：mDC-^ApoU937能有效地诱导特异性抗白血病效应。