吴茱萸碱和盐酸小檗碱对大肠癌HT29细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响,为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据。方法:体外培养人结肠癌HT29细胞,加入不同浓度的吴茱萸碱及盐酸小檗碱进行培养,采用活细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,TRAP法检测端粒酶活性,RT-PCR法检测hTERT的表达。结果:吴茱萸碱和盐酸小檗碱作用HT29细胞后,增殖明显受到抑制,呈剂量和时间依赖性;能够降低HT29端粒酶活性,但二者无协同作用;并且端粒酶hTERT表达降低,具有剂量依赖关系。结论:吴茱萸碱和盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞具有显著生长抑制作用,该抑制作用可能通过下调端粒酶hTERT基因表达,降低端粒酶的活性,为临床治疗大肠癌提供实验依据。     

吴茱萸碱和盐酸小檗碱对HT29细胞生长抑制及凋亡的影响

目的探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和盐酸小檗碱对大肠癌HT29细胞的生长抑制及其诱导细胞凋亡的作用。为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据。方法采用活细胞计数试剂盒（CCK-8），AnnexinV—FITC／PI双染色流式细胞术，检测不同浓度的盐酸小檗碱和吴茱萸碱作用后HT29细胞增殖活性和细胞凋亡的变化。结果吴茱萸碱和盐酸小檗碱作用HT29细胞后，增殖明显受到抑制，呈剂量和时间依赖性；流式细胞仪检测表明吴茱萸碱和盐酸小檗碱能够诱导细胞凋亡，呈剂量依赖性。倒置显微镜观察细胞呈现缩小、变圆、皱缩、脱壁等增殖变慢的形态学特征。结论吴茱萸碱和盐酸小檗碱对大肠癌HT29细胞具有显著生长抑制作用。该抑制作用与诱导细胞凋亡相关。     

吴茱萸碱和小檗碱对HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响

目的：探讨左金丸的主要成分吴茱萸碱和小檗碱对结肠癌HT29细胞凋亡及端粒酶催化亚基（hTERT）表达的影响,为临床应用左金丸治疗大肠癌提供实验依据。方法：体外培养人结肠癌HT29细胞,加入不同浓度的吴茱萸碱及盐酸小檗碱进行培养,采用活细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡变化,RT-PCR法检测hTERT的表达。结果：吴茱萸碱和盐酸小檗碱作用HT29细胞后,增殖明显受到抑制,呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测表明吴茱萸碱和盐酸小檗碱能够诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性;并且端粒酶hTERT表达降低,具有剂量依赖关系。结论：吴茱萸碱和盐酸小檗碱对结肠癌HT29细胞具有显著生长抑制作用,该抑制作用可能通过下调端粒酶hTERT基因表达,降低端粒酶的活性,从而诱导细胞凋亡。     

左金胃漂浮缓释片中小檗碱、巴马汀、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的体外释放规律和机制研究

目的探讨左金胃漂浮缓释片体外多成分释放的规律和机制。方法采用转篮法以人工胃液为介质,以HPLC法测定左金胃漂浮缓释片中小檗碱、巴马汀、吴茱萸碱和吴茱萸次碱在8 h内的体外累积释放率,通过相似因子比较法、Higuchi方程,零级、一级释放方程等释放模型拟合法以及Peppas方程研究左金胃漂浮缓释片多成分释放的规律。结果左金胃漂浮缓释片中4种生物碱的平均释放曲线相互之间的相似因子均大于80%,均以Higuchi释放模型为最佳拟合模型,释放机制均为扩散协同骨架溶蚀作用。结论左金胃漂浮缓释片中生物碱类成分的释放具有均衡缓释性。     

马钱子碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、细胞周期的影响及其作用机制

目的:探讨马钱子碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、细胞周期的影响及其作用机制.方法:体外培养HT-29细胞,加入不同浓度马钱子碱,用MTT法检测对HT-29细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测对HT-29细胞周期的影响.采用Western blot法检测细胞中Bcl-2、caspase3、caspase9、P53、c-PA...     

吴茱萸碱抑制HDAC6促进人白血病K562细胞周期阻滞和凋亡的机制研究

目的探讨吴茱萸碱通过抑制组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)促进人白血病K562细胞周期阻滞以及凋亡的机制。方法采用CCK-8法检测吴茱萸碱对K562细胞增殖的影响;流式细胞术检测K562细胞周期和凋亡;化学比色法检测K562细胞HDAC6活性;Western blotting法检测K562细胞中HDAC6、Cyclin D1、CDK4、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、ERK、p-ERK、p38和p-p38蛋白的表达。结果 CCK-8法结果提示,吴茱萸碱在一定浓度范围内(1~16μmol/L)可以有效抑制K562细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;流式细胞术结果显示,吴茱萸碱可将K562的细胞周期阻滞于G0/G1期;2、4、8μmol/L吴茱萸碱诱导K562细胞48 h后,其凋亡率分别为(11.47±1.05)%、(12.77±0.79)%和(18.58±1.37)%,与对照组(2.79±1.01)%相比差异显著(P0.01);化学比色法结果显示,吴茱萸碱能有效抑制HDAC6的活性;Western blotting结果显示,吴茱萸碱能上调Bax、Cleaved Caspase-3、p38和p-p38蛋白的表达,下调CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、HDAC6、ERK和p-ERK蛋白的表达。结论吴茱萸碱可能是通过抑制HDAC6的活性,激活MAPK信号通路,进而上调促凋亡蛋白的表达,下调周期蛋白的表达,从而抑制K562细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡。     

小檗碱对结肠炎小鼠Th17/Treg细胞分化及IL-35的影响

目的研究Th17、Treg细胞分化及白细胞介素-35(IL-35)在小鼠结肠炎发病中的作用,探讨小檗碱对小鼠结肠炎的治疗作用和作用机制。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组和小檗碱组,每组10只。正常组未行造模,其余3组均采用三硝基苯磺酸进行结肠炎造模。造模24 h后,小檗碱组小鼠给予小檗碱腹腔注射,地塞米松组小鼠给予地塞米松腹腔注射,模型组和正常组小鼠均以生理盐水腹腔注射,均1次/d,共7 d。第8天处死各组小鼠,观察小鼠结肠黏膜大体形态及组织病理评分,用流式细胞仪检测小鼠脾脏Th17、Treg细胞分化情况,ELISA法检测小鼠结肠组织中IL-35表达情况。结果与正常组比较,模型组小鼠脾脏Th17细胞比例显著升高(P 0. 05),Treg细胞比例显著降低(P 0. 05),结肠组织中IL-35表达水平显著降低(P 0. 05);与模型组比较,小檗碱组、地塞米松组小鼠脾脏Th17细胞比例显著降低(P均0. 05),而Tregs细胞比例显著升高(P均0. 05),且结肠组织中IL-35表达水平显著升高(P均0. 05)。结论脾脏Th17/Treg细胞失衡,促炎细胞Th17细胞分化增加、免疫抑制细胞Treg细胞降低及结肠IL-35分泌减少参与了结肠炎的发生发展过程,而小檗碱可以通过抑制小鼠脾脏Th17细胞分化,促进Treg细胞分化和IL-35表达,起到减轻结肠黏膜炎症的作用。     

小檗碱吴茱萸碱联用对AGS细胞TNF-α和IL-8含量的影响

目的: 观察小檗碱吴茱萸碱对胃癌细胞株(AGS)细胞增殖及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL-8)含量的影响。方法: 采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法测定小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对AGS细胞生长的影响;流式细胞技术检测小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对AGS细胞细胞周期的影响;ELISA法测定小檗碱、吴茱萸碱及两药联用 对AGS细胞TNF-α和IL-8含量的影响。结果: 小檗碱15 μmol·L^-1和吴茱萸碱45 μmol·L^-1联用时对AGS细胞增殖的抑制作 用弱于吴茱萸碱单用;小檗碱83 μmol·L^-1和吴茱萸碱1.4 μmol·L^-1 联用时对AGS细胞增殖的抑制作用稍优于两药单用,两药联用阻滞细胞周期于G₂/M期的作用较两药单用无显著差异。进一步研究发现,小檗碱83 μmol·L^-1和吴茱萸碱1.4 μmol·L^-1联用增加AGS细胞培养上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的作用优于两药单用。小檗碱具有降低AGS细胞培养上清IL-8含量的趋势,而吴茱萸碱能够显著增强AGS细胞培养上清IL-8的含量(P <0.01),两药联用能够显著降低AGS细胞培养上清中IL-8的含量(P <0.01)。结论: 不同剂量的小檗碱吴茱萸碱联用对AGS细胞增殖的影响不同。小檗碱能够抑制吴茱萸碱诱导的AGS细胞IL-8的表达上调。     

小檗碱与吴茱萸碱联用对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的：观察小檗碱与吴茱萸碱联用对结直肠癌HCT116、RKO细胞迁移、侵袭能力的影响,并探究其可能机制。方法：细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测小檗碱(30μmol·L^-1)、吴茱萸碱(0.8μmol·L^-1)及两药联用(30+0.8μmol·L^-1)对HCT116及RKO细胞增殖的抑制作用;划痕实验、转移小室(Transwell)实验检测小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对HCT116及RKO细胞迁移、侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小檗碱、吴茱萸碱及两药联用对HCT116及RKO细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)蛋白表达的影响。结果：与空白组比较,小檗碱组和吴茱萸碱组对HCT116及RKO细胞增殖、迁移、侵袭能力无明显抑制作用,两药联用组能显著抑制HCT116及RKO细胞增殖、迁移、侵袭能力(P<0.01);与空白组比较,小檗碱组和吴茱萸碱组对HCT116及RKO细胞中PI3K、...     

吴茱萸碱在诱导小鼠纤维肉瘤L929细胞凋亡过程中对细胞周期的阻滞作用

目的研究吴茱萸碱体外诱导 L929细胞死亡的机制。方法用 MTT 法测定吴茱萸碱对 L929的细胞毒作用。通过倒置显微镜,荧光染色,观察 L929在吴茱萸碱作用下的形态学变化,用 LDH 活力测定法证明凋亡途径,用流式细胞分析技术研究昊茱萸碱对细胞周期的影响。结果 MTT 法测定不同浓度吴茱萸碱明显抑制 L929生长,并具有剂量依赖性。吴茱萸碱可诱导 L929凋亡,呈现凋亡小体,亚二倍体峰出现,但无典型因凋亡引起的 DNA 梯状泳带。低剂量5μmol·L~(-1)吴茱萸碱可将细胞周期阻滞在 G_2/M 期,而高剂量20μmol·L~(-1)吴茱萸碱可将细胞周期阻滞在 G_0/G_1 期。结论在吴茱萸碱诱导 L929凋亡过程中低剂量将细胞周期阻滞在 G_2/M 期,而高剂量则引起 G_0/G_1期阻滞。     

小檗碱在结直肠癌治疗中的作用机制研究进展

结直肠癌（colorectal cancer,CRC）作为国内外常见的恶性肿瘤,严重影响人们的生命健康,传统的治疗手段对生存期的改善有限,因此,寻求新的治疗方式成为目前研究的热点之一。其中,植物化合物小檗碱对于CRC的治疗作用逐渐受到关注,它具有抑制肿瘤细胞的增殖迁移、促进肿瘤细胞的自噬凋亡、改善肠道菌群及代谢等作用。通过对小檗碱在结直肠癌治疗中的作用机制进行综述,为进一步开发小檗碱的抗肿瘤作用以及形成中医药治疗CRC的治疗策略提供一定的理论参考。     

miR-92a对人胃癌细胞株生物特性的影响及机制研究

目的探讨miR-92a对人胃癌细胞株生物特性的影响及可能的分子机制。方法在人胃癌细胞(SGC-7901)中瞬时转染miR-92a inhibitor,采用CKK-8法检测细胞株增殖情况,采用TUNEL方法检测细胞凋亡情况,采用Transwell迁移和侵袭实验观察细胞转移情况,并采用Western blot方法检测Bcl-2、Survivin蛋白表达情况。结果人胃癌细胞株在瞬时转染miR-92a inhibitor后,细胞增殖能力明显降低(P<0.05),凋亡明显增加(P<0.05),迁移和侵袭的细胞数量明显较少(P<0.05),Western blot检测结果显示Bcl-2、Survivin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论 miR-92a可以促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡,其可能通过调控Bcl-2、Survivin来促进胃癌的发生。     

去甲斑蝥素干扰HL-60肿瘤细胞周期及其机制研究

目的明确去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对肿瘤细胞周期的影响,进一步阐明NCTD的抗肿瘤作用机制。方法体外培养HL-60细胞,NCTD作用后采用3H-TdR掺入实验检测DNA复制;流式细胞术检测细胞周期进程;Western blotting检测细胞周期调控蛋白Cdk1、Cyclin B1、Cdc 25c表达变化。结果不同浓度(16~128μmol/L)NCTD作用于HL-60细胞12 h后,DNA复制受到抑制,细胞周期出现明显的S期累积,并呈剂量依赖性趋势;同时观察到G2/M的阻滞,且调控G2/M周期进程的调节蛋白Cdk1、Cyclin B1及Cdc 25C蛋白表达下调。结论 NCTD可抑制HL-60细胞DNA复制、下调周期调控蛋白从而干扰肿瘤细胞的周期进程。     

伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响

目的研究伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响。方法通过MTT法比较在31.25μmol/L、62.50μmol/L、125μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L共6个浓度的伪士的宁培养24小时、48小时、72小时后对HT-29细胞增殖的抑制作用;通过显微镜细胞观察法检测细胞生长状态;利用流式细胞术检测250μmol/L伪士的宁对HT-29细胞周期的影响。结果伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞有一定的抑制作用,其抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,1000μmol/L培养72小时作用最显著,抑制率为97.47%;随着伪士的宁浓度增加,作用时间增大,HT-29细胞密度逐渐变小,局部可见固缩细胞或死亡细胞。伪士的宁(250μmol/L)作用于HT-29细胞后,与空白组相比,G1期细胞数量明显增加,S期细胞数量不变,G2期细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.05),表明伪士的宁可诱使HT-29细胞在G1期发生阻滞,诱导细胞凋亡。结论伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞增殖具有显著抑制作用,且其作用呈现时间依赖和剂量依赖关系,其抑制作用机制可能与阻滞细胞周期有关。     

miR-29a调控心肌肥大的分子机制研究

目的探讨miR-29a调控心肌肥大的分子机制。方法利用荧光素酶报告基因实验验证miR-29a与其潜在靶基因PPARδ/β的靶向关系。体外分离培养新生SD大鼠心肌细胞,分别以5 mmol/L葡萄糖(正常组)、25 mmol/L葡萄糖(高糖诱导组)和转染miR-29a抑制剂+25 mmol/L葡萄糖(实验组)培养48 h,应用Image J软件测量单细胞表面积,用qRT-PCR法检测各组miR-29a以及心肌肥大标志基因β-MHC和BNP mRNA的表达,采用Western blot法检测各组心肌细胞PPARδ/β蛋白表达情况。结果荧光素酶报告基因实验显示调控能量代谢的基因PPARδ/β是miR-29a的潜在靶点。高糖诱导组单细胞表面积,β-MHC、BNP mRNA表达水平和miR-29a表达水平均明显高于正常组(P均<0.05),而PPARδ/β蛋白表达水平显著低于正常组(P<0.05);实验组单细胞表面积,β-MHC、BNP mRNA表达水平和miR-29a表达水平均明显低于高糖诱导组(P均<0.05),PPARδ/β蛋白表达水平显著高于高糖诱导组(P<0.05),各指标与正常组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 miR-29a通过影响心肌细胞的能量代谢而调控心肌肥大。     

小檗碱对人非小细胞肺腺癌细胞迁徙转移的影响及其分子机制的研究

目的:观察低剂量的小檗碱的抗肿瘤活性,并探讨其抑制肿瘤细胞增殖及肿瘤转移的分子机制。方法:以人非小细胞肺腺癌A549为模型,用0、5、10、20、30μmol/L的小檗碱处理处于对数期增长的A549细胞24小时或者30μmol/L的小檗碱处理细胞不同时间。侵袭小室以及基质凝胶转移实验检测A549细胞的侵袭与迁移能力;免疫印迹方法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、上皮钙黏素(E-Cadherin,N-Cadherin)以及细胞信号转导分子(Stat3)的表达。结果:20、30μmol/L小檗碱孵育A549细胞48h后,其迁移与侵袭率显著降低;免疫印迹结果显示小檗碱能显著抑制Stat3转移到细胞核内;此外,抑制Stat3表达后,能显著抑制MMP以及N-Cadherin而增强E-Cadherin的表达。结论:小檗碱通过抑制Stat3转移到细胞核从而调节MMP的表达和A549细胞转移和迁徙。     

补骨脂酚诱导人乳腺癌MCF-7细胞S期周期阻滞及机制研究

目的研究补骨脂酚对人乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用及其机制。方法采用噻唑蓝法(MTT法)考察补骨脂酚对MCF-7细胞生长的影响;采用流式细胞术检测补骨脂酚处理后细胞周期分布情况及活性氧(ROS)的产生;利用荧光显微镜观察补骨脂酚对MCF-7细胞核的影响;采用蛋白免疫印迹法检测补骨脂酚作用下MCF-7细胞凋亡、周期相关蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族蛋白的表达;引入ROS清除剂及MAPK家族蛋白抑制剂考察其在补骨脂酚作用下对MCF-7细胞生长抑制率和细胞周期相关蛋白表达的影响。结果补骨脂酚可以呈时间、剂量依赖性抑制MCF-7细胞生长,其抑制作用明显强于阳性药5-氟尿嘧啶。补骨脂酚可诱导MCF-7细胞产生ROS,同时上调p-p53及p21蛋白表达水平,下调细胞周期相关蛋白CDK2和CyclinA2表达水平,进而引起细胞发生S期阻滞。而上述影响可被ROS清除剂Tiron逆转,表明ROS参与补骨脂酚诱导的S期阻滞。加入p38MAPK抑制剂SB203580后,细胞产生的ROS水平降低,表明ROS的产生依赖于p38MAPK途径。结论补骨脂酚抑制MCF-7细胞增殖的作用与其引起细胞发生S期阻滞有关,ROS参与S期阻滞过程。     

吴茱萸碱对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用

目的探讨吴茱萸碱对小鼠肝癌细胞H22的生长抑制、诱导凋亡和对细胞周期的影响.方法体外试验MTT法测存活率,甲基绿-派诺宁联合染色观察细胞凋亡形态,流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察DNA损伤及细胞周期.结果吴茱萸碱0.5、1、2、4mg/L浓度组对小鼠肝癌细胞H22作用72h细胞存活率分别为60.3±6.6%、54.0±4.3%、40.7±4.8%、26.9±0.9%,作用24h、48h和72h的IC50依次为4.2、3.3和1.4mg/L.甲基绿-派诺宁染色后0.5、1mg/L吴茱萸碱组癌细胞均表现出凋亡特征;2mg/L吴茱萸碱组部分癌细胞开始出现坏死特征;4mg/L有较多癌细胞坏死.48h流式细胞仪检测表明1、2mg/L吴茱萸碱组出现亚二倍体凋亡峰,细胞周期阻滞于G2期,4mg/L吴茱萸碱组亚二倍体凋亡峰不典型,出现坏死单峰.凋亡率对照组为1.2、1、2和4mg/L吴茱萸碱分别为6.4、9.1和11.2%.48h琼脂糖凝胶电泳表明,4mg/L吴茱萸碱组细胞DNA裂成大片段,DNA损伤呈凋亡特征.结论吴茱萸碱能诱导小鼠肝癌细胞H22的凋亡.     

黄连素调节miR-29b抑制高糖诱导的MPC-5足细胞上皮-间质转化研究

[目的]探讨miR-29b在高糖诱导的MPC-5足细胞上皮-间质转化中的作用及黄连素的保护机制.[方法]将MPC-5小鼠足细胞分为正常组、高糖组和高糖+50μmol/L黄连素组,培养48 h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液上清液中的重组人转化生长因子-β1(TGF-β1),实时定量聚合酶链反应(RT-qP...