固相萃取HPLC法研究黄芪总苷、黄芪甲苷在大鼠体内的黄芪甲苷血药浓度

目的 建立了固相萃取HPLC测定大鼠血清中黄芪甲苷含量的方法,比较黄芪总苷(AST)、黄芪甲苷(AST-Ⅳ)在大鼠腹腔注射给药后相同时间大鼠血清中AST-Ⅳ的含量.方法 分别以AST、AST-Ⅳ(按AST-Ⅳ计20 mg/kg相等剂量)二种药物大鼠腹腔注射,给药后30,60,75,90,105,120 min测定大鼠血清中AST-Ⅳ的含量,并对两种药物结果 进行分析、比较.结果 在大鼠腹腔注射等量AST-Ⅳ,测得AST、AST-Ⅳ两种药物各时点血清中AST-Ⅳ浓度前者均是后者3倍以上,且最高浓度前者是后者的3.5倍.结论 以AST-Ⅳ血药浓度为指标,AST较AST-Ⅳ更易于吸收.     

黄芪总苷及黄芪甲苷对糖皮质激素诱导衰老大鼠氧自由基代谢的影响

目的：探讨黄芪总苷(astragaloside,AST)及黄芪甲苷(astragalus saponin I, ASI) 对糖皮质激素诱导老前期大鼠衰老模型的延缓衰老作用及自由基代谢和免疫调节的影响。方法：用氢化可的松((hydrocorisone, HC,10 mg·kg^-1,sc,21 d)建立老前期大鼠的衰老模型,用Y迷宫检测大鼠的学习记忆功能；采用试剂盒检测衰老大鼠的肝和脑中MDA含量、SOD和CAT的活性以及GSH和GSSG的含量；采用Con A诱导测定大鼠脾淋巴细胞增殖反应,采用大鼠脾细胞增殖法测定IL-2活性。结果：与模型组比较,AST和ASI能改善HC诱导老前期大鼠衰老模型组大鼠的记忆功能,能降低肝和脑中MDA和GSSG含量,升高GSH含量,升高SOD和CAT活性,促进脾淋巴细胞增殖和IL-2活性。结论：HC可以促进老前期大鼠衰老,AST和ASI对HC诱导老前期大鼠衰老具有延缓作用,其机制可能与其抗氧化作用和调节免疫有关。     

黄芪总苷对脾虚大鼠胃黏膜保护机制探讨

目的:探讨黄芪总苷对冷水-束缚应激状态下脾虚大鼠胃黏膜H+,K+-ATP酶活性及mRNA表达变化、胃蛋白酶活性及髓过氧化物MPO活性的影响。方法:SD大鼠70只分为7组,即正常对照组,脾虚组,模型(脾虚应激)组,黄芪总苷(200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg)组,补中益气丸组。采用经典大黄致脾虚法复制脾虚模型大鼠,水浸-束缚法给予脾虚大鼠应激,观察胃黏膜损伤指数,无机磷法检测胃黏膜H+,K+-ATP酶、胃蛋白酶及MPO活性的变化,RT-PCR法测定H+,K+-ATP酶mRNA表达变化。结果:正常对照及脾虚组大鼠胃黏膜未见溃疡损伤,经冷水-束缚应激后的模型组、补中益气丸组、黄芪总苷(高、中、低)组大鼠胃黏膜可见点状或条索状溃疡损伤,且与模型组相比黄芪总苷中剂量及高剂量组、补中益气丸组明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜H+,K+-ATP酶活性、胃蛋白酶及髓过氧化物MPO活性值,H+,K+-ATP酶mRNA表达明显增高(P<0.05),而脾虚组降低(P<0.05)。与模型组相比,补中益气丸组、黄芪总苷(中、高)剂量组H+,K+-ATP酶活性、胃蛋白酶及髓过氧化物MPO活性值,H+,K+-ATP酶mRNA表达均有所下降(P<0.05)。结论:黄芪总苷对脾虚大鼠胃黏膜的保护作用机制之一与影响胃蛋白酶、H+,K+-ATP酶活性及其mRNA表达有关。     

黄芪总苷通过调控SIRT1表达对胆汁淤积性肝纤维化小鼠的影响

目的 探究黄芪总苷对胆汁淤积性肝纤维化小鼠的影响及其作用机制。方法 采用2种胆汁淤积性肝纤维化模型,0.1%DDC喂养C57BL/6小鼠8周,第5周起灌胃给予黄芪总苷112、56 mg/kg和奥贝胆酸4周;Mdr2^-/-小鼠8周龄时灌胃给予黄芪总苷56、28 mg/kg和奥贝胆酸3周,对照组和模型组分别灌胃给予等体积蒸馏水。给药结束后检测各组小鼠肝质量与肝脏系数、血清肝功能、肝组织病理学变化和肝组织纤维化相关指标的表达。结果 与对照组比较,DDC和Mdr2^-/-模型组小鼠肝质量和肝脏系数均升高(P<0.01),血清ALT、AST、ALP活性和TBA、胆红素水平均升高(P<0.01),肝组织病理可见结构紊乱、大量炎性细胞浸润,汇管区胶原沉积,胶原阳性面积和肝组织HYP水平均增加(P<0.01),肝组织α-SMA、Col1a1、Col4a1和TGF-β1表达均升高(P<0.01),SIRT1表达降低(P<0.01)。在2种模型中,与模型组比较,黄芪总苷56 mg/kg组小鼠肝质量和肝脏系数均降低(P<0.05,...     

黄芪总苷的药理研究进展

黄芪总苷具有广泛的药理作用,包括①抗病毒:具有体外抗Ⅱ型人疱疹病毒、抗乙肝病毒、保护被病毒感染心肌细胞的作用;②保肝:对肝损伤有明显的保护作用,能抑制体外激活肝星状细胞的增殖和胶原产生,抑制人肝癌细胞株的增殖,诱导肝癌细胞凋亡;③抑瘤作用;④改善心脏功能;⑤抗炎镇痛、抑制滑膜成纤维细胞增殖.     

黄芪地上部分黄芪总苷动态规律的研究

目的:探讨黄芪地上部分最佳采收时期。方法:测定不同采收时期的黄芪地上部分的产量和黄芪总苷含量及不同时期割去地上部分的黄芪根的产量和黄芪总苷含量。结果:果盛期黄芪地上部分产量最高,黄芪总苷含量最高,果盛期割去地上部分的黄芪根的产量及黄芪总苷的含量与枯萎期(成熟期)相近。结论:果盛期为黄芪地上部分最佳采收时期。     

黄芪总苷对大鼠神经元缺氧/复氧损伤的影响

目的 探讨黄芪总苷（astragalosides, AST）对大鼠神经元缺氧/复氧损伤的影响。 方法 建立原代培养的大鼠海马神经元的缺氧/复氧模型。采用四唑蓝（MTT）法和乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞活力;检测细胞上清液中丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性;Hoechst染色和AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;采用激光共聚焦显微镜和Ca2+荧光探针Fluo-3/AM观察细胞内游离钙[Ca2+]i。 结果 黄芪总苷可以提高缺氧/复氧后神经元的活力,降低细胞上清液中MDA和NO含量,提高SOD活性,降低细胞凋亡率,减轻神经元内的钙超载。 结论 黄芪总苷对缺氧/复氧损伤的神经元具有保护作用,其机制可能与抗氧化和减轻钙超载有关。     

HPLC-ELSD同时测定当归补血总苷中黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅱ

目的 建立HPLC-ELSD测定当归补血总苷(黄芪、当归)中的黄芪甲苷和黄芪皂苷Ⅱ的方法.方法 色谱柱Kromail C18(4.6mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水(37.5∶62.5);体积流量0.8 mL/min;ELSD参数:漂移管温度100℃;N2气流体积流量2.60 L/min.结果 黄芪甲苷在0.85 ～6.76 μg之间呈良好的线性关系(r=0.999 2),平均回收率为98.8％,RSD为1.50％.黄芪皂苷Ⅱ在1.05～8.4 μg之间呈良好的线性关系(r=0.999 4),平均回收率为95.7％,RSD为2.70％.结论 该法精密度、重复性良好,简便、快速、准确,适用于当归补血总苷中黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ的测定.     

黄芪总苷及黄芪甲苷对糖皮质激素诱导老前期大鼠记忆损伤的保护作用及机制

目的:探讨黄芪总苷(astragaloside,AST)及黄芪甲苷(astragalus saponin I,ASI)对糖皮质激素诱导老前期大鼠记忆障碍的延缓作用及对胸腺和海马神经元胞浆钙[Ca~(2+)]_i和凋亡的影响.方法:用氢化可的松((hydrocorisone,HC,10 mg·kg~(-1),sc,21 d)建立老前期大鼠的衰老模型,用Y迷宫检测大鼠的学习记忆功能;在体外用地塞米松(dexamethasone,DEX,1 μmol·L(-1))诱导胸腺细胞和海马神经元,Fura-2/AM负载法检测大鼠胸腺细胞和海马神经元[Ca~(2+)]_i,琼酯糖凝胶电泳检测DNA梯度和流式细胞仪检测凋亡情况.结果:与模型组比较,AST和ASI能改善HC诱导老前期大鼠衰老模型组大鼠的记忆功能,增加大鼠体重、脑指数和胸腺指数;AST和ASI能够抑制DEX诱导的胸腺细胞和海马神经元[Ca~(2+)]_i的升高和凋亡.结论:AST和ASI对HC诱导老前期大鼠记忆障碍具有延缓作用,其机制可能与抑制海马神经元[Ca~(2+)]_i升高和凋亡有关.     

黄芪总皂苷与赤芍总苷协同抗血栓作用

运用肺栓塞、动脉血栓形成、脑血栓形成三种实验性血栓形成模型 ,观察黄芪总皂苷 (AS)和赤芍总苷 (TSP)以各种剂量配伍时的作用 ;结果AS和TSP均具有不同程度抗各种实验性血栓形成作用或趋势 ,配伍后作用更佳 ,抗凝作用则源于赤芍总苷 ,应用二因素五水平均匀设计方法观察到AS 5 0mg kg和TSP 15 0mg kg配伍时抗动脉血栓形成作用最佳 ,该剂量下两药配伍对于大鼠脑血栓有相加的保护作用。表明AS和TSP有协同抗血栓形成作用。     

补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜TFF1mRNA与蛋白表达的影响

目的:观察脾虚大鼠胃粘膜TFF1mRNA与蛋白表达变化及补中益气汤对其表达的影响,并探讨相关作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白对照、脾虚损伤、补中益气汤、非脾虚损伤组。脾虚损伤组、补中益气汤组大鼠给予100%大黄水煎剂灌胃,一天2次,连续10天。第11天补中益气汤组给予补中益气汤灌胃治疗7天。第18天,除空白对照组外,另三组灌服消炎痛溶液造成胃粘膜损伤,采用逆转录PCR(RT-PCR)检测TFF1mRNA,采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测TFF1蛋白表达的变化。结果:与非脾虚损伤组比较,脾虚损伤组大鼠胃粘膜TFF1mRNA、TFF1蛋白表达明显降低;与脾虚损伤组比较,补中益气汤组大鼠胃粘膜TFF1mRNA、蛋白明显上调。结论:脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜TFF1mRNA、蛋白表达显著下调,提示脾虚大鼠胃粘膜防御能力减弱,补中益气汤可提高脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜TFF1mRNA与蛋白的表达,这可能是补中益气汤保护胃粘膜,降低脾虚大鼠胃粘膜易损性的机理之一。     

七方胃痛胶囊对实验性胃溃疡大鼠表皮生长因子及其受体的影响唐梅文

目的：探讨中药七方胃痛胶囊抗溃疡的机制及提高溃疡愈合质量的应用价值。方法：40只Wistar大鼠制作乙酸诱发大鼠胃渍疡模型后第3天随机分为对照组、雷尼替丁胶囊、七方胃痛胶囊大、小剂量4组。取胃组织测量溃疡面积。观测再生粘膜纽织炎症细胞数、新生血管数，并测定表皮生长因子（EGF）及受体（EGFR）的表达情况。结果：1．七方胃痛胶囊纽溃疡指数明显低于雷尼替丁组和对照组（P〈0．05，P〈0．01）；2．七方胃痛胶囊组的再生粘膜的新生血管数明显高于雷尼替丁组和对照组（P〈0．05，P〈0．01），固有层炎症细胞浸润数明显低于雷尼替丁组和对照组（P〈0．05，P〈0．01）：3．七方胃痛胶囊组溃疡边缘粘膜组织的EGF与EGFR的表达明显高于雷尼替丁组和对照组（P〈0．05，P〈0．01）。结论：七方胃痛胶囊抗溃疡的作用机制与增加EGF与EGFR的表达有关，且能增加再生粘膜的新生血管生成，降低渍疡指数与炎症细胞浸润，对于提高溃疡愈合质量有一定的价值。     

Effect of herbal cake-partitioned moxibustion on MEK1/2 and ERK1/2 expressions of gastric tissues in rats with spleen deficiency syndrome

Objective

To observe the effect of herbal cake-partitioned moxibustion on the expressions of mitogen-activated protein kinase (MEK1/2) and extracellular regulatory protein kinase (ERK1/2) in gastric tissues of rats with spleen deficiency syndrome, and to explore the possible mechanisms of herbal cake-partitioned moxibustion in treating spleen deficiency syndrome.

Methods

Sixty Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into a blank control group (group A), a model group (group B), a ranitidine group (group C), and a herbal cake-partitioned moxibustion group (group D) by random digit, 15 rats in each group. Rat models of spleen deficiency syndrome were made by intragastric administration of 4 °C 200% concentrated Da Huang (Radix et Rhizoma Rhei). After successful modeling, the rats in group C were treated with 25 mg/(kg·bw) ranitidine by intragastric adminstration and rats in group D were treated with herbal cake-partitioned moxibustion at Zusanli (ST 36) and Zhongwan (CV 12), for 8 d. Excepted for rats in group A, all the other rats were treated with indomethacin at 5 mg/(kg·bw) at 8:00 a.m. on the second day after finishing all the intervention and sacrificed 7 h later to isolate the stomach. Histopathological changes of the gastric tissues were observed under light microscope after hematoxylin-eosin (HE) staining. The protein expressions of MEK1/2 and ERK1/2 in the gastric tissues were detected by immunohistochemistry.

Results

After intervention, the gastric mucosal injury in group B was significantly severer than that in group A, with large breakage and ablating; the damage of gastric mucosa was decreased in group C compared with group B; the gastric mucosal surface remained relatively complete, and the status of breakage and ablating was significantly improved. After intervention, compared with group A, the protein expressions of MEK1/2 and ERK1/2 in gastric tissues of the other groups were significantly higher (P<0.01). Compared with group B, the protein expressions of MEK1/2 and ERK1/2 in group C and D were significantly higher (all P<0.01). Compared with group C, the protein expressions of MEK1/2 and ERK1/2 in group D were significantly higher (P<0.01).

Conclusion

Herbal cake-partitioned moxibustion promotes the repair of gastric mucosa in rats with spleen deficiency syndrome, via improving protein expressions of MEK1/2 and ERK1/2 in gastric tissues, as well as activating MEK/ERK signaling pathway.

     

冷水束缚应激下脾虚大鼠胃黏膜H~+,K~+-ATP酶活性及mRNA的表达变化

目的观察脾虚大鼠模型在冷水束缚应激负荷下,胃黏膜损伤程度与H+,K+-ATP酶活性及基因表达的变化。方法 SD大鼠随机分为正常组、脾虚组、应激组、脾虚应激组。采用100%大黄水煎液灌胃10 d造成脾虚模型。冷水束缚应激负荷6 h后观察各组大鼠胃黏膜损伤指数,用无机磷法测定胃黏膜H+,K+-ATP酶的活性;用RT-PCR法检测胃黏膜H+,K+-ATP酶mRNA的表达。结果脾虚大鼠胃黏膜肉眼未见明显损伤,应激及脾虚应激组大鼠胃黏膜均出现点状及条索状损伤,且脾虚应激组损伤程度更为显著。脾虚组H+,K+-ATP酶活性及mRNA的表达率较正常组低(P均<0.05);应激及脾虚应激组H+,K+-ATP酶活性及mRNA的表达较正常组高(P均<0.05);且脾虚应激组大鼠H+,K+-ATP酶活性及mRNA的表达增高幅度有所增大。结论脾虚大鼠在冷水束缚应激状态下胃黏膜易损伤性增高,其机制之一可能与脾虚应激后胃黏膜H+,K+-ATP酶功能升高有关。     

电针腧穴"胃病方"对胃黏膜损伤大鼠EGF及 EGFR mRNA 表达的调节

目的:探讨电针腧穴"胃病方"治疗急性胃黏膜损伤的作用机制。方法:将40只清洁级Wistar大鼠随机分为4组,即空白对照组(正常组)、假模型组、模型组、胃病方组,每组10只。采用无水乙醇灌胃法造模。胃病方组取"内关""中脘"和"足三里",针刺入穴位后施以疏密波,频率10~30Hz,电流强度2mA,以大鼠肢体微颤为宜,电针20min。治疗结束1h后,取大鼠腹动脉血液及胃黏膜组织,采用酶联免疫吸附法检测血清中表皮生长因子(EGF)及逆转录-多聚酶链反应法测胃黏膜上皮表皮生长因子受体(EGFR)mRNA表达。结果:模型组大鼠血中EGF含量为41.62±12.58ng/L,胃黏膜中EGFR mRNA表达为0.78±0.03,与正常组[(60.37±12.01)ng/L,0.55±0.04]及假模型组[(61.21±13.46)ng/L,0.53±0.05]相比,差异有统计学意义(均P<0.05)。胃病方组电针后,EGF的含量升高[(70.59±10.14)ng/L],胃黏膜上皮EGFR mRNA表达上调(1.18±0.02),与模型组相比,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:腧穴"胃病方"可能促进了胃黏膜上皮细胞增殖、分化、迁移,以修复损伤的胃黏膜。     

康胃颗粒对实验性脾虚大鼠的健脾作用

目的探讨康胃颗粒的和胃健脾作用。方法通过实验性大鼠脾虚模型,进行体液免疫、肠蠕动、健脾等实验,观察免疫、肠蠕动和体质量、症状等改善情况。结果康胃颗粒可以有效地提高大黄所致脾虚大鼠的免疫力,加快胃、肠道的蠕动速度,提高墨汁在小肠中的推进率;对于喂饲猪油脂及卷心菜所致饮食失节脾胃损伤大鼠,可促进大鼠的体质量增长,改善其泄泻、纳呆、反应迟钝、被毛枯槁等症状及增加饮食量。结论康胃颗粒具有明显的和胃健脾作用和改善胃肠道功能的作用。     

肝郁脾虚证胃溃疡大鼠胃窦组织差异蛋白质表达及柴黄胃溃宁的干预研究

目的:探讨肝郁脾虚证胃溃疡大鼠胃窦组织总蛋白质的差异表达及柴黄胃溃宁的可能疗效机制。方法:以多因素复合模拟中医病因结合乙酸法建立肝郁脾虚证胃溃疡大鼠模型,采用双向凝胶电泳技术分析模型大鼠与正常大鼠胃窦组织总蛋白质的表达差异;同时,采用笔者临床经验方柴黄胃溃宁对模型大鼠进行复健。结果:模型组大鼠的血清胃泌素、血清淀粉酶活性、血浆去甲肾上腺素和血浆5-羟色胺等指标出现紊乱,与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与正常组匹配后,模型组5个蛋白质点表达下调,2个蛋白质点表达上调;经柴黄胃溃宁治疗后,大鼠上述血清、血浆指标复健;模型组和中药组匹配后,模型组5个蛋白点表达低于中药组,1个点表达高于中药组。结论:与正常组的蛋白质可能是肝郁脾虚证胃溃疡的相关蛋白;柴黄胃溃宁对肝郁脾虚证胃溃疡的疗效可靠,其作用机制可能与调控上述目的蛋白质有关。     

四君子汤对脾虚大鼠不同脑区单胺类神经递质含量的影响

[目的]研究脾虚大鼠不同脑区单胺类神经递质含量的变化和四君子汤干预的途径.[方法]将60只大鼠分为空白对照组、脾虚组和四君子汤组,使用高效液相色谱法检测大鼠海马、下丘脑和纹状体中5-羟色胺(5-HT)和多巴胺(DA)的含量.[结果]与对照组比较,脾虚组大鼠各脑区内5-HT水平显著升高,DA水平显著下降(P<0.05);使用四君子汤干预后,5-HT和DA水平基本恢复正常,与空白对照组比较,无显著性差别.而与脾虚组大鼠比较,差异有显著性(P<0.05).[结论]四君子汤可通过改善中枢单胺类神经递质含量的途径达到健脾治疗的目的.     

自拟温中理气汤治疗脾胃虚寒型H.pylori相关性慢性萎缩性胃炎伴缺铁性贫血的疗效及对体液免疫和胃黏膜的影响

目的观察自拟温中理气汤治疗脾胃虚寒型幽门螺杆菌(H.pylori)相关性慢性萎缩性胃炎伴缺铁性贫血(IDA)的疗效及对体液免疫和胃黏膜损伤修复的影响。方法将70例H.pylori相关性慢性萎缩性胃炎伴IDA的患者随机分为观察组和对照组,每组35例,2组均进行常规的H.pylori根除治疗和补铁治疗,观察组在此基础上给予自拟温中理气汤内服,2组疗程均为2周。观察2组治疗前后腹痛、喜温喜按、腹胀、纳差、大便稀溏积分和血红蛋白(Hb)、血清铁(SI)、血清铁蛋白(SF)及血清中免疫球蛋白G(IgG)、IgA、IgM、胃泌素-17(GAS-17)、内皮素-1(ET-1)、前列腺素E_2(PGE_2)和丙二醛(MDA)水平变化情况,统计2组治疗后H.pylori根除率。结果治疗结束后2组腹痛、喜温喜按、腹胀、纳差和大便稀溏积分均明显降低,Hb、SI、SF、IgG、IgA、IgM、GAS-17和PGE_2水平均明显升高,血清ET-1和MDA均明显降低(P均0.05),且观察组上述指标改善情况均明显优于对照组(P均0.05)。观察组H.pylori转阴率略高于对照组,但差异无统计学意义(P0.05)。结论自拟温中理气汤可以有效缓解脾胃虚寒型H.pylori相关性慢性萎缩性胃炎伴IDA患者的症状和贫血指标,可能与提高机体的体液免疫功能以及促进胃黏膜损伤修复有关。