白术、黄芪糖复合物对IEC-6细胞迁移钾通道影响的研究

目的:上皮细胞迁移是胃肠黏膜损伤修复的重要环节,观察白术、黄芪糖复合物对小肠上皮IEC-6细胞迁移多胺信号通路钾通道相关指标的影响,为探讨益气健脾中药白术、黄芪胃肠黏膜损伤修复机制提供参考。方法:划痕法复制细胞迁移模型;非损伤微测法检测细胞K~+外流;Western Blot法检测Kv1.1蛋白表达;HE染色观察细胞形态;透射电镜观察细胞超微结构。结果:白术、黄芪糖复合物具有以下作用:50μg/ml均可促进细胞迁移;100μg/ml均能增加细胞K+外流;白术(50μg/ml)、黄芪(100μg/ml)糖复合物能提高钾通道蛋白Kv1.1蛋白表达;200μg/ml剂量均能逆转钾通道抑制剂4-氨基比啶(4-AP)所致的细胞迁移抑制;100、200μg/ml剂量均能改善4-AP所致的Kv1.1蛋白表达抑制和细胞空泡化。结论:白术、黄芪促进胃肠黏膜损伤修复的作用与其影响小肠上皮细胞迁移多胺信号通路钾通道相关指标有关。     

四君子汤多糖分离纯化对IEC-6细胞迁移药效活性的影响

目的：本研究对四君子汤多糖进行提取和分离纯化,观察不同多糖样品对小肠上皮细胞（IEC?6）迁移的影响,从而进行多糖纯化过程的药效活性追踪,为探讨四君子汤多糖药效物质基础提供参考。方法：①四君子汤水提醇沉得到四君子汤多糖1;经Sevag法去蛋白得到四君子汤多糖2;经DEAE?52纤维素柱层析并超纯水洗脱得到四君子汤多糖3a;经Sephadex G?100葡聚糖凝胶柱层析并超纯水洗脱得到四君子汤多糖4a和多糖4b;并以苯酚?硫酸法检测各多糖样品糖含量（以葡萄糖计）。②凝胶渗透色谱法（GPC）检测四君子汤多糖3a、多糖4a和多糖4b纯度。③在IEC?6细胞迁移模型上,观察四君子汤多糖不同样品促进细胞迁移的药效活性。结果：4种多糖样品（四君子汤多糖1、2、3a、4b）糖含量分别为71.35%、75.45%、81.00% 和98.50%,其促进细胞迁移的最低有效剂量分别为200、100、50、30mg·L^?1;表明纯化步骤最多的多糖4b糖含量最高、药效最优,且GPC 法测得其为均一性多糖组分。结论：四君子汤多糖经不同纯化步骤后,糖含量和纯度提高,药效活性随之增强,研究结果为探讨四君子汤促进细胞迁移的药效物质基础研究提供参考。     

四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6迁移的影响

目的:观察四君子汤总多糖(PPS)在黏膜损伤后对小肠上皮细胞修复的影响。方法:采用大鼠小肠上皮细胞株IEC-6制成细胞迁移模型,观察四君子汤PPS在造模后0 h8、h及24 h对细胞迁移面积的影响。结果:四君子汤在细胞迁移的8 h及24 h,对IEC-6的细胞迁移均有促进作用。而其最佳剂量集中于100~400μg/ml范围内。结论:四君子汤可促进胃肠道黏膜损伤的修复,其机制与促进细胞迁移有关。     

白术甲醇提取物对小肠上皮细胞增殖、迁移及磷脂酶C-γ1表达的影响

目的观察白术甲醇提取物(以下简称白术提取物)对小肠上皮细胞(IEC-6)增殖、迁移及磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)表达的影响,旨在探讨益气健脾中药白术促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法细胞分为空白组,精脒(5μmol/L)组,白术提取物(50、100、200 mg/L)组;负荷实验设α-二氟甲基鸟氨酸[(α-difluoromethylornithine,DFMO)多胺合成抑制剂]组,精脒+DFMO组,白术提取物(50、100、200 mg/L)+DFMO组。细胞贴壁培养24 h,给予受试药培养相应时间后,采用实时细胞分析仪(Real-time Cell Analyzer,RTCA)观察白术提取物对IEC-6细胞增殖的影响;划痕法检测白术提取物对IEC-6细胞迁移数目的影响;采用荧光定量PCR法和Western blot法检测PLC-γ1 m RNA及其蛋白表达。结果与空白组比较,白术提取物对细胞增殖无明显影响(P0.05),精脒和白术提取物(100、200 mg/L)对细胞迁移均有促进作用(P0.01),并能增加细胞迁移过程PLC-γ1 m RNA和蛋白表达(P0.01)。与DFMO组比较,精脒、白术提取物(100、200mg/L)能逆转DFMO所致的细胞迁移抑制及PLC-γ1 m RNA及其蛋白表达的抑制作用(均P0.01)。结论白术提取物可通过促进多胺介导的上皮细胞迁移发挥修复胃肠黏膜损伤作用,细胞增殖不是其主要药效作用。     

黄芪和白术提取物对IEC-6细胞迁移的影响

目的 筛选益气健脾中药黄芪和白术促进小肠上皮细胞(IEC-6)迁移的有效提取部位.方法 以系统溶剂分离法从黄芪、白术药材分别得到糖复合物、正丁醇萃取物、醇沉上清液以及大孔树脂吸附后70%乙醇洗脱部位作受试药.IEC-6细胞接种于6孔板并培养24 h,划痕法造细胞迁移模型,划痕后加入各受试药,24 h后观察细胞迁移情况;并进一步观察具有促进细胞迁移的有效部位对二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致细胞迁移抑制的影响.结果 50 mg·L-1的黄芪糖复合物或白术糖复合物能促进细胞迁移(P＜0.01);黄芪、白术的正丁醇萃取物、醇沉上清液、大孔树脂吸附后醇洗脱部位对细胞迁移均无明显影响;2.5 mmol·L-1的DFMO能抑制细胞迁移(P＜0.01),加入DFMO同时加入100 mg·L-1黄芪糖复合物或200 mg·L-1白术糖复合物能使细胞迁移恢复至接近正常水平.结论 黄芪糖复合物和白术糖复合物能促进IEC-6细胞迁移,还能使DFMO所致的细胞迁移抑制恢复至接近正常水平.     

四君子汤多糖对IEC-6细胞迁移、钾通道蛋白及膜电位的影响

目的:观察四君子汤多糖对小肠上皮IEC-6细胞迁移及多胺调控信号通路钾通道蛋白和膜电位的影响,探讨四君子汤修复胃肠黏膜损伤的作用机制。方法:划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察正常培养及α-二氧甲基乌氨酸(DFMO,多胺合成抑制剂)或4-氨基吡啶(4-AP,钾通道抑制剂)负荷下四君子汤多糖对IEC-6细胞迁移的影响;分别以荧光定量PCR法和Western blot法检测四君子汤多糖对IEC-6细胞钾通道蛋白kv1.1 mRNA和蛋白表达的影响;流式细胞仪检测四君子汤多糖对IEC-6细胞膜电位的影响。结果:与空白对照组比较,四君子汤多糖(40、80、160 mg/L)可促进IEC-6细胞迁移,提高IEC-6细胞kv1.1 mRNA和蛋白表达水平及细胞膜电位超极化水平(P0.05或P0.01);与DFMO模型组比较,四君子汤多糖(40、80、160 mg/L)可逆转DFMO所致细胞迁移数减少、kv1.1 mRNA和蛋白表达的降低以及细胞膜电位去极化(P0.05或P0.01);与4-AP模型组比较,四君子汤多糖(20、40、80 mg/L)可逆转4-AP所致细胞迁移的抑制、kv1.1 mRNA和蛋白表达的降低(P0.05或P0.01)。结论:四君子汤多糖可促进IEC-6细胞迁移,作用机制与影响多胺调控信号通路钾通道蛋白表达和细胞膜电位有关。     

灵芝多糖对IEC-6细胞促增殖、迁移与分化作用

 目的通过灵芝多糖作用于体外培养的大鼠小肠隐窝细胞株IEC-6细胞,观察灵芝多糖对IEC-6细胞增殖、迁移与分化的影响。方法不同浓度的灵芝多糖作用于正常IEC-6细胞44h后,用噻唑蓝(MTT)法测细胞的增殖。灵芝多糖预作用IEC-6细胞46h后,用500μmol·L^{-12O₂刺激IEC-6细胞40min,以MTT法测细胞的增殖变化。采用IEC-6单层肠上皮细胞损伤重建模型,检测灵芝多糖对IEC-6细胞迁移的影响,并用ELISA方法检测培养细胞上清中TGF-β的含量以探讨迁移途径。对细胞进行HE染色来观察IEC-6细胞的分化情况。结果灵芝多糖对正常及受H₂O₂损伤后的IEC-6细胞均有促增殖作用,并呈量效关系;10mg·L-1灵芝多糖可促进受损IEC-6细胞的迁移,但对细胞上清中TGFβ含量无影响。在10mg·L-1灵芝多糖作用下,IEC-6细胞分化程度增高。结论灵芝多糖可以促进IEC-6细胞增殖、迁移与分化。其促迁移作用是非依赖TGFβ途径的。}     

白术、黄芪、党参促进IEC-6细胞损伤后的快速修复

目的研究白术、黄芪、党参提取物对体外胃肠黏膜上皮细胞损伤的快速修复作用。方法采用Tips划痕法建立小肠上皮(IEC-6)细胞迁移模型,首先考察不同的IEC-6细胞接种密度、划痕后修复时间、不同的血清浓度以建立稳定的迁移模型;接着采用表皮生长因子(EGF)及其阻断剂AG1478对迁移模型进行评价;最后考察三味中药对IEC-6细胞迁移的作用效果。结果 (1)细胞的最佳接种密度为1×105个/m L;(2)宜在划痕后8 h计算细胞迁移率;(3)1%血清浓度为最适宜浓度;(4)EGF明显促进了IEC-6细胞迁移,AG1478明显抑制了细胞迁移;(5)白术、黄芪、党参提取物均可促进IEC-6细胞迁移。结论益气健脾中药可促进胃肠黏膜损伤后的快速修复过程,其机制是否与影响EGFR信号通路有关有待进一步研究。     

四君子汤总多糖及单味药多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞迁移作用的比较研究

目的：研究四君子汤总多糖及各单味药多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞研究迁移的影响。方法：以IEC-6细胞为研究对象，采用体外细胞迁移模型，观察四君子汤总糖及各单味多糖对该细胞迁移的影响。结果：各多糖作用存在差异，茯苓多糖具有明显抑制细胞迁移的作用，白术多糖作用不显著，甘草多糖和党参多糖具有明显促进细胞迁移的作用。当各单味药多糖与总多糖相比时，总多糖的效用优于各单味药多糖。结论：四君子汤总多糖的作用可能是各单味药多糖综合作用的结果，也提示中药复方用药具有一定的合理性。     

白术多糖调控钙离子以促进细胞迁移及E-钙黏蛋白表达的研究

目的观察白术多糖对大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)钙离子水平、细胞迁移和E-钙黏蛋白表达的影响,探讨益气健脾中药白术促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:流式细胞仪检测白术多糖对细胞游离钙离子水平([Ca~(2+)]cyt)的影响;划痕法复制细胞迁移模型,观察白术多糖对细胞迁移的影响;Western blot法和免疫荧光法检测白术多糖对细胞E-钙黏蛋白表达的影响。结果白术多糖(25,50,100 mg·L~(-1))可增加细胞[Ca~(2+)]cyt、促进细胞迁移、提高E-钙黏蛋白表达,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);可逆转多胺合成抑制剂α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)所致的[Ca~(2+)]cyt降低、细胞迁移抑制和E-钙黏蛋白表达减少,与DFMO组比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论白术多糖可通过提高细胞钙离子水平以促进细胞迁移和E-钙黏蛋白表达,为探讨益气健脾中药白术修复胃肠黏膜损伤的作用机制提供参考。