甘草次酸对K562细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的 研究甘草次酸对髓系白血病细胞系K562体外增殖抑制作用,分析其引起细胞周期的变化及探讨其可能的抗癌机制.方法 MTT法检测甘草次酸对K562细胞增殖活性的影响;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析细胞周期的变化以及cyclin D1和cyclin E蛋白表达的变化;RT-PCR测定细胞中cyclin D1和cyclin E mRNA表达的改变.结果 甘草次酸对K562有增殖抑制作用,其抑制作用呈现为量效和时效依赖性,作用48 h的IC50值为(93.1±3.7)μmol/L.甘草次酸可以诱导细胞发生凋亡,Hoechst染色可见细胞核内凋亡小体.甘草次酸可以诱导K562细胞周期阻滞于G0/G1期,同时G2/M期细胞比例减小,S期变化不明显,仅在最大浓度组稍有降低.甘草次酸可以同时下调K562细胞内cylin D1和cyclin E蛋白和基因的表达,下调作用与剂量呈正相关.结论 甘草次酸能明显抑制K562细胞增殖,并诱导其周期阻滞于G0/G1期.该效应可能与其下调周期蛋白cyclin D1和cyclin E表达有关,有望成为新型抗肿瘤中药.     

白桦脂酸对人Raji淋巴瘤细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 研究D类细胞周期蛋白(cyclin D3)在Burkitt淋巴瘤细胞Raji中的表达及白桦脂酸对其的影响.方法 MTT法检测细胞增殖活性,Annexin-V/PI双标法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期分布,RT-PCR法分析白桦脂酸作用于Raji细胞后cyclin D3 mRNA表达的变化,Western blotting法检测细胞内cyclin D3的蛋白表达.结果 白桦脂酸对Raji细胞有明显的增殖抑制作用,Annxin-V/PI双标法显示,白桦脂酸诱导细胞凋亡呈剂量依赖性.随着白桦脂酸剂量的加大,凋亡率增高.白桦脂酸作用Raji细胞后主要使细胞周期阻滞于G0/G1期,G0/G1期细胞比例随白桦脂酸剂量增大而逐渐增高,而S期细胞比例随白桦脂酸剂量增大而逐渐降低,对G2/M期细胞作用不明显.RT-PCR结果显示白桦脂酸作用于Raji细胞使cyclin D3 mRNA表达减少,并与其剂量呈正相关.Western blotting结果显示白桦脂酸使cyclin D3蛋白表达降低,呈剂量依赖性.结论 白桦脂酸抑制Raji细胞增殖并诱导细胞凋亡,可使细胞阻滞于G0/G1期,其可通过下调cyclin D3表达而发挥抗肿瘤作用.     

三棱散对人胃癌SGC-7901细胞增殖作用的影响

目的:探讨三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡影响及其可能机制。方法:制备三棱散水提物,培养人胃癌SGC-7901细胞,MTT法观察不同时间(24 h,72 h)不同浓度三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。用流式细胞仪检测三棱散水提物对细胞周期阻滞及其凋亡的影响。RT-PCR法检测不同浓度三棱散水提物作用人胃癌SGC-7901细胞72 h后细胞NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA及p16 mRNA表达情况。结果:随着三棱散水提物浓度增高和作用时间的延长,人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐增高(P0.05),同一浓度不同时间的细胞增殖抑制率相比,有显著性差异(P0.05)。人胃癌SGC-7901细胞在G0/G1期表现出明显的增加,S期细胞明显的减少,各浓度组均明显诱导细胞凋亡(P0.05),其凋亡率随三棱散浓度增加而提高。RT-PCR法检测显示,随着三棱散水提物浓度的增加,NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA表达逐渐减少,p16 mRNA表达逐渐增加。三棱散水提物浓度5.0 mg/m L,10.0 mg/m L时,NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA及p16 mRNA表达存在显著性差异(P0.05或P0.01)。结论:三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞有抑制增殖和促凋亡作用,呈时间和浓度依赖性,且G0/G1期细胞数量增多,S期细胞数量减少。RT-PCR法检测显示,NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA呈现低表达,p16 mRNA呈现高表达,由此推测,NF-κBp65表达下调会直接影响Cyclin D1表达,发挥细胞周期的正反馈调节,p16表达上调可启动细胞周期的负反馈调节,共同作用产生细胞增殖抑制及促进凋亡的作用。     

三七总皂苷对MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响

目的 探讨三七总皂苷对激素性股骨头坏死的保护作用。方法 采用CCK-8法检测三七总皂苷(1～1 000 mg/L)和地塞米松(10μmol/L)对MC3T3-E1细胞增殖的影响，偶氮偶联法检测三七总皂苷(10、50、100 mg/L)和地塞米松对MC3T3-E1细胞ALP活性的影响，茜素红染色法检测三七总皂苷和地塞米松对细胞矿化的影响，RT-qPCR法和免疫荧光染色法检测三七总皂苷和地塞米松对细胞蛋白Col-Ⅰ、OCN、OPN蛋白和mRNA表达的影响，Western blot法检测三七总皂苷和地塞米松对细胞Runx2蛋白和Wnt/β-catenin通路靶蛋白表达的影响。结果 10μmol/L地塞米松能抑制MC3T3-E1细胞增殖。与正常组比较，10～100 mg/L三七总皂苷能促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05),并可降低地塞米松对细胞增殖的抑制作用(P<0.01)。此外，三七总皂苷能降低地塞米松对MC3T3-E1细胞ALP活性和钙沉积的抑制作用(P<0.01),地塞米松可降低MC3T3-E1细胞Col-I、Runx2、OCN、OPN蛋白表达和Wnt/β-ca...     

白花丹醌对瘦素刺激的人肝星状细胞周期及其相关蛋白表达的影响

目的 研究白花丹醌对瘦素刺激的体外培养人肝星状细胞(HSC-LX2)细胞周期及周期相关蛋白表达的影响,探讨白花丹醌抗肝纤维化的作用机制.方法 ELISA法检测HSC-LX2细胞培养上清液中自分泌瘦素水平.将HSC-LX2细胞分成对照组,瘦素组,白花丹醌2、8 μmol/L组,秋水仙碱6.25 μg/mL阳性对照组.除对照组外,其余各组细胞用瘦素100 μg/mL刺激24 h、再与药物共同培养24 h后,流式细胞仪检测HSC-LX2细胞周期,Western blotting法检测细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclinE1、p21的表达.结果 HSC-LX2细胞自分泌瘦素的浓度先随着培养时间的延长而递减,24h达到低谷值,48h后又升至6h水平,每个时间点分泌的瘦素量无显著差异(P＞0.05).与对照组相比,瘦素组HSC-LX2细胞增殖能力显著增强,S期和G2/M期细胞比例显著增加;白花丹醌2、8μmol/L干预HSC-LX2细胞后,G0/G1期细胞的比例明显提高,而S期和G2/M期细胞比例明显降低,且呈明显的浓度相关性.与对照组比较,瘦素组HSC-LX2细胞经瘦素刺激后细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin E1的量显著增加,p21蛋白的表达受到抑制;白花丹醌2、8μmol/L和秋水仙碱明显降低cyclin Dl、cyclin E1蛋白水平,增强p21蛋白表达.结论 白花丹醌可明显抑制瘦素诱导的HSC-LX2细胞增殖,该作用主要是通过抑制细胞由G0/G1期向S期转变而产生的,作用机制可能与其降低cyclin D1、cyclin E1蛋白水平,增加p21蛋白表达相关.     

和厚朴酚联合青蒿素对CNE-2细胞周期阻滞的作用

目的:观察和厚朴酚(HNK)联合青蒿素(ART)对人鼻咽癌细胞(CNE-2)细胞周期的调控作用,探讨其可能的机制。方法:CNE-2细胞经胸腺嘧啶核苷(TdR,终浓度为2 mmol.L-1)处理16 h,2次PBS洗脱后用RMPI-1640培养基10 h,再次加入终浓度为2 mmol.L-1的TdR处理16 h,PBS洗脱后收集细胞用于下一步的实验研究。HNK(7.5 mg.L-1),ART(7.5 mg.L-1)单独及联合作用于已同步化的CNE-2细胞24 h,同时设立对照组,流式细胞仪检测细胞周期分布的改变;RT-PCR检测cyclin D1,cyclin E1,p27 mRNA表达。结果:CNE-2细胞经胸腺嘧啶核苷2次处理后,流式细胞仪检测显示,G1,S,G2期细胞比例分别为(72.64±5.01)%,(24.60±4.35)%,(0.00)%,表明细胞处于G1/S交界处。HNK+ART组、HNK组、ART组的G1期细胞比例分别为(90.78±9.49)%,(67.86±1.59)%,(66.77±2.25)%,提示HNK+ART组较HNK组或ART组显著地将CNE-2细胞阻滞在G1期(P<0.05)。RT-PCR检测显示HNK+ART组、HNK组、ART组的cyclin D1mRNA表达分别为(0.237±0.014),(0.328±0.002)及(0.368±0.007);cyclin E1 mRNA的表达各组依次是(0.445±0.027),(0.572±0.005)及(0.542±0.006);p27 mRNA的表达各组分别是(1.069±0.046),(0.543±0.022)及(0.388±0.004),与单药组比较,HNK+ART组显著下调cyclin D1,cyclin E1 mRNA的表达(P<0.05),显著上调p27 mRNA的表达(P<0.05)。结论:HNK+ART应用以协同方式诱导CNE-2细胞阻滞于G1期,这可能与通过下调cyclin D1及cyckin E1的mRNA表达及上调p27 mRNA表达有关。     

青龙衣醇提物对人白血病K562细胞的基因芯片表达的影响

目的:了解青龙衣醇提物对人白血病K562细胞的基因芯片表达的影响,在基因水平探讨青龙衣醇提物抑制K562细胞增殖的作用机制。方法:制备青龙衣醇提物,在37℃恒温、5%CO2培养K562细胞。采用浓度为0.1、0.5、2.5、12.5、62.5 mg/m L的青龙衣醇提物分别处理K562细胞;采用倒置显微镜与荧光显微镜观察处理后K562细胞的形态改变,并采用流式细胞仪检测K562细胞周期。提取细胞的总RNA,生成c DNA,构建基因芯片,并检测基因表达的结果。结果:经过12.5 mg/m L青龙衣醇提物处理后,通过流式细胞仪测定细胞周期:G1期细胞占23.8%,S期占59.9%,G2期占16.3%;而对照组的细胞周期:G1期占22.9%,S期占72.4%,G2期占4.7%;经青龙衣醇提物处理的细胞中,G2期的细胞比例上升,S期细胞比例下降。管家基因为β-actin,构建的基因芯片的特异性、均一性与重复性均良好。表达上调的基因有chk1;下调的基因有cyclin B1、cyclin E1、cyclin D1、cdk4、cdk2、E2F1、PCNA、VEGF、DNA-TopoⅠ、DNA-PK、jnk和mcl-1。结论:青龙衣醇提物通过调控与细胞周期、血管生成、细胞凋亡有关的基因表达,抑制K562细胞的细胞周期进程,从而表现出抗肿瘤作用。     

大黄素对血管平滑肌细胞周期调控蛋囱Cyclin D1表达的影响

目的：观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和CyclinD1表达的影响。方法：取对数增长期的平滑肌细胞，采用MTY法观察大黄素对平滑肌细胞增殖抑制的有效浓度范围，求出IC50并干预细胞；然后分别用流式细胞仪和Westemblot法进行细胞周期对相和Cyclin D1表达的测定。结果：与对照组比较，IC50对药物组G0／G，期细胞百分比升高，S期细胞百分比下降，Cyclin D1表达高峰延迟，表达量下调，细胞周期受阻于G0/G1期。结论：大黄素在抑制平滑肌细胞增殖的过程中通过下调Cyclin D1表达，阻滞了细胞周期的进程；是一种有效的抗平滑肌细胞增殖的药物。     

中医分期序贯治疗对哮喘气道平滑肌细胞增殖周期调控的影响

目的:探讨中医分期序贯治疗对哮喘气道重构时气道平滑肌细胞(ASMC)中正性细胞周期调节蛋白(CCRP)cyclin A、cyclin B及负性CCRP P27 kip-1的影响。方法:采用腹腔注射与吸入卵蛋白复制哮喘大鼠模型,应用流式细胞检测技术,对比观察中医辨证分期序贯治疗1组(A1)、2组(A2)、3组(A3)、孟鲁司特钠组(M)、布地奈德组(B)、模型组及正常组大鼠气道平滑肌细胞增殖周期中相应细胞周期调节蛋白(CCRP)的表达水平。结果:各治疗组大鼠ASMC中正性CCRP cyclin A和cyclin B的表达水平低于模型组,而高于正常组,差异有显著性意义(P0.05);而负性CCRP P27kip-1的表达水平则高于模型组,而低于正常组,差异有显著性意义(P0.05)。各治疗组间比较:对于正性CCRP cyclin A的下调作用,A1组、A2组与A3组依次增强(P0.05),且均强于M组(P0.05),A1组和A2组均弱于B组(P0.05);各中药组大鼠ASMC内正性CCRP cyclin B的表达水平依次降低(P0.05),且均低于M组(P0.05),其中B组大鼠ASMC内正性CCRP cyclin B的表达水平高于A3组而低于A1组(P0.05);A2组、A3组大鼠ASMC内负性CCRP P27kip-1的表达水平显著高于M组及B组。结论:1发生哮喘气道重构时,ASMC的异常增殖可能与ASMC内G1/S和G2/M限制点的正性CCRP的表达上调及负性CCRP的表达下调有关;2中医药分期序贯治疗(温肺化痰-化痰养阴-滋阴补肾)可通过下调哮喘ASMC内正性CCRP cyclin A和cyclin B表达及上调负性CCRP P27kip-1表达的方式,影响ASMC通过G1/S和G2/M细胞周期限制点,抑制哮喘气道平滑肌细胞增殖及其肌层增厚,减缓气道重构的进程。     

三七总皂苷对缺糖缺氧/再灌注损伤SH-SY5Y细胞NgR1、ROCK2 mRNA和蛋白表达的影响

目的:研究三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对Nogo-NgR及其下游通路中NgR1和ROCK2 mRNA和蛋白的调控作用。方法:将SH-SY5Y细胞分为8组:正常组、模型组、维甲酸(retinoic acid,RA)组、三七总皂苷大(640 mg/L)、小(320 mg/L)剂量组、Y27632组、Y27632+三七总皂苷大、小剂量组,采用缺糖缺氧方法建立SH-SY5Y细胞损伤模型。应用实时荧光定量PCR和Western blot检测SH-SY5Y细胞缺糖缺氧损伤后NgR1、ROCK2 mRNA和蛋白表达特征及三七总皂苷对其影响。结果:模型组细胞中NgR1、ROCK2 mRNA和蛋白的表达较正常组显著升高(P0.01);各给药组细胞中NgR1和ROCK2 mRNA水平较模型组均有较为显著的降低(P0.01或P0.05);Western blot结果显示Y27632+三七总皂苷大、小剂量组中NgR1表达水平较模型组有显著差异(P0.01或P0.05);Rock2在三七总皂苷大剂量组、Y27632组和Y27632+三七总皂苷大、小剂量组中,表达水平较模型组明显减少(P0.01或P0.05)。结论:三七总皂苷可能通过抑制NgR1、ROCK2 mRNA和蛋白在缺糖缺氧损伤SH-SY5Y细胞中的表达,进而促进轴突的生长和重塑。     

The effects of oridonin on cell growth, cell cycle, cell migration and differentiation in melanoma cells

Oridonin, a diterpenoid isolated from Rabdosia rubescens (Hemsl.) Hara, is currently one of the most important traditional Chinese herbal medicines. We investigated the anti-proliferation effect of oridonin on the cultured murine melanoma cell line K1735M2. The growth inhibition activity of oridonin for K1735M2 cells occurred in a time- and dose-dependent manner (IC50 was 7.4+/-0.6 microM). Further studies showed that these inhibition effects were associated with dose-dependent G2/M phase arrest and differentiation induction. Detection of morphological observation showed that oridonin could induce K1735M2 cells to produce dendrite-like structures. The results of the migration indicated that oridonin affected motility of K1735M2 cells in a dose-dependent manner. These results suggested that oridonin is a potential candidate for melanoma cancer therapy.     

斑蝥素对HL—60细胞和QGY7703细胞的作用研究

采用MTT法和流氏细胞仪技术,研究了斑蝥素对HL－60细胞和QGY7703细胞的存活率和细胞周期分布影响。结果表明,斑蝥素对HL－60细胞的IC50是15．34μmol/L,对QGY7703细胞的IC50是18．54μmol/L。按蝥素处理HL－60细胞和QGY7703细胞24h后,G2－M期细胞分布都有所增加,G0－G1期细胞分布都有所降低;斑蝥素处理HL－60细胞24h后,G0－G1期峰前有亚二倍体峰出现,说明斑蝥素在所用剂量下降够诱导HL－60细胞发生凋亡。     

血管内皮细胞-平滑肌细胞共培养体系研究进展

血管内皮细胞(endothelial cells,EC)和血管平滑肌细胞(smooth muscle cells,VSMC)的相互作用、相互影响维持血管生理功能和多种疾病的发生发展,EC-SMC联合培养模型是目前研究这2种细胞间相互影响的最佳方式。作者对现有的EC-SMC共培养模型及共培养对这2种细胞结构和功能的影响进行综述,为在微观上深入研究二者的相互关系提供依据,也为建立更接近机体生理/病理状态的EC-SMC体外共培养体系提供参考。     

星形胶质细胞的研究进展

星形胶质细胞(AS)是脑中数量最多的细胞,具有抑制神经元活动的作用,可以防止神经元的过度兴奋.过去一直认为,大脑中只有神经元具有传递和处理信息的功能,而胶质细胞只对神经元起营养支持作用,对神经信号的传递和处理不起作用.     

菟丝子定向诱导成骨细胞向神经元细胞转化的研究

目的：开展菟丝子醇提物诱导大鼠成骨细胞向神经元细胞转化的定向诱导研究．方法：采用菟丝子醇提物刺激成骨细胞的分化，用RT-PCR检测和倒置显微镜下观察菟丝子水提物对成骨细胞刺激后的变化。结果：RT-PCR检测有神经元细胞和神经胶质细胞的特异性蛋白神经元烯醇酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达，在倒置显微镜下观察到神经元样细胞生长．结论：在体外，菟丝子醇提物具有诱导大鼠成骨细胞向神经元细胞定向分化的作用。     

九香虫三氯甲烷浸提物对两种癌细胞增殖和周期的影响

目的研究九香虫三氯甲烷浸提物对胃癌细胞SGC-7901和肝癌细胞HepG2细胞增殖和细胞周期的影响。方法本研究采用冷浸法获得九香虫的三氯甲烷浸提物;MTT法分析三氯甲烷浸提物对两种癌细胞体外增殖的抑制作用;流式细胞术分析三氯甲烷浸提物对两种癌细胞的细胞周期的影响。结果九香虫三氯甲烷浸提物能抑制SGC-7901细胞和HepG2细胞的体外增殖并呈明显的剂量依赖性,IC50分别为1 193.52和964.34μg/mL;流式细胞术分析表明,三氯甲烷浸提物作用后HepG2细胞的S期和G2/M期细胞比例明显降低,G0/G1期细胞比例明显升高。结论九香虫三氯甲烷浸提物能抑制两种肿瘤细胞的体外增殖,对HepG2细胞抗肿瘤活性可能是由于通过其细胞周期的阻滞引起。     

NF-κB在马钱子碱抑制非小细胞肺癌细胞环氧化酶2生成中的作用研究

目的:探讨马钱子碱抑制环氧化酶2(COX-2),从而诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的分子机制。方法:构建COX-2启动子若干转录因子缺失突变体与含COX-2 mRNA 3’-UTR的报告质粒,与Renillia共转染至非小细胞肺癌A549细胞,测报告基因luciferase活性研究COX-2启动子受马钱子碱抑制的最小顺式作用元件;采用蛋白质免疫印迹法研究马钱子碱对IκBα磷酸化与p65进核的影响。结果:马钱子碱显著性抑制LPS诱导的COX-2启动子的激活,而对COX-2 mRNA转录后调控影响不大,COX-2启动子-262位附近NF-κB是马钱子碱抑制COX-2启动子活性的重要顺式作用元件。马钱子碱能抑制IκBα的磷酸化,并能抑制p65的进核。结论:马钱子碱抑制NF-κB的激活,进而从转录水平COX-2的基因表达,促进A549细胞凋亡。     

宝藿苷对人食管癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的 研究香加皮中宝藿苷-Ⅰ对人食管癌细胞Eca-109细胞周期的影响及其作用机制.方法 采用MTT法分析不同质量浓度宝藿苷-Ⅰ(12.5、25、50 μg/mL)分别作用24、48、72 h后,对Eca-109细胞增殖的影响;流式细胞术分析宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞周期的影响;RT-PCR技术检测宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞Cyclin B1mRNA表达的影响;Western blotting方法检测宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞Cyclin B1蛋白表达的影响.结果 25、50μg/mL宝藿苷-Ⅰ均可明显抑制Eca-109细胞的增殖(P<0.05),作用48 h的IC50为24.8μg/mL.25、50μg/mL宝藿苷-Ⅰ作用48 h后,随宝藿苷-Ⅰ质量浓度的增加,Eca-109细胞的G0/G1期细胞比例明显下降,G2/M期细胞比例明显提高,细胞的Cyclin B1蛋白及mRNA表达水平降低,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01).结论 香加皮宝藿苷-Ⅰ可抑制Eca-109细胞增殖,使细胞周期阻滞,该作用町能与下调细胞Cyclin B1表达有关.     

姜黄素对人食管癌细胞Eca-109增殖及细胞周期的影响

目的研究姜黄素对人食管癌细胞Eca-109细胞周期的影响及其作用机制。方法采用MTT法分析不同浓度姜黄素对Eca-109细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析姜黄素对Eca-109细胞周期的影响,采用RT-PCR技术检测姜黄素对Eca-109细胞Cyc linB1mRNA表达的影响,采用W estern-b lotting方法检测姜黄素对Eca-109细胞Cyc lin B1蛋白表达的影响。结果 20,40,60μmol/L姜黄素均可明显抑制Eca-109细胞的增殖(P均<0.05),特别是姜黄素作用24 h后,随姜黄素浓度增加,Eca-109细胞的G0/G1期细胞比例明显下降而G2/M期细胞比例明显提高,Cyc lin B1蛋白与mRNA表达水平均降低,与对照组比较均有显著性差异(P均<0.01)。结论姜黄素可抑制Eca-109细胞增殖,使细胞周期阻滞,该作用可能与下调细胞Cyc lin B1表达有关。     

刺五加的体细胞胚胎发生研究

目的用不同质量浓度2,4-D和外植体类型对刺五加体细胞胚胎诱导进行研究,为刺五加的资源保护和遗传工程提供理论依据。方法以刺五加的萌发3周幼苗和层积处理种子合子胚的胚根、下胚轴和子叶为外植体,考察不同激素对刺五加体细胞胚胎发生的影响。结果来自层积处理种子合子胚的外植体接种于附加0.5 mg/L2,4-D的MS或1/2MS培养基中体细胞胚胎诱导率(57.1%)和数量(3.3)最高。体胚在原培养基中即可发育成熟,转入降低2,4-D质量浓度的培养基后更有利于新体胚的产生和原有体胚的成熟。刺五加体胚的发育历程与合子胚相似。结论刺五加可以通过来自合子胚的外植体实现体细胞胚胎发生,体胚诱导率取决于2,4-D质量浓度和外植体的发育程度。