塔斯品碱对体外培养成纤维细胞自分泌生长因子的影响

 目的探讨塔斯品碱盐酸盐(TA)对成纤维细胞作用及促进伤口愈合的机制。方法体外培养L₉₂₉成纤维细胞,经不同质量浓度塔斯品碱盐酸盐(0.05,0.1,0.2,0.4和0.5 μg·mL^-1)作用后,以及加入0.4 μg·mL^-1塔斯品碱盐酸盐作用不同时间(24,48和72 h)后,采用ELISA测定其自分泌转化生长因子-β₁(TGF-β₁)及表皮生长因子(EGF)的变化规律。结果塔斯品碱盐酸盐可促进成纤维细胞自分泌TGF-β₁和EGF,且随质量浓度的增大,作用时间的延长而增强。结论塔斯品碱盐酸盐可促进TGF-β₁和EGF的自分泌,促进成纤维细胞及炎性细胞的趋化性,促进细胞外基质的沉积,促进创面愈合。     

川芎嗪对溶血磷脂酸致新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及分泌细胞因子的影响

目的:探讨川芎嗪(TMP)对溶血磷脂酸(LPA)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖以及分泌转化生长因子β1的影响。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法获取CFs,采用MTT法检测细胞增殖,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定不同条件下培养的CFs培养液上清中的TGFβ1水平。结果:TMP对CFs增值的抑制作用随浓度的升高而增强,其中10mg/mLTMP抑制作用随时间的延长而显著增加,5、20mg/mL浓度则在作用72h后抑制作用显著增强。TMP对LPA致CFs分泌TGFβ1的抑制作用也随浓度的升高而增强,其中5mg/mLTMP抑制作用随时间的延长而显著增强,10、20mg/mL浓度则在作用72h后抑制作用显著增强。结论:TMP可以浓度依赖性地抑制CFs增殖及分泌TGFβ1,作用时间以72h以上为佳,TMP可能通过抑制TGFβ1的分泌抑制CFs增殖。     

松萝酸钠对体外培养成纤维细胞迁移及分泌生长因子的影响

 目的探讨松萝酸钠对成纤维细胞的作用及其促伤口愈合的作用机制。方法建立体外细胞划伤模型,加入不同浓度的松萝酸钠(0.34,0.68,1.37,2.74μmol·L^-1),观察不同作用时间(4,8,24 h)后,药物对细胞迁移行为的影响;采用ELISA法测定其分泌转化生长因子-β₁(TGF-β₁)和表皮生长因子(EGF)的变化规律。结果松萝酸钠对成纤维细胞迁移有促进作用;可促进成纤维细胞分泌TGF-β₁和EGF,且随着药物浓度的增大而增强。结论松萝酸钠可通过促进成纤维细胞分泌TGF-β₁和EGF,加速细胞迁移。     

粉防己碱对PDGF、TGF-β诱导瘢痕成纤维细胞增殖与胶原合成的抑制作用

目的:探讨粉防己碱对血小板衍生生长因子(PDGF-BB)、转化生长因子β(TGF-β)诱导人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的干预作用.方法:体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞加入PDGF-BB、TGF-β、粉防己碱, 用3H-TdR掺入法和3H-脯氨酸掺入法测定粉防己碱干预下PDGF-BB、TGF-β诱导人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成作用的变化.结果:粉防己碱在不抑制瘢痕成纤维细胞DNA合成的药物浓度(3μg/ml)时即可显著抑制其胶原合成,并可显著抑制PDGF-BB和TGF-β诱导的实验细胞DNA及胶原合成.结论:粉防己碱可抑制PDGF-BB、TGF-β诱导的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成.     

艾灸对大鼠皮肤创伤成纤维细胞和KGF表达的影响

目的：研究艾灸对大鼠创伤皮肤组织成纤维细胞和角化细胞生长因子（KGF）表达的影响,探讨艾灸对大鼠皮肤创伤修复的作用。方法：建立大鼠背部皮肤创伤模型,采用随机数字表法,将24只大鼠分为治疗组和模型组。根据治疗时间的不同,又将每组分为1天、3天、7天共3个时间点,每个时间点4只大鼠。治疗组进行艾灸治疗,每次30 min,每日1次。以HE染色法检测1天、3天、7天3个时间点修复组织内成纤维细胞数;以免疫组化法检测1天、3天、7天等3个时间点修复组织成纤维细胞生长因子的表达情况。结果：大鼠创面愈合指数治疗组高于模型组（P〈0.05）。大鼠皮肤创面成纤维细胞数,7天治疗组皮肤创面成纤维细胞数高于模型组（P〈0.05）;3天两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。大鼠创面KGF表达情况,3天模型组KGF表达呈弱阳性,治疗组表达呈阳性;7天模型组KGF表达呈阳性,治疗组表达呈强阳性。结论：艾灸能促进大鼠皮肤创伤愈合,其机制可能与调节不同时间内创面组织成纤维细胞数和KGF含量有关。     

塔斯品碱诱导肺癌细胞A549凋亡的实验研究

目的:探讨塔斯品碱对肺癌细胞A549增殖、凋亡以及细胞周期的影响。方法:进行人肺腺癌细胞株A549细胞培养,不同浓度塔斯品碱干预,采用MTT法、流式细胞术、透射电镜等技术,研究不同浓度塔斯品碱对其增生、凋亡以及细胞周期的影响。结果:塔斯品碱可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,且呈时间剂量依赖性;FCM检测发现塔斯品碱阻滞细胞周期于S期;电镜下可见塔斯品碱能够诱导细胞出现核固缩、细胞核内染色质凝聚和凋亡小体等凋亡现象。结论:塔斯品碱有抗肿瘤和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。     

塔斯品碱对小鼠S180肉瘤的抑制作用及其机制探讨

目的：研究塔斯品碱对小鼠S180肉瘤生长的抑制作用及其机制。方法：建立小鼠S180肉瘤动物模型,利用该模型观察塔斯品碱的体内抗肿瘤作用。通过免疫组织化学Elivision plus法检测肿瘤组织内微血管密度(MVD)及血管内皮细胞生长因子(VEGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),凋亡基因Bcl-2,Bax蛋白表达情况。结果：塔斯品碱对小鼠S180肉瘤具有抑制作用,瘤体血管内的VEGF,bFGF,Bcl-2,Bax蛋白表达逐渐下降,Bax/Bcl-2比值逐渐上升,存在良好的量效关系。结论：塔斯品碱能够抑制小鼠S180肉瘤的生长,其机制可能与降低瘤体组织内VEGF,bFGF,Bcl-2和Bax的蛋白表达,促进血管内皮细胞凋亡有关。     

小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌TGF-β1的影响

目的 探讨小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌TGF-β1的影响.方法 分离培养糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞,用MTT法检测系膜细胞的增殖能力,ELISA法测定系膜细胞分泌的TGF-β1,放射免疫法测定系膜细胞产生cAMP水平.结果 间接免疫荧光鉴定结果显示所培养的细胞为系膜细胞.小檗碱(15、30、60、120 μmol/L)能有效的抑制糖尿病肾病大鼠系膜细胞的增殖和TGF-β1的分泌,并显著升高糖尿病肾病大鼠系膜细胞的cAMP水平.结论 升高糖尿病肾病大鼠系膜细胞cAMP水平可能是小檗碱发挥抑制系膜细胞过度增殖和分泌的机制之一.     

胰岛素样生长因子-1对rhBMP-2诱导下成纤维细胞增殖及成骨转化的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在重组人骨形态蛋白2(rhBMP-2)诱导成纤维细胞(Fb)转化为成骨细胞过程中是否具有促进作用。方法从成年新西兰大白兔背部皮肤中分离、纯化提取成纤维细胞,然后培养。将细胞分为空白对照组、rhBMP-2干预组和IGF-1+rhBMP-2干预组。空白对照组:常规培养液培养,不加入任何诱导剂及干预因子;rhBMP-2干预组:常规培养液中加入100μg/L的rhBMP-2;IGF-1+rhBMP-2干预组:常规培养液中加入100μg/L的rhBMP-2与终浓度为50μg/L的IGF-1。定期在倒置显微镜下观察Fb生长状况,并采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,同时行碱性磷酸酶(ALP)活性检测、茜素红染色及钙钴染色评价其成骨分化的能力。结果与其他2组相比,IGF-1+rhBMP-2组细胞增殖速度快,周期短,MTT法检测示细胞生长旺盛,而空白对照组与rhBMP-2干预组之间无显著性差异。rhBMP-2干预组ALP表达高于空白对照组;而IGF-1+rhBMP-2组ALP表达明显高于其他2组。茜素红染色空白对照组未见明显钙化结节,rhBMP-2干预组细胞可见红色钙化结节,而IGF-1+rhBMP-2组钙化结节数目明显较rhBMP-2干预组多,面积增大。钙钴染色:rhBMP-2干预组和IGF-1+rhBMP-2干预组细胞胞浆中均可见浅棕色至棕黑色的细胞颗粒,但以IGF-1+rhBMP-2干预组棕黑色颗粒较多。空白对照组未见明显阳性细胞。结论 Fb在体外一定条件下经过诱导剂诱导后,可向成骨细胞方向转化。IGF-1可以促进Fb在rhBMP-2诱导下的增殖及成骨表型表达。     

脱氢紫堇碱对高糖培养心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

目的观察中药延胡索主要有效成分脱氢紫堇碱（DHC）对高浓度葡萄糖培养的心肌成纤维细胞（CFs）增殖和胶原分泌的影响,为延胡索的临床应用提供实验依据。方法采用体外高糖培养的CFs模型进行实验。以胶原酶与胰蛋白酶联合消化分离出生24 h内乳鼠CFs,取2～4代细胞高浓度葡萄糖（25 mmol/L）培养,分别加入100、50、25 mg/L DHC干预,24、48 h后镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,ELISA测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原含量。结果 CFs种植3 h后开始贴壁生长,高浓度葡萄糖培养液培养24、48 h后细胞增殖明显增加（P〈0.05,P〈0.01）,48 h后S＋G2＋M期细胞的百分率明显增加（P〈0.01）,细胞分泌Ⅰ型、Ⅲ型胶原量明显升高（P〈0.01）;DHC干预后可显著抑制CFs增殖（P〈0.01）,降低S＋G2＋M期细胞百分率（P〈0.01）,减少Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌（P〈0.05,P〈0.01）。结论 DHC能抑制高糖培养的CFs的增殖,减少胶原分泌,DHC具有潜在的抗心肌纤维化作用。     

美洲大蠊温敏凝胶的制备及其促糖尿病大鼠创面修复作用考察

目的:制备美洲大蠊温敏凝胶并考察其促糖尿病大鼠创面修复作用。方法:以N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)与丙烯酸(AAc)为单体,在水相中通过自由基聚合法制得具有温度响应的共聚物P(NIPAM-co-AAc),然后将其接枝透明质酸(HA)以合成P(NIPAM-co-AAc)-g-HA温敏材料,采用核磁共振氢谱(1H-NMR)和紫外分光光度法(UV)对该材料的化学组成、低临界相转变温度(LCST)进行表征;采用透析法制备美洲大蠊温敏凝胶,利用扫描电子显微镜、旋转流变仪和热重分析仪表征其断面结构、流变学性质和热稳定性;采用差示扫描量热法,X-射线衍射法和傅里叶红外光谱法共同鉴定P(NIPAM-coAAc)-g-HA温敏材料对美洲大蠊提取物的包合作用,并考察美洲大蠊温敏凝胶促糖尿病大鼠创面修复的作用,采用ImagePro Plus 6. 0软件计算创面愈合率,运用苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察各组大鼠创面组织病理学变化。结果:成功合成了P(NIPAM-co-AAc)-g-HA温敏材料,其LCST处于29～31℃,具有密集、均匀的多孔结构,且能将美洲大蠊提取物均匀包合。药效学结果表明,美洲大蠊温敏凝胶组促创面愈合效果最佳,其炎细胞浸润程度明显降低,胶原蛋白、成纤维细胞排列整齐、致密,新生血管密度较模型组显著增加。结论:美洲大蠊温敏凝胶可有效促进糖尿病大鼠创面愈合,可克服美洲大蠊市面液体制剂用于皮肤创面治疗的不足,可为美洲大蠊提取物促糖尿病患者创面愈合制剂的开发提供参考。     

龙血竭胶囊合九华膏对环状混合痔术后创面促愈作用及对新生血管形成的影响

目的:观察龙血竭胶囊合九华膏对环状混合痔术后恢复的疗效,及其对创面和血清血管内皮生长因子的影响。方法:将190例患者根据入院先后顺序,随机按数字表法分为对照组和观察组各95例。两组患者均行分段多层次弧切缝合加注射术,术后常规进行抗生素静脉滴注预防感染;并内服芪蓉润肠口服液,20 mL/次,3次/d,便后采用苦参汤伤口清洗。对照组采用马应龙麝香痔疮膏涂抹肛门,以无菌纱布覆盖创面,1 g/次,1~2次/d。观察组以龙血竭胶囊合九华膏涂抹肛门,以无菌纱布覆盖创面,1 g/次,1~2次/d。两组疗程均为10 d。记录术后第3,10天创面的疼痛、水肿、创面渗液、创面面积和创面肉芽组织情况,记录创面愈合时间;评价术后10 d创面毛细血管含量,采用免疫组化评价创面血管内皮生长因子(VEGF),碱性成纤维生长因子(b FGF)表达情况;检测治疗前后血清血小板源性生长因子(PDFG),血管内皮生长因子(VEGF),碱性成纤维生长因子(b FGF)。结果:术后10 d,观察组临床疗效总有效率为91.58%,优于对照组的77.89%(χ~2=6.877,P0.01);观察组在术后3 d和10 d疼痛、水肿、创面渗液、创面面积和创面肉芽组织评分均低于同期对照组(P0.01);观察组创面平均愈合时间为(11.5±2.1)d,低于对照组的(13.7±2.5)d,比较差异有统计学意义(P0.01);观察组创面毛细血管数目多于对照组(P0.01),观察组创面VEGF和b FGF表达的MOD值高于对照组(P0.01);治疗后观察组患者血清PDFG,VEGF和b FGF水平均高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。治疗过程中未发现与龙血竭联合九华膏相关不良反应。结论:采用龙血竭胶囊合九华膏治疗环状混合痔术后创面的治疗,能促进创面的修复,缩短愈合时间,其作用机制可能与调节血清和创面VEGF,PDFG,b FGF等因子表达,促进创面毛细管血管形成,促使肉芽组织生长与修复有关。     

四效散对糖尿病足溃疡大鼠创面愈合的影响

目的:观察四效散在糖尿病足溃疡大鼠创面组织愈合过程中所起到的作用,探究四效散对糖尿病溃疡大鼠创面愈合过程中的影响及作用机制。方法:将SPF级SD大鼠随机分成4组,分别为空白组(普通大鼠),模型组,甲硝唑(5 m L·kg~(-1)·d-1)组,四效散(100 mg·kg~(-1)·d-1)组。甲硝唑组予甲硝唑注射液外敷,四效散组予四效散外敷,治疗14 d后,检测大鼠血清中表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及碱性成纤维细胞生长因(basic fibroblast growth factor,b FGF)含量;免疫组化检测创面肉芽组织中成纤维细胞数及新生毛细血管数;苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态学变化。结果:与模型组比较,甲硝唑组、四效散组大鼠血清中b FGF,EGF含量显著升高(P0.01),其中四效散组大鼠血清b FGF,EGF的升高优于甲硝唑组(P0.01)。与模型组比较,甲硝唑组、四效散组的新生毛细血管数密度及成纤维细胞数显著升高(P0.05),四效散组新生毛细血管数密度及成纤维细胞数的增多高于甲硝唑组(P0.05)。结论:四效散能够提高大鼠血清中b FGF,EGF蛋白水平,有利于成纤维细胞、新生毛细血管的增殖,有利于创面肉芽组织的生长,从而促进糖尿病足溃疡的愈合。     

高氧液促进家兔创面愈合的实验研究

目的：研究高氧液对家兔创面愈合的影响,探讨其治疗机制。方法：建立12只家兔创面动物模型后,随机将其分为高氧组（H组）及生理盐水组（S组）,每组6只。观察家兔创面愈合情况,计算创面愈合率,在造模后第4、7天取材作光镜观察及检测羟普氨酸（Hyp）含量。结果：在创面形成第4、7天,H组创面愈合率明显优于S组,有显著性差异（P〈0.05）。组织形态学观察H组较S组可明显促进创面肉芽组织生长,促进成纤维细胞增殖及毛细血管增生,增加胶原纤维含量。H组较S组可明显提高创面肉芽组织中Hyp含量,有显著性差异（P〈0.05或P〈0.01）。结论：高氧液可促进家兔创面愈合,具有一定的临床应用价值。     

皮肤创伤愈合过程的研究

创伤愈合是一个复杂的生物学过程,包括细胞的增殖、分化、上皮化、迁移及基质的合成与沉积[1],现简单介绍创伤愈合的过程及其相关的研究进展。     

湿润生肌油纱促肛瘘术创面愈合的疗效及对肉芽组织因长因子mRNA表达的影响

目的:观察湿润生肌油纱对肛瘘术创面愈合的效果以及对肉芽组织血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法:单纯性肛瘘患者随机分为观察组、对照组和凡士林组各30例,术后分别采用湿润生肌油纱、龙珠软膏纱条和凡士林覆盖手术创口,比较3组创面愈合率、创面愈合时间和创面肉芽生长情况,RT-PCR法测定3组患者肉芽质VEGFmRNA的表达。结果:观察组术后7、14、21 d在创面愈合率和创面肉芽生长积分显著优于凡士林组(P0.05),术后14、21 d创面愈合率和肉芽生长积分显著优于对照组(P0.05);3组创面平均愈合时间分别为(15.23±5.29)d、(19.80±5.57)d和(22.19±4.81)d,观察组创面愈合时间显著少于对照组和凡士林组;术后7 d3组患者肉芽组织VEGFmRNA表达量与GADPH平均比值分别为(0.886±0.088)、(0.781±0.098)、(0.553±0.074),观察组VEGFmRNA表达量显著高于对照组和凡士林组。结论:湿润生肌油纱可促进创面愈合,改善肉芽组织生长,其机制与上调VEGFmRNA表达有关。     

猪皮寡肽对大鼠皮肤创面EGFR的影响

目的:探讨猪皮寡肽对EGFR的影响。方法:建立大鼠皮肤创伤模型。随机分为5组,模型组、阳性对照组、猪皮寡肽高剂量组(相当于2倍临床浓度剂量)、猪皮寡肽中剂量组(相当于常规人用剂量)、猪皮寡肽低剂量组(相当于0.5倍临床浓度剂量)。取用药后第7天、14天局部创面新生肉芽组织为所需实验样品,观察猪皮寡肽对EGFR的影响。结果:各组在第14天EGFR含量下降,但仍维持较高水平,优于模型组,高、中剂量组与模型组比较具有统计学意义(P<0.05)。结论:猪皮寡肽能够提高创面愈合过程中EGFR的含量。     

中药对伤口愈合干预作用的机理研究

创面愈合是创伤后的病理过程,正常情况下可通过自体调节功能使伤口愈合。但是临床上也常会出现因感染、血运不畅等多种原因导致伤口经久不愈的病例。外用中药在治疗难愈创面方面具有独到之处,中医药理论将外用中药促进创面愈合的作用机理总结为:清热解毒、活血化瘀、煨脓长肉及祛腐生肌。现代医学研究认为外用中药可以通过创面多种细胞及细胞生长因子间的交互调节作用;加强创面免疫活性细胞氧化代谢功能;改善创面微循环;调节创面p H值等诸多途径促进伤口愈合。文章将从这两个方面对近年来中药干预伤口愈合的作用机理研究进行详细阐述。     

断体地龙提取液促进小鼠创伤愈合作用研究

目的：在前期实验研究和“断体地龙假说”的基础上,探究断体地龙中活性成分促进创伤愈合的机制。方法：采用小鼠皮肤切除性创伤模型,制备地龙提取液,通过苏木精-伊红（HE）染色和免疫组化测定伤后创面愈合率及创面组织中血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）、转化生长因子（TGF-β1）的表达。结果：1.断体地龙提取液给药组与空白对照组相比创面愈合率更大,且HE染色后发现其能明显改善创面组织的愈合。2.地龙药物组VEGF、TGF-β1 2种因子的表达与生理盐水组差别不大,无统计学意义（P>0.05）。3.地龙药物组bFGF与生理盐水组相比,药物组bFGF的表达提前到达峰值,且持续时间较长;地龙药物组bFGF的表达第1天到达峰值,与对照组同一时间点阳性表达得分相比,具有显著性差异（P<0.05）。结论：地龙提取液外涂对小鼠皮肤切除性创伤的愈合有促进作用,其机制可能与VEGF、TGF-β1的表达无关,而与炎症期和增殖期创伤部位bFGF的表达增高有关系。     

蟾酥乳膏透皮吸收及促进伤口愈合作用的初步研究

目的:将制备的蟾酥乳膏剂进行体外透皮吸收实验并评价其对皮肤伤口愈合的效果。方法:利用体外Franz扩散池法测定蟾酥乳膏的体外透皮吸收率;采用小鼠断尾法测定小鼠止血时间及出血量;根据全层皮肤缺损法制备兔皮肤缺损模型,考察乳膏对兔皮肤伤口愈合的影响。结果:实验结果表明,制备乳膏剂光泽度、细腻度、延展性良好,具有良好的稳定性,透皮吸收率高,并能缩短小鼠断尾止血时间、减少出血量,并且可以促进家兔皮肤伤口愈合(P<0.05)。结论:本实验确定了蟾酥乳膏剂的体外透皮吸收量,并进行了初步的药效试验。家兔皮肤伤口愈合实验结果:蟾酥乳膏在给药1周后表现出促进伤口愈合的效果,且涂抹乳膏后未见兔皮肤出现红斑、红肿,显示了蟾酥乳膏具有一定的安全性。