低密度脂蛋白受体基因敲除鼠极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分诱导J774巨噬细胞胆固醇酯蓄积

为探讨低密度脂蛋白受体基因敲除鼠血浆极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分致动脉粥样硬化的作用,采用密度梯度序列超速离心法从低密度脂蛋白受体基因敲除鼠血浆分离极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分,用日立７４５０ 自动分析仪测定其脂含量,琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其电泳迁移率和载脂蛋白组成,并与鼠腹腔巨噬细胞共同孵育,观察它与巨噬细胞的相互作用。结果发现, 低密度脂蛋白受体基因敲除鼠血浆极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分与Ｊ７７４ 巨噬细胞孵育后,细胞胆固醇酯水平［（７３±０ ．５） μｍｏｌ（ｇ．ｃｅｌｌｐｒｏｔｅｉｎ）］ 非常显著地大于空白对照组（ Ｐ＜ ０．００５） , 是天然低密度脂蛋白诱导细胞胆固醇酯［（８±７） μｍｏｌ（ｇ．ｃｅｌｌｐｒｏｔｅｉｎ）］蓄积的９ 倍。结果提示,低密度脂蛋白受体缺失鼠血浆非修饰极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白组分可被Ｊ７７４ 巨噬细胞摄取,转巨噬细胞为泡沫细胞。     

氧化型低密度脂蛋白的不同组分在诱导巨噬细胞凋亡中的作用

通过观察调居噬细胞的特征性ＤＮＡ梯形图谱和细胞核的形态变化，研究了氧化型低密度脂蛋白的不同组份在其诱导的巨噬细胞凋亡中的作用。结果发现；氧化型低密度脂蛋白可引起巨噬细胞凋亡，表现在ＤＮＡ图谱呈典型的梯形，细胞核固缩，正常和乙酰化低密度脂蛋白均未引起巨噬细胞的明显凋亡，用谷胱苷肽过氧化物酶模拟物ｅｂｓｅｌｅｎdisplay structure     

分拣受体Sortilin促进巨噬细胞内脂质蓄积

目的探讨分拣受体Sortilin对THP-1巨噬细胞内脂质代谢的影响。方法用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育THP-1巨噬细胞。Western blot检测荷脂后THP-1巨噬细胞中Sortilin表达变化;THP-1巨噬细胞Sortilin高表达和沉默后,液体闪烁计数仪检测胞内胆固醇流出,高效液相色谱法检测细胞内脂质含量,油红O染色观察胞内脂滴情况。结果 THP-1巨噬细胞Sortilin表达呈ox-LDL剂量和时间依赖性增加;以50 mg/L ox-LDL处理24 h后THP-1巨噬细胞Sortilin表达水平达到高峰。与对照组相比,Sortilin过表达后巨噬细胞胆固醇流出减少,胞内脂质含量增加且脂滴明显增多,而Sortilin沉默后则刚好出现相反的结果。结论 Sortilin抑制巨噬细胞内胆固醇流出,促进胞内脂质蓄积。     

低密度脂蛋白对THP-1源性巨噬细胞PCSK9和低密度脂蛋白受体表达的影响

目的用低密度脂蛋白处理THP-1源性巨噬细胞后,检测低密度脂蛋白受体和PCSK9(proprotein convertase subtilisin/kexintype9)的表达并研究PCSK9与低密度脂蛋白受体之间的相关性。方法160nmol/L佛波酯孵育THP-1源性巨噬细胞24h,使其诱导分化成贴壁的巨噬细胞后,分别用0、10、20和     

氧化型低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇蓄积的影响及可能机制

研究氧化型低密度脂蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇蓄积的影响 ,并探讨其与组织蛋白酶活性之间的关系。用 10 0mg/L的乙酰化低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白处理小鼠腹腔巨噬细胞 2 4h ,分别测定巨噬细胞胞浆和溶酶体中胆固醇的含量以及溶酶体中组织蛋白酶的活性。结果发现 ,乙酰化低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白均可引起细胞胆固醇含量增加 (分别为 2 2 .2± 0 .4 μg和 2 2 .5 5± 0 .15 μg比对照组的 7.0± 0 .4 μg ,P <0 .0 1) ,但蓄积部位和形式完全不同 ,前者蓄积部位主要在胞浆并以胆固醇酯为主 (胞浆与溶酶体分别为 18.9± 0 .4 μg和3.3± 0 .2 μg ,游离胆固醇与胆固醇酯分别为 0 .73± 0 .0 5 μg和 18.1± 0 .4 μg) ,后者主要在溶酶体并以游离胆固醇为主 (胞浆与溶酶体分别为 3.6 5± 0 .14 μg和 18.90± 0 .15 μg ,游离胆固醇与胆固醇酯分别为 14 .13± 0 .14 μg和 4 .77±0 .33μg) ;前者不引起溶酶体组织蛋白酶的活性改变和蛋白含量增加 (组织蛋白酶L和D分别为 99.5± 3.4和 2 8.0± 2 .4 ,对照组分别为 10 2 .3± 8.2和 2 7.3± 1.6 ,P >0 .0 5 ;蛋白含量为 8.8± 0 .4 μg ,对照组为 9.0± 0 .3μg,P >0 .0 5 ) ;后者则造成溶酶体组织蛋白酶活性的明显降低和蛋白蓄积 (组织     

云芝多糖防止氧化型低密度脂蛋白所致巨噬细胞泡沫样变和预防实验性动脉粥样硬化形成

云芝多糖防止氧化型低密度脂蛋白所致巨噬细胞泡沫样变和预防实验性动脉粥样硬化形成陈瑗,周玫(第一军医大学自由基医学研究室,广州510515)动脉粥样硬化(As)的发生发展与低密度脂蛋白(LDL)受到氧化修饰有关已为越来越多的研究所证实[1～9]。体内与As发生有关的内皮细胞(EC)、平滑肌细胞以及巨噬细胞(MP)等都能对LDL进行氧化修饰。氧化的LDL(OLDL)是造成早期内皮细胞损伤和进一步病理变化的关键性因子,它不但直接损伤EC,而且诱导....     

低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞源性巨噬细胞胆固醇代谢及低密度脂蛋白受体表达的影响

目的 研究动脉粥样硬化过程中低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞源性巨噬细胞胆固醇代谢和低密度脂蛋白受体表达的影响。方法 以佛波酯刺激分化的THP-1细胞作为单核细胞源性巨噬细胞模型。通过胆固醇酶联法测定细胞内胆圊醇含量，逆转录-聚合酶链反应检测细胞低密度脂蛋白受体mRNA的表达，Western blot检测细胞低密度脂蛋白受体蛋白的表达。结果 与低密度脂蛋白组、阴性组及IgG免疫复合物组比较，低密度脂蛋白免疫复合物组细胞内胆固醇水平明显增高，并且低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白的表达增加。结论 低密度脂蛋白免疫复合物能显著增加巨噬细胞内胆固醇含量，亦能够促进低密度脂蛋白受体mRNA与蛋白的表达，提示低密度脂蛋白免疫复合物在动脉粥样硬化进展过程中起重要的作用。     

轻度氧化低密度脂蛋白对巨噬细胞内质网应激的诱导作用及其信号通路

目的研究巨噬细胞泡沫化过程中轻度氧化低密度脂蛋白(mm-LDL)对巨噬细胞内质网应激的诱导作用及其信号通路。方法体外培养鼠源RAW264.7巨噬细胞,分别给予mm-LDL(25、50和100 mg/L)和衣霉素(TM)处理6、12和24 h。采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,酶比色法测定细胞内总胆固醇含量,免疫荧光细胞化学法观测转录激活因子6(ATF6)核转位情况,免疫印迹法检测内质网应激转导子1(IRE1)磷酸化水平和X盒结合蛋白1(XBP1)及内质网分子伴侣糖调节蛋白78(GRP78)蛋白的表达,RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达。结果 mm-LDL呈浓度依赖性增加细胞内总胆固醇含量,胞浆内可见大量油红O染色阳性脂质颗粒,以12 h时最为显著;与内质网应激诱导剂TM相似,mm-LDL显著诱导ATF-6由胞浆向细胞核内转移,并上调磷酸化IRE1及其下游信号分子XBP1和GRP78蛋白的表达,且表达强度随着mm-LDL诱导浓度的增加而增强;50 mg/L mm-LDL处理组GRP78 mRNA的表达于作用后6 h即发生显著上调,为对照组的3.7倍,而蛋白表达水平也明显增加,并于12 h达到高峰,此...     

氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞内源性大麻素系统激活

目的 探讨氧化型低密度脂蛋白刺激能否诱导巨噬细胞内源性大麻素系统激活.方法 体外常规培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,加入氧化型低密度脂蛋白或溶媒孵育24 h,用高效液相色谱分析技术检测巨噬细胞内源性大麻素Anandamide和2-arachidonoylglycerol水平,以实时定量PCR技术和免疫印迹法对大麻素CB1、CB2受体和血小板活化因子受体mRNA和蛋白的表达进行分析.结果 内源性大麻素2-arachidonoylglycerol水平在6mg/L和12 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激时分别升高了2.4倍和4.8倍,而Anandamide水平无明显变化.3～12mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激时,RAW264.7巨噬细胞大麻素CB1和CB2受体及血小板活化因子受体mRNA和蛋白的表达均明显上调(P＜0.01).结论 首次证实氧化型低密度脂蛋白通过激活血小板活化因子受体诱导巨噬细胞内源性大麻素系统激活,提示氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化过程中可能涉及该系统的激活.     

不同磷脂配比构成的脂蛋白对J774巨噬细胞胆固醇转运的影响

目的研究不同磷脂配比构成的脂蛋白rHDL-A1、rHDL-A2、rHDL-A3、rHDL-B1、rHDL-B2对J774巨噬细胞胆固醇转运的影响。方法取新鲜抗凝血浆,用超速离心法进行密度梯度离心,收集LDL、HDL3。将LDL置于含10μmol/L CuSO4的PBS溶液(pH7.2)中,37℃温育24h;氧化修饰后的LDL置含200μmol/     

神经肽Y对血管平滑肌增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和c-myc基因表达的影响

以体外培养的血管平滑肌细胞模型为研究对象，在运用免疫荧光细胞组织化学技术和激光共聚焦显微镜定量研究神经肽Ｙ的作用下，观察血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和ｃ－ ｍｙｃ 原癌基因表达的平均荧光值变化，以阐明神经肽Ｙ 参与高血压和动脉粥样硬化等心血管疾病发生的病理机制。结果发现，对照组中增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和ｃ－ ｍｙｃ 原癌基因表达的平均荧光值分别为１５４２．７１ ±２００．０４ 、８１５．２８±１１６．４８ 和１６２０．２６±１７４．５８，神经肽Ｙ则可促进增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和ｃ－ ｍｙｃ 原癌基因在血管平滑肌细胞中的表达，其平均荧光值分别为１６４８．５６±２３２．７１、１２２５ ．４６±１０１ ．８４ 和１７４０ ．３５ ±２０５ ．９１，其中以血小板源性生长因子的表达差异最为明显（ Ｐ＜ ０．０１）。结果提示，神经肽Ｙ可促进血管平滑肌细胞的增殖，并诱导血小板源性生长因子和ｃ－ ｍｙｃ 原癌基因表达增强。     

糖尿病大鼠糖基化终产物与主动脉细胞外基质成分的关系

为了观察富含胆固醇的脂蛋白对兔主动脉平滑肌细胞脂类堆积的影响及机制,用富含胆固醇的脂蛋白（β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白） 与兔主动脉平滑肌细胞温育４８ ｈ 后,发现β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白都能促进平滑肌细胞内总胆固醇和甘油三酯堆积,以β－ 极低密度脂蛋白的作用更显著。乳铁蛋白作为低密度脂蛋白受体相关蛋白的一种特异配体,当它与上述脂蛋白共同与平滑肌细胞温育后,发现乳铁蛋白对脂蛋白所致的平滑肌细胞内脂质堆积有抑制作用。乳铁蛋白与标记的β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白的竞争结合实验也进一步发现乳铁蛋白可明显竞争β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白与平滑肌细胞的结合,且对β－ 极低密度脂蛋白的竞争抑制作用尤为明显。提示β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白可能主要通过低密度脂蛋白受体相关蛋白介导进入平滑肌细胞,导致平滑肌细胞内脂质堆积。     

阿司匹林对血管平滑肌细胞增殖及增殖细胞核抗原表达的影响

目的探讨阿司匹林对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及相关机制。方法体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,用不同浓度的阿司匹林处理,并且设置对照组,采用MTT法检测阿司匹林对血管平滑肌细胞增殖活性的影响,用免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应检测阿司匹林作用后血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原的表达。结果较高浓度(5×10-3mol/L)的阿司匹林对血管平滑肌细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),相对抑制率为31.5%。与对照组相比,该浓度组血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原的蛋白和mRNA表达量均显著降低(P<0.05)。结论阿司匹林可能通过降低增殖细胞核抗原的表达来抑制血管平滑肌的增殖,对心血管系统具有抗血小板聚集之外的保护作用。     

Toll 样受体9对巨噬细胞脂周素2表达的影响

目的研究ODN1826对巨噬细胞脂周素2表达的影响,并揭示其调控的相关分子机制。方法应用半定量PCR和免疫印迹法分别测定ODN1826对脂周素2 mRNA和蛋白水平表达影响。应用荧光素酶活性分析方法检测ODN1826对脂周素2启动子活性的影响。结果 ODN1826以剂量和浓度依赖方式上调脂周素2 mRNA和蛋白水平表达,并且通过Ets/AP-1位点促进脂周素2启动子活性。结论在巨噬细胞中,TLR9信号显著诱导了脂周素2 mRNA和蛋白的表达,并且脂周素2启动子区域的Ets/AP-1位点参与了这一诱导过程。     

中国人极低密度脂蛋白受体基因的克隆及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

为了研究极低密度脂蛋白受体结构与功能的关系,本文利用反转录聚合酶链反应技术从中国人心肌组织中克隆出极低密度脂蛋白受体的全长ｃＤＮＡ后,将其插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３获得重组体ｐＣＤ－ＶＲ。测序结果发现,这一源于中国人的极低密度脂蛋白受体基因ｃＤＮＡ的碱基序列与文献报道基本相符,反转录聚合酶链反应检测证实,转染ｐＣＤ－ＶＲ的中国仓鼠卵巢细胞可有效表达极低密度脂蛋白受体ｍＲＮＡ。脂蛋白结合实验结果发     

原发性肝细胞癌EGFR,PCNA表达及相互关系的研究

收集原发性肝细胞癌60例,肝异型增生12例及正常肝细胞10例,进行增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen、PCNA)和表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)免疫组化观察,探讨它们在肝细胞癌中的表达情况,分析不同分化程度肝癌之间表达的差异及两者之间的关系。结果表明:在正常肝组织阳性率很低,随着细胞增长,特别是异型增生,阳性率逐渐增高。在癌Ⅰ级达到高峰,而在癌组织随着癌分化程度降低,阳性表达率逐渐下降。而且还表明EGFR的表达与PCNA表达基本一致,呈正相关关系。这说明在细胞增殖活动中,这两者的作用都很重要,都能从不同方面反映细胞的增殖活性。     

神经肽Y影响人血管平滑肌细胞低密度脂蛋白受体表达

通过观察神经肽Y对人血管平滑肌细胞低密度脂蛋白受体表达的影响 ,以探讨神经体液因素在动脉粥样硬化发生中的重要作用。将体外培养的人血管平滑肌细胞分成对照组和不同浓度神经肽Y组 (浓度分别为 1 0 8mol L、1 0 7mol L、1 0 6 mol L和 1 0 5mol L) ,各组分别培养 6h、1 2h、2 4h和 4 8h ,然后经免疫荧光组织化学染色 ,在激光扫描共聚焦显微镜下定量检测神经肽Y对人血管平滑肌细胞的低密度脂蛋白受体表达的影响。结果发现 ,对照组低密度脂蛋白受体表达的平均荧光值在 2 4 2 8～ 2 5 2 7之间 ,且不同培养时间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。而各神经肽Y组低密度脂蛋白受体表达的平均荧光值与对照组之间有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ,在不同的培养时间中 ,1 0 8mol L神经肽Y组平均荧光值在 1 798～ 2 4 0 8之间 ;1 0 7mol L神经肽Y组在 1 783～ 2 332之间 ;1 0 6 mol L神经肽Y组在 1 72 2～ 2 2 81之间 ;1 0 5mol L神经肽Y组在 1 5 90～ 2 0 1 0之间。与对照组相比 ,分别平均下降 1 5 .5 9%、1 9.78%、2 1 .91 %和 2 6 .83% ,且不同浓度神经肽Y组之间多有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,神经肽Y对成人血管平滑肌细胞的低密度脂蛋白受体表达的下调作用呈现一定的剂量和时间依赖效应。结果提示 ,     

大鼠胃黏膜萎缩过程中的组织学变化和p16、Bcl-2、增殖细胞核抗原表达

慢性萎缩性胃炎尤其是胃窦萎缩性胃炎与胃癌关系密切。胃黏膜恶变过程中，细胞增殖与凋亡异常发挥重要作用。目的：研究大鼠胃黏膜萎缩过程中的组织学变化，以及p16、Bcl-2、增殖细胞核抗原（PCNA）表达情况．探讨这些调控因子的改变对萎缩性胃炎形成的影响。方法：以氨水、脱氧胆酸钠和乙醇三种损伤因素联合作用诱导慢性萎缩性胃炎。大鼠分为正常对照组和模型组，分别于2、4、6个月后处死。取胃黏膜行大体观察和组织学检查，以免疫组化方法检测胃窦黏膜p16、Bcl-2、PCNA表达。结果：模型组胃黏膜炎症细胞浸润明显；胃窦小凹增生．腺体层厚度和腺体数目明显减少；胃体病变较轻，仅于后期出现壁细胞数目减少。在胃窦黏膜萎缩过程中，p16表达逐渐降低，Bcl-2和PCNA表达逐渐升高。萎缩组p16表达较非萎缩组显著降低，Bcl-2、PCNA表达较非萎缩组显著升高。结论：多因素长期慢性刺激可致大鼠胃黏膜萎缩。模型大鼠胃黏膜细胞处于高增殖状态．抑癌基因p16蛋白表达低下．凋亡抑制基因Bcl-2蛋白高表达，萎缩性胃炎的发病与细胞增殖与凋亡失衡相关。     

血小板源生长因子BB对人血管平滑肌细胞钙调素的影响

为研究血小板源生长因子BB对培养的人血管平滑肌细胞钙调素的影响，采用培养的人血管平滑肌细胞，应用磷酸二酯酶法观察不同浓度的血小板源生长因子BB对钙调素含量变化的影响及其时间效应。结果发现，平滑肌细胞在进入细胞增殖周期后，细胞内钙调素含量逐渐增加，在9h时出现一个短暂的高峰，随后细胞内钙调素含量逐渐下降。血小板源生长因子BB可促进钙调素含量的增加，并呈现出明显的浓度依赖关系，30μg/L血小板源生长因子BB作用最为显著。结果提示，血小板源生长因子BB可明显促进培养的人血管平滑肌细胞钙调素含量的增加，并存在着一定的量效依赖关系及时间反应性。