The Effects of Wild-type p5 3Gene Transfection on the Growth and Chemotherapeutic Sensitivity of Human Glioma Cells

In gliomas,p5 3 mutations are among the mostfrequently observed genetic findings[1] .As a tu-mor- suppressor gene,p5 3 mutations can lead touncontrolled cell proliferation[2 ] . It was reportedthat loss of wild- type p5 3 function decreased sensi-tivity of tumor cells to chemotherapy[3 ] . In thisstudy,wild- type p5 3 gene was delivered into hu-man glioma cell line U2 5 1 by using liposome- medi-ated transfection technique to observe the effects ofp5 3 gene treatment and combined treatment of …     

siRNA沉默COX-2基因对胶质瘤细胞放射敏感性的影响

目的 利用小分子RNA(small interfering RNA,siRNA)技术体外沉默人胶质瘤细胞COX-2基因表达,探讨其对放射敏感性的影响,以期为胶质瘤的治疗提供新的思路和方法。 方法 体外培养胶质瘤U251细胞,使用siRNA技术构建U251细胞COX-2基因沉默模型,Western blot检测转染后细胞COX-2蛋白表达情况,筛出最适序列。将实验分为对照组与转染组,分别予以2、4、6、8 Gy四个剂量组予以X线照射,实验重复3次,使用MTT法检测辐射后细胞增殖抑制情况,平板克隆形成实验检测细胞存活分数(SF)并通过单击多靶拟合曲线计算增敏比(SER),流式细胞术检测细胞凋亡情况。 结果 转染组COX-2蛋白表达情况较对照组均下降,其中以siRNA600序列降低最为明显,差异具有统计学意义(P<0.05),后续实验均以siRNA600序列进行转染。辐射后转染组的细胞增殖抑制率为(84.87±3.50)%、(63.62±0.35)%、(55.05±4.87)%、(36.85±3.00)%,较对照组增殖抑制作用明显增强,并随放射剂量增加而增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。辐射后的转染组SF低于对照组,且转染组D0为4.110,Dq为1.387,均低于对照组,对照组D0为6.908,Dq为2.772,放射增敏比SER为1.680,差异有统计学意义(P<0.05)。辐射后的转染组细胞凋亡率为(3.63±0.45)%、(6.08±0.87)%、(47.97±2.13)%、(59.56±3.07)%均高于对照组,且在6 Gy、8 Gy照射后升高更为明显。 结论 siRNA技术沉默人胶质瘤U251细胞COX-2基因表达可以提高细胞的放射敏感性,增加了放射后细胞的凋亡率及增殖抑制作用,降低了克隆形成率。      

野生型p53基因转染对人胃癌细胞系HGC27生长的抑制作用

目的 研究野生型p53基因对人未分化胃癌细胞系HGC27生长的抑制作用。方法 用表达人野生型p53基因全长cDNA的真核载体pcDNA3—p53，转染人未分化胃癌细胞系HGC27，对转染后细胞进行生长曲线、细胞生长抑制率及流式细胞术分析，观察其生物学特性变化。结果 外源野生型p53基因在HGC27细胞内稳定表达，经pcDNA3—p53转染的HGC27细胞生长速度受到明显抑制，流式细胞分析显示G1期增加，S期下降，细胞出现凋亡。结论 野生型p53基因能在HGC27细胞内表达，且能抑制其生长并促进细胞凋亡。     

白介素-24抑制胶质瘤细胞生长的体内外实验研究

目的探讨白介素-24基因转染对胶质瘤生长的影响。方法将载有人白介素-24eDNA的新型重组腺病毒（Ad5F35-IL24）感染人胶质瘤细胞系U251,体外观察Ad5F35-IL24对该细胞系生长的影响;建立人胶质瘤动物模型,瘤内注射Ad5F35-IL24,观察肿瘤生长情况;用流式细胞仪检测其凋亡和Bax／Bel-2的表达情况。结果Ad5F35-IL24感染U251细胞和肿瘤组织后,IL-24蛋白高表达,U251细胞和组织的生长受到明显抑制,其凋亡率明显升高,Bax／Bel-2也明显升高。结论白介素-24具有抑制人胶质瘤细胞系U251生长和诱导凋亡作用。Ad5P35-IL24转导白介素-24基因可能是一种有效的胶质瘤基因治疗途径。     

RNA干扰沉默Bmi-1基因观察胶质瘤细胞凋亡状况的初步研究

目的:初步探讨Bmi-1基因对胶质瘤细胞凋亡状况的影响?方法:采用siRNA技术干扰沉默U251胶质瘤细胞中Bmi-1基因,RT-PCR法检测干扰效果,流式细胞仪检测U251细胞的凋亡状况, one way ANOVA 和t检验进行统计学分析?结果:RT-PCR显示U251细胞RNA干扰组Bmi-1 mRNA凝胶电泳条带呈弱阳性, 阴性对照组和未处理组Bmi-1 mRNA条带呈强阳性,灰度比统计分析,差异具有统计学意义,siRNA可以明显降低U251细胞中Bmi-1基因的表达;流式细胞仪显示干扰组U251细胞的凋亡率为(32.53±6.33)%,高于阴性对照组的凋亡率(21.91±5.63)%,统计分析其差异具有统计学意义?结论:Bmi-1基因可以抑制胶质瘤细胞的凋亡,有可能促进了胶质细胞瘤的发生?发展?     

PTEN基因对胶质瘤细胞增殖及侵袭性影响的体外研究

目的探讨PTEN基因转染人胶质瘤U251细胞后对其增殖及侵袭性的影响。方法应用脂质体转染技术,将含PTEN基因重组表达质粒转染U251细胞系,Western blot鉴定其蛋白表达;应用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法观察对细胞株生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;应用免疫组化检测转染PTEN的U251细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)和金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1、TIMP-2)的表达变化。结果 PTEN质粒成功转染U251细胞并有PTEN蛋白的表达。与对照组、空载体组相比,转染组细胞生长抑制率下降达52.46%;细胞周期改变,细胞从G1期到S期发生阻滞;转染组MMP-2、MMP-9表达显著下降,而TIMP-1、TIMP-2表达显著上升,两者呈负相关(r=-0.506,P<0.05)。结论 PTEN转染人胶质瘤细胞系U251后,可抑制其增殖、促进凋亡;并可能通过抑制MMPs和促进TIMPs来抑制细胞侵袭性。     

脑胶质瘤p16基因转染对细胞生长及放射敏感性的影响

目的　探索p16基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及p16基因与肿瘤细胞放射敏感性间的关系。方法　将外源野生型p16基因导入胶质瘤细胞株U251、C6,筛选阳性克隆。同时以空载体质粒pCDNA3为对照,免疫组化检测p16基因表达,用MTT法测定细胞生长曲线及肿瘤杀伤率。结果　转染p16基因的U251、C6细胞有外源p16基因的整合及表达,克隆形成率减少,生长速度明显减慢,对辐射的敏感性增强。结论　导入外源野生型p16基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖,提高胶质瘤细胞对辐射的敏感性。     

In vitro effect of p21WAF-1/CIP1 gene on growth of human glioma cells mediated by EGFR targeted non-viral vector GE7 system

Objective: To construct the EGFR targeted non-viral vector GE7 system and explore the in vitro effect of p21WAF-1/CIP1 gene on growth of human glioma cells mediated by the GE7 system. Methods: The EGFR targeted non-viral vector GE7 gene delivery system was constructed. The malignant human glioma cell line U251MG was transfected in vitro with β-galactosidase gene(reporter gene) and p21WAF-1/CIP1 gene (therapeutic gene) using the GE7 system. By means of X-gal staining, MTS and FACS, the transfection efficiency of exogenous gene and apoptosis rate of tumor cells were examined. The expression of p21WAF-1/CIP1 gene in transfected U251MG cell was examined by immunohistochemistry staining. Results: The highest transfer rate of exogenous gene was 70%. After transfection with p21WAF-1/CIP1 gene, the expression of WAF-1 increased remarkably and steadily; the growth of U251MG cells were inhibited evidently. FACS examination showed G1 arrest. The average apoptosis rate was 25.2%. Conclusion: GE7 system has the ability to transfer exogenous gene to targeted cells efficiently, and expression of p21WAF-1/CIP1 gene can induce apoptosis of glioma cell and inhibit its growth.     

电离辐射诱导pEgr-hPTEN 表达增强其体外抗肿瘤作用

目的：研究辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN体外稳定转染联合X射线照射对恶性胶质瘤细胞SHG-44增殖和诱导细胞凋亡的作用。 方法：以脂质体介导携有外源野生型PTEN基因的表达载体pEgr-hPTEN转染人胶质瘤SHG-44细胞,筛选稳定转染细胞克隆并扩增培养,以Western blotting法检测PTEN基因的辐射诱导表达情况,应用流式细胞仪及生长曲线测定稳定转染联合0~10 Gy X射线照射对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响。 结果：SHG-44-hPTEN稳定转染细胞PTEN蛋白的相对表达量可被辐射诱导增强,5 Gy以内呈剂量依赖性增加。稳定转染联合辐射可明显抑制肿瘤细胞的恶性增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,照射后第8天稳定转染不同剂量组细胞数仅为稳定转染0 Gy假照组的30.0%~50.0%和未转染0 Gy假照组的7.7%~13.0%;稳定转染不同剂量照射组早期凋亡细胞百分数分别为稳定转染0 Gy假照组的1.5~2.3倍、未转染照射组的1.9~4.4倍及未转染0 Gy假照组的3.4~5.1倍。 结论：体外基因-放射联合作用可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,具有显著的肿瘤抑制作用。     

沉默lncRNA HCP5上调miR-508-3p表达增加胶质瘤细胞的辐射敏感性

目的探讨长链非编码(lnc)RNA HCP5对胶质瘤细胞的辐射敏感性的影响及其机制。方法分别用0、2、4、6、8 Gy射线照射胶质瘤细胞U251和U87,作为不同剂量辐射组;将si-con、si-HCP5、pcDNA、pcDNA-HCP5转染至细胞U251和U87中,分别记为si-con组、si-HCP5组、pcDNA组、pcDNA-HCP5组;将si-con、si-HCP5转染至细胞U251和U87后再用4 Gy射线照射,分别记为IR+si-con组、IR+si-HCP5组,仅用4 Gy射线照射的细胞记为IR组;将si-HCP5分别与anti-miR-con、anti-miR-508-3p共转染至细胞U251和U87后再用4 Gy射线照射,分别记为IR+si-HCP5+anti-miR-con组、IR+si-HCP5+anti-miR-508-3p组,转染均用脂质体法。采用RT-qPCR检测miR-508-3p和HCP5的表达;细胞克隆形成实验检测胶质瘤细胞的放射敏感性;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测磷酸化H2AX(γ-H2AX)、裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果放射处理的胶质瘤细胞HCP5高表达,miR-508-3p低表达;沉默HCP5后细胞U251和U87放射敏感性增强,细胞凋亡率升高[U251:(16.67±1.68)%,(3.58±0.62)%,t=21.929,P<0.05;U251:(12.32±1.08)%,(4.48±0.71)%,t=18.198,P<0.05],γ-H2AX[U251:(0.45±0.04),(0.23±0.05),t=10.307,P<0.05;U87:(0.38±0.04),(0.24±0.03),t=8.400,P<0.05]、Cleaved caspase-3[U251:(0.37±0.04),(0.16±0.03),t=12.600,P<0.05;U87:(0.38±0.04),(0.22±0.03),t=9.600,P<0.05]表达水平升高。相比单独沉默HCP5或辐射处理,沉默HCP5同时辐射处理U251细胞,细胞凋亡率[(25.34±1.54)%,(16.67±1.68)%,t=11.413,P<0.05;(25.34±1.54),(11.13±1.06),t=22.802,P<0.05]显著升高,γ-H2AX[(0.69±0.05),(0.45±0.04),t=11.245,P<0.05;(0.69±0.05),(0.31±0.04),t=17.804,P<0.05]、Cleaved caspase-3[(0.52±0.06),(0.37±0.04),t=6.240,P<0.05;(0.52±0.06),(0.34±0.04),t=7.488,P<0.05]表达水平升高。辐射处理后且沉默HCP5后U251和U87细胞中p-PI3K[(0.21±0.02),(0.52±0.04),t=20.795,P<0.05;(0.26±0.23),(0.67±0.07),t=5.116,P<0.05]、p-AKT[(0.22±0.03),(0.66±0.07),t=17.332,P<0.05;(0.23±0.04),(0.71±0.03),t=28.800,P<0.05]表达水平降低。HCP5可靶向调节miR-508-3p表达;干扰miR-508-3p逆转了沉默HCP5和辐射对U251和U87细胞放射的增敏和促进细胞凋亡的作用,降低了γ-H2AX、Cleaved caspase-3表达水平,提高了p-PI3K、p-AKT表达水平。结论沉默lncRNA HCP5可增强胶质瘤细胞的辐射敏感性,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-508-3p及PI3K/Akt信号通路有关,可为胶质瘤治疗提供新靶点和新思路。     

野生型p53基因转染前列腺癌细胞系PC-3m对细胞凋亡的不同影响

目的：观察野生型p53基因转染对前列腺癌细胞PC-3m增殖和凋亡的影响。方法：用脂质体Lipofectamine将真核表达载体pCMV—p53和pCMV—p53mt135分别转染PC-3m细胞，MTT法检测转染前后细胞生长情况，转染48h后采用流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率。结果：pCMV—p53转染后的PC-3m细胞生长明显受到抑制，FCM显示，转染48h后，细胞凋亡率为15％。结论：野生型p53基因瞬间转染PC-3m细胞可抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。     

野生型p53基因抑制人结肠癌细胞的体内抑瘤效应观察

目的研究人野生型p53基因对人结肠癌SW1116细胞生长的影响。方法采用电穿孔法将正向携带有野生型p53基因cDNA的重组反转录病毒质粒导入有p53基因突变的人结肠腺癌SW1116细胞,筛选带外源p53基因的G418抗药性SW1116细胞克隆,对其进行生长速度、软琼脂集落形成及裸鼠成瘤等方面的检测,分析其生物学特性变化。结果导入人野生型p53基因使人结肠腺癌SW1116细胞的生长速度明显减慢(P<0.05或0.01)、软琼脂集落数量明显较对照组减少(P<0.05或0.01),移植瘤体积较对照组明显小(P<0.05)。结论人野生型p53基因对人结肠腺癌SW1116细胞有明确的抑瘤效应。     

野生型p53,GM-CSF和B7-1基因转移对卵巢癌细胞系SKOV-3增生的影响

目的研究人野生型p53、GM-CSF和协同刺激因子B7-1基因共转染对卵巢癌细胞增生的影响。方法以携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒载体转染卵巢癌细胞系SKOV-3,荧光显微镜观察,流式细胞计数计算转染效率;以携带野生型p53、GM-CSF和B7-1基因的腺病毒转染SKOV-3细胞,RT-PCR检测目的基因表达,观察转染前后细胞形态的变化,绘制细胞生长曲线。结果当腺病毒的感染强度达到400 pfu/细胞时,转染率可达到81%;以携带目的基因的腺病毒转染SKOV-3细胞,能检测到相应基因表达;转染后SKOV-3细胞形态发生改变,增生减缓。结论腺病毒载体能介导目的基因转入卵巢癌细胞,并有效表达;人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因共转染能减缓卵巢癌细胞的增生。     

hTERT启动子调控的野生型p53基因对膀胱癌细胞的靶向性抑制作用

目的:探讨人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)启动子调控的野生型p53基因的靶向性表达,观察对人膀胱癌细胞株T24的选择性杀伤效应及细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法,将构建的含hTERT启动子调控表达人野生型p53基因和报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒,分别转染膀胱癌细胞株T24和正常人胎肺成纤维细胞,应用荧光显微镜、电镜、台盼蓝拒染法及流式细胞仪等方法,观察基因的靶向性表达及对膀胱癌细胞株T24细胞形态学、生长抑制曲线及细胞周期变化的影响。结果:转染hTERT启动子调控的目的基因可在端粒酶阳性的膀胱肿瘤细胞中靶向性表达发出绿色荧光。靶向转染野生型p53基因能抑制膀胱癌细胞生长,72h后细胞生长抑制率分别为48.5%、高于常规培养组3.6%和阴性对照组2.5%,差异有显著性意义(P<0.05)。电镜可见典型的凋亡细胞。细胞周期分析G0和G1期细胞比例明显增高,并出现凋亡峰。结论:构建的hTERT启动子调控表达的野生型p53基因能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥靶向性抑制膀胱癌细胞生长作用。     

野生型p53基因对人肺癌细胞SPC-A1凋亡的诱导

目的：观察外源性野生型p53基因特染对人肺腺癌细胞SPC-A1增殖和凋亡的影响。方法：用脂质体Lipofectamine将真核表达载体pCMV-p53和pCMV-p53mtl35分别转染SPC-A1细胞，MTT法检测转染前后的细胞生长情况，于转染后24、48、72h分别收集细胞，以流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率，并进行染色体DNA断裂的测定。结泉：pCMV-p53转染后的SPC-A1细胞生长受到明显抑制，转染后24、48、72h的凋亡率分别为1．78％、24．11％、35．75％，转染后48、72h的细胞染色体断裂明显。结论：野生型p53基因瞬间转染可诱导肺癌细胞SPC-A1凋亡。     

SUMO-1 Enhancing the p53-induced HepG2 Cell Apoptosis

Wild-type p53 gene ( wtp53) can induce cellapoptosis andinhibit oncogenesis[1 ,2]. The proteinof muring double minute gene 2 ( MDM2) was in-duced by wtp53 .After MDM2's binding to p53 pro-tein,it can sti mulate the p53 degradation throughthe ubiquitin pathway , forming the p53-MDM2negative feedback circle[3 ,4].Small ubiquitin-likemodifier-1 (SUMO-1) plays an crucial role in theprotein post-translational modification[5 ,6].SUMO-1 can compete the receptor binding sites of someproteins wi…     

介导p53基因转移的重组体腺病毒对人肺癌细胞的抑制作用

ｐ５３基因突变是肿瘤发生中的多发事件,导入野生型ｐ５３基因能抑制肿瘤细胞的生长。通过腺病毒载体介导。将野生型ｐ５３基因转导到人肺腺癌细胞系（ＧＬＣ－８２）中,证实对肺腺癌细胞生长具有明显的抑制作用,换制率达６１％。     

HIF-1α反义寡核苷酸体外对人脑胶质瘤细胞U251的作用

目的:研究缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,探讨以H IF-1α为靶点进行反义寡核苷酸转染治疗胶质瘤的有效性。方法:设计合成针对H IF-1α的寡核苷酸片段.实验分6组:空白对照组、脂质体组、正义组和反义组(1.0μmol/l、2.5μmol/l和5.0μmol/l)。利用脂质体包裹瞬时转染人胶质瘤细胞系U251,MTT法检测细胞增殖;采用AO/EB染色及末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的变化。结果:转染后各组细胞增殖抑制率分别为(1.30±0.05)%、(1.98±0.35)%、(2.47±0.48)%、(22.30±2.08)%、(33.60±4.19)%和(56.20±4.22)%。转染H IF-1α反义寡核苷酸组较各对照组相比细胞增生下降,凋亡增加(P<0.01)。结论:H IF-1α反义寡核苷酸转染人胶质瘤U251细胞系可以抑制细胞增生并诱导胶质瘤细胞凋亡,H IF-1α有望成为一个极具潜力的肿瘤治疗的靶点。     

格尔德霉素对胶质瘤细胞增殖及相关基因表达的影响

目的：研究格尔德霉素（GDM）对肝细胞生长因子（HGF）引起的胶质瘤细胞增殖及相关基因表达的影响。方法：选用人恶性胶质瘤细胞系U251 MG和U87 MG,应用HGF作用24 h后,分别加入不同浓度的GDM再处理48 h。MTT法检测细胞增殖及抑制,分组为：正常细胞组、HGF组、GDM组、HGF+GDM组和紫杉醇组,其中HGF为终浓度30 μg•L^-1,GDM为50、250、500与1 000 nmol•L^-1,紫杉醇为60 μg•L^-1;RT-PCR法检测HGF及c-Met基因的表达,分组如上,GDM为1　000 nmol•L^-1。结果：HGF作用U251 MG与U87 MG细胞24 h后,细胞增殖率分别为0.139±0.070与0.242±0.167,而50、250、500与1 000 nmol•L^-1 GDM对U251 MG和U87 MG生长具有抑制作用,抑制率分别为0.029±0.028、0.027±0.017、0.312 ±0.084和0.339±0.047与0.116±0.069、0.222±0.191、0.269±0.056和0.276±0.031;而紫杉醇对U251 MG和U87 MG细胞的抑制率分别为0.075±0.062与0.071±0.044;RT-PCR结果显示,HGF组HGF与c-Met表达较正常组增加（P<0.05）,而HGF+GDM组则较HGF组明显降低（P<0.05）。结论：GDM能抑制HGF诱导的胶质瘤细胞增殖,并且能从基因水平抑制其表达。     

辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL对肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用

目的：研究携带可溶性人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(shTRAIL)基因的辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL在人肝癌细胞株中的表达及其促凋亡作用。方法：体外通过脂质体转染SMMC7721细胞。转染细胞分别接受0(假照组)、2、5和10 Gy X线照射,ELISA法检测sTRAIL的表达;细胞分为正常SMMC7721组,分别接受0(假照组)、2和5 Gy X线照射的转染空质粒pshuttle-Egr1组及转染重组质粒pshutlle-Eyr1-shTRAIL组,采用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率;分别取SMMC772细胞、转染STRAIL细胞、转染空载体及照射组细胞,采用克隆形成实验检测细胞存活率。结果：不同剂量X射线照射SMMC7721-shTRAIL细胞上清中可溶性TRAIL表达量明显高于假照组（P< 0.001）;与假照组比较,照射转染后SMMC7721细胞的凋亡细胞百分数明显增加（P<0.05或P<0.001）,细胞存活率明显下降（P<0.05
或P<0.001）。结论：pshuttle-Egr1-shTRAIL