犬型钩端螺旋体抗血清被动免疫保护力初步测试

目的：拟通过大型钩端螺旋体56603株39KD抗原抗血清的制备及其抗血清免疫保护力测试，为钩体病的诊断与防治研究提供资料。方法：将39KD抗原采用四种方法接种家兔制备抗血清，然后通过被动免疫途径，对其抗血清免疫保护力进行测试。结果：四种方法接种家兔制备的抗血清凝集效价均在200左右，四者无显著差异。除1株非致病钩体Patoc Ⅰ外，其抗血清能保护豚鼠免受10株致病性钩体(10群10型)的攻击。结论：犬型钩体39KD抗原抗血清，具有很好的动物免疫保护作用，具有种特异性，值得进行深入的研究。     

产生抗单纯疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用HSV-1 SM44株免疫C×S/1小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/O融合,经HAT选择培养,细胞融合率为100％。ELISA筛选后获得53孔产生抗HSV抗体的杂交瘤阳性孔。对1A12,2A8,1G8,1D10,2C5 5株细胞系用有限稀释法做2～5次克隆化,阳性克隆率均达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养4个月,仍能稳定产生单克隆抗体,冻存的细胞系经复苏后亦能稳定产生抗体。应用ELISA及IF试验证明,5种单克隆抗体均与HSV-1和HSV-2标准株呈特异性反应。ELISA测定,杂交瘤培养上清抗体效价为10~(-2)～10~(-3),制备免疫腹水效价为10~(-4)～10~(-7)。5种单克隆抗体与EBV,CMV,JEV和HFRSV无交叉反应。     

乙型肝炎病人血清中PreS1／2抗原检测方法的建立及初步应用

目的：建立乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）ＰｒｅＳ抗原检测方法。方法：表达与纯化了ＨＢＶＰｒｅＳ１／２抗原，并用纯化蛋白免疫家兔，利用纯化抗血清包被ＥＬＩＳＡ板，吸附病人血清中包含ＰｒｅＳ１／２抗原的ＨＢＶ的病毒颗粒或病毒亚单位，特异吸附颗粒用抗ＨＢｓＡｇ的酶标单抗检测。结果：利用金属螯合柱层析的方法高度纯化了ＰｒｅＳ重组抗原，用复性的重组抗原免疫家兔３次，血清抗体滴度可达１     

炭疽菌保护性抗原抗血清的制备及其应用

为了及时测定炭疽杆菌培养物中保护性抗原(PA)的浓度,除了Wright 1962用过补体结合法外,从1957至1971年国外多用琼脂扩散法滴定炭疽菌免疫原及抗体,他们使用了H_(533)抗血清(活芽胞免疫马),H_(25)抗血清(培养滤液明矾沉淀物免疫马)及R-1抗血清(豚鼠毒血浆中分离的因子1免疫兔)分别测定三种因子。本组曾用DEAE-纤维素分离炭疽菌滤液后及再经聚丙烯酰胺电泳分离5—8段抗原。本文报告以上述抗原免疫家兔及绵羊获得抗血清,并利用对流免疫电泳这一快速简便法来测定培养物中的PA含量,并对家兔免疫该化学苗后产生的抗体进行动态测定。     

人原甲旁素的放射免疫分析法:组织提取物及血浆激素含量的分析

著者建立了人的原甲旁素(hProPTH)的放射免疫分析技术并用于甲状旁腺及血浆内该激素含量的检测。抗血清系由人工合成的牛原甲旁素(bProPTH)的18肽碎片作抗原在家兔免疫获得。     

酶联免疫吸附试验检测乙脑病毒抗原的研究Ⅰ实验方法的建立(摘要)

本文采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双夹心法,通过影响因素、实验条件的研究,建立了检测乙脑病毒抗原的实验方法。 通过测定,最适条件是包被抗体(差速离心提纯抗原免疫豚鼠抗乙脑病毒IgG)和第二抗体(差速离心抗原免疫家兔抗IgG)浓度为10μg/ml,羊抗兔酶结合物浓度1:30000,抗原抗体作用时间2小时,温度37℃。曾用鱼精蛋白-硫乙二醇半提纯乙脑病毒抗原免疫     

用微克炭疽保护性抗原制备抗血清

免疫血清在免疫学实验中是不可少的试剂之一。有高纯度高效价抗血清是抗原抗体体外测定能否获得成功的首要条件。目前制备免疫血清采用的免疫方案各家不一,而其成功往往依赖于经验。为制备免疫吸附剂及免疫测定的需要,我们在已往制备炭疽保护性抗原抗血清的基础上,制备了一批抗炭疽高效液相纯抗原免疫血清,给4只家兔免疫,全部产生了较满意的抗体水平。     

应用免疫电镜检出简易浓集的病毒

1971年kelen用琼脂浓集法制备免疫电镜样品,检测澳大利亚抗原成功后,现已用于多种病毒。本文报告了对该方法的改进及检测七种病毒的电镜观察结果。病毒冠状病毒、腺病毒(3和7型)、辛德比斯病毒、西方马脑炎病毒、基孔肯亚病毒、登革病毒(1—4型及新分毒株2株)和水疱性口炎病毒均为本实验室保存的毒株,分别培养于人胚肾原代细胞、白纹伊蚊传代细胞C_6/36纯株及鸡胚纤维母细胞。按常规方法收取感染病毒的细胞培养液,保存-20℃备用。     

一种能够在人绒毛膜促性腺激素(hCG)存在的条件下,对人促黄体激素(LH)进行放射免疫分析的特异性抗血清的制备

LH 和 hCG 结构相似,决定二种激素免疫活性的β-亚单位也极为相近,所以为了在有 hCG 存在情况下进行 LH 的放射免疫测定,必须用高纯度(10,000国际单位/毫克)的 LH 为抗原免疫家兔,所得抗血清再经结合了 hCG 的 Sepharose-4B 琼脂糖亲和层析     

抗牛CuZn-超氧化物歧化酶的抗血清与肿瘤患者血中CuZn-超氧化物歧化酶的抗原抗体反应新发现

牛与人的CuZn-超氧化物歧化酶(简称CuZn-SOD)虽为不同种属的酶,但其一级结构中150个氨基酸残基中有125个排列顺序相同,而且两者的二、三、四级结构也可能类似。如果肿瘤患者血中CuZn-SOD的结构发生些微变化,是否会改变该酶与抗牛CuZn-SOD的抗血清之间抗原抗体反应的强不相容性,至今无人研究。为了研究此问题,我们建立了某些方法与新技术如(1) 分离纯化牛CuZn-SOD。其比活性与紫外吸收、电泳图谱等理化性质完全达到纯酶标准。(2) 制备了抗牛CuZn-SOD的抗血清。用免疫双扩散法鉴定出抗血清效价为1∶32。抗血清可与有活性或无活性的牛CuZn-SOD发生强抗原抗体反应。(3) 建立了激光比浊的抗原抗体复合物定量法。该法手续简便,灵敏度较高。(4) 新建立了化学发光的抗原抗体复合物定量法,其特点是应用我们推导的动力学公式     

2型猪链球菌溶血素及其抗血清的免疫保护活性研究

目的 探讨2型猪链球菌(SS2)溶血素(SLY)及其抗血清的免疫保护活性.方法 以纯化的SLY重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,收集抗血清,测定抗血清的效价及其中的IgG亚型,用致死剂量的SS2强毒株攻击小鼠,评价SL Y的免疫保护活性.制备SLY抗血清并以其被动免疫小鼠,4h后用致死剂量的SS2强毒株攻击小鼠,评价抗血清的...     

细粒棘球绦虫高免动物血清的特异性和敏感性分析

目的获得用于诊断细粒棘球绦虫成虫感染时特异性和敏感性高的抗血清。方法用细粒棘球绦虫成虫抗原免疫兔2只，制备高免血清，血清用饱和硫酸铵沉淀、透析、获得比较纯化的抗体，测量浓度和效价后，3μg／ml兔抗体包被，检测感染了不同犬带科绦虫的实验犬和空白犬粪样，单克隆抗体补捉抗原（1：6000），再用HRP标记的兔抗小鼠IgM（...     

输血传播病毒单独感染者肝组织病理学观察

近年来 ,随着临床诊断试剂和检测方法的灵敏度、特异性的不断提高 ,病毒性肝炎除甲、乙、丙、丁、戊和庚 6种肝炎病毒感染和巨细胞病毒 (Cylomegalovirus,CMV)、EB病毒 (Ep stein Barrvirus,EBV)感染外 ,可能还存在尚未被发现的致人类病毒性肝炎的其他致病因子[1 2 ] 。Nishiza     

抗河豚毒素单克隆抗体的制备及其抗毒效应

目的 :为制备高毒性的小分子生物毒素河豚毒素 (TTX)的单克隆抗体 (mAb) ,探讨TTX中毒免疫抗毒的可能性。方法 :以TTX为半抗原 ,与中国鲎血蓝蛋白 (TTH)化学偶联制备人工抗原 (TTX_TTH) ;并以其免疫BALB c小鼠。用杂交瘤技术制备抗TTX的mAb ,用竞争抑制酶免疫分析法测定mAb对TTX结合活性 ,以mAb与检测抗原的结合被抑制 5 0 %时的TTX浓度 (IC50 )表示mAb的结合反应性。对小鼠预防注射抗体 ,测试抗体对抗TTX中毒的效果。结果 :建立了 2株对TTX_BSA阳性反应的mAb(1E4和 3C11) ,均属IgG1 亚类 ;具有TTX结合活性 ,其IC50 值分别为 3.2× 10 _6 mol L和 9.9× 10 _7mol L ;亲和力常数 (Kaff)分别为 3.0× 10 6 L mol和 2 .8× 10 6 L mol。小鼠预防给予mAbs ,可对抗 1×LD的TTX攻毒 ,动物存活率 71% ;抗 1.5×LD时 ,1 3存活 ;抗毒效果好于小鼠抗血清对照。结论 :用新的TTX人工抗原成功地制备了抗TTX的mAb ,具有一定的体内预防抗毒效价。     

流行性出血热特异性荧光抗体的制备和抗原检测的实验研究

用直接免疫荧光法,检测流行性出血热相关抗原(EHF-AA)阳性黑线姬鼠(传至第8代)的肺、肾、肾上腺悬液,接种豚鼠,制备的荧光血清,经实验研究表明:(1)该血清与EHF急性期病人血白细胞作用时,仅在单核细胞中能检到EHF-AA,而非疫区门诊病人和输血员均为阴性,用兔及人荧光血清作对照,所得结果与豚鼠荧光血清相同;(2)用EHF病毒制成的细胞抗原片进行阻断试验时,发现经EHF病人血清作用的标本,荧光强度受到明显抑制;(3)抗体效价较免疫前显著增长。这些结果表明制备的荧光血清是特异的,并佐证EHF-AA在黑线姬鼠中的传代是成功的。     

人肿瘤转移相关基因mag-2的多克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备和鉴定针对人肿瘤转移正相关基因mag-2蛋白产物的特异性多克隆抗体.方法:采用生物软件分析mag-2蛋白序列特性,预测特异性抗原表位,人工合成17肽抗原表位片段,将之与钥孔碱血蓝蛋白(KLH)耦联,采用背部皮下及皮内多点注射法免疫日本大耳白兔,收集分离血清,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其效价, Western印迹试验鉴定其特异性及其在多种肿瘤细胞中的表达.结果:成功免疫日本大耳白兔,ELISA结果表明得到的抗血清与免疫多肽有良好的结合,获得了高效价的多克隆抗体;Western印迹试验结果显示抗血清检测到的条带大小约为55×103,与mag-2理论蛋白产物相对分子质量相符;发现mag-2在多种肿瘤细胞中均有表达.结论:成功制备了mag-2特异性多克隆抗体,为深入研究mag-2基因在肿瘤转移中的作用提供了一个有用的工具.     

人禽流感HSN1病毒HA1蛋白抗原表位及主要免疫功能区特征的研究

目的 确定人禽流感H5N1病毒HA1蛋白的单克隆抗体(McAb)抗识别表位及主要免疫功能区.方法 将16条人禽流感H5N1病毒HA1基因重叠片段克隆入真核表达载体pDisplay,构建表达HA1蛋白的重叠肽段重组质粒,转染HeLa细胞后制备细胞抗原片.利用灭活的H5N1病毒免疫BALB/C小鼠,制备病毒特异单克隆抗体(单抗)和多克隆抗体(多抗),采用间接免疫荧光法分析单抗、多抗与HA1肽段的反应性.确定HA1蛋白的单抗识别表位及主要免疫功能区.结果 成功克隆、表达了16条不同长度的H5N1肽段,并制备、获得30株分泌抗H5N1型禽流感病毒McAb的杂交瘤细胞株,其中18株为抗HA的单抗,18株中有6株单抗具有中和病毒活性.利用表达的H5N1肽段对单抗识别表位进行分析,初步确定3B5、3D1、3132、M6、M3等18株McAb识别表位区域分别位于氨基酸残基aa133-143、aa155-165、aa166-196、aa166-176、aa34-66及aa296-328之间,其中3B5、3D1、3B2、M6等McAb识别表位为序列依赖型表位,M3和M7等具有中和活性的McAb识别表位为构象性中和表位.结论 利用制备的H5N1病毒特异性McAb和表达的病毒HA1蛋白重叠肽抗原,初步确定了18株抗HA McAb的识别表位和HA1蛋白的主要免疫功能区,为进一步研究开发新型疫苗提供了重要理论依据.     

基因免疫法制备小鼠抗人肝素酶多克隆抗体

目的:利用基因免疫的方法制备抗人肝素酶抗体.方法:用本室构建的表达肝素酶全长质粒pcDNA3.1(+)-HPA为基因免疫载体,免疫6～8周龄雄性BALB/c小鼠,使得质粒上的目的基因在动物体内表达,诱导动物体对DNA编码的外源蛋白产生抗体而获得肝素酶的抗血清,通过间接ELISA方法测定小鼠抗血清效价,Western 印迹鉴定抗血清特异性.结果:获得了效价较高的小鼠抗血清,最高效价可达到1∶5×104;抗体特异性与标准品一致.结论:建立了一种制备肝素酶抗体的新方法.     

辛得比斯病毒结构多肽抗原性

辛得比斯病毒有三种结构多肽:包膜蛋白E1,E2及衣壳蛋白C。为了研究病毒结构多肽与病毒抗原性的关系,分析其共同抗原及特异抗原,为病毒特异诊断提供理论依据。本文以辛得比斯病毒为模型,将分离的结构多肽免疫动物,制备抗血清,进行抗原性观察。结果表明包膜蛋白E1抗血清与同组内     

抗鼠IgG和IgM免疫血清的制备研究(摘要)

本文报告了从小鼠血清中提取IgG及IgM的方法,以及用此两种球蛋白免疫绵羊获得了两个相同效价(1:128琼脂双扩)的抗血清,此血清制备成的荧光