Box-Behnken响应面法优化夏枯草中科罗索酸和山楂酸提取工艺

目的优选夏枯草中三萜类同分异构体科罗索酸和山楂酸最佳提取工艺。方法采用HPLC建立夏枯草中科罗索酸和山楂酸含量测定方法,以科罗索酸和山楂酸含量为评价指标,通过单因素和Box-Behnken响应面法优化工艺,考察乙醇体积分数、提取时间、提取次数、料液比对科罗索酸和山楂酸提取效果的影响。结果科罗索酸和山楂酸分离度良好,分别在1.062～6.372μg(r=0.999 9)、1.326～7.956μg(r=1)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.53%(RSD=1.40%)、100.70%(RSD=2.00%)。最佳提取工艺条件为采用88.5%乙醇提取102 min,提取2次。实测与响应面法回归模型高度拟合。结论本研究建立的方法结果准确、重复性好,可用于合理优化夏枯草中科罗索酸和山楂酸的提取工艺。     

不同产地枇杷叶中三萜酸类成分的含量比较

目的 比较不同产地枇杷叶药材中三萜酸类化学成分的含量.方法 采用高效液相色谱法,测定不同产地枇杷叶中齐墩果酸、熊果酸、科罗索酸、山楂酸的含量.结果 来自安徽滁州的枇杷叶中山楂酸、科罗索酸、熊果酸的含量最高,江苏苏州的枇杷叶中齐墩果酸的含量最高.结论 不同产地的枇杷叶药材中三萜酸类成分的含量有显著的差异.     

不同产地薏苡仁药效成分含量与体外抗肺癌活性的相关性分析

目的:考察不同产地薏苡仁的药效成分含量及其对肺癌细胞的增殖抑制作用,阐明药效组分含量与药效的相关性,确定薏苡仁的最优产地。方法:采用HPLC-ELSD和紫外分光光度法测定5个产地薏苡仁中甘油三油酸酯和总甘油三酯的含量,通过四甲基偶氮唑盐比色法测定不同产地薏苡仁提取液对人肺癌细胞A549和SPC-A-1的抑制率。结果:河北、辽宁、福建、贵州、山东产地的薏苡仁中甘油三油酸酯质量分数分别为0.91%,1.14%,0.82%,0.77%,1.09%,总甘油三酯质量分数分别为14.83,10.88,7.85,5.26,7.71 mg·g-1。对A549的半数抑制浓度(IC50)分别为2.33,2.77,3.15,3.24,3.08 g·L-1,对SPC-A-1的IC50依次为1.64,2.15,2.63,3.01,2.99 g·L-1。结论:5个产地薏苡仁中指标成分均符合2010年版《中国药典》的规定。河北产样品中总甘油三酯含量最高,抗肺癌活性最强,提示抗肺癌药效与总甘油三酯含量呈正相关。     

基于中药组分结构理论的夏枯草属药材防治肺癌物质基础研究

目的:在组分结构理论指导下研究夏枯草防治肺癌的物质基础。方法:采用A549细胞模型对9个产地夏枯草属药材进行活性筛选,运用HPLC法分析不同产地夏枯草属药材各组分间及各组分内部主要活性成分的含量。在组分结构理论指导下通过对含量测定结果的分析,探索各组分结构比与防治肺癌活性间的关系。结果:江苏、安徽、河南、广西、湖北、浙江、贵州、江西、四川的夏枯草属药材对A549细胞的IC50分别为62.98、65.33、161.94、158.36、303.90、328.84、278.43、329.57、279.40μg生药/mL。HPLC测定结果表明,咖啡酸、迷迭香酸、芦丁、槲皮素在江西夏枯草中含量最高,熊果酸和齐墩果酸在四川硬毛夏枯草中含量最高。而此两产地夏枯草的对A549细胞的抑制活性较差。药效最好的江苏山菠菜和安徽夏枯草虽六种成分含量均较低,但两者酚酸、黄酮、三萜三组分的结构比及六种主要成分(咖啡酸、迷迭香酸、芦丁、槲皮素、熊果酸、齐墩果酸)的结构比相似,三组分结构比分别为(1.41∶0.44∶0.53)和(1.42∶0.44∶0.66),六成分的结构比分别为:(1.0∶14.7∶3.9∶1.0∶4.4∶1.4)和(1.0∶14.8∶4.0∶0.8∶5.6∶1.8)。结论:夏枯草属药材防治肺癌的物质基础由具有固定结构比的酚酸、黄酮和三萜三类组分构成;夏枯草属药材防治肺癌的物质基础具有稳定、有序的整体性结构。     

基于网络药理学探讨夏枯草对非小细胞肺癌的作用机制

目的:基于网络药理学方法,探讨夏枯草治疗非小细胞肺癌的作用机制,阐述其科学内涵。方法:检索中草药系统药理学平台(TCMSP)获取夏枯草有效活性成分与作用靶点;检索疾病-基因组合数据库(Dis Ge NET)获取非小细胞肺癌相关疾病靶点;构建"药物-成分-疾病-靶点"网络,分析其作用机制;构建关键靶点蛋白质相互作用(PPI)网络,对关键靶点进行基因本体(GO)分类富集分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:从TCMSP中获取有效活性成分11种,靶点178个;从Dis Ge NET数据库获取非小细胞肺癌相关基因2 019个;构建"药物-成分-疾病-靶点"网络,获得夏枯草治疗非小细胞肺癌的关键靶点114个;构建其PPI网络,包含节点114个,边1 952条。分析PPI网络,度值较高即夏枯草治疗非小细胞肺癌的关键靶点包括蛋白激酶B1(Akt1),血管内皮生长因子(VEGFA),半胱天冬酶-3(Caspase-3),白细胞介素(IL)-6,JUN,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 8,原癌基因蛋白(MYC),表皮生长因子受体(EGFR)等。对其进行生物学过程富集分析,显示涉及152种生物学过程,其中细胞增殖,细胞分裂,细胞凋亡等多种与癌症相关; KEGG富集涉及147条信号通路,其中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/Akt通路,核转录因子(NF)-κB通路,低氧诱导因子-1(HIF-1)通路,p53信号通路,EGFR信号通路等对非小细胞肺癌的发生、发展、侵袭、转移有着关键性作用是公认的。结论:本研究初步验证了夏枯草治疗NSCLC的基本药理学作用与机制,为进一步探究其作用机制奠定基础。     

红景天苷抗非小细胞肺癌作用机制研究进展

肺癌是最常见的呼吸道恶性肿瘤之一,居全球癌症死亡原因首位,其主要病理类型为非小细胞肺癌。由于非小细胞肺癌早期症状不典型,大多数患者确诊时已处于癌症中晚期,失去了手术机会且对放化疗不敏感,生存率较低。中药红景天具有益气活血、通脉平喘的功效,广泛应用于神经系统疾病、心血管疾病、糖尿病、恶性肿瘤等疾病的治疗。红景天苷是红景天的主要抗肿瘤成分,研究表明其可通过抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞转移、改善免疫功能等多种途径发挥抗肿瘤作用,说明其在抗非小细胞肺癌方面有巨大潜力,推测其治疗非小细胞肺癌具有良好的前景。下一步应深入探索红景天苷药理毒理性质、安全用量、毒副反应等,为红景天苷的进一步开发利用提供参考。     

β-榄香烯体内外对人肺癌细胞株的作用及其机制

目的:系统研究β-榄香烯体内外抗肺癌药理学作用及其作用机制。方法:体外抗肿瘤实验采用MTT法,检测浓度12.5~200μmol·L-1的β-榄香烯对人肺癌细胞株SPC-A-1,A549及人正常胚胎肺成纤维细胞MRC-5的细胞增殖抑制率;抗肿瘤机制研究采用Hoechst 33258染色,观察细胞凋亡时细胞核的形态学变化,流式细胞术FITC-Annexin V/碘化丙啶(PI)双标记染色法检测细胞凋亡率。体内以裸鼠移植瘤为模型,肿瘤生长抑制率为指标,检测β-榄香烯对荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用。结果:β-榄香烯作用48 h时SPC-A-1,A549的50%抑制浓度(IC50)分别为126.0,134.1μmol·L-1,但对人胚胎肺成纤维细胞MRC-5有促进增殖作用,表明β-榄香烯对肺癌细胞具有选择性抑制作用。β-榄香烯对人肺癌细胞株SPC-A-1增殖的抑制作用呈时间和浓度依赖性,干预24,48,72 h的IC50值分别为549.7,126.0,21.2μmol·L-1;Hoechst 33258染色后倒置荧光显微镜下观察可见β-榄香烯孵育后出现凋亡细胞核固缩,浓染,着色深而呈亮蓝色;流式细胞术检测结果显示,β-榄香烯可诱导SPC-A-1细胞出现不同程度的凋亡。给药剂量为45,135 mg·kg-1的β-榄香烯在体内对裸鼠移植性人肺癌SPC-A-1细胞的增殖抑制率分别为34.01%,49.57%。结论:β-榄香烯具有选择性抗肺癌作用,提示其在发挥抗肿瘤作用的同时其毒副作用小,而且该作用可能机制是通过诱导肺癌细胞凋亡实现的。     

四种甘草对人乳腺癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的比较研究

目的比较新疆四种野生甘草活性成分对人乳腺癌细胞的增殖抑制作用,以期筛选出药效最佳的甘草种类。方法采用MTT法检测不同样品对BCAP-37细胞的增殖抑制作用,Hoechst33258荧光染色法检测各样品诱导BCAP-37细胞凋亡的作用。结果4种甘草的活性成分对人乳腺癌BCAP-37细胞具有显著的增殖抑制与诱导凋亡的作用,且存在显著的种间与产地间差异。结论抗癌药效最佳的甘草种类为阿拉尔甘草。     

黄芪甲苷抗人肺癌SPC-A-1细胞增殖作用及其机制

目的探讨黄芪甲苷对人肺癌SPC-A-1细胞增殖抑制作用及其机制。方法细胞分为不同浓度黄芪甲苷组(10、20、40μmol/L)及溶剂对照组,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)染色法检测黄芪甲苷对SPC-A-1细胞活力的影响,原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性,免疫印迹法(Western blot)检测β细胞淋巴瘤2因子(BCL2)、凋亡相关基因(BAX)蛋白的表达。结果黄芪甲苷作用24、48、72 h后能显著抑制SPC-A-1细胞活力;同时黄芪甲苷能够增加SPC-A-1细胞的凋亡率;10~40μmol/L的黄芪甲苷能明显增加SOD及GSH-Px的活性,同时能使细胞中BCL2蛋白表达降低(P0.01),BAX蛋白表达升高,BCL2/BAX比率降低。结论黄芪甲苷能抑制SPC-A-1细胞增殖,增加细胞凋亡率,其机制可能与其增加SOD及GSH-Px活性有关。     

直立白薇苷C诱导肺癌A549细胞凋亡的作用机制

目的研究白薇诱导肺癌A549细胞凋亡的活性成分及其作用机制。方法以肺癌A549细胞为实验对象,通过硅胶柱层析等方法确定其活性成分,并利用比色法研究活性成分对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9的活性以及凋亡相关基因肿瘤坏死因子(TNF-α)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(BCL2)、Caspase-3和生存素(Survivin)的影响。结果分离获得1种能诱导肺癌A549细胞凋亡的活性成分,经鉴定为直立白薇苷C。它可显著抑制A549细胞增殖、诱导A549细胞凋亡。同时增强Caspase-3和Caspase-9的活性,上调TNF-α基因表达,下调BCL2、Caspase-3和Survivin等基因表达。结论直立白薇苷C可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其调节Caspase家族因子活性有关。     

Activation of AMP‐activated protein kinase on human gastric cancer cells by apoptosis induced by corosolic acid isolated from Weigela subsessilis

Corosolic acid is one of the triterpenoids present in the leaves of Weigela subsessilis. The antidiabetic activity of corosolic acid has been reported previously, but to date, the anticancer effects on gastric cancer have been poorly studied. In this study, corosolic acid showed growth inhibition on SNU‐601 human gastric cancer cells, with an IC₅₀ value of 16.9 ± 2.9 μm . Corosolic acid also triggered the activation of caspase‐3 and poly (ADP‐ribose) polymerase, while it was recovered by Z‐VAD‐FMK. Moreover, the cell growth/apoptosis activities of corosolic acid were regulated by the AMP‐activated protein kinase‐mammalian target of rapamycin (AMPK‐mTOR) signals. These results showed that corosolic acid‐mediated AMPK activation leads to inhibition of mTOR, thus providing a possible mechanism of action of corosolic acid in the inhibition of cancer cell growth and the induction of apoptosis. Copyright © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.     

高效液相色谱法测定不同产地夏枯草中咖啡酸和迷迭香酸的含量

目的比较不同产地夏枯草中咖啡酸和迷迭香酸的含量。方法采用高效液相色谱法,Waters SunFire C18色谱柱（4．6mm×150mm,5μm）,甲醇-0．1％甲酸梯度洗脱,流速1．0mL／min,检测波长330nm。结果咖啡酸在0．0992～0．4960gg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999）,平均回收率为99．75％,RSD=2．27％（n=5）;迷迭香酸在0．8288～4．1440gg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9998）,平均回收率为101．37％,RSD=1．19％（n=5）;不同产地夏枯草中咖啡酸与迷迭香酸的含量分别在0．02％-0．05％,0．09％-0．20％之间。结论不同产地夏枯草中咖啡酸和迷迭香酸含量差异很大,使用夏枯草时要注意产地差异。     

夏枯草中活性成分迷迭香酸的提取分离、结构鉴定与富集

目的:建立夏枯草中活性成分迷迭香酸的快速分离、结构鉴定与富集的方法。方法:采用回流提取,硅胶柱粗砍断,反相柱细分,半制备柱纯化样品得到目标化合物迷迭香酸,再利用化合物的理化性质,质谱和核磁等波谱学技术鉴定结构。结果:快速地从夏枯草中分离、鉴定和富集到迷迭香酸。结论:该方法简单,可重复性强,为下一步进行夏枯草的质量标准和迷迭香酸的药效研究奠定基础。     

Corosolic Acid Exhibits Anti‐angiogenic and Anti‐lymphangiogenic Effects on In Vitro Endothelial Cells and on an In Vivo CT‐26 Colon Carcinoma Animal Model

We describe the anti‐angiogenic and anti‐lymphangiogenic effects of corosolic acid, a pentacyclic triterpenoid isolated from Cornus kousa Burg. A mouse colon carcinoma CT‐26 animal model was employed to determine the in vivo anti‐angiogenic and anti‐lymphangiogenic effects of corosolic acid. Corosolic acid induced apoptosis in CT‐26 cells, mediated by the activation of caspase‐3. In addition, it reduced the final tumor volume and the blood and lymphatic vessel densities of tumors, indicating that it suppresses in vivo angiogenesis and lymphangiogenesis. Corosolic acid inhibited the proliferation and tube formation of human umbilical vein endothelial cells and human dermal lymphatic microvascular endothelial cells. In addition, corosolic acid decreased the proliferation and migration of human umbilical vein endothelial cells stimulated by angiopoietin‐1. Pretreatment with corosolic acid decreased the phosphorylation of focal adhesion kinase (FAK) and ERK1/2, suggesting that corosolic acid contains anti‐angiogenic activity that can suppress FAK signaling induced by angiopoietin‐1. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

Corosolic Acid Triggers Mitochondria and Caspase‐dependent Apoptotic Cell Death in Osteosarcoma MG‐63 Cells

The response of osteosarcoma MG‐63 cells to corosolic acid treatment has been investigated. The results showed that corosolic acid significantly inhibited cell viability in both a dose and a time dependent manner. It was found that corosolic acid increased the Bax/Bcl‐2 ratio by up‐regulating Bax expression, disrupted mitochondrial membrane potential and triggered the release of cytochrome c from mitochondria into the cytoplasm. Corosolic acid treatment triggered the activation of caspase‐8, 9 and 3. The apoptosis was obviously inhibited by pretreatment with a general caspase inhibitor, z‐VAD‐FMK. Moreover, pretreatment of CsA, a cyclophilin D ligand that inhibits mitochondria potential uncoupling, prevented the activation of caspase‐9 and caspase‐3, but not caspase‐8, and the apoptosis of MG‐63 cells, triggered by corosolic acid. All these results indicated that corosolic acid‐induced apoptosis was associated with the activation of caspases via a mitochondrial pathway. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

夏枯草对Raji细胞生长和凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的:探讨夏枯草体外抗淋巴瘤的作用,为临床应用夏枯草治疗淋巴瘤提供实验依据。方法:1.用MTT法测定夏枯草注射液对Raji细胞的生长抑制率,计算出IC50值。同时,用MTT法绘制两种浓度夏枯草注射液(50mg/m l,100 mg/m l)作用于Raji细胞的生长曲线。2.用倒置显微镜、姬姆萨染色法、MTT染色法光镜下观察细胞形态,用免疫细胞化学法检测夏枯草注射液对凋亡相关基因bc l-2、bax蛋白表达的影响,并用图文分析系统进行定量分析。结果:1.夏苦草注射液对Raji细胞生长具有明显的抑制作用,IC50(实际夏枯草浓度)为0.118 mg/m l,且在一定的剂量范围内夏枯草对Raji细胞的抑制作用具有明显的剂量依赖性,相关系数为0.97。2.夏枯草注射液(50mg/m l)作用于Raji细胞后,倒置显微镜,姬姆萨染色,MTT染色光镜下观察,均可见典型的凋亡细胞的形态学特征。免疫细胞化学结果显示,50 mg/m l夏枯草注射液作用于Raji细胞48 h后,bc l-2蛋白表达增强,而bax表示减弱,与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。结论:夏枯草可明显抑制Raji细胞增殖,可望成为新的抗淋巴瘤药物,诱导Raji细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

夏枯草提取物诱导B、T淋巴瘤细胞凋亡的实验研究

目的:研究夏枯草提取物对人B淋巴瘤Raji细胞及T淋巴瘤Jurkat细胞增殖的影响及其差异,探讨夏枯草提取物体外抗淋巴瘤的作用机制。方法:不同浓度的夏枯草提取物分别作用于Raji细胞及Jurkat细胞;48 h后分别收集各组细胞,应用MTT法、琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞技术分别检测每组细胞的增殖抑制率、细胞凋亡率及细胞凋亡情况;Western blot检测BCL-2及BAX蛋白表达变化。结果:不同浓度的夏枯草提取物对Raji及Jurkat细胞均有明显的增殖抑制作用(P0.01),且对Raji细胞的抑制作用大于Jurkat,其对Raji细胞IC50(18.01±0.92)μg/mL显著低于Jurkat细胞(25.47±0.96)μg/mL(P0.05);凝胶电泳检测结果表明夏枯草提取物处理Raji及Jurkat细胞后均出现凋亡相关DNA Ladder;随夏枯草提取物浓度的增加,Raji及Jurkat细胞的早期凋亡率均显著增加,与空白对照组比较差异显著(P0.01),浓度为15、20、25μg/mL的夏枯草提取物作用于Raji及Jurkat细胞后的早期凋亡率分别为(9.4±0.25)%、(21.68±0.46)%、(35.03±0.35)%和(4.06±0.14)%、(13.59±0.23)%、(22.92±0.20)%,同浓度条件下,Raji细胞的早期凋亡率显著高于Jurkat细胞(P0.01);随夏枯草提取物浓度增加,实验组细胞中BCL-2蛋白的表达逐渐减弱,BAX蛋白的表达逐渐增强,与空白对照组比较均有显著性差异(P0.05),同浓度条件下,Raji细胞内BCL-2蛋白表达的下降程度、BAX蛋白表达的增加程度显著高于Jur-kat细胞(P0.05)。结论:夏枯草提取物具有抑制淋巴瘤细胞增殖的作用,其机制可能与调节BCL-2和Bax蛋白的表达以诱导细胞凋亡有关,且夏枯草提取物对Raji细胞的抑制作用大于Jurkat细胞。     

HPLC-ESI-MS／MS鉴定夏枯草的主要化学成分

目的通过高效液相色谱电喷雾串联质谱（HPLC-ESI-MS／MS）手段鉴定夏枯草的主要化学成分。方法夏枯草采用水加热提取,提取液采用HPLC-ESI-MS／MS鉴定其所含的主要化学成分。结果通过保留时间、一级质谱和二级质谱信息从夏枯草水提液中鉴定或推测了8个主要化学成分的结构,其中5个有机酸类化合物通过对照品得到了鉴定。结论通过HPLC-ES〉MS／MS分析研究,夏枯草水提液的主要活性成分为有机酸类化合物。     

夏枯草提取物对α-淀粉酶抑制作用的初步研究

目的探讨夏枯草提取物对α-淀粉酶的抑制作用。方法采用水提和水提醇沉方法得到夏枯草水提物、浸膏、粗多糖,通过Van Loon′s碘比色法检测α-淀粉酶活性,以夏枯草水提物测定该酶动力学。结果夏枯草水提物对α-淀粉酶有抑制作用,呈量效关系,对该酶抑制类型为反竞争性抑制。夏枯草浸膏对α-淀粉酶抑制作用较水提物明显。结论夏枯草水提物、浸膏对α-淀粉酶存在抑制作用,有效部位可能在浸膏部分,为深入研究夏枯草提取物抑制单糖吸收作用提供了依据。