噬菌体裂解法与BACTEC-460法在结核分支杆菌快速检测中的比较

目的：比较噬菌体裂解法与BACTEC－460法在结核分支杆菌快速检测及鉴定中的价值。方法：应用噬菌体裂解法和BACTEC－460法分别检测30株结构分支杆菌临床分离株、10株非结核分支杆菌和7株非分支杆菌，以及60份临床确诊的肺结核患者的痰标本，结果：所有结核分支杆菌临床分离株噬菌体裂解试验均为阳性，而非结核分支杆菌和非分支杆菌均为阴性。41份BACTEC－460培养阳性和19份BACTEC－460培养阴性的痰标本中，噬菌体裂试验分别有34份（82．9％）和5份（26．3％）阳性。结论：噬菌体裂解法可以简便，快速地检测结核分支杆菌，并且具有较高的敏感性的特异性。     

利用噬菌体生物扩增法快速检测痰标本中结核分支杆菌

目的探讨噬菌体生物扩增（PhaB）法在快速检测痰标本结核分支杆菌（MTB）中的临床应用价值。方法应用PhaB法检测103例痰标本MTB,并与改良罗氏培养法检测结果进行比较。结果103例痰标本PhaB法与培养法检测MTB均阳性67例,均阴性25例,两法不相符11例。如以培养法结果为判断标准,则PhaB法检测痰标本MTB的敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阳性预测值（NPV）及准确性分别为94.9%（67/71）、73.5%（25/34）、90.5%（67/74）、86.2%（25/29）、89.3%（92/103）。PhaB法对涂阳标本检出率为88.6/%（62/70）,对涂阳培阳标本检出率为93.9%（62/66）,对涂阴培阳标本检出率为100%（5/5）。33例涂阴痰标本PhaB法检测MTB阳性率（36.4%）高于培养法（15.2%）,差异显著（χ^2=5.14,P〈0.05）。结论PhaB法检测测痰标本MTB具有较高的敏感性和特异性,只需要2天时间,简便快速,不需要特殊仪器设备,费用低廉,可作为MTB检测快速筛选方法。     

聚合酶链反应－冷单链构象多态性快速检测结核分支杆菌rpoB基因突变

目的评估ｒｐｏＢ基因突变检测在结核分支杆菌利福平耐药性测定中的应用价值。方法采用聚合酶链反应－冷单链构象多态性（ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ）方法对８７株结核分支杆菌临床分离株及有药敏结果的２２份相应肺结核患者痰标本进行分析。结果ＰＣＲ扩增ｒｐｏＢ基因的敏感性为１００ｐｇＤＮＡ及５０００个菌体，属于分支杆菌特异。所有分离菌的ｒｐｏＢ基因ＰＣＲ扩增均为阳性。采用套式ＰＣＲ可使扩增敏感性提高１００倍。与传统药敏试验方法相比，ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ对８７株结核分支杆菌临床分离菌利福平耐药性的检测敏感性和特异性分别为８９．６％及１００％。２２份涂阳培阳痰标本中套式ＰＣＲ扩增阳性的６份均为高度利福平耐药，其ＳＳＣＰ结果也与相应分离株的药物敏感性试验相符。结论ＰＣＲ－冷ＳＳＣＰ检测结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变快速、简便、易行，适用于结核分支杆菌分离株利福平耐药性的快速测定。如进一步提高引物增特异性及敏感性，该技术可望用于临床标本直接检测     

噬菌体生物扩增法检测结核杆菌在糖尿病合并结核感染诊断中的应用

目的探讨噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌在糖尿病合并结核感染快速诊断中的应用价值。方法收集我院门诊和综合医院内分泌科糖尿病患者的痰、纤支镜抽取液、穿刺液、脓液标本共60例，应用噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌，同时做抗酸染色，并用Versa TREK^TM细菌培养仪做分枝杆菌种鉴定。结果噬菌体生物扩增法检测的阳性率为43．3％（26／60），显著高于涂片法25．0％（15／60）（P〈0．01），与Versa TRE^TM培养阳性率为38．3％（23／60）相比，差异无显著性（P〉0．05）。21株Versa TREK^TM培养法与噬菌体生物扩增法同时阳性的菌株和5株噬菌体生物扩增法阳性菌株均鉴定为结核分枝杆菌；2株Versa TREk^TM培养法阳性菌株鉴定为非结核分枝杆菌。结论噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌具有快速、特异、敏感的特点，在糖尿病合并结核感染的快速诊断中有重要价值。     

聚合酶链反应检测肺结核患者外周血单个核细胞中结核分支杆菌DNA的临床价值

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术配对检测９２例肺结核患者外周血单个核细胞内和痰标本中结核分支杆菌ＤＮＡ，同时检测３０例非结核患者外周血。结果显示：外周血和痰标本ＰＣＲ阳性率分别为７１７％和５５４％，前者明显高于后者（Ｐ＜００５）；各型肺结核外周血和痰标本ＰＣＲ阳性率不尽相同；３０例非结核患者外周血ＰＣＲ阳性３例（１０％）。认为ＰＣＲ检测肺结核患者外周血单个核细胞内结核分支杆菌ＤＮＡ是一种快速、敏感的方法，可用于肺结核早期诊断与鉴别诊断     

PCR—SSCP方法用于痰标本中结核分支杆菌rpoB基因突变检测

本文用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法直接检测痰标本中结核分支杆菌ｒｐｏ基在变，评价此方法用于结核分支杆菌利福平耐性试验的意义，以期建立一种直接检测分支杆菌耐利福平的快速方法。本文用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法分析了３０例结核病人和２０例非结核性肺部疾病病人痰标本。３０份肺结核病人的痰用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测痰中结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变：２１份痰ＰＣＲ扩增阳性，其中１３份ＳＳＣＰ图谱与参考株Ｈ３７ＲｖＳＳＣＰ图谱有     

噬菌体裂解法与涂片法对肺结核的诊断价值比较

目的比较噬菌体裂解法与涂片法对肺结核的诊断价值。方法对168份临床诊断为肺结核患者的痰标本同时应用噬菌体裂解法和涂片法检测,对照分析结果。结果168份痰标本,噬菌体裂解法检出阳性率58.9%(99/168),显著高于涂片法萋-奈氏染色的38.1%(64/168)及金胺0染色的41.1%(69/168),(P<0.01),噬菌体裂解法对涂片阴性的标本的检出率高达39.4%(39/99)。结论噬菌体裂解法与涂片法相比,具有较高的敏感性和特异性,是一种崭新的结核分支杆菌快速快速检测方法。     

套式PCR及测序方法用于痰标本中结核分枝杆菌rpoB耐药基因突变检测

目的应用套式PCR—DNA测序方法直接检测痰标本中结核分枝杆菌相关的rpoB基因突变，以期建立一种直接检测分枝杆菌耐利福平的快速方法，并评价其临床应用价值。方法采用套武PCR—DNA测序方法直接检测112例活动性肺结核患者和20例非结核性肺部疾病患者痰、标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变情况。同份痰标本同时做涂片抗酸染色，罗氏培养及菌型鉴定。结果112例活动性肺结核患者痰标本套式PCR扩增87例呈阳性，产物DNA测序31例有rpoB基因突变。其中分离出耐利福平株的32例痰中29例发生了基因突变，耐药突变率90．6％（29／32），39例菌阴（涂阴培阴）痰中有2例发生突变。分离出对利福平敏感株的37例痰中未发生突变，20例非结核性肺部疾病患者痰标本套式PCR扩增均为阴性，特异性100％。结论套式PCR—DNA测序可望为直接检测临床痰标本中结核分枝杆菌耐利福平的准确、特异、快速的方法。     

噬菌体生物扩增法与其它方法在结核菌检测中的比较

目的通过三种方法的比较,研究噬菌体生物扩增法在结核菌检测中的意义和可行性。方法同一份标本分别做抗酸杆菌涂片法、BACTEC MGIT 960培养法和噬菌体生物扩增法。结果检测的243例标本中,噬菌体生物扩增法阳性104例,抗酸杆菌涂片法阳性44例,BACTEC MGIT 960培养法95例阳性。结论噬菌体生物扩增法检测结核菌阳性率远高于涂片法,略高于BACTEC MGIT 960培养法。噬菌体生物扩增法可以快速鉴定结核分枝杆菌,用其检测标本中的结核分枝杆菌具有很高的特异性和较高的敏感性。     

2月末结核分枝杆菌阳性初治肺结核患者菌型鉴定结果分析

目的分析深圳市南山区2月末结核分枝杆菌阳性肺结核患者的分枝杆菌分布情况,为诊断与治疗分枝杆菌感染提供参考依据。方法 2013年1月至2015年12月深圳市南山区痰结核分枝杆菌阳性的初治肺结核患者治疗2月末仍结核分枝杆菌阳性患者进行菌型鉴定并进行结果分析。结果 617例结核分枝杆菌阳性肺结核患者经2个月强化期治疗后,46例患者出现2月末结核菌阳性,其中涂片阳性为33例,涂片阴性而培养阳性为13例;涂片阳性患者中19例培养阴性,10例为结核药物敏感菌,4例为非结核分枝杆菌;涂阴培阳患者中1例为结核药物敏感菌,12例为非结核分枝杆菌;16例非结核分枝杆菌经分型鉴定后,7例脓肿分枝杆菌,9例戈登分枝杆菌。结论肺结核患者可能继发非结核分枝杆菌感染,抗结核治疗2月末肺结核病人应及时留取痰标本做结核菌涂片,培养和菌种鉴定,为进一步诊断和制定个体化疗方案提供依据。     

噬菌体生物扩增法检测痰结核分枝杆菌的临床研究

目的评价噬菌体生物扩增(PhaB)法检测痰中结核分枝杆菌的应用价值。方法分别应用PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法和BACTECMGIT960快速培养法检测2005年8月至10月沈阳市胸科医院53例疑诊肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌,并对检测结果进行比较。结果PhaB法、直接涂片法、集菌涂片法、BACTECMGIT960快速培养法检出阳性标本数分别为24,11,17和22份;以培养结果为评价标准,PhaB法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为86.4%,83.9%,79.2%和89.7%;集菌涂片法和PhaB法联合检测的敏感性为90.9%,特异性为83.9%,阳性、阴性预测值分别为80.0%和92.9%。结论PhaB法检测痰中结核菌操作简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为临床结核分枝杆菌的快速检测方法;PhaB法联合集菌涂片法进行检测可进一步提高敏感性,减少漏诊率。     

BACTEC MGIT 960和BACT/ALERT 3D系统快速培养和鉴定痰中抗酸杆菌

目的对抗酸染色阳性痰行分枝杆菌培养和鉴定。方法采用萋一尼氏抗酸染色法对临床诊断肺结核患者的晨痰涂片直接镜检,抗酸染色阳性痰经BACTEC960和BACT/ALERT3D系统进行分枝杆菌培养,分别经对硝基苯甲酸（PNB）和噻吩-2-羧基肼（TCH）培养基生长试验行分枝杆菌菌群和结核分枝杆菌复合群菌种鉴定。结果抗酸染色阳性痰标本的分枝杆菌培养阳性率100％,大多数为结核分枝杆菌（9／10）,少数为非结核分枝杆菌（1／10）,最快6天即可报告分枝杆菌阳性培养。结论BACTEC 960和BACT／ALERT3D系统具有快速培养分枝杆菌作用,抗酸染色阳性痰有必要行分枝杆菌培养和鉴定,有利于肺结核与非结核分枝杆菌病的鉴别诊断、结核分枝杆菌菌种鉴定和抗结核药物敏感性试验。     

四种结核分枝杆菌检测方法的临床应用评价

目的评估涂片、培养、PCR和增菌PCR检测结核分枝杆菌临床应用价值。方法对124例临床确诊的肺结核、可疑结核患者和非结核病人痰标本的涂片、培养、PCR和增菌PCR四种方法的检测结果进行比较。结果涂片、培养、PCR和4及7d的增菌PCR检测31例临床确诊的肺结核病人痰标本阳性率分别为22.5%、32.2%、54.8%、64.5%和87.1%;检测59例临床可疑肺结核病人痰标本阳性率分别为13.6%、18.6%、28.8%、37.3%和52.5%。比较四种方法的阳性检测率有显著性差异(P<0.05)。检测34例非结核病人痰标本,涂片、培养均为阴性,而PCR和增菌PCR均有1例假阳性,假阳性率2.9%。比较PCR与增菌PCR对菌阳和菌阴病人的痰标本阳性检测率,有显著性差异(P<0.05),而两种方法的假阳性率相同。结论增菌PCR检测结核分枝杆菌具有很高的敏感性和特异性,可作为结核病的有效辅助诊断方法之一。     

纤维支气管镜检查对无痰或痰菌阴性不典型肺结核的诊断价值

目的 探讨纤维支气管镜（简称“纤支镜”）检查对无痰或痰菌阴性不典型肺结核的诊断价值。 方法 选无痰或痰菌阴性的不典型肺结核患者201例,用纤支镜在病变部位进行活检、刷检、支气管肺泡灌洗液（BALF）进行BBLMGIT(Mycobacteria Growth Indicate Tube)分枝杆菌快速培养查结核杆菌。术后进行痰涂片查抗酸杆菌、痰结核分枝杆菌快速培养。 结果201例刷检、BALF快速培养结核分枝杆菌阳性率分别是67.2%、83.6%,61例活检阳性率63.9%,201例术后痰涂片、术后痰快速培养结核分枝杆菌阳性率分别是28.9%、57.2%。 结论 纤支镜检查是确诊无痰或痰菌阴性不典型肺结核的有效方法 ,其中BALF行结核分枝杆菌快速培养具有较高的诊断价值、快速、阳性率较高。根据镜下所见采用不同的取材方法 可望提高诊断率。     

结核分枝杆菌γ-干扰素酶联免疫斑点试验在菌阴肺结核中的诊断价值

目的通过检测结核分枝杆菌γ-干扰素酶联免疫斑点试验的结果,探讨其在菌阴肺结核诊断及鉴别诊断中的意义。方法将研究对象分为菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺部肿瘤、肺炎4组。所有患者分别进行结核分枝杆菌γ-干扰素酶联免疫斑点试验、结核抗体三项测定及结核菌素试验。结果菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺部肿瘤、肺炎4组患者PPD试验阳性率为84.8%、83.3%、28.6%、33.3%;结核抗体试验的阳性率为84.8%、66.6%、28.6%、33.3%;ELISPOT试验阳性率为93.9%、93.3%、7.1%、3.3%。结论结核杆菌感染T细胞酶联免疫斑点试验在肺结核诊断,可能优于结核菌素试验及结核抗体测定,对于菌阴肺结核的诊断与鉴别诊断具有临床意义。     

Value of smear and PCR in bronchoalveolar lavage fluid in culture positive pulmonary tuberculosis.

At present, further investigations are needed in patients with suspected pulmonary tuberculosis (TB) and either negative sputum smear or without sputum. The aim of the present study was to analyse the yield of bronchoalveolar lavage fluid (BALF) smear and PCR in patients with confirmed pulmonary TB. Patients with a positive culture for Mycobacterium tuberculosis complex in sputum or BALF were analysed over 5 yrs. In total, 90 out of 230 (39%) patients with culture-positive pulmonary TB had a positive sputum smear, and 120 patients underwent bronchoscopy. BALF smear was positive in 56 (47%), BALF PCR in 93 (78%) patients, and BALF smear and/or PCR was positive in 83%. In total, 71 patients who underwent bronchoscopy and had complete clinical records were further analysed. BALF (smear or Mycobacterium tuberculosis complex-PCR) allowed a rapid diagnosis in 10 (59%) out of 17 patients who had a negative sputum smear, and 49 (91%) out of 54 patients without sputum production. Of these 71 patients, 12 (17%) were only culture positive. Rapid diagnosis of pulmonary TB by smear and/or PCR was made in 190 out of 210 patients (90%) in sputum or BALF. In conclusion, combined use of bronchoalveolar lavage fluid smear and Mycobacterium tuberculosis complex-PCR has a good diagnostic yield in patients with sputum smear-negative tuberculosis or without sputum production.     

套式PCR及测序方法用于痰标本中结核分枝杆菌rpoB耐药基因突变检测

目的应用套式PCR-DNA测序方法直接检测痰标本中结核分枝杆菌相关的rpoB基因突变,以期建立一种直接检测分枝杆菌耐利福平的快速方法,并评价其临床应用价值。方法采用套式PCR-DNA测序方法直接检测112例活动性肺结核患者和20例非结核性肺部疾病患者痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变情况。同份痰标本同时做涂片抗酸染色,罗氏培养及菌型鉴定。结果112例活动性肺结核患者痰标本套式PCR扩增87例呈阳性,产物DNA测序31例有rpoB基因突变,其中分离出耐利福平株的32例痰中29例发生了基因突变,耐药突变率90.6%(29/32),39例菌阴(涂阴培阴)痰中有2例发生突变。分离出对利福平敏感株的37例痰中未发生突变,20例非结核性肺部疾病患者痰标本套式PCR扩增均为阴性,特异性100%。结论套式PCR-DNA测序可望为直接检测临床痰标本中结核分枝杆菌耐利福平的准确、特异、快速的方法。