穿膜肽-凋亡蛋白融合蛋白导入人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌Anip973细胞的生物学特性

目的:在大肠杆菌内表达穿膜肽与凋亡蛋白的融合蛋白,观察其诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的活性,并了解其是否有剂量依赖性。方法:实验于2005-08/2006-01在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。①在大肠杆菌中表达穿膜肽-凋亡蛋白并用IDA-Ni2 亲和层析纯化。②细胞增殖抑制实验:取对数生长期人脐静脉内皮细胞和Anip973细胞接种于96孔培养板中,培养12h后加入终浓度分别为0,10,20,30,40,50mg/L融合蛋白培养48h,弃上清,每孔中加入四甲基偶氮唑盐溶液穴5g/L雪20μL,继续孵育4h,检测吸光度,计算肿瘤生长抑制率。③取对数生长期人脐静脉内皮细胞、Anip973细胞,每种细胞分成两组:给药组加入终浓度为30mg/L穿膜肽-凋亡蛋白,对照组加入相同体积的磷酸盐缓冲液,继续培养48h。苏木精-伊红染色,光镜下观察细胞形态;溴乙啶/丫啶橙荧光染色观察细胞凋亡率。结果:①细胞增殖抑制实验结果表明浓度为10～50mg/L穿膜肽-凋亡蛋白对人脐静脉内皮细胞没有明显抑制作用,对Anip973细胞呈剂量依赖性抑制作用,半数抑制浓度为27mg/L。②30mg/L穿膜肽-凋亡蛋白作用48h后,人脐静脉内皮细胞形态没有显著改变,对照组和给药组的凋亡率分别为穴2.9±0.4雪%和穴3.1±0.6雪%,没有显著差异(P>0.05);Anip973细胞可见到细胞皱缩,染色质浓缩和出现凋亡小体等凋亡特征性形态变化,给药组和对照组凋亡率分别为穴36.8±1.7雪%和穴6.7±0.5雪%,差异显著(P<0.01)。结论:穿膜肽-凋亡蛋白能诱导肿瘤细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖性,而对正常细胞没有毒性作用。     

辛伐他汀对人脐静脉内细胞CD40／CD40L表达的影响

目的：探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激下的人脐静脉内皮细胞CD40／CD40L表达的影响。方法：实验于2004—03／06在中南大学湘雅二医院实验室完成。实验所用脐带于无菌条件下取自本院产房健康新生儿，产妇知情同意，实验符合赫尔辛基宣言中的伦理学标准。辛伐他汀原粉由杭州默沙东制药公司提供。原代培养人脐静脉内皮细胞，实验在第4代有70％细胞汇合的情况下进行。低密度脂蛋白快速分离后加入含10μmol／L硫酸铜的磷酸盐缓冲液氧化修饰24h，在准备后15d内用于实验。采用流式细胞技术检测CD40／CD40L在细胞上的表达，采用逆转录多聚酶链式反应检测NF-κBP65 mRNA，同时行细胞免疫化学染色检测细胞NF-κBP65的表达。观察辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激人脐静脉内皮细胞表达CD40／CD40L分子和NF-κB P65 mRNA的影响实验中，共分5组：①空白对照组，给予磷酸盐缓冲液。②氧化低密度脂蛋白刺激组，80mg／L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。③低浓度辛伐他汀组，先予1μmol／L辛伐他汀干预1h，再予80mg／L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。④高浓度辛伐他汀组，先予10μmol／L辛伐他汀干预1h，再予80mg／L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。⑤单纯辛伐他汀组，10μmol／L辛伐他汀干预25h。免疫化学检测人脐静脉内皮细胞NF-κBP65分子表达的实验中，共分3组：①空白对照组，给予磷酸盐缓冲液。②氧化低密度脂蛋白刺激组，80mg／L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。③辛伐他汀组，10μmol／L辛伐他汀干预1h，再予80mg／L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。结果：①氧化低密度脂蛋白刺激人脐静脉内皮细胞后CD40／CD40L的表达情况：20-80mg／L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h后，CD40／CD40L的表达以浓度依赖和时间依赖的方式增加。②辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激的人脐静脉内皮细胞CD40／CD40L表达的影响：预先给予辛伐他汀（1μmol／L和10μmol／L）干预1h明显降低氧化低密度脂蛋白所致的CD40／CD40L表达，与单纯氧化低密度脂蛋白刺激组比较，差异显著（P均〈0．05）；10μmol／L的高浓度辛伐他汀较1μmol／L的低浓度辛伐他汀作用更明显（P〈0．05）；而单纯给予10μLmol／L的辛伐他汀干预不影响人脐静脉内皮细胞CD40／CD40L的表达。③辛伐他汀对NF-v：BP65 mRNA在人脐静脉内皮细胞表达的影响：人脐静脉内皮细胞中加入80mg／L氧化低密度脂蛋白培养24h后NF-κB mRNA的表达明显高于空白对照组（0．53&;#177;0．06，0．08&;#177;0．01，P〈0．01）。而预先给予1μmol／L辛伐他汀孵育lh显著降低氧化低密度脂蛋白刺激升高的NF-κB P65 mRNA，明显低于单纯氧化低密度脂蛋白刺激组（0．31&;#177;0．04，0．53&;#177;0．06，P〈0．01）。高浓度组（10μmol／L）作用更显著，显著低于单纯氧化低密度脂蛋白刺激组（0．14&;#177;0．04，0．53&;#177;0．06，P〈0．01），而单纯给予辛伐他汀（10μmol／L）不影响人脐静脉内皮细胞NF-κB P65 mRNA的表达。结论：氧化低密度脂蛋白以浓度和时间依赖的方式刺激人脐静脉内皮细胞表达CD40/CD40L，而辛伐他汀以剂量依赖的方式减轻氧化低密度脂蛋白刺激下人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L的表达，可能与其抑制人脐静脉内皮细胞的NF—κBP65的表达有关。提示辛伐他汀可通过抑制高脂血症患者炎症信号通路而到达抗动脉硬化的作用。     

搏动信号对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合成酶表达的影响

目的：观察搏动信号对人脐静脉内皮细胞中反映内皮细胞活性的内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响。 方法：实验于2004-06／2005-03在湘雅二医院心胸外科生物材料研究室和上海生物工程有限公司进行。将取自剖宫产产妇自愿捐献的无菌脐带的人脐静脉内皮细胞培养、传代，传4代后分为两组：①搏动培养组：先静放6-8h待细胞贴壁后，用自行设计的细胞搏动培养装置，进行搏动培养。搏动参数：搏动频率150次／min，搏出量0．3mL／次，搏动产生的压力30／9mmHg（1mmHg=0．133kPa）。②静态培养组：不进行搏动，其余条件同搏动培养组。每组每个时间点5个样本。用反转录-聚合酶链反应方法，分别在第1，2，4，6，9，12，15，18天检测两组的人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达水平（相对吸光度值）。 结果：人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶mRNA表达：①培养第1，4天，静态培养组明显高于搏动培养组（1．0&;#177;0．55比1．10&;#177;0．35；1．17&;#177;0．23比1．42&;#177;0．44，P〈0．05）。②培养第2天两组比较差异不显著（1．16&;#177;0．18比1．25&;#177;0．35，P〉0．05）。③培养第6，9，12，15，18天，搏动培养组明显高于静态培养组（1．52&;#177;0.14比1．27&;#177;0.30；1．60&;#177;0.19比1．16&;#177;0.33；1．68&;#177;0.44比0．99&;#177;0.31；1．7&;#177;0.24比1．1&;#177;0.94；1．7&;#177;0.16比1．0&;#177;0.28，P〈0．05）。 结论：搏动信号能提高人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶的表达。提示搏动信号在维持细胞发挥正常的生理功能方面起到重要的作用，能增强细胞的生物活性。     

氧自由基对培养人脐静脉内皮细胞代谢产物的影响

目的：观察氧自由基对培养的人脐静脉内皮细胞产生的裂解不对称二甲精氨酸的酶--二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶活性及表达的影响，以探讨不对称二甲精氨酸代谢机斜及卡托普利的作用。方法：实验于2003—05／2004—06在南昌大学医学分子中心进行。采用改良的Jaffe法培养人脐静脉内皮细胞，取生长良好的3～6代人脐静脉内皮细胞分为4组：①空白对照组：加DMEM培养液。②氧自由基0．01，0.1mmol／L组：分别加入氧自由基0.01，0.1mmol／L。③卡托普利组：同时加入氧自由基0.1mmol／L及卡托普利（100mg／L）共孵。孵育24h后，检测上清液中一氧化氮、一氧化氮合酶活性、内皮细胞的代谢产物不对称二甲精氨酸浓度以及反应二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶酶活性的L-瓜氨酸浓度，采用Western blotting测定细胞裂解液中二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶的蛋白表达。结果：①二甲精氨酸浓度：氧自由基0，01，0.1mmol／L组均高于空白对照组[（2．71&;#177;0．35），（4．78&;#177;0．67），（0．81&;#177;0．12）μmol／L，P〈0．05，0．01]，卡托普利组低于氧自由基0．1mmol／L组[（2．03&;#177;0．35）μmol／L．P〈0．01]。②L-瓜氨酸浓度：氧自由基0．01，0．1mmol／L组均低于空白对照组（P〈0．05，0．01）．卡托普利组高于氧自由基0．1mmol／L组（P〈0．01）。③一氧化氮浓度及一氧化氮合酶活性：氧自由基0．01，0．1mmol／L组均低于空白对照组（P〈0．05，0．01），卡托普利组高于氧自由基0．1mmol／L组（P〈0．01）。④二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶的蛋白表达：各组间无差异（P〉0．05）。结论：氧自由基培养下，内皮损伤，不对称二甲精氨酸的增加与二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶的活性减弱有关，与其蛋白的表达无关。而卡托普利则通过增加二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶活性促进不对称二甲精氨酸代谢，使一氧化氮合酶活性增加，抑制氧自由基对内皮功能的损伤。     

人巨细胞病毒感染对人脐静脉内皮细胞周期和凋亡的影响——动脉粥样硬化发生的可能病因

目的：探讨人巨细胞病毒感染对人脐静脉内皮细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。方法：实验于2003—06／2004／06在解放军第四军医大学老年病二科和解放军第四军医大学基础部生理学教研室完成。①细胞来源及分组：将液氮中冻存的人巨细胞病毒AD169株，用人胚肺成纤维细胞进行增殖培养6-8代；将人脐静脉内皮细胞消化成单细胞悬液，用DMEM培养基重新悬浮，细胞以一传三种于培养瓶继续培养至细胞贴壁并已伸展但未汇合，用台盼蓝拒染法检查活细胞数大于95％，对照组为空白对照，实验组接种人巨细胞病毒169病毒株。②组织学及实验室检查：凋亡的人脐静脉内皮细胞形态学特点在倒置相差显微镜下观察。两组人脐静脉内皮细胞增殖情况采用四甲基偶氮唑蓝比色法，以酶联免疫检测仪测得的A490值表示。两组人脐静脉内皮细胞的细胞周期变化采用流式细胞技术（在荧光激活细胞分选仪上进行细胞周期分析）；检测两组人脐静脉内皮细胞的细胞凋亡情况以Annex—in V染色法的以荧光强度判定。结果：①凋亡的人脐静脉内皮细胞形态学特点：正常的生长融合的人脐静脉内皮细胞呈铺路石状镶嵌排列，细胞边界清楚，胞浆丰富，胞核椭圆居中，核仁明显；凋亡的细胞有的变成大细胞。②人巨细胞病毒对人脐静脉内皮细胞增殖的影响：人巨细胞病毒感染人脐静脉内皮细胞后24h，对照组与人巨细胞病毒组A490值分别为1．09&;#177;0．08与2．08&;#177;0．09（t=7．96，P〈0．05）。③人巨细胞病毒对人脐静脉内皮细胞细胞周期的影响：正常对照组G0／G1期的细胞为74．4％，加入人巨细胞病毒后为59．3％，较正常对照组降低20．3％（P〈0．05）。④人巨细胞病毒对人脐静脉内皮凋亡的影响：正常对照组凋亡细胞为8.3％，当加人人巨细胞病毒后为5.8％，较对照组降低30．1％（P〈0．01）。结论：人巨细胞病毒感染人脐静脉内皮细胞后，引起细胞生长周期和凋亡水平的改变增加G0／G1期细胞进入S和G2／M期，降低细胞凋亡，导致细胞最终表现为增殖。     

人参皂甙单体Rh2对人K562白血病细胞增殖和凋亡的时效和量效分析

目的：观察人参皂甙单体Rh2对人K562细胞增殖和凋亡的影响，分析该影响的时间和剂量依赖性。方法：实验于2006-07／08在吉林医药学院临床检验系实验室完成。①取对数生长期人K562细胞制成细胞悬液，浓度1&;#215;10^8L^-1，接种于96孔培养板内，每孔100μL，6h后加入终质量浓度分别为6.25，12.5，25．0，50.0，100．0mg／L的人参皂甙单体Rh2 100μL（购自吉林省宏久生物科技股份有限公司），每一浓度组均设4孔。对照孔及调零孔加100μL培养液。各孔总体积均为200μL。在加药后48h采用四甲基偶氮比色法检测各孔中细胞的抑制率。在接近于半数抑郁浓度的人参皂甙单体Rh2处理作用于细胞6，12，24，48和72h后采用四甲基偶氮唑盐比色法计算抑制率。②在倒置显微镜下观察加药与未加药孔K562细胞形态。（蓼常规苏木精-伊红染色，检测25．0mg/L人参皂甙单体Rh2作用0，12，24和48h后K562细胞的凋亡率，并观察人参皂甙单体Rh2质量浓度分别为0，12．5，25．0，50．0，100．0mg／L时，培养24h后的细胞凋亡率。结果：①人参皂甙单体Rh2对K562细胞生长抑制作用：当人参皂甙单体Rh2质量浓度为6．25，12．5，25、0，50．0和100．0mg／L时，抑制率逐渐升高，呈现明显剂量依赖性。人参皂甙单体Rh2对K562细胞的半数抑制浓度为25．8mg/L处理K562细胞6，12，24，48，72h后细胞抑制率逐渐升高，且后4个时间点明显高于处理6h时（t=11．79-50．89．P〈0、01）。②人参皂甙单体Rhz对K562细胞形态的影响：细胞经人参皂甙单体Rh2作用后呈现出明显的凋亡细胞形态，细胞分散，体积缩小，胞浆浓缩，细胞核膜消失，细胞核断裂呈小块或碎片状，但细胞膜较完整并可见凋亡小体。③人参皂甙单体Rh2对K562细胞凋亡的影响：在25．0mg／L人参皂甙单体Rh2作用K562细胞0，12，24和48h后，K562细胞的凋亡率依次升高，分别为（3．8&;#177;0.5）％，（9．4&;#177;1．1）％，（23.2&;#177;2.2）％和（34.5&;#177;3.5）％（与作用0h比较，t=8.78&;#177;20.06．P〈0.05-0．01）。人参皂甙单体Rh2质量浓度分别为0，12.5，25,0，50.0，100.0mgL培养K562细胞24h，细胞凋亡率依次升高，分别为[（3．7&;#177;0.6）％，（9．4&;#177;1.3）％，（21.2&;#177;2.1）％，（28.5&;#177;2．5）％，（31．8&;#177;3.4）％，与0mg／L人参皂甙单体比较，t=9．39～18、54．P〈0．01]。结论：人参皂甙单体Rh：能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡，且呈时间和剂量依赖性。     

依达拉奉对淀粉样β蛋白25～35致PC12细胞氧化损伤的神经保护作用

目的：观察特异性清除羟自由基的神经保护剂依达拉奉对淀粉样β蛋白25-35诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法：实验于2005-03／07在吉林大学中日联谊医院神经内科进行。将培养的PC12细胞分为3组：①正常对照组：加入含体积分数0．25的胎牛血清的DMEM维持液培养。②依达拉奉预处理组：加入依达拉奉20μmol／L预处理12h，然后加入淀粉样β蛋白25～35 30μmol／L继续孵育24h。③淀粉样B蛋白25～35干预组：淀粉样β蛋白25～35 30μmol／L孵育24h。采用MTT法测定细胞生存率；采用ELISA法测定羰基蛋白和晚期糖基化终产物的含量；硫代巴比妥酸法测定丙二醛的浓度。结果：①3组细胞生存率比较：正常对照组为（100．0&;#177;5.7）％，依达拉奉预处理组显著高于淀粉样β蛋白25～35干预组[（86．4&;#177;17．7炀，（42．5&;#177;9．4）％，P〈0．001]。②3组细胞内羰基蛋白含量比较：正常对照组为（0．35&;#177;0．09）μmol／g，依达拉奉预处理组显著低于淀粉样β蛋白25～35干预组[（0．41&;#177;0．12），（0．81&;#177;0．17）μmol／g，P〈0.01]。③3组晚期糖基化终产物水平比较：正常对照组为（12．21&;#177;3．26）mg／L，依达拉奉预处理组显著低于淀粉样β蛋白25-35干预组[（14.65&;#177;4．25），（26．57&;#177;5，18）mg／L，P〈0．01]。④丙二醛浓度：正常对照组为（4．11&;#177;0．98）μmol／L，依达拉奉预处理组显著低于淀粉样β蛋白25～35干预组[（4．92&;#177;1．30），（7.58&;#177;1．01）μmol／L，P〈0.01]。结论：依达拉奉能够减少淀粉样β蛋白25～35对PC12细胞内蛋白质氧化产物、晚期糖基化终产物及脂氧化终末产物的生成，具有神经保护作用。     

睾酮浓度与人脐静脉组织因子途径抑制物的表达

目的：观察生理及超生理浓度睾酮对人脐静脉内皮细胞合成、分泌组织因子途径抑制物的影响。方法：实验于2005-01／06在汕头大学医学院药理实验室完成。将人原代脐静脉内皮细胞复苏后于37℃，体积分数为0．05的CO2培养箱中静置培养，所用细胞为两三代。将消化好的细胞移人96孔板，接种密度为1&;#215;10^8每孔100μL。24h后分为不同浓度睾酮组（3&;#215;10^-9, 3&;#215;10^4, 3&;#215;10^-9, 3&;#215;10^-5 mol/L）及单纯培养液对照组，继续孵育48h，吸取上清，酶联免疫吸附法测定各组组织因子途径抑制物蛋白含量。反转录-聚合酶链反应法观察各组组织因子途径抑制物基因表达水平。结果：①人血管内皮细胞组织因子途径抑制物含量：对照组，3&;#215;10^-9, 3&;#215;10^-8, 3&;#215;10^-6. 3&;#215;10^-5 mol/L睾酮组组织因子途径抑制物含量分别为（6．43&;#177;0．61），（9．8&;#177;1．18），（9．8&;#177;1．05），（6．43&;#177;1．19），（5．43&;#177;0．66）μg／L生理浓度睾酮可明显增加内皮细胞上清液中组织因子途径抑制物含量。而3&;#215;10^-5mol／L组的组织因子途径抑制物含量明显低于对照组（P〈0,05）。②不同浓度睾酮组组织因子途径抑制物mRNA水平：3&;#215;10^-9，3&;#215;10^-8mol／L组组织因子途径抑制物mRNA水平明显高于对照组（P〈0．05）。而3&;#215;10^-5mol／L组组织因子途径抑制物mRNA水平又显著降低（P〈0．05）。结论：生理浓度睾酮通过雄激素受体促进组织因子途径抑制物合成、分泌，增强抗凝系统活性，有利于预防男性冠心病及心肌梗死等血栓性疾病的发生。     

基础植物药提取剂丹皮酚影响人大肠癌细胞凋亡及调控基Np53的表达

目的：体外实验观察植物药提取剂丹皮酚作用后大肠癌细胞的凋亡情况，分析其与凋亡调控基因p53的关系。 方法：实验于2004—09／2005—07在武汉大学人民医院消化病研究所完成。常规于培养瓶内培养人大肠癌HT-29细胞株，待其进入对数生长期后分为丹皮酚溶液15．63mg／L，62．5mg／L，250mg／L组和对照组，分别加入15．63mg／L，62．5mg／L，250mg／L的丹皮酚溶液（购自上海第一制药厂）及等量培养液。以倒置显微镜和苏木精-伊红染色法观察细胞形态学、DNA末端原位标记染色法和流式细胞仪技术检测细胞凋亡，从而定性、定量分析丹皮酚与大肠癌细胞凋亡的关系，通过免疫细胞化学方法检测凋亡相关基因p53的表达情况。 结果：①丹皮酚溶液15．63mg／L，62．5mg／L，250mg／L组大肠癌细胞株HT-29的凋亡指数分别为（8．16&;#177;2.24）％，（15.35&;#177;3．07）％及（23．70&;#177;3.42）％，均显著高于对照组[（3．32&;#177;0．41）％（P〈0．01）]，且凋亡指数与丹皮酚浓度呈正相依赖关系。②丹皮酚使细胞周期分布发生明显变化，表现为S期细胞比例上升，G0／G1期和G2/M期细胞比例下降。③丹皮酚溶液15．63mg／L，62．5mg／L，250mg／L组大肠癌HT-29细胞株p53基因的阳性表达率分别为（87．6&;#177;10．10）％，（83．7&;#177;9．43）％及（77．4&;#177;8．22）％，均显著低于对照组[（90．2&;#177;8．04）％（P〈0．05-0．01）]，此作用与丹皮酚浓度呈反比关系。 结论：丹皮酚在一定的浓度范围内可诱导大肠癌细胞发生凋亡，该作用可能与其影响癌细胞的细胞周期、下调凋亡相关基因p53的表达有关，且呈一定的剂量依赖性。     

芦荟大黄素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的量效影响

目的：观察天然药物芦荟大黄素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用。方法：实验于2001—06／2004—12在广东医学院整形外科研究所完成。成纤维细胞取自广东医学院附属医院整形外科患者手术切除的增生性瘢痕组织，瘢痕组织经处理后进行成纤维细胞原代及传代培养至第3—8代细胞。用剂量为40mg／L的芦荟大黄素分别处理对数生长期成纤维细胞[0（为对照组），24，48，72h]，以流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率；观察加入不同浓度（0，20，40，60，80mg／L）芦荟大黄素后24h对成纤维细胞凋亡的影响，采用特异性荧光染色和原位末端标记技术分别检测凋亡指数。结果：①芦荟大黄素作用不同时间对成纤维细胞周期和凋亡的影响：流式细胞术检测发现，用药24h出现“亚二倍体峰”即凋亡峰，凋亡指数为（10．81&;#177;1．43）％，到48和72h凋亡指数为（16．02&;#177;1．30）％和（21．58&;#177;1．56）％。随着作用时间的延长，DNA合成前期细胞百分数增多，DNA合成期的细胞含量逐渐减少，亚二倍体峰百分数增多（F=122．514，225．552，105．346，P〈0．05）。②芦荟大黄素对成纤维细胞凋亡的量效影响：荧光染色和原位末端标记法检测凋亡指数，均呈剂量依赖性增高[荧光染色：0mg／L为（4．52&;#177;1．22）％，20mg／L为（25．56&;#177;1．12）％，40mg/L为（56．20&;#177;2．20）％，80mg／L为（80．05&;#177;2．12）％，F=1350．737；原位末端标记法：0mg／L为（3．85&;#177;1．15）％，20mg／L为（11．66&;#177;1．20）％，40mg／L为（23．12&;#177;1．06）％．80mg／L为（40．31&;#177;1．43）％．F=511．487，P〈0．011。结论：芦荟大黄素以时间依赖性的方式调节细胞周期并诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡，还可呈量效关系促进成纤维细胞发生凋亡。     

数字人体微观研究-量子人体与人体的关系

根据量子人体与人体研究方法的区别,本文首先介绍了量子人体与人体的对应原理,然后描述了量子人体谐振子的相干态,最后对量子人体的Rydberg波包,波形的演化与恢复作了阐述,为数字人体微观研究,阐述量子人体与人体的对应关系提供了理论基础.     

Extended phase I study of human beta-interferon in human cancer

Ten patients with advanced cancer were treated with weekly intravenous escalating doses of human beta-interferon (HuIFN beta) 4 days each week. The starting dose of HuIFN beta was 3.0 X 10(6) units/m2 and the dose was doubled each week until dose-limiting toxicity was observed. Subjective toxicity included mild fevers and chills, malaise and flu-like symptoms. The lowest dose which caused suppression of the platelet and/or white cell count was 64 X 10(6) units daily, and the maximum dose given was 320 X 10(6) units daily. Both subjective and objective toxicity were not dose-related, easily managed and reversible. Serum interferon levels and the duration of measurable interferon activity on natural killer cells was in general dose-dependent. Two patients had an objective partial response, and two others showed stable disease while receiving HuIFN beta.     

人巨细胞病毒感染人源细胞后的蛋白质检测

目的探讨人源细胞对人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)的易感性及其感染后蛋白质的表达。方法用HCMV感染3种人源细胞并检测其病毒蛋白质表达情况。结果 HCMV可成功感染3种细胞并表达病毒蛋白。结论 HCMV在体外有较大的细胞嗜性。     

Increased expression of human luteinizing hormone/human chorionic gonadotropin receptor mRNA in human endometrial cancer

Fifty randomly selected endometrial tissue samples were used in this study to determine the existence of LH/hCG receptor. Of these, 6 were matched samples of cancerous and surrounding morphologically normal tissues from the same individuals. Conventional RT-PCR, nested RT-PCR, and relative real-time PCR (TaqMan) methods were used to measure the gene expression on the RNA levels. The results show, (1) Real-time PCR can detect LH/hCG receptor expression in all the RNA samples analyzed when conventional RT-PCR only demonstrates the expression of LH/hCG receptor in 17% of the tested samples. (2) Absolute quantitation of LH/hCG receptor by real-time PCR shows higher expression in cancer tissue. This finding was confirmed by the six matched samples. It suggests that LH/hCG receptor gene expresses in endometrium at very low levels and real-time PCR is the best method to detect the expression. Quantitative real-time PCR also reveals increased expressions of LH/hCG receptor in endometrial cancerous tissues compared with surrounding microscopically normal tissues.     

免疫组织化学方法在人/山羊嵌合体人源细胞鉴定中的应用

目的在胎山羊宫内移植人造血干细胞(hHSC)获得人／山羊嵌合体基础上，应用免疫组织化学技术分析嵌合体实验山羊肝、肺和肾组织中人源细胞的生长及分化情况。方法对7头经荧光激活的细胞分选(FACS)、荧光原位杂交(FISH)和分子生物学方法鉴定为阳性的实验山羊，在出生后不同时间取其肝、肺和肾组织，制作石蜡切片，然后采用免疫组织化学的EnVision系统，用特异性人增殖期细胞核抗原(PCNA)单抗、人肝细胞特异性抗原(HSA)单抗及人β—2微球蛋白(β—2M)单抗鉴定这些组织中的人源细胞。结果7头实验山羊的肝组织中有一定比例的PCNA和HSA抗体阳性染色细胞，肺和肾组织内有PCNA及β—2M抗体阳性染色细胞，正常人的肝、肺和肾细胞也呈阳性染色，而非hHSC移植的正常山羊的肝、肺和肾组织中未见有阳性染色细胞。结论胎山羊宫内移植hHSC所形成的嵌合体的肝脏中有人源细胞存活，并检测到表达人肝细胞特异抗原的人肝样细胞。免疫组化鉴定的阳性结果与分子生物学等方法的鉴定结果相符。此外，在嵌合体山羊肺和肾组织中也发现有人源细胞。     

数字人体微观研究——量子人体的散射

围绕数字人体微观领域开展量子人体的散射研究.主要内容有量子人体的碰撞过程与散射截面;量子人体辏力场中的弹性散射(分波法);量子人体的方形势阱与势垒所产生的散射;量子人体玻恩近似和量子人体质心坐标系与实验室坐标系,为数字人体微观研究提供理论和实验依据.     

Effects of human interleukin 1 and human tumor necrosis factor on human T lymphocyte colony formation.

The growth of T lymphocyte colonies in agar is dependent on the cooperation of a number of different cell types and their products. Among these interacting cells are monocytes and/or macrophages. Monocytes are capable of producing both interleukin 1 (IL-1) and tumor necrosis factor (TNF). These two factors display a positive influence on T cell colony formation. Recombinant IL-1 and recombinant TNF were both shown to stimulate T cell colony growth in a dose-dependent manner, and this stimulation could be blocked by prior incubation with anti-IL-1 or anti-TNF, respectively. In addition, conditioned medium obtained from monocytes cultured in the presence of endotoxin also stimulated T cell colony formation. This stimulation by monocyte-conditioned medium was partially suppressed by incubation with anti-TNF or anti-IL-1, while incubation with both antibodies together displayed greater suppression. In conclusion, monocytes produce at least two factors, IL-1 and TNF, which can stimulate T cell colony formation by peripheral blood lymphocytes.