丙型肝炎阳性血清直接感染HepG2细胞的初步研究

目的：用丙型肝炎（丙肝）阳性血清（抗ＨＣＶ阳性及ＨＣＶＲＮＡ ＲＴ－ＰＣＲ阳性）感染ＨｅｐＧ２细胞,以期建立稳定的ＨＣＶ感染的细胞模型。方法：采用丙肝阳性血清连续感染法感染ＨｅｐＧ２细胞,用逆转录多聚酶链反应检测传代ＨｅｐＧ２细胞内ＨＣＶＲＮＡ正链和负链,电镜观察感染后的细胞内的病毒颗粒,免疫组化方法检测感染后的细胞内丙肝病毒蛋白抗原（ＨＣＶＮＳ５、ＨＣＶ ｃａｐｓｉｄ）的存在。结果：感染后传代的     

丙型肝炎病毒2a型E2区基因cDNA的变异分析

目的 了解丙型肝炎病毒2a型基因组E2区序列的一级结构及变异特征，为进一步研究HCV包膜蛋白的生物学功能打下基础。方法 用逆转录套式多聚酶链反应(RT-nPR)法从1例NANB型肝炎患者血清中扩增出一条约1100bp的片段，以限制性内切酶EcoRI、HindⅢ双酶切后连入pUC19载体中，转化感受态细胞，经限制性内切酶长度多态性分析(RFLP)和PCR法证实为阳性克隆后，用全自动序列分析仪测序。结果 测得约1100bp的核苷酸序列，其核苷酸序列及其编码的氨基酸序列分别与HCV-1、HC-C2、HCV-BK、HC-J6、HC-J8相应序列作比较，显示分离株HCV在核苷酸水平上与以上分离株的同源性分别为63．1％、64．2％、64．1％、86．9％、69．3％，在氨基酸水平上的同源性分别为69．6％、70．7％、69．6％、86．2％、83．1％。结论 分离株(HCV-JF)与HC-J6同属2a型。     

丙型肝炎病毒核心区蛋白在HepG2细胞中的表达

目的 :构建能稳定表达丙型肝炎病毒核心区蛋白的哺乳动物细胞系 ,以便对丙型肝炎病毒核心区蛋白的抗原性及其他功能作进一步研究。方法 :通过PCR扩增丙型肝炎病毒核心基因 ,将其亚克隆入真核表达质粒pcDNA3.1( )中 ,用脂质体包裹后转染肝癌细胞系HepG2 ,通过G4 18筛选获得稳定转染细胞系 ,并通过间接免疫荧光法检测HepG2中丙型肝炎病毒核心区蛋白的表达。结果 :克隆的基因全长 5 94bp ,并经测序和重组质粒双酶切证实为所需目的基因 ;经间接免疫荧光验证实转染了目的基因的HepG2细胞中有丙型肝炎核心区蛋白的表达。结论 :丙型肝炎病毒核心区蛋白能在HepG2细胞中稳定表达。     

慢性乙型肝炎患者的HCV重叠感染

研究45例慢性乙型肝炎患者的HCV重叠感染。病例均为后发抗HCV阳性的慢性HBsAg携带者,无先抗HCV阳性而后HBsAg阳性的个案,这可能反映HBV和HCV两种病毒感染的先后次序、不同传播方式及HBV对HCV易感性的增进作用。用RT-PCR检出30/45例血浆HCV RNA阳性,不仅确证HCV重叠感染诊断,还证实HCV复制及传染性。23/30例HCVRNA阳性者有输血史,提示输血是其获得HCV重叠感染的主要途迳。用PCR检出25/45例血清HBV DNA阳性,其中抗HBe阳性者的HBV DNA检出率为42.9％(12/18),明显低于(P<0.001)我们前文报道,提示重叠HCV感染对HBV复制有抑制作用。此外有9例抗HBe阳性者,其HBV DNA阴性但HCV RNA阳性,反映HCV可能已取代HBV成为致肝损害的主要病因。     

外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒RNA检测的可靠性

外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒ＲＮＡ检测的可靠性唐振亚，喻植群，汪由坤，赵西平，李方和，杨东亮，郝连杰武汉同济医科大学附属同济医院临床免疫学研究室，武汉４３００３０关键词核细胞；肝炎病毒．丙型；逆转录－聚合酶链反应中图法分类号Ｒ３２９．２，Ｒ５１２．...     

墓头回提取物对HepG2细胞作用的初步研究

目的研究墓头回提取物体外对HepG2细胞毒作用，探讨其抑癌作用机理。方法用MTF法检测墓头回提取物对HepG2细胞毒作用；透射电镜观察细胞超微结构变化；流式细胞仪P1染色观察墓头回对HepG2细胞的促凋亡活性。结果墓头回提取物对HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用；流式细胞仪结果显示，实验组细胞凋亡率明显高于对照组；透射电镜观察可见细胞体积缩小，微绒毛减少或消失，核固缩，核染色质浓缩边集。结论墓头回提取物对HepG2细胞具有良好的抗肿瘤活性，其作用机制与诱导细胞凋亡有关。     

臭氧溶液对HBV体外感染的HepG2细胞的抗病毒作用

目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)体外感染人肝癌HepG2细胞的实验模型,并研究臭氧溶液对感染了HBV后的HepG2细胞的抗病毒作用。方法:乙肝阳性血清与HepG2细胞共孵育建立体外感染模型,采用倒置相差显微镜检测细胞形态,MTT法检测细胞成活率,ELISA法检测HBsAg和HBeAg表达水平,HBV荧光定量PCR检测HBV DNA表达量。结果:体外感染了HBV DNA的HepG2细胞能持续稳定分泌HBsAg和HBeAg,并能产生HBV DNA,通过低浓度臭氧溶液作用后,细胞形态无明显差异,细胞成活率无明显影响(P>0.05),HBsAg和HBeAg均转阴(P<0.01),HBV DNA拷贝量亦明显降低(P<0.01)。结论:较低浓度臭氧溶液对感染了HBV的HepG2细胞有明显的抗病毒作用,对细胞并无损伤。     

血清抗—Hcv与Hcv—RNA的关系比较

对160例门诊及住院肝炎患者采用ELISA法测抗—Hcv,并用逆转录套式聚合酶链反应检测血清Hcv—RNA。结果:160例肝炎患者中,120例Hcv—RNA阳性,即75％的患者存在病毒血症,115例抗—Hcv阳性患者中97例Hcv—RNA阳性,阳性率为84.3％。Hcv—RNA检出率与抗—Hcv的结果有一定关系。     

持续表达的丙型肝炎病毒NS4B激活HepG2细胞内质网应激反应的研究

目的研究持续表达的丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)对HepG2细胞内质网应激反应的影响。方法 NS4B重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)NS4B通过脂质体转染HepG2细胞,G418筛选、基因组PCR和Western blot鉴定稳定转染细胞;RT-PCR检测稳定转染细胞内人X盒结合蛋白1(XBP1)mRNA剪接,荧光素酶试验检测稳定转染细胞内GRP78启动子、XBP1启动子和核因子κB(NF-κB)活性。结果基因组PCR和Western blot鉴定证实NS4B基因整合到转染HepG2细胞的染色体上,并有效表达;在NS4B稳定转染的HepG2细胞中,检测到XBP1mRNA剪接、XBP1和Grp78启动子激活、Ca2+稳态变化及NF-κB激活。结论 NS4B在HepG2的稳定表达诱导了内质网应激反应,揭示NS4B可能通过诱导肝细胞内质网应激反应在HCV感染及其致病性中发挥作用。     

丙型肝炎患者尿液特异标志物的检测及其临床意义

对５４例丙型肝炎患者尿液特异指标检测，结果：抗－ＨＣＶ阳性５／５４例（９．２％）。ＨＣＶＲＮＡ阳性９／５４例（１６．７％）。急性ＨＣＶ感染者，尿中抗－ＨＣＶ检出率为２／６例（３３％），较慢性者３／３８例（７．９％）为高（Ｐ＜０．０５）。尿液ＨＣＶＲＮＡ全部出现在未经α－干扰素治疗的慢性患者中，故可用作判断干扰素疗效的指标之一。本文在尿中检出ＨＣＶＲＮＡ，提示ＨＣＶ可经尿液污染环境。     

乙型肝炎病毒核心启动子热点突变与HBeAg存在状态

目的 :研究乙型肝炎病毒 (HBV)核心启动子 (BCP)区 176 2位和 176 4位热点突变对HBeAg存在状态的影响。方法 :采用错配引物的PCR结合限制性内切酶技术检测 90例不同HBeAg状态的HBV无症状携带者的HBVBCP热点突变。结果 :6 0例HBeAg阴性者中HBVBCP热点突变者 2 6例 (4 3.3% ) ,其中 2 0例伴有HBV前C区 (Pre C)区1896位热点突变 ;30例HBeAg阳性者中仅 3例 (10 % )出现HBVBCP热点突变 ;无HBVPre C区热点突变者中 ,19例HBeAg阴性者有 6例存在HBVBCP热点突变 (31.6 % ) ,2 8例HBeAg阳性者仅 2例有HBVBCP热点突变 (7.1% ) ,两组间比较差异具显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :HBVBCP热点突变在HBeAg阴性HBV感染者中较常见 ,且常伴有HBVPre C区 1896位突变 ,HBVBCP热点突变可能是HBeAg阴性的另一原因     

急慢性丙型肝炎患者ALT、抗-HCV与HCVRNA关系的分析

对 4 0例丙型肝炎患者的血清 AL T、抗 - HCV及 HCVRNA进行了检测。结果显示 :在急慢性丙型肝炎中 ,抗 - HCV阳性率分别为 83.3%、93.8% ,HCVRNA阳性率分别为 50 %、6 8.8% ,有 4例抗 - HCV阴性急性患者 HCVRNA阳性。抗 - HCV阳性者中有 51.4 % HCVRNA阳性。HCVRNA的检出在 AL T异常情况下较正常明显高 (P<0 .0 5)。提示 HCVRNA早期诊断意义较抗 - HCV大 ,抗 - HCV在一定程度上能反映 HCVRNA的情况 ,而 AL T高低亦可间接反映 HCV的复制状态。     

不同种类的百日咳菌液致大鼠感染性脑水肿模型的比较

目的 :了解不同种类的百日咳菌液致大鼠感染性脑水肿 (感脑 )模型的差异 ,以寻找一种新的感脑模型。方法 :SD大鼠随机分为生理盐水对照组 (NS) ,粗制百日咳菌液组 (PBR)和精制百日咳菌液组 (PBP)。分别使用粗制百日咳菌液和精制百日咳菌液制作感脑模型后 ,检测脑组织含水量、伊文思蓝 (EB)含量和钠钾离子含量。结果 :PBR组和PBP组大鼠脑含水量、钠离子含量和EB含量较NS组明显增高 ,钾离子含量明显降低 (P <0 .0 1)。PBR组全部大鼠左半球脑组织明显蓝染 ;而PBP组仅 6只大鼠脑组织出现蓝染。PBR组大鼠脑组织EB含量明显高于PBP组 (P <0 .0 1)。结论 :粗制百日咳菌液和精制百日咳菌液均可致大鼠感脑模型 ,前者以混合性脑水肿为主 ,后者以细胞内毒性脑水肿为主     

医院内下呼吸道感染细菌菌株分布特点及药物敏感性分析

为探讨院内下呼吸道感染细菌分布特点和药物敏感性 ,对临床确诊的下呼吸道感染患者分别采取痰细菌培养及下气道分泌物培养共获得 196株细菌。抗生素敏感性测定采用KB纸片法 ,最低抑菌浓度 (MIC)采用琼脂二倍稀释法。结果发现革兰氏阴性细菌 (G-)以铜绿假单胞菌 (PA)和肺炎克雷白杆菌 (KLB)为主 ,分别占 30 %和 2 2 % ;革兰氏阳性菌 (G+)以表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌为多见 ,分别占 14%和 12 %。药敏试验示 ,依米配能、头孢哌酮、头孢曲松、复达欣、环丙沙星、阿米卡星对G-细菌有效率分别为 98% ,90 % ,90 % ,92 % ,90 % ,89% ;而万古霉素对G+细菌为 10 0 %。提示铜绿假单胞菌、肺炎克雷白杆菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌是院内下呼吸道感染主要致病菌 ,依米配能、头孢哌酮、头孢曲松、复达欣、环丙沙星、阿米卡星、万古霉素是治疗院内下呼吸道感染的有效抗菌素     

原发性肝癌78例血清HCVRNA和抗HCV的观察

用逆转录－聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测了７８例原发性肝癌患者清丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ、抗ＨＣＶ和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）免疫学标物。     

Detection of hepatitis C virus in serum and peripheral blood mononuclear cells by two reverse transcription polymerase

Over 75% of patients with acute hepatitis C （HCV） will develop into chronic infection associated with chronic hepatitis, end stage liver disease or hepatocellular carcinoma. HCV infection is usually ignored because the level of HCV in serum of some patients is very low and most patients with chronic HCV infection are asymptomatic. Some patients with persistent abnormal liver function may be infected with HCV although HCV RNA and HCV antibodies in serum are negative because their HCV load is under the current detectable limit or sometimes HCV is absent in serum but present in the liver or peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） and other tissues.     

用小鼠骨髓内皮细胞条件培养液代替造血刺激因子培养CFU-GM和HPP-CFC

利用大于 10kD组分的小鼠骨髓内皮细胞条件培养液 (mBMEC CM)作刺激物体外琼脂培养CFU GM ,与rmGM CSF合用培养HPP CFC获得成功。就培养CFU GM和HPP CFC而言 ,用细胞因子作刺激物与并用大于 10kD组分的mBMEC CM作刺激物相比较 ,以后者的CFU GM及HPP CFC产率最高