丙型肝炎阳性血清直接感染HepG2细胞的初步研究

目的：用丙型肝炎（丙肝）阳性血清（抗ＨＣＶ阳性及ＨＣＶＲＮＡ ＲＴ－ＰＣＲ阳性）感染ＨｅｐＧ２细胞,以期建立稳定的ＨＣＶ感染的细胞模型。方法：采用丙肝阳性血清连续感染法感染ＨｅｐＧ２细胞,用逆转录多聚酶链反应检测传代ＨｅｐＧ２细胞内ＨＣＶＲＮＡ正链和负链,电镜观察感染后的细胞内的病毒颗粒,免疫组化方法检测感染后的细胞内丙肝病毒蛋白抗原（ＨＣＶＮＳ５、ＨＣＶ ｃａｐｓｉｄ）的存在。结果：感染后传代的     

丙型肝炎病毒感染细胞模型的实验研究

目的 建立接近体内自然感染状态并能长期复制的丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞模型．方法 用HCV阳性血清感染人肝癌细胞株HepG2、SMMC 7721及胎肝细胞株L02，继续培养60d，用巢式逆转录-聚合酶链反应(nested RT-PCR)检测培养细胞及上清中正、负链HCV RNA。结果 HepG2、SMMC 772l在感染后第2-30d，L02在感染后第3-30d细胞中可以间断检出HCV正链RNA；3株细胞的细胞内HCV负链RNA均在感染后第3-30d可以间断检出，检出率与正链RNA接近。3株细胞以HepG2细胞中HCV RNA正、负链检出率较高，并在第3l—60d仍可间断检出，但复制程度逐渐减弱。3株细胞的培养上清中HCV正链RNA感染后也呈间断阳性，检出率与细胞内正链RNA基本一致。培养上清中均末检出HCV负链RNA。结论 HePG2、SMMC772l及L02细胞均对HCV易感，并能支持HCV长期复制。而HePG2细胞是较为理想的HCV体外感染细胞模型。     

人滋养层细胞内丙型肝炎病毒样颗粒的免疫电镜形态学研究

目的：应用免疫电镜技术观察体外培养的人胎盘滋养层细胞感染丙型肝炎病毒（HCV）情况。方法：采用胰蛋白酶消化法及Percoll密度梯度分离法分离培养人胎盘组织中滋养层细胞，以HCV RNA阳性血清对滋养层细胞进行体外感染实验，胶体金免疫电镜检测滋养层细胞内的HCV病毒颗粒，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）定性检测滋养层细胞内HCV RNA。结果：体外培养的人胎盘滋养层细胞内可观察到胶体金颗粒吸附的病毒样颗粒，形态及直径符合HCV特点。RT—PCR定性检测结果阳性，进一步证文所观察到的病毒样颗粒为HCV。结论：HCV可感染体外培养的人胎盘滋养层细胞。     

人胎肝细胞体外感染丙型肝炎病毒的定位研究

为了证实人胎肝细胞在体外与丙型肝炎病毒（HCV）阳性血清共培养24h是否能感染HCV病毒而作定位研究。采用透射电镜、免疫电镜的手段对于HCV阳性血清共培养的人胎肝细胞中病毒样颗粒进行定位研究,以测定细胞内是否有HCV。结果发现在透视电镜下人胎肝细胞胞浆中有很多病毒样颗粒,直径约45nm。通过免疫电镜进一步证实在人胎肝细胞中这些病毒样颗粒含有HCV基因表达产物NS3及NS5。此外,人胎肝细胞在体外与HCV阳性血清共培养24h并经多次洗涤后的培养上清加入到新鲜分离的正常人胎肝细胞培养基中继续培养,可以得出上述相同的结果。这些结果表明人胎肝细胞在体外培养情况下可以感染HCV,并且感染了HCV的人胎肝细胞可以产生具有传染性的HCV颗粒分泌到培养液中。     

人胎肝细胞体外感染丙型肝炎病毒的定位研究

为了证实人胎肝细胞在体外与丙型肝炎病毒（HCV）阳性血清共培养24h是否能感染HCV病毒而作定位研究。采用透射电镜、免疫电镜的手段对于HCV阳性血清共培养的人胎肝细胞中病毒样颗粒进行定位研究，以测定细胞内是否有HCV。结果发现在透视电镜下人胎肝细胞胞浆中有很多病毒样颗粒，直径约45nm。通过免疫电镜进一步证实在人胎肝细胞中这些病毒样颗粒含有HCV基因表达产物NS3及NS5。此外，人胎肝细胞在体外与HCV阳性血清共培养24h并经多次洗涤后的培养上清加入到新鲜分离 的正常人胎肝细胞培养基中继续培养，可以得出上述相同的结果。这些结果表明人胎肝细胞在体外培养情况下可以感染HCV，并且感染了HCV了人胎肝细胞可以产生具有传染性的HCV颗粒分泌到培养液中。     

丙型肝炎患者外周血单个核细胞内病毒抗原的免疫酶标记

目的对慢性丙型肝炎 (丙肝 )患者外周血单个核细胞 (PBMC)内病毒抗原进行鉴定及定位研究。方法应用抗 -HCV核心区和NS3单抗及光镜、电镜免疫组化技术对丙肝患者PBMC进行免疫酶标记。结果光镜免疫酶染色 ,HCVAg强阳性的PBMC内常规电镜首次发现其胞质空泡中直径 5 0～ 80nm具有双层膜的球型HCV颗粒和正在芽生病毒颗粒 ,均被免疫电镜酶反映产物特异性标记。结论免疫电镜证实 ,常规电镜所见病毒颗粒确为丙型肝炎病毒。从而为HCV感染PBMC并在其中复制提供了确切的形态学证据。     

丙型肝炎患者外周血单个核细胞内病毒抗原的免疫酶标记

目的 对慢性丙型肝炎（丙肝）患者外周血单个核细胞（PBMC）内病毒抗原进行鉴定及定位研究。方法 应用抗-HCV核心区和NS3单抗及光镜、电镜免疫组化技术对丙肝患者PBMC进行免疫酶标记。结果 光镜免疫酶染色,HCVAg强阳性的PBMC内常规电镜首次发现其胞质空泡中直径50-80nm具有双层膜的球型HCV颗粒和正在芽生病毒颗粒,均被免疫电镜酶反映物特异性标记。结论 免疫电镜证实,常规电镜所见病毒颗粒确为丙型肝炎病毒,从而为HCV感染PBMC并在其中复制提供了确切的形态学证据。     

丙肝病毒核心抗原检测在丙肝病毒感染诊断中的作用研究

目的探讨丙肝核心抗原检测在丙肝感染诊断中的作用。方法收集175例丙肝抗体检测标本同时检测HCVAb、HCV游离抗原、HCV总抗原、HCVRNA。结果 75例HCVAb阳性反应标本,检出HCV游离抗原阳性17例,HCV总抗原阳性54例,HCVRNA阳性50例;100例HCVAb阴性反应标本,检出HCV游离抗原阳性1例,HCV总抗原阳性2例,HCVRNA阳性1例。结论 HCV核心抗原是HCV早期感染的标志之一,检测HCV核心抗原有利于HCV感染的早期诊断。     

体外感染细胞表达HCV-NS5和复制HCV RNA的实验研究

为了研究 HCV- NS5 和 HCV RNA在体外感染细胞培养系统中的表达和复制情况 ,选用 HCV RNA水平为2× 10 4拷贝 / m l的阳性血清感染人肝癌细胞株 (Hep G2细胞株 )。应用胶体金标免疫电镜法和原位杂交法检测 HCV在被感染细胞中 NS5 蛋白表达和 RNA复制的情况。结果在细胞浆内有电子密度大的金标颗粒的吸附 ,在感染后的第 1至第 9代细胞中均有发现。感染后的细胞超微结构完整 ,未发现 HCV颗粒。在感染后的第 1至第 7代细胞内出现特异性杂交信号 ,HCV RNA阳性物呈蓝紫色细小颗粒分布在细胞浆和细胞核内。因此 ,HCV能够在 Hep G2细胞中表达 NS5抗原和复制 RNA,而细胞超微结构完整。     

急慢性丙型肝炎患者ALT、抗-HCV与HCVRNA关系的分析

对 4 0例丙型肝炎患者的血清 AL T、抗 - HCV及 HCVRNA进行了检测。结果显示 :在急慢性丙型肝炎中 ,抗 - HCV阳性率分别为 83.3%、93.8% ,HCVRNA阳性率分别为 50 %、6 8.8% ,有 4例抗 - HCV阴性急性患者 HCVRNA阳性。抗 - HCV阳性者中有 51.4 % HCVRNA阳性。HCVRNA的检出在 AL T异常情况下较正常明显高 (P<0 .0 5)。提示 HCVRNA早期诊断意义较抗 - HCV大 ,抗 - HCV在一定程度上能反映 HCVRNA的情况 ,而 AL T高低亦可间接反映 HCV的复制状态。     

In Vitro Expression of Hepatitis C Virus Non-structure 5 Antigen in the HepG2 Cell Line

ItisofgreatsignificancetoestablishasensitivepropagationsystemofHCVinvitroforstudyingthefeaturesofHCV,pathogenesisofHepatitisC,thetreatmentofanti--virusandstudyofvaccine.Wede-tectedthepositiveandnegativelineofHCVinTlymphcellsofhumaninndroinpreviousstudyLI],andpresentedinthispaPeristhefurtherstudyoninvljroexpressionofHCV.lMATERMisANDMETHODS1'1PositiveInocuIumsofHCVRNATheserumofHCVRNAwith1evelof2X10'copy/mlwasselected,anddefinedbyfluorescentquantificationmethed(Thereagentkitwa…     

In vitro expression of hepatitis C virus non-structure 5 antigen in the HepG2 cell line

Summary To establish a cell line as a model system for HCV infection and propagationin vitro, a human HepG2 cell line was incubated with a HCV RNA positive serum. The sABC immunological techniques and gold-labeled colloid electron microscopy method were employed to examine the viral proteins in those cells. The HCV non-structure 5 antigen was first detected in the HepG2 cells 72 h after incubation. The antigen was continuously observed in the cytoplasm as well on the membrane of the HepG2 cells even after 1, 2, 3 and 4 weeks after incubation. The observation of HCV non-structure 5 antigen continuously expressed in the HepG2 cells strongly indicates that the cells may have been infected by HCV virus. Therefore, the HepG2 cell line may serve as a potential host for establishment of HCV infection and propagationin vitro. This project was supported by a grant of the National Educational Committee for return scholars (No.)     

血液透析患者丙型肝炎病毒感染的研究

作者用ＥＬＩＳＡ法和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对４５例血液透析（ＨＤ）患者的血清丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）和丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）进行了检测，发现１３例抗－ＨＣＶ阳性，１５例ＨＣＶＲＮＡ阳性，共１７例患者（３７．８％）ＨＣＶ标志物（抗－ＨＣＶ和／或ＨＣＶＲＮＡ）阳性。将这１７例ＨＣＶ标志物阳性患者与２８倒闭性患者作了比较，结果表明，ＨＣＶ标志物阳性患者的透析时间、输血次数和输血量均明显高于阴性患者（Ｐ＜０．０１）。对１５例ＨＣＶＲＮＡ阳性患者的ＨＣＶ基因型的分析表明，１３例为Ⅱ型，Ⅲ例为Ⅲ型。本研究表明，ＨＤ患者丙型肝炎的感染率很高，这与血液透析时多次接触血液、血液透析器具以及输血次数和输血量密切相关。     

丙型肝炎病毒标志物测定的临床应用

目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)感染者血清及初乳中该病毒标志物存在状况。　方法 :对 2 44份 HCV感染者、33份对照血清和 35份 HCV特异性 Ig G抗体阳性的产妇、41份健康产妇的初乳进行 HCV四种标志物测定。抗HCV- Ig G、Ig M和 GOR抗体采用间接 EL ISA法 ,HCV C33抗原采用双抗体夹心 EL ISA法。　结果 :抗 HCV- Ig G、抗 HCV- Ig M、HCV C33和抗 GOR抗体四种标志物在慢性活动性丙型肝炎组检出率最高 ,分别为 10 0 .0 %、85 .7%、46 .4%和 6 4.3% ;急性输血后丙型肝炎组检出率为 6 6 .7%、10 0 .0 %、2 2 .9%和 42 .9% ;慢性稳定性丙型肝炎组为 94.1%、2 6 .5 %、17.6 %和 5 2 .9% ;血透患者组为 6 2 .6 %、31.3%、4.8%和 45 .6 %。血清抗 HCV Ig G阳性组初乳为 17.1%、2 .9%、8.5 %和 37.1%。血清和初乳对照组除 1例献血员血清抗 HCV- Ig G阳性外 ,其余均为阴性结果。　结论 :除抗 HCV- Ig G外 ,抗 HCV- Ig M、HCV C33和 GOR抗体三种标志物在 HCV感染的相关疾病组中 ,有一定的阳性检出率 ,均可作为 HCV感染的标志 ,可用于 HCV感染后的实验室诊断。     

Extrahepatic and Intrahepatic Replication and Expression of Hepatitis C Virus

HepatitisCvirus(HCV)isthemajorpathogenofpost--transfusionalhepatitiswithachroniccourseinupto60%ofindividuals,leadingtocirrhosisandeventuallytohepatocellularcarcinomain20%ofindividuals[1'2].HCVcontainsasingleplusstrandRNAwhichissimilartopestivirusandflavivirusingenomestructures.HCVRNAcanbedetectedinsera,livertissues,peripheralbloodmononuclearcells(PBMCs)andsalivaglandsbypolymerasechainreaction(PCR)assay['-'j.Inthisstudy,theinsituhybridizationandimmunohistochemicaltechniqueusingdigoxinla…     

重组丙型肝炎病毒在7721细胞中的复制

目的 探讨构建的重组丙型肝炎病毒(HCV)能否在易感细胞系中复制和表达。方法 用人工构建的HCV感染易感细胞系7721，培养72h后利用RT-PCR检测HCV的RNA表达，并应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察免疫荧光标记的HCV核心抗原和胞膜抗原EI在细胞中的表达。结果 人工构建的HCV感染7721细胞72h后、RT-PCR检测细胞内可检出HCV正链及负链RNA，细胞培养上清中可检出HCV正链RNA，CLSM检测HCV核心抗原和E1抗原在细胞内的分布呈胞浆型。结论 构建的HCV72h内可以在易感细胞系7721中复制和表达。     

原发性肝细胞癌与HCV分型的关系

目的：了解原发性肝细胞癌（HCC）患者HCV基因型分布现状及其关系。方法：选择山西省肿瘤医院1996年间住院的HCVRNA阳性，临床上确诊的HCC患者血清标本13份，非肝癌癌症患者血清标本15份，1996年－1997年HCVRNA阳性的公共场所从业人员血清标本15份，用型特异性引物进行RT－PCR基因分型。结果：13例HCVRNA阳性的HCC患者，除1例未能分型外，其余12例均为HCV 1b型（100％）。15例非肝癌癌症患者，除13酌（86．67％）为1b型感染者外，其余均为2a型（13．33％）。15例从业人员中，不仅检出了12b型感染（86．67％），还检出2a型，1／2混合型各1例。所有标本中1b,2a型，1b/2a混合型的构成分别为38／42（90．48％），3／42（7．14％），1／42（2．38％），以1b型的比例最高，未检出1a,2b和3a型。结论：HCVRNA1b型与HCC的关系较为密切，同时也是山西地区HCV的感染优势株。