稳定表达人细胞色素P450 1A2的HepG2细胞的建立及其代谢效应

目的：建立稳定表达人细胞的色素P450 1A2(CYP1A2)的HepG2细胞。方法：将所克隆的野生型CYP1A2 cDNA从重组质粒pGEM-CYP1A2中用Kpn Ⅰ／BamHⅠ双酶切，并亚克隆到哺乳动物细胞表达栽体pREP9中。再将重组质粒转化感受态大肠杆菌Top10，用氨苄青霉素抗性筛选和限制酶谱鉴定。改良的磷酸钙介导的细胞转染法将重组质粒pREP9-CYP1A2转染肝癌细胞HepG2，用RT-PCR技术对转基因细胞的CYP1A2mRNA表达作了分析，并用MTT法比较转基因细胞对黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒敏感试验。结果：与HepG2细胞相比，HepG2-CYP1A2转基因细胞表达CYP1A2 mRNA，能增强AFB1的细胞毒作用。结论：建立了稳定表达CYP1A2的转基因细胞系，可用于由CYP1A2参与的毒理学与药物代谢研究。     

奥美拉唑对HepG2细胞中CYP2C19酶表达及活性的影响

目的：研究奥美拉唑（omeprazole）对HepG2细胞CYP2C19酶表达及活性的影响,间接反映奥美拉唑和氯吡格雷联合用药是否存在药物的相互作用。方法通过MTT实验筛选出奥美拉唑对HepG2细胞的无毒浓度。采用实时定量PCR （Q-PCR）及Western印迹法检测奥美拉唑（浓度分别为0、0.1、1和10 mg/L）对HepG2细胞中CYP2C19在mRNA和蛋白水平上表达的影响。奥美拉唑（0、0.1、1、10和100 mg/L）与表达人CYP450同工酶和人CYP450还原酶的昆虫细胞的微粒体共同孵育,在体外水平上通过荧光强度的变化分析对CYP2C19酶活性的影响。结果奥美拉唑对HepG2细胞无毒性的浓度范围为0～10 mg/L。在mRNA及蛋白表达水平上,奥美拉唑各浓度组均抑制CYP2C19酶的表达,且具有浓度依赖性。酶活性检测表明,当奥美拉唑的浓度达到10、100 mg/L时,荧光强度明显减弱,表明高浓度奥美拉唑抑制CYP2C19酶的表达。结论奥美拉唑能降低HepG2细胞色素氧化酶CYP2C19的表达,并抑制其活性,提示奥美拉唑与其他需经过CYP2C19酶代谢才能转化为活性代谢产物的药物（氯吡格雷）联用时,有可能会出现药效抵抗现象。     

三氧化二砷抑制苯并(a)芘诱导的HeLa细胞细胞色素P450 1A1的表达

目的观察不同浓度三氧化二砷(As2O3)对苯并(a)芘[B(a)P]诱导的子宫颈癌HeLa细胞的增殖及细胞色素P450 1A1(CYP1A1)表达的影响。方法用7.5μmol/L B(a)P分别与不同浓度的As2O3共同作用于HeLa细胞,MTT法检测As2O3对HeLa细胞增殖的影响,Western blot和实时荧光定量PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法结果显示,随着As2O3浓度增加,各实验组吸光度值逐渐减少,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);As2O3下调B(a)P诱导的HeLa细胞CYP1A1的mRNA和蛋白质的表达,抑制作用显著(P<0.05)。CYP1A1活性检测结果显示,随着As2O3浓度增加,HeLa细胞CYP1A1酶活力逐渐降低,各实验组与对照组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3能抑制B(a)P诱导的HeLa细胞增殖,抑制CYP1A1的表达并降低CYP1A1酶活性且呈现剂量依赖性。     

来氟米特对急性化学性肝损伤小鼠肝Cyt.P450酶含量及CYP2E1 mRNA表达的影响

目的观察来氟米特(Lef)作用前后急性化学性肝损伤小鼠肝微粒体细胞色素P450(Cyt.P450)、细胞色素b5(Cyt.b5)含量及P4502E1(CYP2E1)mRNA表达水平的变化,进一步研究其治疗机制。方法采用CCl4诱导小鼠急性化学性肝损伤模型,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,肝匀浆丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量以及肝微粒体细胞色素P450(Cyt.P450)和细胞色素b5(Cyt.b5)含量,RT-PCR法检测小鼠肝脏细胞色素P4502E1(CYP2E1)mRNA表达水平,并作肝组织切片病理观察。结果Lef明显降低CCl4急性肝损伤小鼠血清ALT、AST水平;降低肝匀浆MDA含量;提高GSH含量并提高肝微粒体Cyt.P450、Cyt.b5含量;抑制CYP2E1 mRNA表达;减轻肝脏病理损伤。结论Lef治疗CCl4所致小鼠急性化学性肝损伤,可能与其诱导肝微粒体Cyt.P450表达,抑制CYP2E1 mRNA转录及抗脂质过氧化有关。     

鹅去氧胆酸对HepG2细胞胆汁酸靶基因的影响及其联合姜黄素的细胞毒性

目的：探讨鹅去氧胆酸对肝癌细胞HepG2胆汁酸靶基因的影响以及联用姜黄素对HepG2细胞的毒性。方法：利用实时荧光定量PCR法检测鹅去氧胆酸对HepG2细胞胆汁酸靶基因的mRNA表达影响,MTT法检测鹅去氧胆酸和姜黄素对HepG2和SMMC-7721肝癌细胞存活率的影响,克隆形成实验检测鹅去氧胆酸和姜黄素对HepG2细胞增殖的影响。结果：随着鹅去氧胆酸浓度的提高,BSEP和SHP基因的mRNA表达水平升高,CYP7A1、CYP8B1、NTCP和β-catenin基因的mRNA表达水平降低（P值均≤0.05）,FXR基因的mRNA表达水平无变化（P>0.05）。HepG2、SMMC-7721细胞存活率随着鹅去氧胆酸和姜黄素浓度的提高和作用时间的延长呈依赖性下降（P<0.05）,鹅去氧胆酸和姜黄素联用的效果更好（P<0.05）。HepG2细胞的克隆形成率受鹅去氧胆酸和姜黄素的影响均降低（P<0.05）,鹅去氧胆酸和姜黄素联用效果更明显（P<0.05）。结论：鹅去氧胆酸对肝癌细胞HepG2的细胞毒性可能与胆汁酸代谢有关,鹅去氧胆酸联合姜黄素能更好地抑制肝癌细胞的...     

二亚硝基哌嗪(DNP)对人细胞色素P4502E1体外表达的影响(英文)

目的　建立人细胞色素P4 5 0 2E1(CYP2E1)cDNA体外异源表达模型 ,观察化学致癌物二亚硝基哌嗪 (N ,N’ dinitrosopiperazine ,DNP)对CYPWE1表达的影响。方法　脂质体介导转染法将外源人CYP2E1cDNA导入NIH3T3细胞 ,PCR和Southernblot鉴定外源基因的整合 ,RT PCR检测其表达 ;用不同浓度乙醇和DNP处理转化细胞 ,RT PCR和westernbloting检测CYP2E1表达的改变。结果　获得二个具外源基因CYP2E1cDNA整合及稳定表达的细胞克隆NIH3T3 2E1 A1和NIH3T3 2E1 A8;经乙醇和DNP处理的细胞克隆CYP2E1mRNA和蛋白质水平的表达增强。结论　DNP与乙醇对CYP2E1表达的诱导可能与其mRNA转录增强有关 ,DNP致癌可能与CYP2E1对其原位代谢活化相关     

Effect of N,N’- dinitrosopiperazine on in vitro expression of humancytochro me P450 2E1

目的：建立人细胞色素P450 2E1(CYP2E1)cDNA体外异源表达模型,观察化学致癌物二亚硝基哌嗪（N,N‘-dinitrosopiperzine,DNP）对CYPWE1表达的影响。方法：脂质体介导转染法将外源人CYP2E1cDNA导入NIH3T3细胞,PCR和Southern blot鉴定外源基因的整合,RT-PCR检测其表达;用不同浓度乙醇和DNP处理转化细胞,RT-PCR和western bloting 检测CYP2E1表达的改变。结果：获得二个具外源基因CYP2E1cDNA整合及稳定表达的细胞克隆NIH3T3-2E1-A1和NIH3T3-2E1-A8;经乙醇和DNP处理的细胞克隆CYP2E1mRNA和蛋白质水平的表达增强。结论：DNP与乙醇对CYP2E1表达的诱导可能与其mRNA转录增强有关,DNP致癌可能与CYP2E1对其原位代谢活化相关。     

原花青素B2及黄曲霉毒素B1对人胚胎肝细胞细胞色素P450亚酶1A2、3A4活力及基因表达的影响

目的 探讨原花青素B2(PC-B2)与黄曲霉毒素B1(AFB1)对人胚胎肝细胞L-02细胞色素P450 (CYP)亚酶1A2、3A4活力及其基因表达的影响.方法 L-02细胞体外培养后分空白对照、溶剂对照、AFB1染毒、PC-B2处理和PC-B2干预共5组,其中PC-B2处理分为3个亚组,分别采用3、10、30 μg/ml PC-B2干预,PC-B2干预分为3各亚组,分别采用3、10、30 μg/ml PC-B2预处理12 h后,再加不同浓度PC-B2与AFB1干预24 h.测定各组细胞的CYP1 A2、CYP3A4酶活力以及CYP1 A2、CYP3A4基因的mRNA表达水平;测定细胞存活率,倒置荧光显微镜观察细胞形态.结果 与空白对照组相比,AFB1染毒组细胞存活率降低(P＜0.05),胞膜结构不清,漂浮细胞增多,CYP1 A2、CYP3A4酶活力及其mRNA表达水平明显升高(P＜0.05).与空白对照组相比,3、10μg/ml PC-B2处理组细胞相关指标无明显变化,但30 μg/ml PC-B2处理组的细胞存活率升高,CYP1A2、CYP3A4酶活力下降(P＜0.05).与AFB1染毒比较,30 μg/ml PC-B2干预组的细胞存活率升高(P＜0.05),各浓度PC-B2干预组的细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及基因表达均降低(P＜0.05),且干预浓度越高,CYP1A2、CYP3A4酶活力及基因表达越低(P＜0.05).结论 AFB1能明显诱导肝细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及其mRNA表达,促使肝细胞凋亡,PC-B2干预可促进肝细胞生长并抑制上述CYP二个亚酶的活力及其基因表达,提示PC-B2可能通过抑制Ⅰ相代谢酶CYP对AFB1的活化而对肝细胞有良好保护作用.     

水蛭提取物对肝癌HepG2细胞DNA去甲基化作用研究

目的探讨水蛭提取物对肝癌HepG2细胞DNA甲基转移酶(DNMTs)表达的抑制作用。方法采用MTT法检测水蛭提取物对肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用,根据回归方程计算出半数抑制浓度(IC50)。以1/2 IC50含药量的水蛭提取物处理肝癌HepG2细胞,并以5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-cdR)处理作阳性对照,处理72 h时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化等方法检测肝癌HepG2细胞DNMT1、DNMT3a、DNMT13b mRNA及蛋白表达水平。结果肝癌HepG2细胞DNMT1呈高表达,DNMT3a、DNMT3b呈中低度表达。经水蛭提取物处理后肝癌HepG2细胞DNMT1、DNMT3a表达水平明显下降,DNMT3b基本不表达,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),与5-Aza-cdR组比较,水蛭提取物组降低DNMT1作用弱于5-Aza-cdR,降低DNMT3a、DNMT3b作用明显优于5-Aza-cdR组(P<0.05)。结论水蛭提取物能抑制肝癌HepG2细胞DNTMs表达,参与DNA去甲基化作用可能是水蛭抗肿瘤的机制之一。     

丹参提取物对肝癌HepG2细胞DNA去甲基化作用研究

目的 探讨丹参提取物丹参酮ⅡA对肝癌HepG2细胞DNA甲基转移酶1基因(DNMTI)表达的抑制作用.方法 采用MTT法检测丹参酮ⅡA、5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-cdR)对HepG2细胞的增殖抑制作用,根据回归方程求出半数抑制浓度(IC50).以IC50含药量的丹参酮ⅡA处理肝癌HepG2细胞.并以5-Aza-cdR处理作阳性对照,处理72 h后用RT-PCR技术检潮肝癌HepG2细胞DNMT1 mBNA表达水平.结果 经丹参酮ⅡA处理后肝癌HepG2细胞DNMT1 mRNA表达水平明显下降,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).但5-Aza-cdR组下降更显著,丹参酮ⅡA组与5-Aza-cdR组比较盖异有统计学意义(P<0.05).结论 丹参酮ⅡA能抑制肝癌HepG2细胞DNTM1 mRNA表达,作用弱于5-Asa-cdR,DNA去甲基化作用可能是丹参酮抗肿瘤作用机制之一.     

隐丹参酮对细胞色素P450酶CYP3A4和CYP2C9的影响

目的 研究丹参中脂溶性成分隐丹参酮对Chang肝脏细胞细胞色素P450酶（CYP450）CYP3A4、CYP2C9表达的影响,明确丹参主要成分对CYP450酶的作用,以阐明基于CYP450酶隐丹参酮与其他药物间相互作用的分子基础,为临床合理使用含隐丹参酮的丹参制剂提供依据。方法 采用CCK-8法考察隐丹参酮对Chang肝脏细胞活力的影响,以确定药物的给药剂量范围;通过Western bloting法考察隐丹参酮在给药后1、3和7 d对Chang肝脏细胞中CYP3A4和CYP2C9蛋白表达的影响;通过定量RT-PCR法考察隐丹参酮对Chang肝脏细胞中CYP3A4和CYP2C9 mRNA表达的影响。结果 给药1 d,隐丹参酮对CYP3A4蛋白及mRNA表达无显著影响。但随时间延长,给药3 d和7 d,隐丹参酮可抑制CYP3A4蛋白及mRNA的表达（P <0.05）。给药1、3和7 d,隐丹参酮对CYP2C9蛋白及mRNA的表达均无显著影响。结论 连续给予隐丹参酮可抑制CYP3A4 mRNA和蛋白的表达。提示临床在连续使用含隐丹参酮时,需要关注其与CYP3A4底物药物之间可能的相互作用。     

在HepG2细胞系上建立四环素(Tet-On)基因调控系统表达P4502E1(英文)

目的　在HepG2细胞系上建立四环素 (Tet On)基因调控系统 ,调控表达P4 5 0 2E1(CYP2E1)。 方法　先后转导调控蛋白基因及CYP2E1cDNA(已与四环素反应启动子整合 )入HepG2细胞。用多西环素调控CYP2E1的表达 ,用RT PCR和Westernblot检测其表达高低。结果　RT PCR和Westernblot均检测出CYP2E1被多西环素调控表达。结论　四环素 (Tet On)基因调控系统 (表达CYP2E1)已在HepG2细胞系上成功建立。     

孕期尼古丁暴露所致成年雄性子代大鼠肝脏CYP同工酶及抗氧化酶变化

目的:探讨孕期尼古丁暴露(PNE)所致雄性子代大鼠肝脏细胞色素P450(CYP)同工酶及抗氧化酶表达和功能变化。方法:建立孕中、晚期尼古丁[2mg/(kg·d)]暴露大鼠模型,检测出生后3月和7月龄雄性大鼠肝脏CYP同工酶和抗氧化酶的表达和活性变化。结果:PNE的3月龄雄性大鼠肝脏CYP1A2、CYP2C11和CYP3A1的mRNA表达显著增加,其他亚型(CYP2A2、CYP2B1、CYP2D2和CYP2E1)为增加趋势,而CYP2E1活性显著降低,其他亚型(CYP2C6、CYP2D2/3和CYP3A1)有降低趋势;7月龄雄性大鼠肝脏CYP2A2和CYP2E1的mRNA表达增加,其他亚型(CYP1A2、CYP2C11、CYP2D2和CYP3A1)为增加趋势,而酶活性无明显变化。3月和7月龄雄性大鼠肝脏抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性无明显改变。结论:PNE可导致雄性3月龄子代大鼠肝脏CYP同工酶的mRNA表达增加,但酶活性降低,7月龄雄性大鼠肝脏CYP同工酶功能趋于正常。提示PNE可改变雄性子代大鼠药物代谢功能但不影响抗氧化酶功能。     

佛手提取物调控CYP7A1蛋白表达的研究

目的 探讨佛手提取物(Finger Citron extract)对HepG2细胞中胆固醇7 α羟化酶(CYP7A1)及其核转录调控因子过氧化物酶体增殖物激活受体oα(PPARd)和肝核因子4α(HNF4α)的蛋白表达量的影响.方法 采用MTT法得出佛手提取物对HepG2细胞生长无明显抑制的浓度,Western blot检测CYP7A1、PPARα和HNF4α的蛋白表达量:采用siRNA干扰技术沉默调控因子PPARα后,观察佛手提取物对CYP7A1的蛋白表达的影响.结果 佛手提取物浓度为0.2、1、5、25 μg/mL对HepG2细胞无明显的抑制作用,且均能上调CYP7A1、PPARα和HNF4α的蛋白表达量,沉默调控因子PPARα后,CYP7A1的蛋白表达量显著下降.结论 佛手提取物具有一定的降脂作用,其机制可能与其上调PPARo的表达来上调CYP7A1的表达有关.     

含CYP2E1基因的重组腺病毒载体转染人骨髓间充质干细胞联合达卡巴嗪的抗肿瘤效应

目的 构建含人细胞色素P-450 CYP2E1(CYP2E1)基因的缺陷型重组腺病毒载体,检测其协同化疗药物的抗肿瘤效应,为基因介导酶前药治疗提供新的思路.方法 克隆人肝CYP2E1全长cDNA,制备高滴度的重组腺病毒颗粒(1.2×1012 pfu/ml).分离、培养、传代纯化及鉴定人骨髓间充质干细胞(BMSC).用Transwell小室检测BMSC向肿瘤细胞的趋化迁移.将重组腺病毒分别转染BMSC和人黑色素瘤细胞A375细胞.荧光显微镜和RT-PCR、Western印迹法分别检测转基因细胞中外源增强绿色荧光蛋白(EGFP)、CYP2E1的表达.倒置显微镜、四甲基偶氮唑盐(MTT)和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双染色法检测CYP2E1协同酶前药达卡巴嗪(DTIC)的抗肿瘤效应(实验分A375-CYP2E1组、BMSC-CYP2E1组和BMSC-CYP2E1+A375组,并以各自空载体组作为对照;细胞接种后分别加入不同浓度DTIC).结果 成功构建重组腺病毒载体pAd5CMV-NpA-CYP2E1和pAd5CMV-NpA-EGFP.成功分离BMSC,并证明BMSC可通过聚碳酸酯膜分别向下室内的K562和A375细胞迁移.荧光显微镜检测到转基因靶细胞EGFP表达,RT-PCR和Western印迹法均检测到目的基因在转基因细胞中高表达.倒置显微镜下见加入DTIC后BMSCCYP2E1+A375组的死亡细胞明显多于对照组.MTT法示DTIC呈浓度依赖性抑制转CYP2E1基因的细胞生长,其中BMSC-CYP2E1+A375组药物半数抑制量(IC50)值为(0.17±0.13)mmol/L,其对照组为(0.65±0.20)mmol/L,二者差异有统计学意义(P＜0.01),可选0.05 mmol/L DTIC浓度作人BMSC的相对安全浓度.Annexin V/PI法示0.05 mmol/L DTIC处理细胞48 h后BMSC-CYP2E1+A375组细胞凋亡率明显高于其对照组(26.8±2.0比8.7±1.3,P＜0.01).结论 BMSC体外具有向肿瘤细胞趋化迁移的特性.重组腺病毒载体介导的CYP2E1转染BMSC具有协同化疗前药的抗肿瘤效应.     

维生素E对二(口恶)英染毒小鼠肝脏细胞色素P450酶基因转录的影响

目的研究维生素E对2,3,7,8-四氯代二苯并二噁英(TCDD)染毒小鼠肝脏细胞色素P450酶1A1、1A2、1B1基因转录的影响。方法设计了5个实验组,将45只小鼠随机分为5组,5组动物给予TCDD和维生素E的水平依次为:TCDD0 ng/kg和VE0 mg/kg、TCDD100 ng/kg和VE0 mg/kg、TCDD100 ng/kg和VE20 mg/kg、TCDD100 ng/kg和VE100 mg/kg、TCDD100 ng/kg和VE500 mg/kg。喂食4周后取其肝脏,用real-time PCR法测小鼠细胞色素P450酶1A1、1A2、1B1基因mRNA水平。结果TCDD染毒小鼠肝脏细胞色素P450酶1A1、1A2 mRNA水平与对照组相比有升高的趋势,而细胞色素P450酶1B1 mRNA水平明显降低。染毒并给予维生素E20 mg/kg组,其肝脏CYP4501A1的mRNA水平有降低趋势,随着维生素E剂量的增加,YP450 1A1的mRNA水平反而有升高的趋势,当维生素E剂量为500 mg/kg时,其肝脏CYP450 1A1的mRNA明显高于TCDD染毒组。CYP450 1A2的mRNA水平随着维生素E剂量的增加有降低的趋势,在TCDD染毒并给予维生素E500 mg/kg组,其肝脏CYP450 1A2的mRNA水平明显低于TCDD染毒组。而肝脏CYP450 1B1的mRNA水平在染毒并给与维生素E500 mg/kg组,与染毒组相比有上调趋势。结论TCDD能影响或部分影响小鼠细胞色素P450酶1A1、1A2、1B1的基因转录,而维生素E能在一定程度上缓解TCDD的作用。     

白细胞介素－6对 HepG2细胞铁调素表达的影响

目的：研究白细胞介素－6（IL－6）对HepG2细胞铁调素（Hepcidin）表达的影响及其可能的分子机制。方法应用不同浓度的IL－6诱导HepG2细胞12 h,按IL－6的浓度分为对照组、实验A组、实验B组。对照组：仅加入1 mL细胞培养液。实验A组：加入0．85 mL细胞培养液及0．15 mL 1 g／mL IL－6培养液,IL－6总浓度为50μg／mL。实验B组：加入0．7 mL细胞培养液及0．3 mL IL－6培养液,IL－6总浓度为100μg／mL。逆转录聚合酶链反应（ RT－PCR）检测3组细胞Hepcidin mRNA表达,Western blot检测信号转导子与转录激活3（ STAT3）及磷酸化STAT3（ pSTAT3）蛋白的表达。比较3组HepG2细胞Hepcidin mRNA、STAT3及pSTAT3表达的差异。结果与对照组相比,实验A组和实验B组Hepcidin mRNA、pSTAT3表达均明显增加（ P＜0．05）,实验B组Hep－cidin mRNA、pSTAT3表达比实验A组更高（ P＜0．05）。3组的STAT3蛋白表达差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论 IL－6显著上调HepG2细胞Hepcidin mRNA表达,且HepG2细胞Hepcidin mRNA表达水平随IL－6浓度上升伴随性增高。其机制可能与IL－6刺激肝细胞内信号分子pSTAT3升高有关。     

人脂肪细胞对HepG2细胞载脂蛋白A5表达的影响及其机制

目的 探讨脂肪细胞对HepG2细胞载脂蛋白A5(apoA5)表达的影响及其调节机制.方法 取人的皮下脂肪组织,经培养、促分化后获得成熟脂肪细胞,用脂多糖(LPS)刺激使其成为炎症状态下脂肪细胞.通过Transwell系统,脂肪细胞与HepG2细胞共培养,RT-PCR测定HepG2细胞的apoA5、血清淀粉样蛋白A(SAA)、过氧化物酶增殖物激活受体-α (PPAR-α)、肝X受体-α (LXR-α )mRNA的表达,并观察MK886对HepG2细胞的apoA5、PPAR-αmRNA表达的影响.结果 ①成熟脂肪细胞可使HepG2细胞的apoA5、PPAR-α、SAA mRNA的表达升高,且共培养48 h后表达水平高于24 h(P ＜0.05),但LXR- α的表达无明显改变(P＞0.05).②炎症状态下脂肪细胞对HepG2细胞的apoA5、PPAR-α、SAA mRNA表达的上调作用比成熟脂肪细胞更强(P＜0.05),但LXR－αmRNA的表达无明显变化(P＞0.05).③MK886可抑制脂肪细胞对HepG2细胞apoA5 mRNA表达的上调作用(P＜0.05).结论 脂肪细胞可通过PPAR-α而不是通过LXR-α途径上调HepG2细胞apoA5 mRNA的表达,此作用可能与其分泌的炎症因子刺激有关.     

RNA干扰SIRT1基因表达对HepG2细胞部分能量代谢信号及炎症因子影响

目的 研究RNA干扰抑制SIRT1基因表达对HepG2部分能量代谢信号及炎症因子影响.方法 将SIRT1-siRNA在脂质体介导下瞬时转入人肝癌HepG2细胞,用实时荧光定量PCR方法检测转染效率及转染后CPT-1mRNA、ECHS-1 mRNA、UCP-2 mRNA、FAS mRNA、ACC mRNA、IL-6 mRNA的表达变化.结果 HepG2细胞成功转染SIRT1-siRNA后,UCP-2 mRNA表达降低（P＜0.01）、FASmRNA表达增高（P＜0.01）、ACC mRNA表达增高（P＜0.05）、IL-6 mRNA表达增高（P＜0.001）,而CPT-1mRNA、ECHS-1 mRNA表达无明显差异.结论 肝癌HepG2细胞中抑制SIRT1基因表达可抑制对UCP-2mRNA表达,促进脂肪酸合成及诱发炎症反应,而对线粒体氧化途径CPT-1、ECHS1表达无明显影响.     

苯并[a]芘对宫颈癌HeLa细胞细胞色素P450 1A1的诱导作用

目的 探讨苯并[a]芘（BaP）对宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞色素P450 1A1（CYP1A1）表达的影响。方法 不同浓度(0、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0 μmol/L)的BaP处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测BaP对HeLa细胞增殖的影响,Western blotting和RT-PCR分别检测CYP1A1的蛋白表达和mRNA表达,荧光素标记检测CYP1A1活性。结果 MTT法检测显示,各浓度BaP组光密度（D553 nm）均较对照组（0 μmol/L BaP）升高,其中7.5 μmol/L BaP组最高（P<0.05）。Western blotting和RT-PCR检测结果显示,各浓度BaP组CYP1A1 mRNA及蛋白的表达水平均高于对照组,其中7.5 μmol/L BaP组最高（P<0.05）。CYP1A1活性检测结果显示,各浓度BaP组HeLa细胞CYP1A1酶活力均高于对照组,以5.0 μmol/L BaP组活力最高（P<0.05）。结论 BaP可诱导HeLa细胞增殖,诱导HeLa细胞表达CYP1A1,并增加酶活性。