G蛋白偶联受体及其配体的结构与功能分析

Ｇ蛋白偶联的受体是介导跨膜信号转导的一组样蛋白质，它们具有显著的同源性及由七个跨膜螺旋组成的相同的膜结构。     

G蛋白偶联受体与辐射关系的研究进展

G蛋白偶联受体(GPCR)是一类细胞表面受体大家族,通过G蛋白介导其细胞作用,在介导细胞间信号转导的过程中起着十分重要的作用。研究发现,G蛋白和GPCR与辐射损伤关系密切,这些研究为充分认识辐射损伤机制及提高防治水平提供了新的观点。     

咪唑啉Ⅰ型受体候选蛋白--非G蛋白偶联受体信号转导与ERK相关

目的：研究在咪唑啉Ⅰ型受体（imidazoline-1 receptor，I1R）激动剂莫索尼定和利美尼定作用下。I1R抗体选择性蛋白（imidazoline receptor antisera selected protein，IRAS）的信号转导机制。方法：采用[^35S]-GTPγS结合实验，确定IRAS是否与G蛋白相偶联；采用蛋白免疫印迹方法，研究IRAS的激活与ERK磷酸化之间的关系。结果：以稳定表达有IRAS的CHO细胞（CHO-IRAS）为实验对象研究发现，利美尼定、莫索尼定在多种实验条件下均不能提高[^35S]-GTPγS结合量，表明IRAS不与G蛋白偶联，而利美尼定和莫索尼定在激活IRAS的同时，能够浓度依赖性地显著升高ERK磷酸水平，其刺激作用能被I1R拮抗剂依法克生完全拮抗。结论：IRAS不与G蛋白偶联，ERK可能是IRAS偶联的信号分子之一。     

β-肾上腺素受体与G蛋白

β－肾上腺素受体（β－ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃｒｅｃｅｐｔｏｒ,β－ＡＲ）和Ｇ蛋白在细胞内外起着传递信息的重要作用。不仅对机体发挥生理调节作用,而且对某些心血管疾病发生,发展有很大的关系。１β－ＡＲ的生物特性［１,２］β－ＡＲ是１条多肽链,其氨基酸序列形...     

Leptin、解偶联蛋白与能量代谢失衡

在严重创伤、脓毒症等病理条件下,葡萄糖代谢障碍,脂肪成为机体能量代谢的主要来源.Leptin是由成熟脂肪细胞分泌的激素,可增加能量消耗,防止脂肪堆积;解偶联蛋白在脂肪组织和骨骼肌表达丰富,表达升高可增加能量散失.二者均与烧伤、脓毒症导致的高能量代谢有关.本文就其性质、分布及表达的影响因素,特别是与过氧化物体增殖物激活受体的关系做一综述.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体与脑卒中的关系及其核素显像剂

Stroke is one of the leading causes of death and disability, especially for the old population in modern world. As one of ligand-gating ionotropic glutamate receptors, N-methyl-D-aspartate rece pto r (NMDAR) involves in excitatory synaptic transmission, synaptic plasticity and the cause and development of numerous neurological as well as psychiatric disorders. Since the distribution of NMDAR varies in different regions, certain brain regions such as hippocampus and cortex with the highest density of NMDAR, are especially sensitive to ischemia. Much emphasizes have been put on the changes of excitatory neurotransmission and NMDAR in central nervous system after ischemia, because the glutamate-mediated excitatory neurotoxicity play a key role in the development of stroke. It has been shown that neuronal death after ischemia results from excessive Ca2+influx, which is due to the hyperactivity of NMDAR, Ca2+ permeable α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionic acid receptor, kainic acid receptors and / or other ion channels permeable to Ca2+. The increase of intracellular Ca2+ triggers the cascades of cell death. With specific structure and pharmacology properties, this study of the tracer of NMDAR give the target for early diagnosis and developing of specific antagonist. Elucidating the changes in interneurons after ischemia/hypoxia with tomography in vivo will help to understand the mechanisms underlying the neoroprotection of antagonist.     

生长抑素受体肿瘤显像的临床应用及研究进展

神经内分泌肿瘤及一些非神经内分泌肿瘤细胞表面均有生长抑素受体高表达。生长抑素类似物如奥曲肽等对生长抑素受体具有亲和力高、作用时间长等特点,并可被放射性核素标记进行肿瘤阳性显像,这对生长抑素受体阳性肿瘤的诊断、分期及预后评价具有较为重要的临床价值,也可作为常规影像学检查的一种有力补充。     

抑郁症的放射性核素脑血流灌注和脑受体显像研究进展

抑郁症是现代社会常见的情感障碍性精神疾病。目前，对抑郁症的病因研究和临床诊断都受到相当的重视。放射性核素脑血流灌注显像和脑５－羟色胺、多巴胺递质及受体显像对抑郁症病因的探讨、辅助诊断及抗抑郁药物的疗效评价都会起到很大作用     

脂多糖对肺微血管内皮细胞β-受体及β-受体激酶影响的研究

为探讨脂多糖 (LPS)对肺微血管内皮细胞 β 受体 (β AR)及 β AR激酶的影响 ,在体外分离、培养大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)的基础上 ,采用放射性配基结合法检测LPS作用后RPMVECβ AR的变化 ,并用Westernblot检测了LPS作用后 β AR激酶GRK2和GRK3的改变。结果发现 ,β AR最大结合容量BmaxLPS组显著低于正常对照组(P <0 0 5 ) ,LPS+山莨菪碱组与正常对照组间无显著性差异 ;LPS组与LPS+山莨菪碱组间GRK2表达无明显差异 ,但均明显高于正常对照组 ;RPMVEC无GRK3表达。提示LPS作用后引起的RPMVECβ AR下调可能与GRK2表达增加促进了β AR内化有关 ,而与GRK3无关 ;山莨菪碱不是通过抑制GRK2表达而是通过其他机制抑制LPS引起的β AR下调     

肿瘤表皮生长因子受体的分子显像研究

表皮生长因子在不同类型肿瘤的生长、发展等不同阶段的信号通路中起着重要的作用,无创性的表皮生长因子受体(EGFR)监测在肿瘤的诊断与疗效的判断中具有重要的意义。近年来针对EGFR的放射性示踪剂研究进展迅速,为ECFR分子显像提供了良好的基础。     

知母、黄芪活性成分对M2受体与G蛋白偶联的影响

目的探讨知母活性成分ZMS、黄芪活性成分HQ和两者联合应用对M2受体和G蛋白偶联的影响。方法以转染M2受体的CHOm2细胞为模型，用^3H-N-甲基东莨菪碱（NMS）结合法测定M2受体的密度，用不被GTP酶水解的^35S-γ位硫代GTP（GTPγs）在M受体激动剂氨甲酰胆碱作用下与G蛋白进行不可逆结合，测定结合部分的放射性，以反映M2受体与Ga蛋白的偶联活性。分别测定加入ZMS及HQ（10^-5mol／L）对偶联的影响，并以加入等体积二甲基亚砜（DMSO）为对照。以偶联活性被M2受体密度除，所得的商反映偶联效率。结果ZMS和HQ在浓度为10^-5mol／L时都能提高M2受体密度和M2受体与G蛋白的偶联活性。HQ能提高偶联效率，ZMS无此作用，两者联合应用时偶联效率的提高更显著（偶联效率依次为1．102，1．011，1．324）。结论ZMS和HQ增强M2受体和G蛋白偶联活性的机制不同，前者主要提高M2受体密度，从而使G蛋白的偶联量增加，后者则除提高M2受体密度外还提高偶联效率。两者联合应用时偶联效率的提高更显著。     

解偶联蛋白与肝缺血再灌注损伤

解偶联蛋白（uncoupling proteins,UCP）位于线粒体内膜上,是线粒体阴离子载体蛋白大家族（mitochondrial anion carrier proteins,MACP）的成员,目前已知有5种。在缺血再灌注损伤（ischemia—reperfusion injury,IRI）中,线粒体解偶联蛋白通过解偶联作用减少细胞内ROS（reactive oxygen specie,活性氧簇）的产生,在一定程度上减轻了脂质过氧化反应,     

多巴胺受体显像半定量参数的探讨

目的探讨脑多巴胺受体显像中作为纹状体非特异性摄取的参照区。方法用大鼠体内研究资料，比较额叶皮质和小脑作为纹状体非特异性摄取参照区所获得的纹状体特异性结合１２５Ｉ（ｓ）（－）３碘２羟基６甲氧基Ｎ〔（１乙基）２吡咯烷基）甲基〕苯甲酰胺（ＩＢＺＭ）的结果。结果碘标记ＩＢＺＭ呈立体选择性和可逆性地与纹状体多巴胺Ｄ２受体结合。额叶皮质和小脑显示对配体的快速摄取和洗脱。当用小脑摄取作为纹状体非特异性摄取参照时，未能获得ＩＢＺＭ的饱和性，而用额叶皮质作为参照区时，可证实其可饱和性，Ｂｍａｘ＝４４ｐｍｏｌ／ｇ纹状体组织。Ｈａｌｏｐｅｒｉｄｏｌ的置换率和由大剂量ｓｐｉｐｅｒｏｎｅ或ｈａｌｏｐｅｒｉｄｏｌ竞争性抑制实验衍变而来的纹状体和其他脑区之间摄取差值百分率均提示：小脑摄取低估了纹状体的非特异性摄取，额叶皮质是一个合适的纹状体非特异性摄取参照区。结论在纹状体多巴胺Ｄ２受体显像中，特异性ＩＢＺＭ的结合和其他半定量参数的计算，最好选用额叶皮质作为非特异性结合参照区。     

人oGPCRs与Gi1α的基因融合及其在昆虫细胞Sf9的表达

目的获得人孤儿G蛋白偶联受体（oGPCR）与G蛋白α亚基（Gi1α）的融合基因及其表达蛋白。方法采用RT-PCR法,从人HepG2细胞扩增oGPCR成员GPR45,GPR85,GPR174和Gi1α的完整表达序列,运用重叠延伸PCR法扩增得到人oGPCR成员GPR45,GPR85,GPR174分别与Gi1α的融合基因,将各融合基因与供体质粒pFASTBac1重组,而后分别转化DH10Bac菌株获得杆状病毒穿梭杆粒,制备重组杆状病毒并感染Sf9细胞,收获融合蛋白,经Western印迹鉴定。结果得到了上述oGPCR成员的融合基因oGPCRs-Gi1α,并使之在昆虫细胞成功表达,制备了足量的oGPCRs-Gi1α融合蛋白。结论oGPCR可与Gi1α成功融合,昆虫细胞表达体系是制备融合蛋白的理想手段,为今后深入开展oGPCRs的相关研究提供了保障。     

肿瘤生长抑素受体显像剂~(99)Tc~m-octreotide的制备及鉴定

目的　建立99Tcm 直接标记octreotide的最佳方法 ,评价其受体介导结合特性以及作为肿瘤生长抑素受体显像剂的可能性。方法　采用抗坏血酸钠和连二亚硫酸钠作为还原剂 ,对oct reotide进行标记 ;用大鼠脑皮质细胞膜进行体外受体结合分析 ;进行动物体内分布、药代动力学、毒性实验和临床受体显像。结果　99Tcm octreotide放化纯达 78 5 % ,纯化后为 93 8% ,室温下放置 4h为92 1%。细胞膜体外放射受体结合分析证实99Tcm octreotide与octreotide具有相同的受体介导结合特性。 3例肺癌患者临床受体显像均获得阳性结果。结论　99Tcm 直接法标记octreotide方法可行 ,稳定性好 ;99Tcm octreotide是一种很有希望的肿瘤生长抑素受体显像剂     

hM1R表达载体的构建及其转入CHO细胞系作为药物靶点的研究

Ｇ蛋白偶联受体 (Ｇｐｒｏｔｅｉｎｃｏｕｐｌｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＧＰＣＲ)一直是新药研制和药理研究的最重要靶标 ,而且在今后的新药研究和开发中仍具有不可替代的地位。人毒蕈碱样胆碱能受体Ⅰ型 (ｈｕｍａｎｍａｒｃｒｉ ｎｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ 1,ｈＭ1Ｒ)作为ＧＰＣＲ的一员 ,具有重要的生理功能和病理意义 ,在ＧＰＣＲ中有着较典型的代表性。人类基因组计划的研究成果和相关新技术的应用 ,将会进一步促进新药研究和现代药理学的发展 ,建立靶向ＧＰＣＲ ,特别是靶向孤儿ＧＰＣＲ(ｏｒｐｈａｎＧＰＣＲ ,ｏＧＰＣＲ)的新药筛选体系…     

吗啡受体显像剂7α-o-IA-DPN的合成

设计、合成了一种新的吗啡受体显像剂。选用吗啡拮抗剂特培洛啡（ｄｉｐｒｅｎｏｒｐｈｉｎｅ，ＤＰＮ），经乙酰化选择性保护苯环３位—ＯＨ，将乙烯锡烷作为弥补基引入ＤＰＮ分子７α支链淑醇基团位置，采用碘代锡烷标记法一步合成碘烷ＤＰＮ（７αｏｉｏｄｏａｌｙｌｄｉｐｒｅｎｏｒｐｈｉｎｅ，即７αｏＩＡＤＰＮ）。其标记率达９０％，比活度为８０ＴＢｑ／ｍｍｏｌ，放化纯度大于９５％。体外吗啡受体结合分析表明其具有很高的亲和力（Ｋｉ＝０．４ｎｍｏｌ／Ｌ）。结果表明：新合成的碘标记吗啡配体适合于ＳＰＥＣＴ活体吗啡受体显像研究。     

hsstr2基因转染肿瘤细胞的受体显像研究

目的将人生长抑素受体2亚型(hsstr2)基因转染至该受体表达阴性的肿瘤细胞,并进行该受体介导的肿瘤显像。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hsstr2基因并构建真核表达载体,将hsstr2基因转染至肺腺癌A549细胞系(hsstr2表达阴性),用RT—PCR及流式细胞术检测受体表达情况;采用高表达细胞株进行该受体体外结合特性研究,建立裸鼠肿瘤模型,探讨该受体介导的肿瘤显像方法。结果获得经测序完全正确的hsstr2基因,RT-PCR及流式细胞术鉴定选取高表达的细胞株,体外结合实验测得平衡解离常数Kd=5.65×10-10mol/L,最大结合容量Bmax=2.01×104结合位点/细胞,半数抑制浓度IC50=1.88×10-9mol/L。裸鼠肿瘤模型显像示,静脉注射显像剂99Tcm-RC-160后0.5-1 h肿瘤显影明显,24 h后肿瘤部位第2次显影。结论将hsstr2转染至该受体表达阴性的肿瘤细胞并进行受体介导的肿瘤显像是可行的,适宜显像时间为0.5-1 h。     

生长抑素受体显像剂99mTc-depreotide的研究进展

99mTc-depreotide是一种新型生长抑素受体显像剂,能与多种肿瘤细胞高表达的生长抑素受体相结合,对肿瘤的良、恶性评估具有很高的特异性和敏感性,可定性、定位诊断多种生长抑素受体阳性肿瘤,特别是对非小细胞肺癌的定位诊断及鉴别诊断更具有临床价值.Depreotide的生物学特点、放射性核素标记、药物体内分布及肿瘤显像等方面的研究都有了新的进展.     

犬冲击伤复合破片伤肺组织G蛋白变化的实验研究

目的探讨弹冲复合伤对犬肺组织G蛋白的变化和可能的作用。方法杂种犬30只,分为正常对照组(6只),单冲组(8只),单破片组(8只)和破片复合中度冲击伤组(8只)。冲击伤利用生物激波管复制,破片伤用滑瞠枪发射三角形弹片复制。致伤后24小时活杀动物取肺组织测定各指标。Gia和Gqo用Westem blot方法定量测定,定量用图像处理系统进行。肺组织血栓素受体用放射配体分析法。结果犬肺细胞膜和胞浆中Cqa变化显著,单冲、单破片伤组均显著下降,复合伤组下降更显著,各组Gia与对照组比较均显著下降、TXA2受体最大结合容量,各组与对照组比较均显著下降,其中复合伤组下降幅度最大,TXA2受体亲和力(Kd)未见显著改变。结论犬弹冲复合伤后Gia和Gia显著下调,在其致伤机制中可能起一定作用．