反转录聚合酶链反应检测自身免疫疾病和正常人外周血淋巴 …

目的：探讨癌基因Ｃ－ｍｙｃ在自身免疫病患者和正常人外周血淋巴细胞上的表达情况。方法；分离正常人及系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）、类风湿性关节炎（ＲＡ）患者外周血淋巴细胞，采用异硫氰酸胍一步法提取ＲＮＡ，利用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，比较正常人及自身免疫病患者外周血淋巴细胞Ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达程度。结果：ＳＬＥ患者外周血淋巴细胞Ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达较正常人和ＲＡ患者高，ＲＡ和正常人之     

C-myc癌基因在正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株上的表达

目的探讨癌基因C-myc在正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株上的表达情况。方法分离正常人外周血淋巴细胞,采用异硫氰酸胍一步法提取正常人外周血淋巴细胞及肿瘤细胞株RNA,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,比较正常人与肿瘤细胞株C-myc mRNA表达程度。结果 HL-60细胞系C-myc RNA表达最强,GBC胃癌细胞株较正常人为高。结论 C-myc参与了正常、异常细胞生长的调节。     

介绍一种快速反转录聚合酶链反应

目的 介绍一种特异、高效的快速PCR方法。方法 总RNA分成2份，采用相同反应体系，分别用普通PCR方法和快速PCR方法同时扩增FasL。结果 虽然两种方法均能成功扩增FasL基因，但普通PCR方法耗时3h48min，而且还存在非特异性片段；而快速PCR方法耗时仅2h6min，而且没有出现非特异片段。结论 快速PCR方法不仅极大的缩短了反应时间，同时提高了反应的特异性。     

反转录—聚合酶链反应在呼吸道合胞病毒感染检测的应用

为呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染的临床诊断寻求敏感，特异的检测方法，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增毒培养液和急性呼吸道感染患者鼻咽分泌物中的ＲＳＶ基因，并应用地高辛标记ｃＤＮＡ探针对扩增产物进行鉴定。结果成功地提取了ＲＳＶｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，经扩增得到４７１ｂｐ左右ｃＤＮＡ区带。流感病毒Ｂ，副流感病毒２型，腺病毒７对照无扩增带，ＲＳＶ培养液１０倍连续稀释至１：１０００，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增仍可见４     

用聚合酶链反应检测肺癌myc族癌基因扩增

应用聚合酶链反应分析人非小细胞肺癌组织标本中ｍｙｃ族癌基因扩增情况。在３３例中检测出５例有ｍｙｃ癌基因扩增，说明在非小细胞肺癌中ｍｙｃ族癌基因扩增的频率较低。其中１例为腺癌复发患者，提示ｃ－ｍｙｃ扩增可能同癌复发相关。同时还发现另外一条带，可能是ｍｙｃ族的新成员，有待于进一步研究。     

反转录聚合酶链反应检测胃癌病人中心静脉血CK20mRNA表达及其临床意义

目的：运用巢式反转录聚合酶链反应（nest RT—PCR）技术，探讨细胞角蛋白20（CK20mRNA）在胃癌病人中心静脉血的表达及其临床意义。方法：nest RT—PCR检测胃癌病人中心静脉血及良性疾病病人中心静脉血CK20mRNA，表达情况与临床病理因素进行分析。结果：64例胃癌病人34例CK20mRNA阳性，阳性率为53．1％，良性病病人16例均阴性；胃癌病人血液CK20mRNA的阳性率与肿瘤大小、腹腔和肝转移、临床分期相关（P〈0．05），与病理组织学类型无相关性（P〉0．05）；8例早期胃癌病人中2例CK20mRNA阳性。结论：扩增CK20mRNA的nest RT—PCR方法是检测胃癌病人中心静脉血微转移敏感而特异的方法。     

聚合酶链反应检测小细胞肺癌myc族癌基因扩增的研究

应用通用引物ＰＣＲ技术检测１６例小细胞肺癌组织ｍｙｃ族癌基因（ｃ－ｍｙｃ，Ｌ－ｍｙｃ，Ｎ－ｍｙｃ）扩增状况，１６例小细胞肺癌中，５例有ｍｙｃ基因扩增（３１％）。其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期小细胞肺癌ｍｙｃ癌基因扩增发生率分别为２５％（１／４），２９％（２／７）和４０％（２／５）。并且，有ｍｙｃ癌基因扩增的病例平均生存期较无扩增者短。研究结果提示ｍｙｃ族癌基因扩增是小细胞肺癌发展过程中产生的遗传学改变，并可影响患者的预后。     

聚合酶链反应检测真菌感染的实验研究

本研究以ＮＳ５－ＮＳ６为引物，扩增真菌同源性序列ｓｓｕ－ｒＤＮＡ片段，建立广范围真菌检测的方法，用此方法扩增医学主要致病真菌，细菌和人体细胞，结果所有真菌均扩增出一个约３１０ｂｐ的科物，而细菌和人体细胞均扩增阴性，１ｐｇ白色假丝酵母菌ＤＮＡ即可检出。     

自身免疫病患者血清纤维粘连蛋白水平的测定

用免疫单扩散方法检测各种自身免疫病患者129例血清标本中纤维粘连蛋白(FN)的含量。患者组(187.42±104.54μg/ml)显著低于正常对照组(227±53 μg/ml)(p<0.05)。对54例红斑狼疮患者检测结果为222.4±113.8μg/ml,与正常对照组无差别,但若根据病情活动度分组,两组之间有显著差异(p<0.05),血清FN水平的降低与病情改善及抗DNA抗体下降呈平行关系。     

SLE病人外周血淋巴细胞早期凋亡状态的检测

①目的　探讨淋巴细胞凋亡在系统性红斑狼疮 (SLE)发病机制中的作用。②方法　应用AnnexinⅤ试剂盒及流式细胞仪 (FCM)对SLE病人及正常人外周血淋巴细胞 (PBL)进行早期凋亡状态的检测 ,并采用免疫比浊法检测SLE病人补体C3含量。③结果　SLE活动期病人PBL早期凋亡率明显高于稳定期病人及正常人 (F =3 6.68,q =3 .17、3 .63 ,P <0 .0 1) ;稳定期病人与正常人相比无显著性差异 ( q =0 .15 ,P >0 .0 5 ) ;活动期病人中初发病组与已用糖皮质激素或免疫抑制剂治疗组相比无差异 (t=0 .2 1,P >0 .0 5 )。活动期病人PBL凋亡率与补体C3含量呈高度负相关 (r =- 0 .85 9,P <0 .0 1)。④结论　SLE病人外周血大量凋亡淋巴细胞可能通过释放过量自身抗原的方式诱导一系列自身抗体的产生 ,从而参与SLE发生     

系统性红斑狼疮儿童外周血淋巴细胞凋亡的初步研究

①目的　探讨系统性红斑狼疮 (SLE)儿童外周血淋巴细胞凋亡特性及其与病情和部分免疫指标的相关性。②方法　应用形态法、间接免疫荧光法和免疫金斑法 ,检测 1 8例SLE病儿和 1 5名健康儿童外周血淋巴细胞凋亡率、T淋巴细胞亚群、CD+2 5细胞百分率和抗ds DNA抗体。③结果　培养前及培养 48h ,SLE病儿组外周血淋巴细胞凋亡率均显著低于正常对照组 (t=2 .363 ,2 .954 ,P <0 .0 5 ,0 .0 1 ) ;培养 48h ,活动期病儿外周血淋巴细胞凋亡率明显低于稳定期病儿 (t=2 .2 94,P <0 .0 5) ,抗ds DNA抗体阳性组外周血淋巴细胞凋亡率显著低于抗ds DNA抗体阴性组 (t=2 .92 8,P <0 .0 1 ) ,SLE病儿外周血淋巴细胞凋亡率与CD+4 细胞百分率、CD+4 CD+8细胞比值和CD+2 5细胞百分率皆呈负相关 (r=- 0 .49～ - 0 .59,P <0 .0 1 )。④结论　SLE病儿外周血淋巴细胞凋亡减少 ,此与病儿细胞和体液免疫功能紊乱关系密切     

风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者外周血淋巴细胞TGF-β1 mRNA的表达

目的:探讨外周血淋巴细胞TGF-β1 mRNA表达与风心病二尖瓣狭窄之间的关系.方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量技术,对15例风心病二尖瓣狭窄患者与15例正常人TGF-β1 mRNA的表达进行检测.以TGF-β1/β-actin光密度值之比作为半定量结果.结果:两组受检者均可见TGF-β1 mRNA的表达,风心病二尖瓣狭窄患者TGF-β1 mRNA的表达明显高于正常人(t=2.134,P＜0.05).结论:风心病患者不仅存在瓣膜局部TGF-β1的表达增强,还存在外周血淋巴细胞TGF-β1的表达增强,但它在风心病中的作用机制有待进一步研究.     

非小细胞肺癌病人外周血MUC1基因定量表达及意义

目的探讨Mucin-1（MUC1）mRNA在非小细胞肺癌（NSCLC）病人外周血中的表达及临床意义。方法采用实时荧光定量RT—PCR方法检测MUC1 mRNA在NSCLC病人外周血中的表达。结果NSCLC病人外周血中MUC1 mRNA表达显著高于正常人（t=2．01,P〈0．05）;鳞癌与腺癌病人MUC1基因的表达无明显差异（P〉0．05）。NSCLC病人外周血中MUC1 mRNA表达与NSCLC的病理分级、TNM分期及淋巴结转移密切相关（F=25．62、34．61,t=2．05,P〈0．05）。结论NSCLC病人外周血中MUC1 mRNA表达与NSCLC发生、发展、侵袭、转移及恶性程度密切相关,对判断NSCLC恶性程度及预后有重要参考价值。     

癌—睾丸抗原SSX-2基因在儿童急性淋巴细胞性白血病外周血单个核细胞中的表达

目的：探讨癌—睾丸抗原SSX-2基因在儿童急性淋巴细胞性白血病（ALL）外周血单个核细胞中的表达,为判断ALL预后提供理论依据。方法：采用逆转录—聚合酶链反应,对51例ALL患儿外周血单个核细胞进行SSX-2mRNA检测,并进行SSX-2基因表达与临床特征的相关性分析;以30例非肿瘤患儿为对照组。结果：ALL初治患儿SSX-2 mRNA表达率为34.78%,对照组无一例表达。ALL初治组表达率明显高于对照组（P〈0.05）,ALL初治组表达率高于ALL完全缓解组表达率7.14%（P〈0.05）。SSX-2基因的表达与儿童ALL性别、年龄、初诊时外周血白细胞数、免疫分型以及临床危险分级无关（P〉0.05）。结论：儿童ALL患者SSX-2mRNA表达率较高,SSX-2mRNA表达可能与儿童ALL的发生、发展有关;SSX-2基因检测对儿童ALL近期疗效的评估、指导临床治疗有一定意义。     

肺结节病患者外周血淋巴细胞IL-2生成及反应能力

观察16例肺结节病患者外周血淋巴细胞 IL-2产生能力及对 IL-2的反应性,结果显示:患者 IL-2产生能力明显降低。外源性 IL-2诱导增殖反应虽有降低趋势,但无统计学意义。外源性 IL-2可增强 PHA 诱导的淋巴细胞转化,提示患者细胞免疫功能可能低下,而外源性 IL-2可使之部分恢复。     

SLE患者血浆维生素C、E水平的变化研究

目的：探讨血浆维生素C、E水平与SLE疾病之间的关系及可能采取的相应对策。方法：对33例确诊为SLE患者及对等匹配的正常人的血浆维生素C及维生素E含量进行测定。结果：SLE组血浆维生素C含量为37．98±15．64mol／L,维生素E含量为14．86±6．53mol／L,均明显低于对照组（P＜0．01）。结论：维生素C、E含量检测可作为反映SLE病变严重程度的一组参考指标。     

SLE患者外周血IL－2活性及SIL－2R水平测定

本文测定３２例ＳＬＥ患者外周血ＩＬ－２活性及血清ＳＩＬ－２Ｒ水平．结果显示，ＳＬＥ患者外周血ＩＬ－２活性显著低于非活动期及正常对照组（Ｐ＜０．０１），血清ＳＩＬ－２Ｒ水平显著高于非活动期及正常对照组（Ｐ＜０．０１）．此结果将有助于进一步探讨ＳＬＥ免疫调节紊乱的发生机制，并对ＳＬＥ患者动态观察有一定意义．