冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用研究

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用。方法:以8、16、24和32μmol/L不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。结果:16~32μmol/L的冬凌草甲素可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48~60h后Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征。结论:冬凌草甲素能通过诱导细胞发生凋亡,抑制BEL-7402细胞的生长而发挥抗增殖作用。     

Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用

背景与目的:雷帕霉素是从吸水性链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)发酵液中提取,最近研究发现雷帕霉素具有免疫抑制作用和广泛的抗肿瘤作用。本研究主要探讨Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用。方法:以不同浓度(5、10、20、30、40、50nmol/L)的雷帕霉素作用于BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化,采用Caspase-3试剂盒和Westernblot蛋白电泳测定Caspase-3活性。结果:雷帕霉素可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,具有量-效与时-效关系;雷帕霉素作用BEL-7402细胞48h后,Hoechst33258荧光染色可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征;凋亡过程中Caspase-3酶原蛋白的激活,出现20ku亚单位,Caspase-3特异性抑制剂z-DEVD-FMK能阻断凋亡的发生。结论:雷帕霉素能抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞凋亡发生,Caspase-3酶的激活在雷帕霉素诱导细胞凋亡机制中起到重要作用。     

雷帕霉素对人肝癌细胞BEL-7402体外抗肿瘤作用研究

目的:观察雷帕霉素体外对肝癌细胞BEL-7402生长、细胞凋亡以及细胞转移能力作用。方法:以5nmol/L,10nmol/L,20nmol/L,30nmol/L,40nmol/L和50nmol/L不同浓度的雷帕霉素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化,细胞粘附分析及体外侵袭试验观察肿瘤细胞的转移能力。结果:雷帕霉素可显著的抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。雷帕霉素作用肝癌细胞BEL-740248h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征。雷帕霉素能抑制其粘附性和侵袭性,具有剂量依赖性,随浓度增加而抑制增加。结论:雷帕霉素不仅能诱导BEL-7402肝癌细胞凋亡,抑制细胞的生长,而且同时抑制肿瘤细胞的粘附性和侵袭性,阻止肿瘤细胞的转移,雷帕霉素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

干扰素α对BEL-7402细胞生长与端粒酶活性影响的观察

目的:探讨干扰素α(IFN-α)对肝癌BEL-7402细胞的生长抑制作用及其对肝癌细胞端粒酶hTERT-mRNA表达水平和端粒酶活性的影响。方法:以不同浓度的IFN-α作用于体外培养的肝癌BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及ho-echst33258荧光染色法观察细胞凋亡;并对细胞凋亡前后的端粒酶hTERT-mRNA表达水平及端粒酶活性进行检测。结果:IFN-α可显著抑制肝癌BEL-7402细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系。在细胞凋亡过程中端粒酶hTERT-mRNA的表达水平及端粒酶活性均显著下降。结论:IFN-α能抑制BEL-7402细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低端粒酶hTERT-mRNA的表达水平及端粒酶活性可能是其重要作用机制。     

STAT3抑制剂S3I-201对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 研究STAT3小分子抑制剂S3I-201对人肝癌细胞系BEL-7402增殖、凋亡与细胞周期的影响和初步的作用机制。方法 分别采用细胞活性检测试剂盒cell couting kit-8(CCK-8)和EdU细胞增殖法检测S3I-201对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖的影响,应用流式细胞术分析S3I-201对BEL-7402的细胞凋亡和周期的影响,通过Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 CCK-8及EdU结果显示,S3I-201能抑制BEL-7402细胞的生长和增殖(P<0.05),使BEL-7402细胞阻滞于S期,具有诱导细胞凋亡的作用,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达(P<0.05)。结论 STAT3小分子抑制剂S3I-201通过促进BEL-7402凋亡、上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并将BEL-7402阻滞于S期而发挥抗肿瘤效应。     

化学修饰的siRNA对乳腺癌细胞VEGF基因表达抑制及凋亡的诱导作用

目的：体外水平探讨化学修饰的小干扰RNA（siRNA）介导的RNAi治疗乳腺癌的可行性。方法：选用阳离子脂质体Lipofectamine2000^TM作为转染试剂,将化学修饰的针对人VEGF基因的siRNA转染人类乳腺癌细胞株MCF-7。半定量RT—PCR和蛋白印迹试验分别检测转染前后细胞中VEGF、Bcl2和baxmRNA和蛋白水平表达的变化,Hoechst33258荧光染色分析细胞凋亡。结果：与未转染的正常细胞组相比,靶向VEGF基因的siRNA转染MCF-7后,细胞中VEGF及Bcl-2mRNA和蛋白表达水平显著降低,P〈0．01。bax基因的表达未发生明显变化,Bcl-2和bax比值下降。Hoechst33258荧光染色显示转染siRNA72h后细胞内可见凋亡小体。结论：化学修饰的siRNA介导的RNAi下调靶基因VEGF的表达,并对MCF-7细胞有明显的凋亡诱导作用。     

合成紫花茄皂苷诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的：探讨合成紫花茄皂苷对BEL-7402细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法：采用酸性磷酸酶(APA)法、吖啶橙荧光染色法和流式细胞术检测合成紫花茄皂苷对人肝癌BEL-72102细胞增殖的影响以及诱导细胞凋亡的作用利用蛋白印迹法检测药物作用后凋亡相关蛋白PARP的表达水平。结果：合成紫花茄皂苷对人肝癌BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用，其72h的IC50为4．2μg／ml。荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡形态流式细胞术分析发现，细胞经皂苷作用6h、12h和24h后，凋亡率显著增加蛋白印迹检测结果显示，合成紫花茄皂苷作用后肿瘤细胞内的PARP蛋白被剪切，Bcl-2蛋白的表达量下调。结论：合成紫花茄皂苷对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性，具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用，且这一作用可能与Bcl-2表达下调有关.     

冬凌草乙素对白血病NB4细胞的体外诱导凋亡作用研究

目的:探讨冬凌草乙素(PON)对急性白血病NB4细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其作用机制.方法:以不同浓度的PON(0～50 μmol/L)作用于体外培养的NB4细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡时的形态学变化.应用免疫印迹法检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP的表达水平,并对凋亡调节蛋白Bax、Bd-2、Bak、Bad及Survivin的表达水平进行检测.结果:>20 μmol/L的PON可显著抑制细胞的生长,并呈现出明显的量-效与时-效关系,FCM检测结果表明,>20 μmol/L的PON作用48 h后,凋亡细胞逐渐增多,在Hoechst染色后可见典型的细胞凋亡现象.蛋白质印迹法检测结果表明,药物作用48 h后Caspase-3被活化出现17×103的亚单位,同时PARP被裂解出现89×103的亚单位片段.蛋白质印迹法检测结果显示,凋亡抑制蛋白Survivin的表达水平明显降低,促凋亡蛋白Bax的表达水平显著升高,而其他凋亡调节基因Bcl-2、Bak、Bad则无明显变化.结论:PON可以通过诱导白血病NB4细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,降低Survivin以及升高Bax的表达水平可能是PON诱导白血病细胞发生凋亡的重要作用机制之一.     

环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡及其机制探讨

目的:探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)选择性抑制剂NS-398对人肝癌BEL-7402细胞凋亡及凋亡抑制蛋白survivin、XIAP和c-IAP1表达的调节作用.方法:用不同浓度的NS-398作用BEL-7402细胞后,MTT法测定细胞增殖抑制情况,FCM法和TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫细胞化学法检测COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达情况.结果:NS-398 可以显著抑制BEL-7402细胞的增殖,诱导其凋亡.免疫细胞化学法检测结果显示,与未处理组相比,NS-398作用可使BEL-7402细胞中COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达明显下调(P<0.01).结论:NS-398对人肝癌细胞株BEL-7402有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与通过下调survivin、XIAP和c-IAP1的表达有关.     

溶血磷脂酸抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡

目的：探讨溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。方法：体外培养卵巢癌细胞株SKOV3,采用MTT法检测LPA对顺铂（cisplatin,DDP）作用后卵巢癌细胞株SKOV3增殖活性的影响,Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞,用FCM法分析细胞周期变化和细胞凋亡率,DNA片段凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA“梯状”条带,免疫细胞化学法及RT-PCR法分别检测细胞凋亡相关蛋白及其mRNA的表达。结果：LPA能降低DDP对SKOV3细胞生长的抑制作用,同时增加G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例和凋亡率。Hoechst33258染色检测示LPA作用后凋亡小体明显减少。DNA片段凝胶电泳示LPA作用后不产生明显的凋亡片段。10μmol/L的LPA作用SKOV3细胞48h后,bcl-2基因及其蛋白表达水平升高,而bax基因及其蛋白表达水平降低（P〈0.01）。结论：LPA可通过上调bcl-2基因及蛋白表达,下调bax基因及蛋白表达,抑制DDP诱导的卵巢癌细胞凋亡。因此,针对LPA的治疗有望提高DDP疗效,改善卵巢癌患者的预后。     

Anti-hepatoma cells function of luteolin through inducing apoptosis and cell cycle arrest

The aim of this study is to explore the apoptotic induction and cell cycle arrest function of luteolin on the liver cancer cells and the related mechanism. The liver cancer cell line SMMC-7721, BEL-7402, and normal liver cells HL-7702 were treated with different concentrations of luteolin. Cell proliferation ability was tested. Morphological changes of the apoptotic cells were observed under inverted fluorescence microscope after Hoechst33342 staining. We investigated the effect of luteolin on cell cycling and apoptosis with flow cytometry. The mitochondrial membrane potential changes were analyzed after JC-1 staining. Caspases-3 and Bcl-2 family proteins expression were analyzed by real-time PCR. Cell proliferation of SMMC-7721 and BEL-7402 were inhibited by luteolin, and the inhibition was dose–time-dependent. Luteolin could arrest the cells at G1/S stage, reduce mitochondrial membrane potential, and induce higher apoptosis rate and the typical apoptotic morphological changes of the liver carcinoma cells. Q-RT-PCR results also showed that luteolin increased Bax and caspase-3 expression significantly and upregulated Bcl-2 expression in a dose-dependent manner in liver carcinoma cells. However, the normal liver cells HL-7702 was almost not affected by luteolin treatment. Luteolin can inhibit SMMC-7721 and BEL-7402 cell proliferation in a time- and dose-dependent manner. And the mechanism maybe through arresting cell cycle at phase G1/S, enhancing Bax level, reducing anti-apoptotic protein Bcl-2 level, resulting in activating caspase-3 enzyme and decrease of mitochondrial membrane potential, and finally leading to cell apoptosis.     

β-elemene Induces Caspase-dependent Apoptosis in Human Glioma Cells in vitro through the Upregulation of Bax and Fas/ FasL and Downregulation of Bcl-2

Background: β-elemene, extracted from herb medicine Curcuma wenyujin has potent anti-tumor effects invarious cancer cell lines. However, the activity of β-elemene against glioma cells remains unclear. In the presentstudy, we assessed effects of β-elemene on human glioma cells and explored the underlying mechanism. Materialsand Methods: Human glioma U87 cells were used. Cell proliferation was determined with MTT assay andcolony formation assay to detect the effect of β-elemene at different doses and times. Fluorescence microscopywas used to observe cell apoptosis with Hoechst 33258 staining and change of glioma apoptosis and cell cyclingwere analyzed by flow cytometry. Real-time quantitative PCR and Western-blotting assay were performed toinvestigated the influence of β-elemene on expression levels of Fas/FasL, caspase-3, Bcl-2 and Bax. The experimentwas divided into two groups: the blank control group and β-elemne treatment group. Results: With increase inthe concentration of β-elemene, cytotoxic effects were enhanced in the glioma cell line and the concentrationof inhibited cell viability (IC50) was 48.5 μg/mL for 24h. β-elemene could induce cell cycle arrest in the G0/G1phase. With Hoechst 33258 staining, apoptotic nuclear morphological changes were observed. Activation ofcaspase-3,-8 and -9 was increased and the pro-apoptotic factors Fas/FasL and Bax were upregulated, whilethe anti-apoptotic Bcl-2 was downregulated after treatment with β-elemene at both mRNA and protein levels.Furthermore, proliferation and colony formation by U87 cells were inhibited by β-elemene in a time and doesdependentmanner. Conclusions: Our results indicate that β-elemene inhibits growth and induces apoptosis ofhuman glioma cells in vitro. The induction of apoptosis appears to be related with the upregulation of Fas/FasLand Bax, activation of caspase-3,-8 and -9 and downregulation of Bcl-2, which then trigger major apoptoticcascades.     

原花青素诱导人肺癌细胞A549凋亡作用研究

目的研究原花青素对人肺癌细胞株A549凋亡的影响并探讨其抗癌机制。方法以不同浓度的原花青素与人肺癌细胞株A549细胞共同培养,MTT法测定细胞增殖;Hoechst 33258/PI染色荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳检测凋亡特异性梯状DNA条带;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果原花青素可体外抑制肺癌A549细胞生长,抑制率呈浓度、时间依赖性,药物浓度达25 mg/L时作用48小时,A549细胞皱缩、细胞核碎裂成碎片,呈现典型凋亡改变;琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞典型的梯状DNA条带;Western blot检测结果显示,Caspase-9、Caspase-3蛋白表达量与药物浓度的增加呈增加趋势,Bcl-2与药物浓度呈负相关。结论原花青素能通过诱导细胞凋亡进而抑制人肺癌细胞增殖,其凋亡机制可能与线粒体通路有关。     

布洛芬抑制人肝癌细胞BEL-7402生长及机制的初步研究

背景与目的：近来发现,临床上常用的非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)可以降低多种癌症的发病率。布洛芬(ibuprofen)作为一种常用的NSAIDs,对肝癌是否具有抑制作用,国内外鲜有报道。本研究初步探讨布洛芬抑制肝癌细胞BEL-7402的作用,并研究其相关机制。方法：肝癌细胞BEL-7402分为对照组和不同浓度布洛芬处理组,药物处理0、24、48和72 h后用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组细胞的周期分布;细胞分析仪检测各组细胞活力及细胞凋亡;蛋白[质]印迹(Western blot)检测各组细胞增殖性核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中前列腺素E₂(PGE₂)蛋白表达水平。结果：布洛芬组中BEL-7402细胞增殖受到抑制,且抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。2.0 mmol/L布洛芬组48 h细胞活力明显低于对照组［(47.87±5.23)% vs (88.93±5.49)%］,G₀/G₁期细胞比例明显高于对照组［(80.04±3.61)%vs (62.36±8.33)%］,细胞早期凋亡率明显高于对照组［(36.65±10.07)% vs (9.81±6.80)%］,差异有统计学意义(P<0.05)。布洛芬作用于细胞48 h后,PCNA、Cyclin D1、Bcl-2以及COX-2蛋白表达与对照组相比显著减少(P<0.05);细胞培养上清液中PGE₂蛋白表达量与对照组［(23.98±4.89) ng/L vs (68.70±9.43) ng/L］相比,显著降低(P<0.01)。结论：布洛芬能够抑制肝癌细胞BEL-7402增殖与活力,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制COX-2及PGE₂表达有关。     

贝母素乙通过调控PI3K/Akt信号通路诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的：探究贝母素乙（Peiminine）对乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的影响及其可能作用机制。方法：采用不同浓度贝母素乙或联合PI3K抑制剂LY294002干预MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖能力;Hoechst33258染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;Western blotting检测细胞中PI3K(p110α)、Akt、p-Akt(ser473)、Bad、Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3以及线粒体和胞浆中细胞色素C(Cyt C)等蛋白表达水平。结果：贝母素乙可呈时间-浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞出现凋亡形态改变,促进细胞凋亡,并降低线粒体膜电位,上调细胞中Bad、Bax、cleaved-Caspase-3及胞浆中Cyt C蛋白表达水平,下调PI3K(p110α)、p-Akt、Bcl-2和线粒体中Cyt C蛋白表达水平,而Akt蛋白表达水平无显著变化。然而,联合LY294002干预可增强贝母素乙对MCF-7细胞凋亡的促进作用。结论：贝母素乙可诱导乳腺癌MCF-7细胞凋...     

Parthenolide-Induced Apoptosis,Autophagy and Suppression of Proliferation in HepG2 Cells

Purpose: To investigate the anticancer effects and underlying mechanisms of parthenolide on HepG2 human hepatocellular carcinoma cells. Materials and Methods: Cell viability was assessed by MTT assay and cell apoptosis through DAPI, TUNEL staining and Western blotting. Monodansylcadaverin(MDC) and AO staining were used to detect cell autophagy. Cell proliferation was assessed by Ki67 immunofluorescence staining. Results: Parthenolide induced growth inhibition in HepG2 cells. DAPI and TUNEL staining showed that parthenolidecould increase the number of apoptotic nuclei, while reducing the expression of the anti-apoptotic protein Bcl-2 and elevating the expression of related proteins, like p53, Bax, cleaved caspase9 and cleaved caspase3. Parthenolide could induce autophagy in HepG2 cells and inhibited the expression of proliferation-related gene, Ki-67. Conclusions: Parthenolide can exert anti-cancer effects by inducing cell apoptosis, activating autophagy and inhibiting cell proliferation.